小儿肺炎血清NO2/NO3和cGMP的变化
作者：郑耀辉 陈珊 张洪 翁依妹
单位：郑耀辉 陈珊 翁依妹(福建医科大学 附属协和医院儿科,福州 350001)；张洪(同济医科大学 附属协和医院儿科,武汉 430022)
关键词：肺炎；一氧化氮；儿童
福建医科大学学报000330
中图分类号: R446.61; R563.1; R725.663.1 文献标识码: A
文章编号:1000-2235(2000)03-0293-02
一氧化氮(NO)是一种具有复杂生物学效应的递质分子,参与人体的炎症、免疫和抗肿瘤等病理过程。为了探讨肺炎患儿血清NO的变化及临床意义,笔者于1998年3月～1999年3月对34例患儿和28例健康儿童血清NO的代谢物NO2/NO3和cGMP含量进行检测。
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1 对象和方法
1.1 对象 肺炎组为34例住院肺炎患儿,男性19例,女性15例,年龄3.8±3.2岁(6个月～13岁)。其中轻型24例,重型10例,诊断符合1987年卫生部制定的小儿肺炎防治方案诊断标准[1]。对照组为同期健康体检儿童28例,男性18例,女性10例,年龄4.6±3.0岁(9个月～12岁)。
1.2 方法 肺炎组患儿于住院次日晨抽空腹静脉血3 ml,分离血清,用于测定血清NO2/NO3和cGMP含量;治疗后2周,其中30例抽血复查。对照组血清标本的采集方法与检测组相同。
1.2.1 血清NO2/NO3的测定 采用镀铜镉还原法。血清0.5 ml加入75 mmol/L ZnSO4 2 ml和55 mmol/L NaOH 2.5 ml,混匀后离心。将贮存的镉粒(20～40 mg)用双蒸水洗3次后加入5 mmol/L CuSO4溶液(用0.2 mol/L 甘氨酸-氢氧化钠缓冲液配制),搅拌1～2 min后,排去CuSO4溶液,再用缓冲液冲洗3次后排尽液体。取去蛋白血清3 ml,加入甘氨酸缓冲液1 ml和激活的镉粒2.5 g,置室温60 min。取上清液2 ml,加入Greiss试剂(1%对氨基苯磺酰胺和0.1%N-1-萘乙二胺1∶1)2 ml,混匀;用721型分光光度计(上海第三仪器厂)在波长545 nm处测得样本的光密度值,以系列亚硝酸溶液建立标准曲线[2]。
, 百拇医药
1.2.2 血清cGMP的测定 采用放射免疫法(125I-cGMP药盒由上海中医药大学同位素室提供)。取血清0.1 ml,加入无水酒精2 ml,振摆1 min,静置5 min,离心(3000 r/min)10 min。将上清液倒入青霉素小瓶,残渣再加入75%酒精1 ml,摇匀,离心10 min。合并上清液,于60℃水浴中吹干。测量时加入50 mmol/L醋酸缓冲液1 ml溶解。取0.1 ml,依次加入乙酰化试剂5 μl,125I-cGMP 100 μl,cGMP抗血清100 μl,摇匀,4℃过夜。加入正常兔血清100 μl,羊抗兔IgG 100 μl,摇匀,4℃过夜,离心15 min,负压吸去上清液,用FJ-2008γ-免疫计数仪(西安国营262厂)自动记录样本的放射性强度。
1.3 治疗情况 轻型肺炎24例主要予青霉素、氨苄青霉素联合抗感染治疗,未予激素,皆痊愈出院。重型肺炎10例予苯唑青霉素联合安美汀(香港史克必成药厂)或单用头孢呋肟(葛兰素中国公司)抗感染治疗,其中5例加用地塞米松;9例痊愈出院,1例好转出院。
, 百拇医药
1.4 统计处理 实验结果以平均值±标准差表示,作方差齐性检验,各组间差异的显著性用q检验和t检验。
2 结 果
肺炎患儿治疗前后血清NO2/NO3和cGMP的变化见附表。
附表 肺炎患儿血清NO2/NO3和cGMP治疗前后的变化 分 组
n
NO2/NO3(nmol/ml)
cGMP
(pmol/ml)
, 百拇医药 对照组
28
29.43±10.88
6.95±3.08
肺炎组
轻型
24
43.31±12.65**
9.19±3.28**
重型
10
68.74±17.21**△△
, http://www.100md.com
14.66±6.12**△△
治疗
前
34
50.46±14.32
10.84±4.93
后
30
34.69±11.40**##
8.08±3.22**#
与对照组比较,**:P<0.01; 与轻型比较,△△:P<0.01; 与治疗前比较,#:P<0.05,##:P<0.01.3 讨 论
, http://www.100md.com
NO是由左旋精氨酸和分子氧在一氧化氮合成酶(NOS)催化下生成的。由于NO半衰期仅几秒钟,且性能极不稳定,生成后很快氧化生成稳定的代谢产物NO2/NO3;同时NO可作用于细胞膜上的鸟苷酸环化酶(GC),使之活化,促使GTP转变为cGMP,因此通过检测血清中NO2/NO3和cGMP的含量可间接反映血清中NO的含量[3]。本文显示,小儿肺炎血清中NO的含量明显高于对照组,患者病情越重,血清中NO的含量越高;经治疗后患者血清NO的含量明显下降。
肺炎早期血清NO的生成增多,这主要是由于肺部炎症可引起生物活性因子(如内毒素、白细胞介素-1、白细胞介素-2和肿瘤坏死因子α等)活性增加,通过激活肺组织细胞中NOS,使其活性增强,产生大量NO[3]。高浓度的NO具有毒性作用,直接损伤气道组织细胞的DNA、线粒体和含铁酶类的活性,同时还可与O-形成过氧化亚硝酰基离子(ONOO-),进而降解为毒性更高的OH-和NO2,造成呼吸道上皮损伤、剥脱。cGMP含量升高,可导致肥大细胞脱颗粒,释放大量炎症介质,增加血管通透性,加重血浆渗漏,引起粘膜及粘膜下充血水肿,造成肺部血管和内皮细胞损伤,使病情更加严重,NOS抑制剂可减轻这种损伤作用[4～6]。经治疗后,随着炎症的控制,组织细胞分泌炎症介质相应减少,对NOS刺激作用减弱,NO的生成也相应减少。
, 百拇医药
NO参与了小儿肺炎的发病过程,检测血清中NO的含量有助于判断患者病情的严重程度,并可作为观察治疗效果的一个指标。临床上用NO生成抑制药阻断肺炎早期过量NO的毒性作用可能有助于小儿肺炎的治疗。
作者简介:郑耀辉(1971～),男,住院医师.
参考文献:
[1] 卫生部. 小儿肺炎防治方案[J]. 中华儿科杂志, 1987,25(1):47～48.
[2] 许宏岳,李爱红,汪晓,等. 比色法测定血清亚硝酸盐和硝酸盐及初步临床应用[J]. 临床检验杂志, 1996,14(1):28.
[3] Moncada S,Palmer RMJ,Higgs EA. Nitric oxide: physiology,pathophysiology and pharmacology[J]. Pharmacol Rev, 1991,43:100～142.
, http://www.100md.com
[4] Royall JA,Kooy NW,Beckman JS. Nitric oxide-related oxidants in acute lung injury[J]. New Horiz, 1995,3(1):113～122.
[5] Barnes PJ. Nitric oxide and airway disease[J]. Ann Med, 1995,27(3):389～393.
[6] Akaike T,Noguchi I. Pathogenesis of influenza virus-induced pneumonia: involvement of both nitric oxide and oxygen radicals[J]. Proc Natl Acad Sci USA, 1996,93(6):2443～2453.
收稿日期:2000-04-10, http://www.100md.com
单位：郑耀辉 陈珊 翁依妹(福建医科大学 附属协和医院儿科,福州 350001)；张洪(同济医科大学 附属协和医院儿科,武汉 430022)
关键词：肺炎；一氧化氮；儿童
福建医科大学学报000330
中图分类号: R446.61; R563.1; R725.663.1 文献标识码: A
文章编号:1000-2235(2000)03-0293-02
一氧化氮(NO)是一种具有复杂生物学效应的递质分子,参与人体的炎症、免疫和抗肿瘤等病理过程。为了探讨肺炎患儿血清NO的变化及临床意义,笔者于1998年3月～1999年3月对34例患儿和28例健康儿童血清NO的代谢物NO2/NO3和cGMP含量进行检测。
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1 对象和方法
1.1 对象 肺炎组为34例住院肺炎患儿,男性19例,女性15例,年龄3.8±3.2岁(6个月～13岁)。其中轻型24例,重型10例,诊断符合1987年卫生部制定的小儿肺炎防治方案诊断标准[1]。对照组为同期健康体检儿童28例,男性18例,女性10例,年龄4.6±3.0岁(9个月～12岁)。
1.2 方法 肺炎组患儿于住院次日晨抽空腹静脉血3 ml,分离血清,用于测定血清NO2/NO3和cGMP含量;治疗后2周,其中30例抽血复查。对照组血清标本的采集方法与检测组相同。
1.2.1 血清NO2/NO3的测定 采用镀铜镉还原法。血清0.5 ml加入75 mmol/L ZnSO4 2 ml和55 mmol/L NaOH 2.5 ml,混匀后离心。将贮存的镉粒(20～40 mg)用双蒸水洗3次后加入5 mmol/L CuSO4溶液(用0.2 mol/L 甘氨酸-氢氧化钠缓冲液配制),搅拌1～2 min后,排去CuSO4溶液,再用缓冲液冲洗3次后排尽液体。取去蛋白血清3 ml,加入甘氨酸缓冲液1 ml和激活的镉粒2.5 g,置室温60 min。取上清液2 ml,加入Greiss试剂(1%对氨基苯磺酰胺和0.1%N-1-萘乙二胺1∶1)2 ml,混匀;用721型分光光度计(上海第三仪器厂)在波长545 nm处测得样本的光密度值,以系列亚硝酸溶液建立标准曲线[2]。
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1.2.2 血清cGMP的测定 采用放射免疫法(125I-cGMP药盒由上海中医药大学同位素室提供)。取血清0.1 ml,加入无水酒精2 ml,振摆1 min,静置5 min,离心(3000 r/min)10 min。将上清液倒入青霉素小瓶,残渣再加入75%酒精1 ml,摇匀,离心10 min。合并上清液,于60℃水浴中吹干。测量时加入50 mmol/L醋酸缓冲液1 ml溶解。取0.1 ml,依次加入乙酰化试剂5 μl,125I-cGMP 100 μl,cGMP抗血清100 μl,摇匀,4℃过夜。加入正常兔血清100 μl,羊抗兔IgG 100 μl,摇匀,4℃过夜,离心15 min,负压吸去上清液,用FJ-2008γ-免疫计数仪(西安国营262厂)自动记录样本的放射性强度。
1.3 治疗情况 轻型肺炎24例主要予青霉素、氨苄青霉素联合抗感染治疗,未予激素,皆痊愈出院。重型肺炎10例予苯唑青霉素联合安美汀(香港史克必成药厂)或单用头孢呋肟(葛兰素中国公司)抗感染治疗,其中5例加用地塞米松;9例痊愈出院,1例好转出院。
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1.4 统计处理 实验结果以平均值±标准差表示,作方差齐性检验,各组间差异的显著性用q检验和t检验。
2 结 果
肺炎患儿治疗前后血清NO2/NO3和cGMP的变化见附表。
附表 肺炎患儿血清NO2/NO3和cGMP治疗前后的变化 分 组
n
NO2/NO3(nmol/ml)
cGMP
(pmol/ml)
, 百拇医药 对照组
28
29.43±10.88
6.95±3.08
肺炎组
轻型
24
43.31±12.65**
9.19±3.28**
重型
10
68.74±17.21**△△
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14.66±6.12**△△
治疗
前
34
50.46±14.32
10.84±4.93
后
30
34.69±11.40**##
8.08±3.22**#
与对照组比较,**:P<0.01; 与轻型比较,△△:P<0.01; 与治疗前比较,#:P<0.05,##:P<0.01.3 讨 论
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NO是由左旋精氨酸和分子氧在一氧化氮合成酶(NOS)催化下生成的。由于NO半衰期仅几秒钟,且性能极不稳定,生成后很快氧化生成稳定的代谢产物NO2/NO3;同时NO可作用于细胞膜上的鸟苷酸环化酶(GC),使之活化,促使GTP转变为cGMP,因此通过检测血清中NO2/NO3和cGMP的含量可间接反映血清中NO的含量[3]。本文显示,小儿肺炎血清中NO的含量明显高于对照组,患者病情越重,血清中NO的含量越高;经治疗后患者血清NO的含量明显下降。
肺炎早期血清NO的生成增多,这主要是由于肺部炎症可引起生物活性因子(如内毒素、白细胞介素-1、白细胞介素-2和肿瘤坏死因子α等)活性增加,通过激活肺组织细胞中NOS,使其活性增强,产生大量NO[3]。高浓度的NO具有毒性作用,直接损伤气道组织细胞的DNA、线粒体和含铁酶类的活性,同时还可与O-形成过氧化亚硝酰基离子(ONOO-),进而降解为毒性更高的OH-和NO2,造成呼吸道上皮损伤、剥脱。cGMP含量升高,可导致肥大细胞脱颗粒,释放大量炎症介质,增加血管通透性,加重血浆渗漏,引起粘膜及粘膜下充血水肿,造成肺部血管和内皮细胞损伤,使病情更加严重,NOS抑制剂可减轻这种损伤作用[4～6]。经治疗后,随着炎症的控制,组织细胞分泌炎症介质相应减少,对NOS刺激作用减弱,NO的生成也相应减少。
, 百拇医药
NO参与了小儿肺炎的发病过程,检测血清中NO的含量有助于判断患者病情的严重程度,并可作为观察治疗效果的一个指标。临床上用NO生成抑制药阻断肺炎早期过量NO的毒性作用可能有助于小儿肺炎的治疗。
作者简介:郑耀辉(1971～),男,住院医师.
参考文献:
[1] 卫生部. 小儿肺炎防治方案[J]. 中华儿科杂志, 1987,25(1):47～48.
[2] 许宏岳,李爱红,汪晓,等. 比色法测定血清亚硝酸盐和硝酸盐及初步临床应用[J]. 临床检验杂志, 1996,14(1):28.
[3] Moncada S,Palmer RMJ,Higgs EA. Nitric oxide: physiology,pathophysiology and pharmacology[J]. Pharmacol Rev, 1991,43:100～142.
, http://www.100md.com
[4] Royall JA,Kooy NW,Beckman JS. Nitric oxide-related oxidants in acute lung injury[J]. New Horiz, 1995,3(1):113～122.
[5] Barnes PJ. Nitric oxide and airway disease[J]. Ann Med, 1995,27(3):389～393.
[6] Akaike T,Noguchi I. Pathogenesis of influenza virus-induced pneumonia: involvement of both nitric oxide and oxygen radicals[J]. Proc Natl Acad Sci USA, 1996,93(6):2443～2453.
收稿日期:2000-04-10, http://www.100md.com