微波免疫透射比浊法快速检测载脂蛋白AⅠ及B
作者：谢松业 陆元善 吴文俊
单位：谢松业(上海市第一人民医院检验科， 上海市 200080)；陆元善(上海市第一人民医院检验科， 上海市 200080)；吴文俊(上海市第一人民医院检验科， 上海市 200080)
关键词：微波辐射；载脂蛋白AⅠ；载脂蛋白B
中国动脉硬化杂志000321[中图分类号] R312 [文献标识码] A
[文章编号] 1007-3949(2000)-03-0266-01
免疫透射比浊法快速检测载脂蛋白AⅠ和B是目前诊断和评价高血脂治疗的一种有价值的检验指标，但常规手工方法(简称常规法)反应时间长，我们利用微波辐射对该方法进行改良，现予报道。
1 材料与方法
, 百拇医药
1.1 仪器和试剂
752C紫外可见分光光度计由上海第三分析仪器厂生产,医用微波炉由第二军医大学长海医院研制(中国专利号ZL93225511.6) 。 参考血清和抗血清由卫生部老年医学研究所生物化学室提供。
1.2 方 法
参考血清用生理盐水稀释成5个不同浓度的标准液。取适量抗血清,用聚乙二醇(MW10 000 日本进口分装)50 g、氯化钠 9.0 g、叠氮钠1.0 g、吐温80溶液22 mL(测载脂蛋白B时不用)和pH 7.4 0.01 mol/L PB配制成1 L的缓冲液来稀释载脂蛋白AⅠ(或B)，抗血清最终稀释度为1∶32,载脂蛋白B抗血清最终稀释度为1∶60。
样品管和不同浓度的标准管操作相同。用10 μL加样器分别吸取5个不同浓度的载脂蛋白AⅠ4 μL和5个不同浓度的载脂蛋白B标准液6 μL，加入试小管，同时各管加入相应的抗血清应用液1 mL，混匀后立即放入微波炉中，功率调至最高档，辐射时间8 s,处理后静置10 min，在340 nm波长用蒸馏水调零,测各管吸光度。每批试验同时设自身空白对照与抗血清应用液对照。标本吸光度为样品吸光度减去样品自身空白对照与抗血清应用液空白对照吸光度之差。用Casio FX 3800P计算器计算。以不同浓度参考血清的吸光值为自变量,其含量为应变量,建立回归方程。载脂蛋白AⅠ应用lgY=a+bx 计算,载脂蛋白B应用Y=a+bx2方程计算。常规法即样品和抗血清应用液混匀后不用微波辐射，放置37℃ 30 min后比色，其余步骤同微波法。
, 百拇医药
2 结 果
2.1 反应速度
取0.6和2.4 g/L两个浓度的载脂蛋白AⅠ进行反应动态曲线观察，载脂蛋白AⅠ经微波辐射8 s静置10 min时的吸光值相当于手工法30 min时的吸光值，表明经微波辐射后反应速度明显加快。
2.2 重复性试验
取载脂蛋白 AⅠ样品(0.4～2. 1 g/L)重复测定20 次,批内、批间变异在2.1～4.42。载脂蛋白 B样品(0.3～1.7 g/L)批内、批间变异在0.94～5.2。
2.3 检测结果
采用宝灵曼载脂蛋白AⅠ和B进口试剂，按提供的参数在日本OLYMPUS AU100全自动生化分析仪上检测来自本院门诊和病房的样品50例，同时进行微波法和BM进口试剂全自动法测定，其检测结果相关良好，r为0.984～0.997(载脂蛋白AⅠ 0.77～ 2.1 g/L,载脂蛋白B 0.24～2.16 g/L)，经t检验，结果差异无显著性(P>0.05)。另外应用微波法和常规法也作了对照测定(n=100)，其结果相关良好， r≥0.987，经t检验，结果差异无显著性(P>0.05)。以上说明以微波法检测的结果与常规法和自动生化分析的结果一样可靠，准确率高。
3 讨 论
微波波长很短，但频率很高。当极性分子如抗原抗体分子置于微波场中，会以惊人的速度运动，在极短的时间内结合，从而大大缩短了反应时间，本法测定载脂蛋白AⅠ 及B样品经微波辐射反应,吸光度迅速上升，静置10 min反应吸光度和手工常规法30 min反应吸光度几乎相近，达到快速检测的目的，且结果可靠，是一种值得推广的方法。
(此文1999-11-02收到，2000-07-26修回), http://www.100md.com
单位：谢松业(上海市第一人民医院检验科， 上海市 200080)；陆元善(上海市第一人民医院检验科， 上海市 200080)；吴文俊(上海市第一人民医院检验科， 上海市 200080)
关键词：微波辐射；载脂蛋白AⅠ；载脂蛋白B
中国动脉硬化杂志000321[中图分类号] R312 [文献标识码] A
[文章编号] 1007-3949(2000)-03-0266-01
免疫透射比浊法快速检测载脂蛋白AⅠ和B是目前诊断和评价高血脂治疗的一种有价值的检验指标，但常规手工方法(简称常规法)反应时间长，我们利用微波辐射对该方法进行改良，现予报道。
1 材料与方法
, 百拇医药
1.1 仪器和试剂
752C紫外可见分光光度计由上海第三分析仪器厂生产,医用微波炉由第二军医大学长海医院研制(中国专利号ZL93225511.6) 。 参考血清和抗血清由卫生部老年医学研究所生物化学室提供。
1.2 方 法
参考血清用生理盐水稀释成5个不同浓度的标准液。取适量抗血清,用聚乙二醇(MW10 000 日本进口分装)50 g、氯化钠 9.0 g、叠氮钠1.0 g、吐温80溶液22 mL(测载脂蛋白B时不用)和pH 7.4 0.01 mol/L PB配制成1 L的缓冲液来稀释载脂蛋白AⅠ(或B)，抗血清最终稀释度为1∶32,载脂蛋白B抗血清最终稀释度为1∶60。
样品管和不同浓度的标准管操作相同。用10 μL加样器分别吸取5个不同浓度的载脂蛋白AⅠ4 μL和5个不同浓度的载脂蛋白B标准液6 μL，加入试小管，同时各管加入相应的抗血清应用液1 mL，混匀后立即放入微波炉中，功率调至最高档，辐射时间8 s,处理后静置10 min，在340 nm波长用蒸馏水调零,测各管吸光度。每批试验同时设自身空白对照与抗血清应用液对照。标本吸光度为样品吸光度减去样品自身空白对照与抗血清应用液空白对照吸光度之差。用Casio FX 3800P计算器计算。以不同浓度参考血清的吸光值为自变量,其含量为应变量,建立回归方程。载脂蛋白AⅠ应用lgY=a+bx 计算,载脂蛋白B应用Y=a+bx2方程计算。常规法即样品和抗血清应用液混匀后不用微波辐射，放置37℃ 30 min后比色，其余步骤同微波法。
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2 结 果
2.1 反应速度
取0.6和2.4 g/L两个浓度的载脂蛋白AⅠ进行反应动态曲线观察，载脂蛋白AⅠ经微波辐射8 s静置10 min时的吸光值相当于手工法30 min时的吸光值，表明经微波辐射后反应速度明显加快。
2.2 重复性试验
取载脂蛋白 AⅠ样品(0.4～2. 1 g/L)重复测定20 次,批内、批间变异在2.1～4.42。载脂蛋白 B样品(0.3～1.7 g/L)批内、批间变异在0.94～5.2。
2.3 检测结果
采用宝灵曼载脂蛋白AⅠ和B进口试剂，按提供的参数在日本OLYMPUS AU100全自动生化分析仪上检测来自本院门诊和病房的样品50例，同时进行微波法和BM进口试剂全自动法测定，其检测结果相关良好，r为0.984～0.997(载脂蛋白AⅠ 0.77～ 2.1 g/L,载脂蛋白B 0.24～2.16 g/L)，经t检验，结果差异无显著性(P>0.05)。另外应用微波法和常规法也作了对照测定(n=100)，其结果相关良好， r≥0.987，经t检验，结果差异无显著性(P>0.05)。以上说明以微波法检测的结果与常规法和自动生化分析的结果一样可靠，准确率高。
3 讨 论
微波波长很短，但频率很高。当极性分子如抗原抗体分子置于微波场中，会以惊人的速度运动，在极短的时间内结合，从而大大缩短了反应时间，本法测定载脂蛋白AⅠ 及B样品经微波辐射反应,吸光度迅速上升，静置10 min反应吸光度和手工常规法30 min反应吸光度几乎相近，达到快速检测的目的，且结果可靠，是一种值得推广的方法。
(此文1999-11-02收到，2000-07-26修回), http://www.100md.com