p16蛋白表达与胃癌浸润转移的关系
作者：贺修胜 苏琦 钱仲斐 罗招阳
单位：贺修胜(衡阳医学院肿瘤研究所,湖南衡阳421001)；苏琦(衡阳医学院肿瘤研究所,湖南衡阳421001)；钱仲斐(湖南医科大学病理教研室，湖南长沙410078)；罗招阳(衡阳医学院肿瘤研究所,湖南衡阳421001)
关键词：p16蛋白表达；胃肿瘤；浸润；转移
分类号分类号：R735.2 文献标识码：A
文章编号：1000-467X(2000)03-0274-01■
p16基因是近年来克隆出来的一个新的抑癌基因，定位于9p21，由2个内含子和3个外显子组成，全长8.5kb。3个外显子共同编码分子量为15.84kd、148个氨基酸组成的单链多肽-P16蛋白，参与正常细胞生长调控[1]。研究资料表明在人类多种肿瘤细胞系及原发肿瘤中存在p16基因的异常及p16蛋白表达的缺失。本文就p16蛋白表达与胃癌浸润、转移等生物学行为的关系进行了分析，报告如下。
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1 材料和方法
1.1 标本来源
标本来源本院病理学教研室存档的石蜡包埋组织块及手术切除标本,均经病理确诊。122例胃癌中男81例,女41例，年龄15～79岁,平均56岁;浸润浅肌层50例,浸润深肌层及全层72例，明确已有淋巴结转移的69例,无淋巴结转移53例,任取30例淋巴结转移癌和其相对应的原发癌配对比较。
1.2 主要试剂
兔抗人p16蛋白多克隆抗体,链菌素生物素-过氧化物酶免疫组化试剂盒(S-P)购自美国Maxaim公司(由福建迈新公司提供)。
1.3 实验设计,工作流程,判断标准,结果判定
见参考文献[4]。
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1.4 统计学方法
采用χ2检验，确定P<0.05为差异有显著性意义。
2 结果
2.1 30例原发及淋巴结转移性胃癌配对标本中p16蛋白阳性表达(见图1)
图1 p16蛋白在淋巴结转移性胃癌组织中的阳性表达(箭头所示)×400
原发胃癌组为46.67%(14/30),淋巴结转移性胃癌组为16.67%(5/30),淋巴结转移性胃癌组p16蛋白阳性表达率低于原发胃癌组，两组间差异有显著性意义(P<0.05)(见表1)。
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表1 p16蛋白表达与原发及淋巴结转移性胃癌的关系
类型
n
阳性
阳性率(%)
原发癌
30
14
46.67
转移癌
30
5
16.67
, 百拇医药
2.2 p16蛋白在不同性别胃癌中阳性表达
女53.66%(22/41)，男44.44%(36/81),女性高于男性(P>0.05)。
2.3 p16蛋白在不同年龄组胃癌中阳性表达
≤40岁的中青年组45.45%(10/22)，41～59岁中老年组49.27%(34/69)，≥60岁老年组45.16%(14/31)，中老年组>中青年组>老年组(P>0.05)。
2.4 p16蛋白在不同浸润深度胃癌组中阳性表达(见图2)
图2 p16蛋白在浸润肌层胃癌组织中的阳性表达(箭头所示)×400
, 百拇医药
浸润浅肌层48.00%(24/50),浸润深肌层及累及全层47.22%(34/72)，前者高于后者(P>0.05)。
2.5 胃癌Borrmann分型与p16蛋白的表达
Ⅰ型为46.67%(7/15),Ⅱ型为48.84%(21/43),Ⅲ型为46.81%(22/47),Ⅳ型为47.06%(8/17),Ⅱ型>Ⅳ型>Ⅲ型>Ⅰ型(P>0.05)。
3 讨论
p16基因是一个直接参与细胞生长殖的负调控基因。若此基因失活或达异常或表达产物结构改变,将使其能丧失,致使细胞过度生长增殖,导肿瘤的发生发展[1]。最近有人把外源p16基因转染到有p16基因缺失的肿细胞内,使瘤细胞重新恢复了p16基表达,生长明显受到抑制[2]。还有人对16基因CpG岛甲基化并表达沉没的瘤细胞系,施用5-氮-2′-脱氧胞嘧啶苷(5-aza-2′-deoxycytidine)治疗,使肿细胞重新恢复了p16蛋白的表达,并现出生长抑制[3]。显然p16基因及其达产物p16蛋白在肿瘤的发生发展程中起着非常重要的作用。
, 百拇医药
作者曾报道胃癌p16蛋白阳性表达率低于癌前病变和正常胃粘膜,而且在胃癌各组织学类型中的表达率也各不相同[4]。本文就不同性别、不同年龄组段、不同浸润深度、Borrmann分型、原发及淋巴结转移胃癌与p16蛋白表达的关系做进一步研究分析，结果显示：(1)p16蛋白阳性表达率,在不同性别、不同年龄组段、不同浸润深度及Borrmann分型各胃癌组中的差异均无显著性意义(P>0.05)，提示胃癌组织中p16蛋白缺失可能与性别、年龄、浸润深度及Borrmann大体分型无明显关系。Reed在研究恶性黑色素瘤时,证实p16蛋白的缺失
与恶性黑色素瘤浸润深度无关[5],与本文胃癌研究结果一致；(2)在30例原发及淋巴结转移性胃癌配对标本中,p16蛋白阳性表达率转移癌为16.67%(5/30)、原发癌为46.67%(14/30),转移癌明显低于原发癌,差异有显著性意义(P<0.05)，与文献报道结果相似[5]。提示p16蛋白的缺失可能与胃癌转移有关。并在1病例中发现原发癌为p16蛋白阳性表达,而转移到胃小弯侧相邻的两个淋巴结,一个为阳性表达,另一个则为阴性表达,究竟是在同一原发癌中有多个克隆或多个亚克隆性癌细胞的存在,还是由于一个淋巴结内转移癌发生了基因突变形成了新的亚克隆,而另一个淋巴结转移癌则没有发生类似改变,仍不清楚,有待进一步探讨。
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基金项目：本课题受湖南省教委基金(编号97B095)资助
通讯作者：贺修胜:Tel：86-734-8280070Fax：86-734-8280907E-mail：yxybgs@hy.hn.cn
参考文献：
[1]Serrano M,Hannon GJ,Beach D. A new regulatory motif in cell-cycle control causing specific inhibition of cyclin D/CDK4[J]. Nature,1993， 366： 704～ 707.
[2]Mobley SR,Liu TJ,Hudson JM,et al.In vitro growth suppression by adenoviral transduction of p21 and p16 in squamous cell carcinoma of the head and neck： a research model for combination gene therapy [J]. Arch Otolaryngol Head Neck Surg,1998, 124： 88～ 92.
, 百拇医药
[3]Lo KW,Cheung ST， Leung SP, et al. Hypermethylation of the p16 gene in nasopharyngeal carcinoma [J]. CancerRes,1996， 56： 2721～ 2725.
[4]贺修胜，苏琦，龙治峰.胃癌及癌前病变中p16蛋白表达的研究[J].衡阳医学院学报，1998，26：378～381.
[5]Reed JA， Loganzo F Jr,Shea CR,et al.Loss of expression of the p16/cyclindependent kinase inhibitor 2 tumor suppressor gene in melanocytic lesions correlates with invasive stage of tumor progression [J]. Cancer Res,1995， 55： 2713～ 2718.
收稿日期：1999-07-28
修稿日期：1999-08-30, http://www.100md.com
单位：贺修胜(衡阳医学院肿瘤研究所,湖南衡阳421001)；苏琦(衡阳医学院肿瘤研究所,湖南衡阳421001)；钱仲斐(湖南医科大学病理教研室，湖南长沙410078)；罗招阳(衡阳医学院肿瘤研究所,湖南衡阳421001)
关键词：p16蛋白表达；胃肿瘤；浸润；转移
分类号分类号：R735.2 文献标识码：A
文章编号：1000-467X(2000)03-0274-01■
p16基因是近年来克隆出来的一个新的抑癌基因，定位于9p21，由2个内含子和3个外显子组成，全长8.5kb。3个外显子共同编码分子量为15.84kd、148个氨基酸组成的单链多肽-P16蛋白，参与正常细胞生长调控[1]。研究资料表明在人类多种肿瘤细胞系及原发肿瘤中存在p16基因的异常及p16蛋白表达的缺失。本文就p16蛋白表达与胃癌浸润、转移等生物学行为的关系进行了分析，报告如下。
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1 材料和方法
1.1 标本来源
标本来源本院病理学教研室存档的石蜡包埋组织块及手术切除标本,均经病理确诊。122例胃癌中男81例,女41例，年龄15～79岁,平均56岁;浸润浅肌层50例,浸润深肌层及全层72例，明确已有淋巴结转移的69例,无淋巴结转移53例,任取30例淋巴结转移癌和其相对应的原发癌配对比较。
1.2 主要试剂
兔抗人p16蛋白多克隆抗体,链菌素生物素-过氧化物酶免疫组化试剂盒(S-P)购自美国Maxaim公司(由福建迈新公司提供)。
1.3 实验设计,工作流程,判断标准,结果判定
见参考文献[4]。
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1.4 统计学方法
采用χ2检验，确定P<0.05为差异有显著性意义。
2 结果
2.1 30例原发及淋巴结转移性胃癌配对标本中p16蛋白阳性表达(见图1)
图1 p16蛋白在淋巴结转移性胃癌组织中的阳性表达(箭头所示)×400
原发胃癌组为46.67%(14/30),淋巴结转移性胃癌组为16.67%(5/30),淋巴结转移性胃癌组p16蛋白阳性表达率低于原发胃癌组，两组间差异有显著性意义(P<0.05)(见表1)。
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表1 p16蛋白表达与原发及淋巴结转移性胃癌的关系
类型
n
阳性
阳性率(%)
原发癌
30
14
46.67
转移癌
30
5
16.67
, 百拇医药
2.2 p16蛋白在不同性别胃癌中阳性表达
女53.66%(22/41)，男44.44%(36/81),女性高于男性(P>0.05)。
2.3 p16蛋白在不同年龄组胃癌中阳性表达
≤40岁的中青年组45.45%(10/22)，41～59岁中老年组49.27%(34/69)，≥60岁老年组45.16%(14/31)，中老年组>中青年组>老年组(P>0.05)。
2.4 p16蛋白在不同浸润深度胃癌组中阳性表达(见图2)
图2 p16蛋白在浸润肌层胃癌组织中的阳性表达(箭头所示)×400
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浸润浅肌层48.00%(24/50),浸润深肌层及累及全层47.22%(34/72)，前者高于后者(P>0.05)。
2.5 胃癌Borrmann分型与p16蛋白的表达
Ⅰ型为46.67%(7/15),Ⅱ型为48.84%(21/43),Ⅲ型为46.81%(22/47),Ⅳ型为47.06%(8/17),Ⅱ型>Ⅳ型>Ⅲ型>Ⅰ型(P>0.05)。
3 讨论
p16基因是一个直接参与细胞生长殖的负调控基因。若此基因失活或达异常或表达产物结构改变,将使其能丧失,致使细胞过度生长增殖,导肿瘤的发生发展[1]。最近有人把外源p16基因转染到有p16基因缺失的肿细胞内,使瘤细胞重新恢复了p16基表达,生长明显受到抑制[2]。还有人对16基因CpG岛甲基化并表达沉没的瘤细胞系,施用5-氮-2′-脱氧胞嘧啶苷(5-aza-2′-deoxycytidine)治疗,使肿细胞重新恢复了p16蛋白的表达,并现出生长抑制[3]。显然p16基因及其达产物p16蛋白在肿瘤的发生发展程中起着非常重要的作用。
, 百拇医药
作者曾报道胃癌p16蛋白阳性表达率低于癌前病变和正常胃粘膜,而且在胃癌各组织学类型中的表达率也各不相同[4]。本文就不同性别、不同年龄组段、不同浸润深度、Borrmann分型、原发及淋巴结转移胃癌与p16蛋白表达的关系做进一步研究分析，结果显示：(1)p16蛋白阳性表达率,在不同性别、不同年龄组段、不同浸润深度及Borrmann分型各胃癌组中的差异均无显著性意义(P>0.05)，提示胃癌组织中p16蛋白缺失可能与性别、年龄、浸润深度及Borrmann大体分型无明显关系。Reed在研究恶性黑色素瘤时,证实p16蛋白的缺失
与恶性黑色素瘤浸润深度无关[5],与本文胃癌研究结果一致；(2)在30例原发及淋巴结转移性胃癌配对标本中,p16蛋白阳性表达率转移癌为16.67%(5/30)、原发癌为46.67%(14/30),转移癌明显低于原发癌,差异有显著性意义(P<0.05)，与文献报道结果相似[5]。提示p16蛋白的缺失可能与胃癌转移有关。并在1病例中发现原发癌为p16蛋白阳性表达,而转移到胃小弯侧相邻的两个淋巴结,一个为阳性表达,另一个则为阴性表达,究竟是在同一原发癌中有多个克隆或多个亚克隆性癌细胞的存在,还是由于一个淋巴结内转移癌发生了基因突变形成了新的亚克隆,而另一个淋巴结转移癌则没有发生类似改变,仍不清楚,有待进一步探讨。
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基金项目：本课题受湖南省教委基金(编号97B095)资助
通讯作者：贺修胜:Tel：86-734-8280070Fax：86-734-8280907E-mail：yxybgs@hy.hn.cn
参考文献：
[1]Serrano M,Hannon GJ,Beach D. A new regulatory motif in cell-cycle control causing specific inhibition of cyclin D/CDK4[J]. Nature,1993， 366： 704～ 707.
[2]Mobley SR,Liu TJ,Hudson JM,et al.In vitro growth suppression by adenoviral transduction of p21 and p16 in squamous cell carcinoma of the head and neck： a research model for combination gene therapy [J]. Arch Otolaryngol Head Neck Surg,1998, 124： 88～ 92.
, 百拇医药
[3]Lo KW,Cheung ST， Leung SP, et al. Hypermethylation of the p16 gene in nasopharyngeal carcinoma [J]. CancerRes,1996， 56： 2721～ 2725.
[4]贺修胜，苏琦，龙治峰.胃癌及癌前病变中p16蛋白表达的研究[J].衡阳医学院学报，1998，26：378～381.
[5]Reed JA， Loganzo F Jr,Shea CR,et al.Loss of expression of the p16/cyclindependent kinase inhibitor 2 tumor suppressor gene in melanocytic lesions correlates with invasive stage of tumor progression [J]. Cancer Res,1995， 55： 2713～ 2718.
收稿日期：1999-07-28
修稿日期：1999-08-30, http://www.100md.com