革兰氏快速染色法的探讨
作者：林芝源 张一峰 苏应为 陈思萍
单位：林芝源 张一峰 陈思萍(广东省茂名市职防院 525011)；苏应为(广东省茂名市中医院)
关键词：
广西预防医学000331
革兰氏染色法是鉴定细菌的基本方法，近年来，在国内虽然已有学者对革兰氏染色法进行改良，但未见有染色时间缩短为20秒钟的快速改良报道。我们通过对各项试剂的浓度、成分及PH值等进行改良探讨，把染色时间缩短为20秒种，改良后操作过程容易掌握，对细菌的染色较原法着色深、浓、清晰。现报告如下。
1 材料与方法
1.1试剂结晶紫液含结晶紫8g/L,含95%酒精为10%；缓冲液为0.5mol/L碳酸盐缓冲液(PH10.4)100ml，加入乳化剂OP50μL；碱性碘溶液为含碘15g/L,含NaOH0.05mop/L；脱色剂为酮与95%酒精按1：1比例混合；碱性复红液为含碱性复红3g/L，石碳酸2.5g/L，含95%酒精12.5%。
1.2方法(1)在固定好的涂片上，滴加结晶紫液2滴，再加入缓冲液2滴，摇动3～5秒后冲洗。(2)滴加碱性碘溶液几滴，摇动3～5秒后冲洗。(3)滴加脱色剂液几滴，摇动3～5秒后冲洗。(4)滴加碱性复红液几滴，摇动3～5秒后冲洗，待干镜检。
2 结果
各种试剂浓度及PH值分别配成由低至高的系列，进行对G+菌和G-菌多次染色观察，结果各种试剂染色的最佳范围是：结晶紫为6.25～12.5g/L；缓冲液为0.5mol/L,PH值为10.6,乳化剂OP为0.05ml%；碘为10～20g/L,NaOH为0.05mol/L；碱性复红为1～5g/L；丙酮：95%，酒精为1：1。
经过多次的染色观察比较，发现本法对G+菌如葡萄球菌、链球菌、念珠菌、芽胞杆菌等的染色较原法着色深、浓、清晰，G+菌染成深紫色近黑色；本法对G-菌如大肠杆菌、克雷伯氏菌、绿脓杆菌、奈氏双球菌、霍乱弧菌等的染色也较原法着色深，染成红色。
3 讨论
虽然革兰氏染色的原理至今尚未完全明确，但综合各学说的观点，本改良法能加快染色反应的原因可能与以下因素有关：(1)本法用的碳酸盐缓冲液PH值较原法的草酸铵液高，可增加细菌菌体所带的负电荷量，增强细菌与染料(带正电荷)的结合能力。乳化剂OP具有去垢助溶、促使化学结合作用，加大细菌菌体表面张力，增强了染料与菌体结合能力，使两者结合更快、更充分。(2)碘液中加入了NaOH，可能一定浓度的NaOH可加强细菌体核糖核酸镁盐与结晶紫一碘结合作用；同时NaOH对G-细菌的细胞壁有一定的作用，可加快G-菌的脱色作用，并有利于碱性复红的复染色作用。
1999-08-05收稿, http://www.100md.com
单位：林芝源 张一峰 陈思萍(广东省茂名市职防院 525011)；苏应为(广东省茂名市中医院)
关键词：
广西预防医学000331
革兰氏染色法是鉴定细菌的基本方法，近年来，在国内虽然已有学者对革兰氏染色法进行改良，但未见有染色时间缩短为20秒钟的快速改良报道。我们通过对各项试剂的浓度、成分及PH值等进行改良探讨，把染色时间缩短为20秒种，改良后操作过程容易掌握，对细菌的染色较原法着色深、浓、清晰。现报告如下。
1 材料与方法
1.1试剂结晶紫液含结晶紫8g/L,含95%酒精为10%；缓冲液为0.5mol/L碳酸盐缓冲液(PH10.4)100ml，加入乳化剂OP50μL；碱性碘溶液为含碘15g/L,含NaOH0.05mop/L；脱色剂为酮与95%酒精按1：1比例混合；碱性复红液为含碱性复红3g/L，石碳酸2.5g/L，含95%酒精12.5%。
1.2方法(1)在固定好的涂片上，滴加结晶紫液2滴，再加入缓冲液2滴，摇动3～5秒后冲洗。(2)滴加碱性碘溶液几滴，摇动3～5秒后冲洗。(3)滴加脱色剂液几滴，摇动3～5秒后冲洗。(4)滴加碱性复红液几滴，摇动3～5秒后冲洗，待干镜检。
2 结果
各种试剂浓度及PH值分别配成由低至高的系列，进行对G+菌和G-菌多次染色观察，结果各种试剂染色的最佳范围是：结晶紫为6.25～12.5g/L；缓冲液为0.5mol/L,PH值为10.6,乳化剂OP为0.05ml%；碘为10～20g/L,NaOH为0.05mol/L；碱性复红为1～5g/L；丙酮：95%，酒精为1：1。
经过多次的染色观察比较，发现本法对G+菌如葡萄球菌、链球菌、念珠菌、芽胞杆菌等的染色较原法着色深、浓、清晰，G+菌染成深紫色近黑色；本法对G-菌如大肠杆菌、克雷伯氏菌、绿脓杆菌、奈氏双球菌、霍乱弧菌等的染色也较原法着色深，染成红色。
3 讨论
虽然革兰氏染色的原理至今尚未完全明确，但综合各学说的观点，本改良法能加快染色反应的原因可能与以下因素有关：(1)本法用的碳酸盐缓冲液PH值较原法的草酸铵液高，可增加细菌菌体所带的负电荷量，增强细菌与染料(带正电荷)的结合能力。乳化剂OP具有去垢助溶、促使化学结合作用，加大细菌菌体表面张力，增强了染料与菌体结合能力，使两者结合更快、更充分。(2)碘液中加入了NaOH，可能一定浓度的NaOH可加强细菌体核糖核酸镁盐与结晶紫一碘结合作用；同时NaOH对G-细菌的细胞壁有一定的作用，可加快G-菌的脱色作用，并有利于碱性复红的复染色作用。
1999-08-05收稿, http://www.100md.com