HPLC法测定盐酸阿莫罗芬搽剂的含量
作者：王成刚 余立
单位：王成刚 余立(北京市药品检验所，北京 100035)
关键词：盐酸阿莫罗芬；高效液相色谱法
中国抗生素杂志000322 摘 要 应用反相高效液相色谱法，采用YWG C18柱，流动相为柠檬酸-盐酸-氢氧化钠缓冲液∶甲醇(1∶4)，254nm检测，建立了测定盐酸阿莫罗芬搽剂含量的方法，在0.08～0.32g/L范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系，r=0.9998，平均回收率为99.93%，重复进样的RSD为0.15%，最低检测限为0.04ng。本方法专属性好、快速、准确。
Determination of amorolfine hydrochloride liniment by HPLC
Wang Chenggang，Yu Li
, 百拇医药
(Beijing Institute for Drug Control，Beijing 100035)
盐酸阿莫罗芬搽剂由瑞士Roche公司生产，其活性成分盐酸阿莫罗芬是一种具有抗真菌活性的新药，目前国内尚未见生产及检验方面的报道。Roche公司所附质量标准中的含量测定法流动相为TEA缓冲液∶水∶三乙胺∶乙腈(25∶175∶0.25∶300)。该流动相中不仅毒性大、价格高的乙腈所占比例较大，且TEA缓冲液由Titrisol缓冲液配制，而Titrisol缓冲液须从国外进口，每次整瓶消耗，价格高又不便于国内使用。为避免上述缺点，根据高效液相色谱法[1，2]，我们对其进行了改进研究，建立了新的含量测定方法。
1 仪器、试剂和试样
1.1 仪器
BIO-RAD 2800高效液相色谱仪，UV-1806紫外检测器，CR-6A数据处理机。
, 百拇医药
1.2 试剂和试样
甲醇、乙腈均为色谱纯，北京化工厂生产；Titrisol缓冲液，MERCK公司提供；其他试剂均为分析纯。
盐酸阿莫罗芬对照品由瑞士Roche公司提供；盐酸阿莫罗芬搽剂样品由瑞士Roche公司生产。
1.3 色谱条件
YWG C18柱(4.6mm×150mm，5μm，Alltech公司)；流动相：缓冲液-甲醇(1∶4)，缓冲液的配制：取柠檬酸0.63g、盐酸0.6ml、氢氧化钠0.24g，加水稀释至1000ml，此溶液与水和三乙胺按25∶175∶0.3比例混合，再以稀盐酸调pH至3.0；流速：1.0ml/min；检测波长：220nm；进样量：10μl；灵敏度：0.16AUFS。色谱见图1～3。
2 标准曲线的测定及精密实验
, 百拇医药
图1 盐酸阿莫罗芬对照品图
1：盐酸阿莫罗芬(Rt=7.63min)；
2、3：溶剂峰(1.23、1.54min)；
4、5未知杂质(2.07、3.18min)
图2 盐酸阿罗芬样品图
1：盐酸阿莫罗芬(Rt=7.63min)；
2、3：溶剂峰(1.23、1.54min)；
4、5未知杂质(2.07、3.18min)
, 百拇医药
图3 原方法色谱图
1：盐酸阿莫罗芬(Rt=8.47min)；
2、3、6：溶剂峰(1.37、1.71、1.31min)；
4、5：未知杂质(2.21、3.13min)
2.1 对照品溶液的制备
取盐酸阿莫罗芬对照品约50mg，精密称定，置50ml容量瓶中，以甲醇-水(1∶1)溶解并稀释至刻度，摇匀。
2.2 方法线性的测定
精密量取对照品溶液2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0ml，分别置25ml容量瓶中，用甲醇-水(1∶1)稀释至刻度，摇匀。分别取10μl注入液相色谱仪，以峰面积为纵座标，浓度为横座标作图。结果表明，在浓度为0.08～0.32g/L的范围内呈良好的线性关系，其线性回归方程为Y=3.2457X+0.2748，r=0.9998。
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2.3 精密度实验
另取线性关系测定中心点浓度(盐酸阿莫罗芬0.2g/L)的溶液，连续进样5次，其峰面积的相对标准偏差为±0.15%，实验精密度良好，可准确用于测定。
3 回收实验
采用加样回收法，取已知含量的样品，分别加入盐酸阿莫罗芬对照品，按含量测定法测定，计算回收率，平均值为99.93%，相对标准偏差为±0.80%(n=5，表1)。
4 盐酸阿莫罗芬搽剂的含量测定
精密量取样品200μl，置50ml容量瓶中，于50℃水浴下导入氮气蒸干，冷至室温，残渣以甲醇-水(1∶1)溶解并稀释至刻度，以0.45μm滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液10μl注入液相色谱仪测定。同时取盐酸阿莫罗芬对照品以甲醇-水(1∶1)溶解并稀释至与样品相同的浓度，取10μl注入液相色谱仪测定并计算，3批样品的测定结果与原方法的测定结果比较，无显著差异(表2)。
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表1 回收实验 加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均值
(%)
RSD
(±%)
10.41
10.46
100.48
, 百拇医药
9.87
9.77
98.99
10.14
10.22
100.79
99.93
0.80
9.96
9.98
100.20
9.69
9.61
, http://www.100md.com
99.17
表2 盐酸阿莫罗芬搽剂的含量测定 批号
本方法的含量
测定结果(%)
原方法的含量
测定结果(%)
F004
98.98
99.62
F008
98.09
97.34
, 百拇医药
F0125
99.25
100.84
5 讨论
本方法流动相中所用缓冲液配制来源方便，适于常规检验，避免了Titrisol缓冲液的缺点。关于流动相的选择：当缓冲液-甲醇的比例为1∶3时，盐酸阿莫罗芬的保留时间延长约5min；当缓冲液的pH值为4.0时，盐酸阿莫罗芬的保留时间延长近一倍。当流动相中甲醇的比例再提高和缓冲液的pH值再降低时，则盐酸阿莫罗芬与杂质的分离度不理想，同时对ODS柱有损害。所以采用本文所介绍的比例。
王成刚,男,生于1969年,学士,主管药师.
参考文献
1，中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典1995年版二部.北京：化学工业出版社，1995：附录P23
2，于如嘏主编.分析化学.北京：人民卫生出版社，1990；352
收稿：1999-04-08, http://www.100md.com
单位：王成刚 余立(北京市药品检验所，北京 100035)
关键词：盐酸阿莫罗芬；高效液相色谱法
中国抗生素杂志000322 摘 要 应用反相高效液相色谱法，采用YWG C18柱，流动相为柠檬酸-盐酸-氢氧化钠缓冲液∶甲醇(1∶4)，254nm检测，建立了测定盐酸阿莫罗芬搽剂含量的方法，在0.08～0.32g/L范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系，r=0.9998，平均回收率为99.93%，重复进样的RSD为0.15%，最低检测限为0.04ng。本方法专属性好、快速、准确。
Determination of amorolfine hydrochloride liniment by HPLC
Wang Chenggang，Yu Li
, 百拇医药
(Beijing Institute for Drug Control，Beijing 100035)
盐酸阿莫罗芬搽剂由瑞士Roche公司生产，其活性成分盐酸阿莫罗芬是一种具有抗真菌活性的新药，目前国内尚未见生产及检验方面的报道。Roche公司所附质量标准中的含量测定法流动相为TEA缓冲液∶水∶三乙胺∶乙腈(25∶175∶0.25∶300)。该流动相中不仅毒性大、价格高的乙腈所占比例较大，且TEA缓冲液由Titrisol缓冲液配制，而Titrisol缓冲液须从国外进口，每次整瓶消耗，价格高又不便于国内使用。为避免上述缺点，根据高效液相色谱法[1，2]，我们对其进行了改进研究，建立了新的含量测定方法。
1 仪器、试剂和试样
1.1 仪器
BIO-RAD 2800高效液相色谱仪，UV-1806紫外检测器，CR-6A数据处理机。
, 百拇医药
1.2 试剂和试样
甲醇、乙腈均为色谱纯，北京化工厂生产；Titrisol缓冲液，MERCK公司提供；其他试剂均为分析纯。
盐酸阿莫罗芬对照品由瑞士Roche公司提供；盐酸阿莫罗芬搽剂样品由瑞士Roche公司生产。
1.3 色谱条件
YWG C18柱(4.6mm×150mm，5μm，Alltech公司)；流动相：缓冲液-甲醇(1∶4)，缓冲液的配制：取柠檬酸0.63g、盐酸0.6ml、氢氧化钠0.24g，加水稀释至1000ml，此溶液与水和三乙胺按25∶175∶0.3比例混合，再以稀盐酸调pH至3.0；流速：1.0ml/min；检测波长：220nm；进样量：10μl；灵敏度：0.16AUFS。色谱见图1～3。
2 标准曲线的测定及精密实验
, 百拇医药
图1 盐酸阿莫罗芬对照品图
1：盐酸阿莫罗芬(Rt=7.63min)；
2、3：溶剂峰(1.23、1.54min)；
4、5未知杂质(2.07、3.18min)
图2 盐酸阿罗芬样品图
1：盐酸阿莫罗芬(Rt=7.63min)；
2、3：溶剂峰(1.23、1.54min)；
4、5未知杂质(2.07、3.18min)
, 百拇医药
图3 原方法色谱图
1：盐酸阿莫罗芬(Rt=8.47min)；
2、3、6：溶剂峰(1.37、1.71、1.31min)；
4、5：未知杂质(2.21、3.13min)
2.1 对照品溶液的制备
取盐酸阿莫罗芬对照品约50mg，精密称定，置50ml容量瓶中，以甲醇-水(1∶1)溶解并稀释至刻度，摇匀。
2.2 方法线性的测定
精密量取对照品溶液2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0ml，分别置25ml容量瓶中，用甲醇-水(1∶1)稀释至刻度，摇匀。分别取10μl注入液相色谱仪，以峰面积为纵座标，浓度为横座标作图。结果表明，在浓度为0.08～0.32g/L的范围内呈良好的线性关系，其线性回归方程为Y=3.2457X+0.2748，r=0.9998。
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2.3 精密度实验
另取线性关系测定中心点浓度(盐酸阿莫罗芬0.2g/L)的溶液，连续进样5次，其峰面积的相对标准偏差为±0.15%，实验精密度良好，可准确用于测定。
3 回收实验
采用加样回收法，取已知含量的样品，分别加入盐酸阿莫罗芬对照品，按含量测定法测定，计算回收率，平均值为99.93%，相对标准偏差为±0.80%(n=5，表1)。
4 盐酸阿莫罗芬搽剂的含量测定
精密量取样品200μl，置50ml容量瓶中，于50℃水浴下导入氮气蒸干，冷至室温，残渣以甲醇-水(1∶1)溶解并稀释至刻度，以0.45μm滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液10μl注入液相色谱仪测定。同时取盐酸阿莫罗芬对照品以甲醇-水(1∶1)溶解并稀释至与样品相同的浓度，取10μl注入液相色谱仪测定并计算，3批样品的测定结果与原方法的测定结果比较，无显著差异(表2)。
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表1 回收实验 加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均值
(%)
RSD
(±%)
10.41
10.46
100.48
, 百拇医药
9.87
9.77
98.99
10.14
10.22
100.79
99.93
0.80
9.96
9.98
100.20
9.69
9.61
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99.17
表2 盐酸阿莫罗芬搽剂的含量测定 批号
本方法的含量
测定结果(%)
原方法的含量
测定结果(%)
F004
98.98
99.62
F008
98.09
97.34
, 百拇医药
F0125
99.25
100.84
5 讨论
本方法流动相中所用缓冲液配制来源方便，适于常规检验，避免了Titrisol缓冲液的缺点。关于流动相的选择：当缓冲液-甲醇的比例为1∶3时，盐酸阿莫罗芬的保留时间延长约5min；当缓冲液的pH值为4.0时，盐酸阿莫罗芬的保留时间延长近一倍。当流动相中甲醇的比例再提高和缓冲液的pH值再降低时，则盐酸阿莫罗芬与杂质的分离度不理想，同时对ODS柱有损害。所以采用本文所介绍的比例。
王成刚,男,生于1969年,学士,主管药师.
参考文献
1，中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典1995年版二部.北京：化学工业出版社，1995：附录P23
2，于如嘏主编.分析化学.北京：人民卫生出版社，1990；352
收稿：1999-04-08, http://www.100md.com