DCA降低家兔血乳酸值的实验研究
作者：江敏 王学林 张辉 祖新琳 苏露晖 伊德林
单位：沈阳市 110031 沈阳医学院基础部
关键词：Dichloroacetate；乳酸；高乳酸血症
摘要 目的摘要 目的：为研究Dichloroacetate(DCA) 降低血乳酸的疗效。方法：采用作者改良的BarKer氏法观测正常及高乳 酸血症(HLA)家兔血乳酸值在接受DCA后的动态变化。结果：静脉注射DCA (50mg/kg)后15及30min时，正常(P<0.05)与HLA家兔血乳酸值(P <0.01)均显著下降。结论：DCA具有降低血乳酸的作用。
Experimental study of DCA reducing lactic
acid content in rabbits blood
, http://www.100md.com
Jiang Min
(Department of Basal Medicine,Shenyang Medical College,Shenyang 110031)
Wang Xuelin
(Department of Basal Medicine,Shenyang Medical College,Shenyang 110031)
Zhang Hui
(Department of Basal Medicine,Shenyang Medical College,Shenyang 110031)
ABSTRACT OBJECTIVE：To study the ther apeutic effect of DCA to decrease blood lactic acid.METHOD:The dynam ic changes of blood lactic acid in normal and lacticemia rabbits were observed a fter DCA was administrated by BarKer′s method(ameliorated by us).RESULTS: DCA(50mg/kg) declined blood lactic acid content in lacticemia(P<0.01) and normal rabbits(P<0.05) after the intravenous injec tion of DCA for 15 or 30 minutes.CONCLUSION:DCA has the action to de crease blood lactic acid.
, 百拇医药
KEY WORDS dichloroacetate,lactic acid,hy perlacticemia
目前临床常用纠正酸中毒(纠酸)药剂NaHCO3及乳酸钠的 应用，由于其副作用而受到限制，在过去十余年间国外不少学者对二氯乙酸盐(Dichloroace tate，DCA)的纠酸及其它作用进行了大量研究并积累了一些资料[1]。本研究通过 静脉注射DCA后正常与高乳酸血症(HLA)家兔血乳酸(LA)的动态变化，旨在为DCA纠酸的临床 应用提供有用资料。目前国内尚无此报道，且本研究与国外检测血LA方法不同。
1 材料与方法
1.1 实验对象与试剂
1.1.1 实验动物 挑选51只体重(2.0±0.5)kg纯系新西兰白色家兔(雌雄不严 格要求)，分为两大组:(1)HLA组:(a)按每公斤体重静脉注射4.25% 2ml LA溶液，不给予DCA 的20只家兔为HLA对照组；(b)按每公斤体重静脉注射4.25% 2.0ml LA溶液，即刻再静脉注射 50mg/kg DCA溶液的21只家兔为HLA实验组；(2)正常组:均不注入LA溶液。 按每公斤体重静 脉注射50mg DCA溶液10只家兔，测定静脉注射DCA前及后的血LA值，分别为正常对照组与正 常实验组，后者只作静脉注射DCA前后血LA值自身比较，不与HLA对照组或HLA实验组之间作 组间比较，故实验样本数较少；而HLA实验组与HLA对照组之间作相应同一时刻血LA值的组间比较。以上各组凡静脉注射DCA溶液者均检测静脉注射DCA前及后15及30min时的血乳酸值并 进行自身比较。
, http://www.100md.com
1.1.2 试剂 对羟联苯为Sigma产品；Dichloroaceta te(本院化学教研室张辉合成、纯化并提供，经辽宁大学分析检测中心鉴定其纯度为99.1%， 含不到1%Na+、CL-杂质)。乳酸、氟化钠、硫酸、硫酸铜、硫酸锂等试剂均为国产优质 纯或分析纯。
1.2 乳酸定量分析法
腹腔内注入25%氨基甲酸乙酯4ml/kg使家兔麻醉。采用超微量BarKer氏改良法定量分析血LA 值，具体过程如下：(1)将1%氟化钠0.48，0.48和0.50ml分别置于测定管1、标准管1、空白 管1内。(2)新鲜血液0.02ml置于测定管内。(3)硫酸锂标准液(0.2mmol/l)0.02ml置于标准管 内。(4)10%硫酸铜1.50ml置于测定管、标准管、空白管内。(5)各管加氢氧化钙0.6g，振动 摇晃15min，3000r/min 离心10min。(6)三管各取上清液0.5ml分别置于测定管2、标准管2 、空白管2内。(7)将4%硫酸铜0.03ml分别置于测定管2、标准管2、空白管2内。(8)将98%硫 酸3.00ml分别置于测定管2、标准管2、空白管2内。(9)三管沸水浴5min，立刻置冰水中冷却 至15℃以下。(10)1.5%对羟联苯0.05ml分别置于测定管2、标准管2、空白管2内。三管振匀 ，30℃水浴30min，置冷水浴至室温后 722分光光度计(厦门)560nm比色。
, 百拇医药
1.3 统计学方法
平均值(X)±标准差(S)表示LA值， t检验HLA实验组同HLA对照组之间相对应时刻血LA值组间差异的显著性以 及正常实验组同正常对照组(自身用药前后)之间血LA差异是否有统计学意义。
2 实验结果
2.1 HLA家兔
实验组静脉注射DCA溶液15及30min时较静脉注射DCA前血LA值非常显著下降(表1，P <0.01，P<0.01)，由(11.40±3.16)mmol/l分别下降到(6.88±1.92)及(5.87±1. 80)mmol/l(表1)；HLA实验组较HLA对照组15及30min时血LA值亦非常显著下降(表1，P<0.01，P<0.01)。
表1 DCA对HLA家兔不同时刻血LA值影响/
±s，mmol/l
, 百拇医药
组别
n
注入LA前
注入DCA后
注入LA即刻
15min
30min
HLA实验组
21
4.17±1.82
11. 40±3.16
6.88±1.92*
, http://www.100md.com
5.87±1.80*
HLA对照组
20
4.17±1.80
11.40±3.27
11.43±2 .88
11.00±2.73
注：*P<0.01
2.2 正常家兔实验组
静脉注射DCA后15及30min较其对照组(静脉注射DCA前)血LA值均显著下降(表2，P< 0.05,P<0.05)，尤其30min时下降更明显，由(4.26±1.80)下降到(2.75±0.8 1)mmol/l。表2 DCA对正常家兔血LA值影响/mmol.l -1,n=10
, 百拇医药
组 别
15min
30min±s
t
P±s
t
P
正常对照组
, http://www.100md.com 正常实验组
4.26±1.80
2.81±0.80
2.34
<0.05
4.26±1.80
2.75±0.81
2.44
<0.05
3 讨 论
3.1 血LA值测定方法很多，本研究根据经 典的BarKer氏法原理所建立的定量分析LA改良法，其优点在于采集血样为全血，不需制备血浆或血清，使用血样超微量，仅为0.02ml，且重复性好，准确性高，不需高精设备，费用低 廉，步骤简化，是手检LA简易可行操作方法之一。
, 百拇医药
3.2 目前临床常用NaHCO3或乳酸钠纠酸，前者禁用于通气功能不全的 代谢性酸中毒及呼吸性酸中毒以防体内CO2蓄积，后者不宜于各种缺氧所致的乳酸性酸中 毒及肝功不全以防体内血乳酸更高。Meveigh&127;等[2]证实DCA可激活丙酮酸脱氢酶复 合体(PDHC)以促进葡萄糖中间代谢产物丙酮酸变为乙酰辅酶A，经三羧酸循环完全氧化成CO 2与水，使体内LA生成减少，PH值升高，因此DCA是一种有效纠酸剂。曾认为DCA可直接激 活PDHC，但更多研究[3]证实DCA不能直接激活PDHC，只能直接抑制对PDHC产生阻抑 作用的“PDHC激酶”活性，从而间接激活PDHC 以促进丙酮酸尽快进入三羧酸循环而被完全 氧化，这就竞争性抑制丙酮酸变成LA，以使LA生成减少，内环境恢复稳态。可见DCA降低LA 机理尚有争论。从本研究结果看，无论是正常家兔还是HLA家兔，静脉注射50mg/kg DCA后15 及30min时血LA值均显著下降(P<0.05,P<0.01)，这与国外报道一致 [4,5]足见DCA降低血乳酸值作用勿用置疑。
, 百拇医药
3.3 现已定论疲劳与体内LA堆积有关，因此我们设想具有降低LA作用的D CA可解除疲劳；有报道 DCA可增强正常或患病心脏的收缩力[5,6]，可使缺血性脑 损害减轻。毒理学研究证明DCA尤其短期使用DCA几乎无毒性作用或副作用[1]，因 此DCA是一种安全、有着美好临床应用前景的新药，其药理作用尚需我们进一步探讨。
参考文献
1，王学林.二氯乙酸盐的药效研究进展.中国实用儿科杂志, 1995,10(增刊)∶168.
2，Meveigh JJ,Lopaschuk GD.Dichloroacetate stimulation of glucose oxidation improves recovery of ischemi c rat heart.Am J Physiol,1990,257(28)∶1079.
, 百拇医药
3，Stacpoole PW.The pharmacology of dichloroacetate. Metabolism,1989,38∶1124.
4，Randall MD,Keon CA,Geenhatf PL,et al.Dual effects of dichloroacetate on cardiac ischemic preconditioning in the r at isolated perfused heart.Br J Pharmacol,1998,124(1)∶245.
5，Kline JA,Maiorano PC,Schroeder JD,et al.Activation of pyruvate dehy drogenase improves heart function and metabolism &127;after hemorrhage shock.J Mol Cell Cardiol,1997,29(9)∶2465.
6，Ludvik B.Effects of dichloroacetate and bicarbona te on haemodynamic parameters in healthy Volunteers.Clin Science,1991,80∶47.
收稿日期：1999-06-09, http://www.100md.com
单位：沈阳市 110031 沈阳医学院基础部
关键词：Dichloroacetate；乳酸；高乳酸血症
摘要 目的摘要 目的：为研究Dichloroacetate(DCA) 降低血乳酸的疗效。方法：采用作者改良的BarKer氏法观测正常及高乳 酸血症(HLA)家兔血乳酸值在接受DCA后的动态变化。结果：静脉注射DCA (50mg/kg)后15及30min时，正常(P<0.05)与HLA家兔血乳酸值(P <0.01)均显著下降。结论：DCA具有降低血乳酸的作用。
Experimental study of DCA reducing lactic
acid content in rabbits blood
, http://www.100md.com
Jiang Min
(Department of Basal Medicine,Shenyang Medical College,Shenyang 110031)
Wang Xuelin
(Department of Basal Medicine,Shenyang Medical College,Shenyang 110031)
Zhang Hui
(Department of Basal Medicine,Shenyang Medical College,Shenyang 110031)
ABSTRACT OBJECTIVE：To study the ther apeutic effect of DCA to decrease blood lactic acid.METHOD:The dynam ic changes of blood lactic acid in normal and lacticemia rabbits were observed a fter DCA was administrated by BarKer′s method(ameliorated by us).RESULTS: DCA(50mg/kg) declined blood lactic acid content in lacticemia(P<0.01) and normal rabbits(P<0.05) after the intravenous injec tion of DCA for 15 or 30 minutes.CONCLUSION:DCA has the action to de crease blood lactic acid.
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KEY WORDS dichloroacetate,lactic acid,hy perlacticemia
目前临床常用纠正酸中毒(纠酸)药剂NaHCO3及乳酸钠的 应用，由于其副作用而受到限制，在过去十余年间国外不少学者对二氯乙酸盐(Dichloroace tate，DCA)的纠酸及其它作用进行了大量研究并积累了一些资料[1]。本研究通过 静脉注射DCA后正常与高乳酸血症(HLA)家兔血乳酸(LA)的动态变化，旨在为DCA纠酸的临床 应用提供有用资料。目前国内尚无此报道，且本研究与国外检测血LA方法不同。
1 材料与方法
1.1 实验对象与试剂
1.1.1 实验动物 挑选51只体重(2.0±0.5)kg纯系新西兰白色家兔(雌雄不严 格要求)，分为两大组:(1)HLA组:(a)按每公斤体重静脉注射4.25% 2ml LA溶液，不给予DCA 的20只家兔为HLA对照组；(b)按每公斤体重静脉注射4.25% 2.0ml LA溶液，即刻再静脉注射 50mg/kg DCA溶液的21只家兔为HLA实验组；(2)正常组:均不注入LA溶液。 按每公斤体重静 脉注射50mg DCA溶液10只家兔，测定静脉注射DCA前及后的血LA值，分别为正常对照组与正 常实验组，后者只作静脉注射DCA前后血LA值自身比较，不与HLA对照组或HLA实验组之间作 组间比较，故实验样本数较少；而HLA实验组与HLA对照组之间作相应同一时刻血LA值的组间比较。以上各组凡静脉注射DCA溶液者均检测静脉注射DCA前及后15及30min时的血乳酸值并 进行自身比较。
, http://www.100md.com
1.1.2 试剂 对羟联苯为Sigma产品；Dichloroaceta te(本院化学教研室张辉合成、纯化并提供，经辽宁大学分析检测中心鉴定其纯度为99.1%， 含不到1%Na+、CL-杂质)。乳酸、氟化钠、硫酸、硫酸铜、硫酸锂等试剂均为国产优质 纯或分析纯。
1.2 乳酸定量分析法
腹腔内注入25%氨基甲酸乙酯4ml/kg使家兔麻醉。采用超微量BarKer氏改良法定量分析血LA 值，具体过程如下：(1)将1%氟化钠0.48，0.48和0.50ml分别置于测定管1、标准管1、空白 管1内。(2)新鲜血液0.02ml置于测定管内。(3)硫酸锂标准液(0.2mmol/l)0.02ml置于标准管 内。(4)10%硫酸铜1.50ml置于测定管、标准管、空白管内。(5)各管加氢氧化钙0.6g，振动 摇晃15min，3000r/min 离心10min。(6)三管各取上清液0.5ml分别置于测定管2、标准管2 、空白管2内。(7)将4%硫酸铜0.03ml分别置于测定管2、标准管2、空白管2内。(8)将98%硫 酸3.00ml分别置于测定管2、标准管2、空白管2内。(9)三管沸水浴5min，立刻置冰水中冷却 至15℃以下。(10)1.5%对羟联苯0.05ml分别置于测定管2、标准管2、空白管2内。三管振匀 ，30℃水浴30min，置冷水浴至室温后 722分光光度计(厦门)560nm比色。
, 百拇医药
1.3 统计学方法
平均值(X)±标准差(S)表示LA值， t检验HLA实验组同HLA对照组之间相对应时刻血LA值组间差异的显著性以 及正常实验组同正常对照组(自身用药前后)之间血LA差异是否有统计学意义。
2 实验结果
2.1 HLA家兔
实验组静脉注射DCA溶液15及30min时较静脉注射DCA前血LA值非常显著下降(表1，P <0.01，P<0.01)，由(11.40±3.16)mmol/l分别下降到(6.88±1.92)及(5.87±1. 80)mmol/l(表1)；HLA实验组较HLA对照组15及30min时血LA值亦非常显著下降(表1，P<0.01，P<0.01)。
表1 DCA对HLA家兔不同时刻血LA值影响/
±s，mmol/l, 百拇医药
组别
n
注入LA前
注入DCA后
注入LA即刻
15min
30min
HLA实验组
21
4.17±1.82
11. 40±3.16
6.88±1.92*
, http://www.100md.com
5.87±1.80*
HLA对照组
20
4.17±1.80
11.40±3.27
11.43±2 .88
11.00±2.73
注：*P<0.01
2.2 正常家兔实验组
静脉注射DCA后15及30min较其对照组(静脉注射DCA前)血LA值均显著下降(表2，P< 0.05,P<0.05)，尤其30min时下降更明显，由(4.26±1.80)下降到(2.75±0.8 1)mmol/l。表2 DCA对正常家兔血LA值影响/mmol.l -1,n=10
, 百拇医药
组 别
15min
30min
±st
P
±st
P
正常对照组
, http://www.100md.com 正常实验组
4.26±1.80
2.81±0.80
2.34
<0.05
4.26±1.80
2.75±0.81
2.44
<0.05
3 讨 论
3.1 血LA值测定方法很多，本研究根据经 典的BarKer氏法原理所建立的定量分析LA改良法，其优点在于采集血样为全血，不需制备血浆或血清，使用血样超微量，仅为0.02ml，且重复性好，准确性高，不需高精设备，费用低 廉，步骤简化，是手检LA简易可行操作方法之一。
, 百拇医药
3.2 目前临床常用NaHCO3或乳酸钠纠酸，前者禁用于通气功能不全的 代谢性酸中毒及呼吸性酸中毒以防体内CO2蓄积，后者不宜于各种缺氧所致的乳酸性酸中 毒及肝功不全以防体内血乳酸更高。Meveigh&127;等[2]证实DCA可激活丙酮酸脱氢酶复 合体(PDHC)以促进葡萄糖中间代谢产物丙酮酸变为乙酰辅酶A，经三羧酸循环完全氧化成CO 2与水，使体内LA生成减少，PH值升高，因此DCA是一种有效纠酸剂。曾认为DCA可直接激 活PDHC，但更多研究[3]证实DCA不能直接激活PDHC，只能直接抑制对PDHC产生阻抑 作用的“PDHC激酶”活性，从而间接激活PDHC 以促进丙酮酸尽快进入三羧酸循环而被完全 氧化，这就竞争性抑制丙酮酸变成LA，以使LA生成减少，内环境恢复稳态。可见DCA降低LA 机理尚有争论。从本研究结果看，无论是正常家兔还是HLA家兔，静脉注射50mg/kg DCA后15 及30min时血LA值均显著下降(P<0.05,P<0.01)，这与国外报道一致 [4,5]足见DCA降低血乳酸值作用勿用置疑。
, 百拇医药
3.3 现已定论疲劳与体内LA堆积有关，因此我们设想具有降低LA作用的D CA可解除疲劳；有报道 DCA可增强正常或患病心脏的收缩力[5,6]，可使缺血性脑 损害减轻。毒理学研究证明DCA尤其短期使用DCA几乎无毒性作用或副作用[1]，因 此DCA是一种安全、有着美好临床应用前景的新药，其药理作用尚需我们进一步探讨。
参考文献
1，王学林.二氯乙酸盐的药效研究进展.中国实用儿科杂志, 1995,10(增刊)∶168.
2，Meveigh JJ,Lopaschuk GD.Dichloroacetate stimulation of glucose oxidation improves recovery of ischemi c rat heart.Am J Physiol,1990,257(28)∶1079.
, 百拇医药
3，Stacpoole PW.The pharmacology of dichloroacetate. Metabolism,1989,38∶1124.
4，Randall MD,Keon CA,Geenhatf PL,et al.Dual effects of dichloroacetate on cardiac ischemic preconditioning in the r at isolated perfused heart.Br J Pharmacol,1998,124(1)∶245.
5，Kline JA,Maiorano PC,Schroeder JD,et al.Activation of pyruvate dehy drogenase improves heart function and metabolism &127;after hemorrhage shock.J Mol Cell Cardiol,1997,29(9)∶2465.
6，Ludvik B.Effects of dichloroacetate and bicarbona te on haemodynamic parameters in healthy Volunteers.Clin Science,1991,80∶47.
收稿日期：1999-06-09, http://www.100md.com