病毒性肝炎患者人巨细胞病毒重叠感染状况及其意义
作者：周跃 汤伟 谭晓慧 沈轶瑶 蒋道荣
单位：南通医学院附属医院，江苏 南通 226001
关键词：肝炎；病毒性；巨细胞病毒；人；重叠感染
中国医师杂志000304【摘要】 为了研究病毒性肝炎患者人巨细胞病毒(HCMV)重叠感染状况及其意义，本文采 用核酸 斑点杂交法检测了130例急性和慢性病毒性肝炎患者外周血中HCMV-DNA，并检测了患者的外 周血T细胞亚群及血浆游离氨基酸谱。结果表明：慢性肝炎组HCMV-DNA阳性率(65.8%)显著 高于急性肝炎组(38.9%)，差异非常显著(P<0.01)；慢性肝炎中HCMV-DNA阳性组患者 的CD3、CD4亚群显著低于阴 性组(P<0.05)；急性和慢性肝炎患者中HCMV-DNA阳性组的支链氨基酸.芳香族氨基酸 比值均显著低于HCMV-DNA阴性组。由此可见：慢性病毒性肝炎患者因免疫力下降而易于发生 HCMV-重叠感染，而HCMV-感染会进一步使患者的免疫功能受损，同时还会影响患者的氨基酸 代谢功能，使肝炎病变迁延难愈。
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[中图分类号] R512.6；R373；R392.11 [文献标识码] A
[文章编号]1008-1372(2000)03-0137-03
Superinfection of Human Cytomegalovirus and
Hepatitis Virus and its Significance in Patients with Viral Hepatitis
ZHOU Yue,TANG Wei,TAN Xiao-hui,et al.A
(ffiliated hospital,Nantong Medical College,Nantong,226001 China)
【Abstract】 In order to study the status and significance of super infection of hepatitis virus and human cytomegalovirus(HCMV) in patients with viral hepatitis,the HCMV-DNA in peripheral blood of 130 patients with viral hepatitis was detected by using DNA dot hybridization assay,the T lymphocyte subgroups and plasma free amino acid spectrum in peripheral blood were detected too.The results showed that the HCMV-DNA positive rate in 76 patients with chronic viral hepatitis was 65.8%,it was remarkably higher than that in 54 patients (38.9%) with acute viral hepatitis(P<0.01).In patients with chronic hepatitis,the counting rate of CD3 and CD4 subgroups of the patients with HCMV-DNA(+) were notably lower than that of the patients with HCMV-DNA(-)(P<0.05).In both patients of acute hepatitis and chronic hepatitis,the ratio of branch amino acids/aromatic amino acids in HCMV-DNA positive group was markedly lower than that in HCMV-DNA negative group.The results suggest that the patients with chronic viral hepatitis were easily complicated with HCMV infection,because of descent of immune fuction,and this double infection will further impair the immune function and disorder the amino acid metabolism of the patients with viral hepatitis,which could prolong the course of viral hepatitis.
, 百拇医药
Key Words Hepatitis,viral;Cytomegalovirus;Human;Superinfection
人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染在人群中广泛存在，据报道约60%～90%以上成人曾有过HCMV的感染，而病毒性肝炎患者中血清抗CMV-IgG阳性率可达81.82%～93.30%[1～3]。本文检测了130例病毒性肝炎患者外周血HCMV-DNA，并对其意义进行了探讨，现报告如下。
1 对象与方法
1.1 病例选择 本次研究中所选病例为1997年6月～1998年2月收住于本院的急性、慢性病毒性肝炎患者，共130例。其中，男性96例，女性34例，年龄16～68岁。按照1995年5月北京全国病毒性肝炎学术会议修订的诊断标准诊断：急性病毒性肝炎54例，其中，甲肝25例、乙肝7例、戊肝11例、甲+戊肝6例、乙+戊肝3例、甲+乙+戊肝2例；慢性病毒性肝炎76例，其中，乙肝61例、丙肝6例、乙+丙肝9例。
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1.2 研究方法
1.2.1 标本采集 所有病例均在入院后5日内于清晨空腹时抽取静脉血送检。
1.2.2 HCMV-DNA检测 采用核酸斑点杂交法[4]。
1.2.3 T细胞亚群检测 采用补体杀伤试验[5]。
1.2.4 血浆游离氨基酸谱测定 采用WATERS(USA)高效液相色谱仪(氨基酸型)检测[6]。计算各例患者的支链氨基酸与芳香族氨基酸比值(BCAA/AAA)。
1.2.5 ALT、TBi测定 由本院生化室采用RA-XT型全自动生化分析仪检测。
, 百拇医药
1.2.6 抗-HAV-IgM、抗-HCV、HBVM、抗-HEV检测 均采用EIA法检测。前三者试剂盒由深圳月亮湾生物工程有限公司提供，抗-HEV试剂盒由新加坡Genelabs公司提供，操作按试剂盒说明书进行。
1.2.7 统计学处理 采用GPIS统计软件处理，数据采用t检验，χ2检验。
2 结果
2.1 急、慢性病毒性肝炎患者HCMV重叠感染率 对本次研究中130例病毒性肝炎患者进行外周血HCMV-DNA进行了检测，发现急性肝炎组54例，其中HCMV-DNA(+)21例，阳性率38.9%；慢性肝炎组76例，其中HCMV-DNA(+)50例，阳性率65.8%，两组间HCMV-DNA阳性率比较差异非常显著(χ2＝15.22，P<0.01)。
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2.2 HCMV重叠感染与肝炎患者T细胞亚群的关系 对急、慢性肝炎组患者的外周血T细胞亚群检测结果见表1。由表可见，慢性肝炎组中，HCMV-DNA(+)患者的CD3、CD4亚群与HCMV-DNA(-)患者比较，差异有显著性。
2.3 HCMV重叠感染对肝脏的影响
2.3.1 对血清ALT、TBi水平的影响 对各组患者的肝功能检查结果表明，ALT、TBi等肝功能指标，在HCMV-DNA(+)和HCMV-DNA(-)患者之间差异无显著性。
2.3.2 对血浆游离氨基酸谱的影响 本文同步检测了所有患者的血浆游离氨基酸谱，并计算各例的BCAA/AAA值。结果表明，无论急性肝炎或慢性肝炎组，HCMV-DNA(+)患者的BCAA/AAA比值均显著低于HCMV-DNA(-)患者，见表2。
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表1各型病毒性肝炎患者的
T细胞亚群的比较(
±s) 组别
例数
T细胞亚群
CD3
CD4
CD8
急肝
HCMV-DNA(-)
33
66.85
, 百拇医药
±9.07
36.12
±8.74
29.95
±8.49
HCMV-DNA(+)
21
59.90
±8.78
34.17
±7.31
29.34
±6.26
, 百拇医药
慢肝
HCMV-DNA(-)
26
59.73
±6.11
35.83
±5.18
27.38
±7.55
HCMV-DNA(+)
50
56.14
±6.21*
, 百拇医药
32.33
±7.09*
26.82
±6.38
与HCMV-DNA(-)组比较，(CD3∶t＝2.41，CD4∶t＝2.23)，*P<0.05表2 急、慢性病毒性肝炎患者的支链氨
基酸/芳香族氨基酸比值(±s) 组别
例数
BCAA/AAA
急肝
, 百拇医药
HCMV-DNA(-)
33
3.18±0.51
HCMV-DNA(+)
21
2.66±0.86**
慢肝
HCMV-DNA(-)
26
2.58±0.71
HCMV-DNA(+)
50
, 百拇医药
2.24±0.42*
与HCMV-DNA(-)组比较，t＝2.62，*P<0.05，t＝2.80，**P<0.01
3 讨论
研究资料表明，多数成人均感染过HCMV，主要为无症状的亚临床轻症感染，部分为潜在性感染，后者仅在机体免疫功能明显降低时，HCMV才能激活、复制并造成机体的明显损害。近年来的研究资料表明，情况并非完全如此，HCMV可在一般人群中引起急性、慢性肝炎，甚至可引起暴发性肝炎[4～6]。
本次研究中采用核酸斑点杂交法，直接检测病毒性肝炎患者外周血中的HCMV-DNA，阳性者说明该患者现时体内正存在HCMV感染。结果表明，在慢性病毒性肝炎患者中，巨细胞病毒重叠感染率高达65.8%，显著高于急性肝炎组。众所周知，慢性乙型和丙型病毒性肝炎患者通常存在着机体免疫功能障碍[7，8]，因此可以认为免疫功能降低是导致慢肝患者巨细胞病毒高重叠感染的主要原因。
, 百拇医药
本文进一步观察了HCMV重叠感染对病毒性肝炎患者T细胞亚群的影响。结果发现在重叠感染HCMV的慢性肝炎患者，以CD3和CD4为明显。现代免疫学指出，CD3为成熟T细胞表面的标志物5，CD4为辅助性T细胞(TH)的表面标志物，而TH不仅促进细胞免疫而且对体液免疫也有重要调节作用，CD3和CD4显著降低，可反映出机体免疫功能的下降。因此，上述的研究结果提示HCMV重叠感染可引起慢性肝炎患者的机体免疫功能进一步下降。
本文的研究结果表明，关于巨细胞病毒重叠感染对肝脏的影响，巨细胞病毒感染对患者的血清ALT及TBi水平等无显著影响，HCMV重叠感染并不明显加重肝炎病毒引起的肝脏活动性炎症病变。但患者血清游离氨基酸谱测定及BCAA/AAA比值计算结果显示：无论急性肝炎或是慢性炎，HCMV-DNA(+)组的BCAA/AAA比值均显著降低。提示巨细胞病毒重叠感染对肝脏影响主要表现为对氨基酸代谢功能的影响。氨基酸代谢与机体的蛋白质合成代谢密切相关，氨基酸代谢异常必然影响肝脏损伤病灶的修复和肝细胞的再生，使肝炎病变的康复变慢，这在临床上将表现为患者肝功能复常时间的延长[9]。
, 百拇医药
综上所述，慢性病毒性肝炎患者由于机体的免疫功能下降，较易发生HCMV的重叠感染，从而使患者的免疫功能进一步受损，患者更难以彻底清除体内的肝炎病毒；同时HCMV重叠感染还会影响患者肝脏的氨基酸代谢功能，影响肝炎病变的康复。作者认为，对于病毒性肝炎尤其是慢性病毒性肝炎患者，有必要作HCMV-DNA检测，对阳性者应及时给予相应的抗病毒治疗。
参考文献
[1]罗光荣，范瑛，刘祖春.病毒性肝炎患者1055例中巨细胞病毒活动性感染的研究.临床肝胆病杂志 1994；10：158
[2]汪俊韬，田庚善，崔振宇.全国病毒性疾病专题座谈会纪要.中华传染病杂志 1986；4：122
[3]王明丽.人巨细胞病毒感染特征.国外医学流行病学与传染病学分册 1985；12：78
, 百拇医药 [4]Rando R,Srinvasan A,Feingold J.Characterization of multiple molecular interacting between human cytomegalovirus and human inmmunodeficiency virus type I(HIV-I).Virology 1990；1976：87
[5]高金凤，蔡中起.暴发型病毒性肝炎研究进展.临床肝胆病杂志 1997；13：70
[6]陈义森，林秀玉，闵福援.既往健康成人巨细胞病毒性肝炎24例临床分析.首都医学院学报 1995；6：214
[7]Bobin J.Oxford textbook of medicine.2nd ed.New York:Oxford University Press 1987；5：76
[8]罗光荣，范谨，刘祖春.病毒性肝炎患者1055例中巨细胞病毒活动性感染的研究.临床肝胆病杂志 1994；10：158
[9]沈玲，张林，张新年，方之勋，等.病毒性肝炎患者巨细胞病毒感染115例分析.中华预防医学杂志 1996；30：157
收稿日期：1999-10-27, 百拇医药
单位：南通医学院附属医院，江苏 南通 226001
关键词：肝炎；病毒性；巨细胞病毒；人；重叠感染
中国医师杂志000304【摘要】 为了研究病毒性肝炎患者人巨细胞病毒(HCMV)重叠感染状况及其意义，本文采 用核酸 斑点杂交法检测了130例急性和慢性病毒性肝炎患者外周血中HCMV-DNA，并检测了患者的外 周血T细胞亚群及血浆游离氨基酸谱。结果表明：慢性肝炎组HCMV-DNA阳性率(65.8%)显著 高于急性肝炎组(38.9%)，差异非常显著(P<0.01)；慢性肝炎中HCMV-DNA阳性组患者 的CD3、CD4亚群显著低于阴 性组(P<0.05)；急性和慢性肝炎患者中HCMV-DNA阳性组的支链氨基酸.芳香族氨基酸 比值均显著低于HCMV-DNA阴性组。由此可见：慢性病毒性肝炎患者因免疫力下降而易于发生 HCMV-重叠感染，而HCMV-感染会进一步使患者的免疫功能受损，同时还会影响患者的氨基酸 代谢功能，使肝炎病变迁延难愈。
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[中图分类号] R512.6；R373；R392.11 [文献标识码] A
[文章编号]1008-1372(2000)03-0137-03
Superinfection of Human Cytomegalovirus and
Hepatitis Virus and its Significance in Patients with Viral Hepatitis
ZHOU Yue,TANG Wei,TAN Xiao-hui,et al.A
(ffiliated hospital,Nantong Medical College,Nantong,226001 China)
【Abstract】 In order to study the status and significance of super infection of hepatitis virus and human cytomegalovirus(HCMV) in patients with viral hepatitis,the HCMV-DNA in peripheral blood of 130 patients with viral hepatitis was detected by using DNA dot hybridization assay,the T lymphocyte subgroups and plasma free amino acid spectrum in peripheral blood were detected too.The results showed that the HCMV-DNA positive rate in 76 patients with chronic viral hepatitis was 65.8%,it was remarkably higher than that in 54 patients (38.9%) with acute viral hepatitis(P<0.01).In patients with chronic hepatitis,the counting rate of CD3 and CD4 subgroups of the patients with HCMV-DNA(+) were notably lower than that of the patients with HCMV-DNA(-)(P<0.05).In both patients of acute hepatitis and chronic hepatitis,the ratio of branch amino acids/aromatic amino acids in HCMV-DNA positive group was markedly lower than that in HCMV-DNA negative group.The results suggest that the patients with chronic viral hepatitis were easily complicated with HCMV infection,because of descent of immune fuction,and this double infection will further impair the immune function and disorder the amino acid metabolism of the patients with viral hepatitis,which could prolong the course of viral hepatitis.
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Key Words Hepatitis,viral;Cytomegalovirus;Human;Superinfection
人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染在人群中广泛存在，据报道约60%～90%以上成人曾有过HCMV的感染，而病毒性肝炎患者中血清抗CMV-IgG阳性率可达81.82%～93.30%[1～3]。本文检测了130例病毒性肝炎患者外周血HCMV-DNA，并对其意义进行了探讨，现报告如下。
1 对象与方法
1.1 病例选择 本次研究中所选病例为1997年6月～1998年2月收住于本院的急性、慢性病毒性肝炎患者，共130例。其中，男性96例，女性34例，年龄16～68岁。按照1995年5月北京全国病毒性肝炎学术会议修订的诊断标准诊断：急性病毒性肝炎54例，其中，甲肝25例、乙肝7例、戊肝11例、甲+戊肝6例、乙+戊肝3例、甲+乙+戊肝2例；慢性病毒性肝炎76例，其中，乙肝61例、丙肝6例、乙+丙肝9例。
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1.2 研究方法
1.2.1 标本采集 所有病例均在入院后5日内于清晨空腹时抽取静脉血送检。
1.2.2 HCMV-DNA检测 采用核酸斑点杂交法[4]。
1.2.3 T细胞亚群检测 采用补体杀伤试验[5]。
1.2.4 血浆游离氨基酸谱测定 采用WATERS(USA)高效液相色谱仪(氨基酸型)检测[6]。计算各例患者的支链氨基酸与芳香族氨基酸比值(BCAA/AAA)。
1.2.5 ALT、TBi测定 由本院生化室采用RA-XT型全自动生化分析仪检测。
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1.2.6 抗-HAV-IgM、抗-HCV、HBVM、抗-HEV检测 均采用EIA法检测。前三者试剂盒由深圳月亮湾生物工程有限公司提供，抗-HEV试剂盒由新加坡Genelabs公司提供，操作按试剂盒说明书进行。
1.2.7 统计学处理 采用GPIS统计软件处理，数据采用t检验，χ2检验。
2 结果
2.1 急、慢性病毒性肝炎患者HCMV重叠感染率 对本次研究中130例病毒性肝炎患者进行外周血HCMV-DNA进行了检测，发现急性肝炎组54例，其中HCMV-DNA(+)21例，阳性率38.9%；慢性肝炎组76例，其中HCMV-DNA(+)50例，阳性率65.8%，两组间HCMV-DNA阳性率比较差异非常显著(χ2＝15.22，P<0.01)。
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2.2 HCMV重叠感染与肝炎患者T细胞亚群的关系 对急、慢性肝炎组患者的外周血T细胞亚群检测结果见表1。由表可见，慢性肝炎组中，HCMV-DNA(+)患者的CD3、CD4亚群与HCMV-DNA(-)患者比较，差异有显著性。
2.3 HCMV重叠感染对肝脏的影响
2.3.1 对血清ALT、TBi水平的影响 对各组患者的肝功能检查结果表明，ALT、TBi等肝功能指标，在HCMV-DNA(+)和HCMV-DNA(-)患者之间差异无显著性。
2.3.2 对血浆游离氨基酸谱的影响 本文同步检测了所有患者的血浆游离氨基酸谱，并计算各例的BCAA/AAA值。结果表明，无论急性肝炎或慢性肝炎组，HCMV-DNA(+)患者的BCAA/AAA比值均显著低于HCMV-DNA(-)患者，见表2。
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表1各型病毒性肝炎患者的
T细胞亚群的比较(
±s) 组别例数
T细胞亚群
CD3
CD4
CD8
急肝
HCMV-DNA(-)
33
66.85
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±9.07
36.12
±8.74
29.95
±8.49
HCMV-DNA(+)
21
59.90
±8.78
34.17
±7.31
29.34
±6.26
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慢肝
HCMV-DNA(-)
26
59.73
±6.11
35.83
±5.18
27.38
±7.55
HCMV-DNA(+)
50
56.14
±6.21*
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32.33
±7.09*
26.82
±6.38
与HCMV-DNA(-)组比较，(CD3∶t＝2.41，CD4∶t＝2.23)，*P<0.05表2 急、慢性病毒性肝炎患者的支链氨
基酸/芳香族氨基酸比值(
±s) 组别例数
BCAA/AAA
急肝
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HCMV-DNA(-)
33
3.18±0.51
HCMV-DNA(+)
21
2.66±0.86**
慢肝
HCMV-DNA(-)
26
2.58±0.71
HCMV-DNA(+)
50
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2.24±0.42*
与HCMV-DNA(-)组比较，t＝2.62，*P<0.05，t＝2.80，**P<0.01
3 讨论
研究资料表明，多数成人均感染过HCMV，主要为无症状的亚临床轻症感染，部分为潜在性感染，后者仅在机体免疫功能明显降低时，HCMV才能激活、复制并造成机体的明显损害。近年来的研究资料表明，情况并非完全如此，HCMV可在一般人群中引起急性、慢性肝炎，甚至可引起暴发性肝炎[4～6]。
本次研究中采用核酸斑点杂交法，直接检测病毒性肝炎患者外周血中的HCMV-DNA，阳性者说明该患者现时体内正存在HCMV感染。结果表明，在慢性病毒性肝炎患者中，巨细胞病毒重叠感染率高达65.8%，显著高于急性肝炎组。众所周知，慢性乙型和丙型病毒性肝炎患者通常存在着机体免疫功能障碍[7，8]，因此可以认为免疫功能降低是导致慢肝患者巨细胞病毒高重叠感染的主要原因。
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本文进一步观察了HCMV重叠感染对病毒性肝炎患者T细胞亚群的影响。结果发现在重叠感染HCMV的慢性肝炎患者，以CD3和CD4为明显。现代免疫学指出，CD3为成熟T细胞表面的标志物5，CD4为辅助性T细胞(TH)的表面标志物，而TH不仅促进细胞免疫而且对体液免疫也有重要调节作用，CD3和CD4显著降低，可反映出机体免疫功能的下降。因此，上述的研究结果提示HCMV重叠感染可引起慢性肝炎患者的机体免疫功能进一步下降。
本文的研究结果表明，关于巨细胞病毒重叠感染对肝脏的影响，巨细胞病毒感染对患者的血清ALT及TBi水平等无显著影响，HCMV重叠感染并不明显加重肝炎病毒引起的肝脏活动性炎症病变。但患者血清游离氨基酸谱测定及BCAA/AAA比值计算结果显示：无论急性肝炎或是慢性炎，HCMV-DNA(+)组的BCAA/AAA比值均显著降低。提示巨细胞病毒重叠感染对肝脏影响主要表现为对氨基酸代谢功能的影响。氨基酸代谢与机体的蛋白质合成代谢密切相关，氨基酸代谢异常必然影响肝脏损伤病灶的修复和肝细胞的再生，使肝炎病变的康复变慢，这在临床上将表现为患者肝功能复常时间的延长[9]。
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综上所述，慢性病毒性肝炎患者由于机体的免疫功能下降，较易发生HCMV的重叠感染，从而使患者的免疫功能进一步受损，患者更难以彻底清除体内的肝炎病毒；同时HCMV重叠感染还会影响患者肝脏的氨基酸代谢功能，影响肝炎病变的康复。作者认为，对于病毒性肝炎尤其是慢性病毒性肝炎患者，有必要作HCMV-DNA检测，对阳性者应及时给予相应的抗病毒治疗。
参考文献
[1]罗光荣，范瑛，刘祖春.病毒性肝炎患者1055例中巨细胞病毒活动性感染的研究.临床肝胆病杂志 1994；10：158
[2]汪俊韬，田庚善，崔振宇.全国病毒性疾病专题座谈会纪要.中华传染病杂志 1986；4：122
[3]王明丽.人巨细胞病毒感染特征.国外医学流行病学与传染病学分册 1985；12：78
, 百拇医药 [4]Rando R,Srinvasan A,Feingold J.Characterization of multiple molecular interacting between human cytomegalovirus and human inmmunodeficiency virus type I(HIV-I).Virology 1990；1976：87
[5]高金凤，蔡中起.暴发型病毒性肝炎研究进展.临床肝胆病杂志 1997；13：70
[6]陈义森，林秀玉，闵福援.既往健康成人巨细胞病毒性肝炎24例临床分析.首都医学院学报 1995；6：214
[7]Bobin J.Oxford textbook of medicine.2nd ed.New York:Oxford University Press 1987；5：76
[8]罗光荣，范谨，刘祖春.病毒性肝炎患者1055例中巨细胞病毒活动性感染的研究.临床肝胆病杂志 1994；10：158
[9]沈玲，张林，张新年，方之勋，等.病毒性肝炎患者巨细胞病毒感染115例分析.中华预防医学杂志 1996；30：157
收稿日期：1999-10-27, 百拇医药