高效液相色谱法测定文冠木各部位中杨梅树皮素和槲皮素的含量
作者：张文霞 包文芳 赵淑华
单位：包文芳 张文霞(沈阳药科大学中药系，沈阳 110015)
关键词：文冠木；杨梅树皮素；槲皮素；高效液相色谱法
沈阳药科大学学报000313 摘 要 应用高效液相色谱法测定文冠木各部位中杨梅树皮素和槲皮素的含量，色谱柱采用SUNTEK AccusiL C-18柱，流动相为甲醇∶水∶磷酸(40∶60∶0.4，V∶V∶V)，柱温为40℃.回收率分别为101.3%和94.9%，RSD分别为1.4%和3.5%.
分类号 R914.1
Quantitative Determination of Myricetin and Quercetin in Xanthoceras sorbifolia Bunge by HPLC
, http://www.100md.com
Zhang Wenxia,Bao Wenfang,Zhao Shuhua
Department of Traditional Chinese Medicines,Shenyang Pharmaceutical University,Shenyang 110015
Abstract Myricetin and quercetin in Xanthoceras sorbifolia Bunge were determined quantitatively by HPLC.The results were stable and reproducible.It was carried out in the SUNTEK AccusiL C-18 column with the mobile phase of a mixture of MeOH∶H2O∶H3PO4(40∶60∶0.4).Their average recoveries were 101.3% and 94.9%， and the coefficients of correlation were 0.999 9 and 0.998 2 respectively.
, http://www.100md.com
Key words Xanthoceras sorbifolia；myricetin;quercetin;HPLC
文冠木为无患子科文冠果属文冠果(Xanthoceras sorbifolia Bunge)的干燥茎枝，分布于东北、华北、西北等地，主产于内蒙古.蒙药名称西拉*森登，能祛风湿，消肿止痛，敛干黄水.临床用于治疗风湿性关节炎、风湿内热、皮肤风湿等症〔1〕.目前对文冠木作为药材的质量控制尚未标准化，仍依赖于比较传统的识别方法，因此作者用HPLC法对其所含杨梅树皮素和槲皮素进行了含量测定，提供了对文冠木进行质量控制的依据和方法，并对不同采集时间、不同产地文冠木的各部位进行了比较.
1 仪器与试药
Shimadzu LC-10A型高效液相色谱仪；SPD-M10A二极管阵列检测器；Class LC-10A色谱工作站：CTO-10A色谱柱温箱；SIL-10A自动进样器；甲醇为色谱纯(天津四友化工厂)；对照品杨梅树皮素和槲皮素自制，纯度>99.85%；其他试剂均为分析纯(山东禹王化学试剂有限责任公司)；水为重蒸水.
, http://www.100md.com
2 方法与结果
2.1 色谱条件
采用SUNTEK AccusiL C-18柱(10 μm，150 mm×4.6 mm)；流动相：甲醇∶水∶磷酸(40∶60∶0.4，V∶V∶V)；流速：1 mL/min；检测波长：360 nm；柱温：40℃；进样量：20 μL.以峰面积定量.
2.2 检测波长的选择
扫描杨梅树皮素和槲皮素对照品的甲醇紫外图谱，二者均在254 nm有最大吸收，但该波长处干扰较多，因此选择杂质峰较低而对照品仍有较大吸收的360 nm为测定波长.
2.3 标准曲线的制备
精密称取杨梅树皮素和槲皮素标准品各37.5 mg和4.0 mg，分别置25 mL和50 mL量瓶中，分别加甲醇溶解并稀释至刻度，即配成储备液.
, http://www.100md.com
精密吸取上述储备液各0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mL，分别置于同一10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，混匀.分别进样20 μL，测定峰面积，绘制标准曲线，计算回归方程如下：杨梅树皮素：A=-253 459.6+47 818 211.4C,r=0.999 9；槲皮素：A=-35 223.2+39 482 687.5C,r=0.998 2.式中A为峰面积，C为样品浓度(mg/mL).
2.4 精密度试验
称取3号文冠木茎样品2 g，置沙氏提取器中，加60 mL氯仿提取8 h，样品挥干氯仿，加60 mL甲醇提取10 h，浓缩至小体积，置25 mL量瓶中，甲醇稀释至刻度.20 μL进样6次，测定杨梅树皮素和槲皮素的峰面积，计算相对标准偏差，结果表明仪器精密度良好，见表1.
2.5 回收率试验
精密称取1 g文冠木茎样品计6份，分别置沙氏提取器中，加60 mL氯仿提取8 h，样品挥干溶剂，分别加入适量杨梅树皮素和槲皮素对照品储备液，加60 mL甲醇提取10 h，浓缩至小体积，置25 mL量瓶中，甲醇稀释至刻度.进样20 μL后计算各个对照品的回收率，结果见表2表3.
, 百拇医药
2.6 生药样品测定
精密称取干燥文冠木各部位样品2 g,置沙氏提取器中，加60 mL氯仿提取8 h，样品挥干溶剂，加60 mL甲醇提取10 h，浓缩至小体积，置25 mL量瓶中，甲醇稀释至刻度.进样20 μL，测定每个组分峰面积，通过回归方程计算含量，结果见表4.
Tab.1 Precision tests of determinations No
Peak areas of reference standards
myricetin
quercetion
1
8 292 518
, http://www.100md.com
533 615
2
8 667 817
565 544
3
8 664 341
543 367
4
8 555 212
558 048
5
8 531 106
, http://www.100md.com 560 040
6
8 832 684
534 286
RSD/%
2.1
2.5
Tab.2 Recoveries of added standard myricetin Content
/mg
Added
/mg
Found
, 百拇医药
/mg
Recovery
/%
2.203
2.250
4.438
99.3
2.198
2.250
4.515
103.0
2.083
2.250
, 百拇医药
4.471
100.6
2.303
2.250
4.506
102.4
2.204
2.250
4.458
100.2
2.208
2.250
4.500
, 百拇医药
102.1
Average:103.3%；RSD=1.4%Tab.3 Recoveries of added standard quercetin Content
/μg
Added
/μg
Found
/μg
Recovery
/%
177.6
104.0
, http://www.100md.com
271.5
90.3
177.2
104.0
274.4
93.4
178.0
104.0
280.8
98.8
177.6
104.0
274.3
, http://www.100md.com
92.9
177.7
104.0
277.4
95.9
178.7
104.0
280.2
98.3
Average:94.9%；RSD=3.5%Tab.4 Contents of flavoids in the stem and other parts of X.s.B. Sample
Parts of plant
, 百拇医药
Place & time of collection
Contents of flavoids
myricetin/mg.g-1
quercetin/μg.g-1
1
stem
Shenyang,Liaoning(1993.3)
0.717 6
87.30
2
, 百拇医药
stem
Shenyang,Liaoning(1997.8)
0.632 2
60.20
3
stem
Tongliao,Inner Mongolia(1998.8)
2.199
177.2
4
flower
Shenyang,Liaoning(1998.5)
, http://www.100md.com
0.428 4
61.54
5
leaf
Shenyang,Liaoning(1998.5)
1.562
50.12
6
leaf
Shenyang,Liaoning(1998.8)
0.841 9
49.62
, 百拇医药
7
leaf
Tongliao,Lnner Mongolia(1998.8)
1.009
35.44
3 讨论 a.不同时间不同产地采集的同类样品所含成分类似，但含量大小不同，以内蒙古采集的样品含量最高，说明在用药时应采用药材；传统药材通常春夏两季采收，含量测定结果表明春季采集的样品含量较夏季高，因此，建议药材宜春季采收.
b.不同部分所含成分差别较大，但均含有杨梅树皮素和槲皮素，只是含量大小不同.
c.对文冠木各部位中杨梅树皮素和槲皮素进行了含量测定，可以作为对文冠木进行质量控制的依据和方法.
参考文献
1 卫生部生物制品检定所，云南省药品检验所.中国民族药志：第一卷.北京：人民卫生出版社，1984.130
收稿日期：1999-11-01, 百拇医药
单位：包文芳 张文霞(沈阳药科大学中药系，沈阳 110015)
关键词：文冠木；杨梅树皮素；槲皮素；高效液相色谱法
沈阳药科大学学报000313 摘 要 应用高效液相色谱法测定文冠木各部位中杨梅树皮素和槲皮素的含量，色谱柱采用SUNTEK AccusiL C-18柱，流动相为甲醇∶水∶磷酸(40∶60∶0.4，V∶V∶V)，柱温为40℃.回收率分别为101.3%和94.9%，RSD分别为1.4%和3.5%.
分类号 R914.1
Quantitative Determination of Myricetin and Quercetin in Xanthoceras sorbifolia Bunge by HPLC
, http://www.100md.com
Zhang Wenxia,Bao Wenfang,Zhao Shuhua
Department of Traditional Chinese Medicines,Shenyang Pharmaceutical University,Shenyang 110015
Abstract Myricetin and quercetin in Xanthoceras sorbifolia Bunge were determined quantitatively by HPLC.The results were stable and reproducible.It was carried out in the SUNTEK AccusiL C-18 column with the mobile phase of a mixture of MeOH∶H2O∶H3PO4(40∶60∶0.4).Their average recoveries were 101.3% and 94.9%， and the coefficients of correlation were 0.999 9 and 0.998 2 respectively.
, http://www.100md.com
Key words Xanthoceras sorbifolia；myricetin;quercetin;HPLC
文冠木为无患子科文冠果属文冠果(Xanthoceras sorbifolia Bunge)的干燥茎枝，分布于东北、华北、西北等地，主产于内蒙古.蒙药名称西拉*森登，能祛风湿，消肿止痛，敛干黄水.临床用于治疗风湿性关节炎、风湿内热、皮肤风湿等症〔1〕.目前对文冠木作为药材的质量控制尚未标准化，仍依赖于比较传统的识别方法，因此作者用HPLC法对其所含杨梅树皮素和槲皮素进行了含量测定，提供了对文冠木进行质量控制的依据和方法，并对不同采集时间、不同产地文冠木的各部位进行了比较.
1 仪器与试药
Shimadzu LC-10A型高效液相色谱仪；SPD-M10A二极管阵列检测器；Class LC-10A色谱工作站：CTO-10A色谱柱温箱；SIL-10A自动进样器；甲醇为色谱纯(天津四友化工厂)；对照品杨梅树皮素和槲皮素自制，纯度>99.85%；其他试剂均为分析纯(山东禹王化学试剂有限责任公司)；水为重蒸水.
, http://www.100md.com
2 方法与结果
2.1 色谱条件
采用SUNTEK AccusiL C-18柱(10 μm，150 mm×4.6 mm)；流动相：甲醇∶水∶磷酸(40∶60∶0.4，V∶V∶V)；流速：1 mL/min；检测波长：360 nm；柱温：40℃；进样量：20 μL.以峰面积定量.
2.2 检测波长的选择
扫描杨梅树皮素和槲皮素对照品的甲醇紫外图谱，二者均在254 nm有最大吸收，但该波长处干扰较多，因此选择杂质峰较低而对照品仍有较大吸收的360 nm为测定波长.
2.3 标准曲线的制备
精密称取杨梅树皮素和槲皮素标准品各37.5 mg和4.0 mg，分别置25 mL和50 mL量瓶中，分别加甲醇溶解并稀释至刻度，即配成储备液.
, http://www.100md.com
精密吸取上述储备液各0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mL，分别置于同一10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，混匀.分别进样20 μL，测定峰面积，绘制标准曲线，计算回归方程如下：杨梅树皮素：A=-253 459.6+47 818 211.4C,r=0.999 9；槲皮素：A=-35 223.2+39 482 687.5C,r=0.998 2.式中A为峰面积，C为样品浓度(mg/mL).
2.4 精密度试验
称取3号文冠木茎样品2 g，置沙氏提取器中，加60 mL氯仿提取8 h，样品挥干氯仿，加60 mL甲醇提取10 h，浓缩至小体积，置25 mL量瓶中，甲醇稀释至刻度.20 μL进样6次，测定杨梅树皮素和槲皮素的峰面积，计算相对标准偏差，结果表明仪器精密度良好，见表1.
2.5 回收率试验
精密称取1 g文冠木茎样品计6份，分别置沙氏提取器中，加60 mL氯仿提取8 h，样品挥干溶剂，分别加入适量杨梅树皮素和槲皮素对照品储备液，加60 mL甲醇提取10 h，浓缩至小体积，置25 mL量瓶中，甲醇稀释至刻度.进样20 μL后计算各个对照品的回收率，结果见表2表3.
, 百拇医药
2.6 生药样品测定
精密称取干燥文冠木各部位样品2 g,置沙氏提取器中，加60 mL氯仿提取8 h，样品挥干溶剂，加60 mL甲醇提取10 h，浓缩至小体积，置25 mL量瓶中，甲醇稀释至刻度.进样20 μL，测定每个组分峰面积，通过回归方程计算含量，结果见表4.
Tab.1 Precision tests of determinations No
Peak areas of reference standards
myricetin
quercetion
1
8 292 518
, http://www.100md.com
533 615
2
8 667 817
565 544
3
8 664 341
543 367
4
8 555 212
558 048
5
8 531 106
, http://www.100md.com 560 040
6
8 832 684
534 286
RSD/%
2.1
2.5
Tab.2 Recoveries of added standard myricetin Content
/mg
Added
/mg
Found
, 百拇医药
/mg
Recovery
/%
2.203
2.250
4.438
99.3
2.198
2.250
4.515
103.0
2.083
2.250
, 百拇医药
4.471
100.6
2.303
2.250
4.506
102.4
2.204
2.250
4.458
100.2
2.208
2.250
4.500
, 百拇医药
102.1
Average:103.3%；RSD=1.4%Tab.3 Recoveries of added standard quercetin Content
/μg
Added
/μg
Found
/μg
Recovery
/%
177.6
104.0
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271.5
90.3
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104.0
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104.0
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104.0
277.4
95.9
178.7
104.0
280.2
98.3
Average:94.9%；RSD=3.5%Tab.4 Contents of flavoids in the stem and other parts of X.s.B. Sample
Parts of plant
, 百拇医药
Place & time of collection
Contents of flavoids
myricetin/mg.g-1
quercetin/μg.g-1
1
stem
Shenyang,Liaoning(1993.3)
0.717 6
87.30
2
, 百拇医药
stem
Shenyang,Liaoning(1997.8)
0.632 2
60.20
3
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Tongliao,Inner Mongolia(1998.8)
2.199
177.2
4
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Shenyang,Liaoning(1998.5)
, http://www.100md.com
0.428 4
61.54
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Shenyang,Liaoning(1998.5)
1.562
50.12
6
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Shenyang,Liaoning(1998.8)
0.841 9
49.62
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Tongliao,Lnner Mongolia(1998.8)
1.009
35.44
3 讨论 a.不同时间不同产地采集的同类样品所含成分类似，但含量大小不同，以内蒙古采集的样品含量最高，说明在用药时应采用药材；传统药材通常春夏两季采收，含量测定结果表明春季采集的样品含量较夏季高，因此，建议药材宜春季采收.
b.不同部分所含成分差别较大，但均含有杨梅树皮素和槲皮素，只是含量大小不同.
c.对文冠木各部位中杨梅树皮素和槲皮素进行了含量测定，可以作为对文冠木进行质量控制的依据和方法.
参考文献
1 卫生部生物制品检定所，云南省药品检验所.中国民族药志：第一卷.北京：人民卫生出版社，1984.130
收稿日期：1999-11-01, 百拇医药