清火栀麦胶囊中穿心莲内酯的HPLC测定及稳定性考察
作者：黄捷
单位：南宁 530021 广西药品检验所
关键词：清火栀麦胶囊；高效液相色谱法；穿心莲内酯；质量稳定性
摘要 目的摘要 目的：采用高效液相色谱法测定了清火栀麦胶囊的含量并对其进 行稳定性考察。方法：用高效液相色谱法对其中的指标成分穿心莲内酯 进行了含量测定。紫外检测波长为λ225nm。加速稳定性试验环境：39℃，相对湿度75%，每 月考核1次。结果和结论：本品含测结果准确，精密度、回收率、重现性 均较好，经加速稳定性试验，放置3个月后，穿心莲内酯含量下降了约50%。
Determination of andrographolide in Qinghuozhimai
capsules and examination of its quality stability by HPLC
, 百拇医药
Huang Jie
(Guangxi Institute for Drug Control,Nanning 530021)
ABSTRACT OBJECTIVE：To establish a method for determinat ion of andrographolide in Qinghuozhimai capsules(QHZMC) and examine the quality stability of QHZMC.METHODS:The content of andrographolide in QHZMC w as determined by HPLC.QHZMC was stored for 3 months at the temperature of 38～40 ℃ with relative humidity of 75%.Andrographolide was assayed every month.R ESULTS:Linear range was 0.20～1.23μg(r=0.9994).The average re covery rate was 97.89% with RSD=2.3%(n=6).The content of andrographolide in QHZMC was decreased by 53% within 3 months.CONCLUSION: The HPLC method can be used for determinationg of andrographolide in QHZMC .The quality of QHZMC is not stable.
, 百拇医药
KEY WORDS qinghuozhimai capsules,HPLC,andrographolide,quality stability
清火栀麦胶囊为南方地区常用的中成药，由穿心莲、栀子、麦冬三 味组成，具清热解毒，凉血消肿之功效，收载于卫生部药品标准中药成方制剂第9册(1994年 )。为了进一步探讨和完善质量控制指标，本文采用高效液相色谱法对君药穿心莲所含穿心 莲内酯(andrographolide)进行了含量测定研究，并对其进行了稳定性考察。
1 仪器与药品
Waters高效液相色谱仪:490E型多功能紫外检测器，510型泵，745型处理机,U6K进样器。
穿心莲内酯对照品(中国药品生物制品检定所)，清火栀麦胶囊(广西柳州市柳城制药厂)。
, 百拇医药
2 方法与结果
2.1 试液的制备
对照品溶液：精密 称取穿心莲内酯对照品适量，加甲醇使溶解并制成每1ml含200μg的溶液，作为对照品溶液 。
样品溶液：取本品内容物，混匀，取约2.5g,精密称定，加无水乙醇50ml,超声处理1h, 滤过，滤渣用无水乙醇洗涤3次，并入滤液中，蒸干，残渣加氯仿-甲醇(7∶3)混合液使溶解，置5ml量瓶中，加混合液稀释至刻度，摇匀，作为样品原液。精密量取原液2 50μl点于硅胶GF254薄层板上，使成条状，在样品条斑侧1.5cm处，随行点穿心莲内 酯对照品(3mg/ml)5μl作对照。以氯仿-醋酸乙酯-无水乙醇(9∶6∶1)为展开剂，展开， 取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视(见图1)，刮取与穿心莲内酯对照品相对应的条斑， 置5ml离心管中，精密加入甲醇5ml,搅拌10min,离心，取上清液，作为样品溶液。
, http://www.100md.com
2.2 色谱条件及色谱行为
色谱柱：μBondpack C18,10μm,4×3 0mm(中国科学院大连化学物所)。流动相：甲醇-水(55∶45)；流速:1.0ml/min；检测 波长:225nm;灵敏度:0.2AUFS;处理机1024;柱温：室温。在以上条件下，注入样品溶液，塔 板 数以穿心莲内酯峰计大于2000,分离度大于2.1。
图1 清火栀麦胶囊薄层色谱图
1-供试品原液；2-穿心莲内酯对照品
2.3 阴性试验
按清火栀麦胶囊的处方、工艺，不加穿心莲，制成阴性 样品，同样品溶液的制备法制成阴性试液，进样10μl,结果本品中穿心莲之外的其它药味对 穿心莲内酯峰无干扰，见图2。
, 百拇医药
图2 清火栀麦胶囊中穿心莲内酯HPLC图
A-穿心莲内酯对照品；B-清火栀麦胶囊样品；C-阴性样品
2.4 稳定性试验
在选定条件下，注入样品溶液，结果在6h内基本稳定, RSD=1.37%(n=8)。
2.5 线性范围试验
精 密吸取对照品溶液1,2,3,4,5,6和7ml,加甲醇稀释并定容至10ml,精密吸取以上7种溶液各10 μl,分别注入液相色谱仪，以穿心莲对照品浓度为自变量(X),以穿心莲内酯峰面积为 应变量(Y),求得回归方程:Y=189571X+543671,峰面积与浓度在20～140μg/ml范围内 呈良好线性关系(r=0.9994)。
2.6 精密度试验
, http://www.100md.com
在选定 条件下，注入样品溶液，连续进样6次,RSD=0.61%。
2.7 回收率试验
取已知含量的清火栀麦胶囊适量，加入一定量的穿心 莲内酯，按样品溶液的制备及测定的方法试验，结果平均回收率为97.89%,RSD =2.3%(n=6)，见表1。
表1 穿心莲内酯回收率测定结果
测得量
/mg
加入量
/mg
样品含量
/mg
, http://www.100md.com
回收率
/%
X
/%
RSD
/%
6.472
2.146
4.339
99.36
6.440
2.146
4.378
, http://www.100md.com
96.11
6.446
3.219
3.263
98.88
97.89
2.27
6.296
3.219
3.256
94.43
6.405
4.292
, 百拇医药
2.192
98.16
6.454
4.292
2.146
100.37
2.8 重现性试验
按样品的测定项下的方法测定950120批样 品5次，平均含量为0.728mg/粒,RSD=0.93%。
2.9 样品的测定
分别精密吸取浓度为60μg/ml的对照品溶液10μl,样 品溶液10μl;注入液相色谱仪，测定，按外标法计算，即得。共测样品10批，结果见表2。表2 样品的含量测定结果
, http://www.100md.com
批 号
测定量(mg/粒)
批 号
测定量(mg/粒 )
950120
0.672
950128
0.698
950207
0.580
950 127
0.477
, http://www.100md.com 950127-2
0.480
950329
0.468
950403
0.514
950408
0.452
950410
0.529
950610
0.352
2.10 加速稳定性试验
, 百拇医药
将本品3批在上市包装条件下，于 39℃和相对湿度75%保存，每月考核一次，连续3个月，对其穿心莲内酯的含量进行考察，结 果见表3。表3 加速稳定性考察结果
批 号
月份(mg/粒)
3个月内损
失率/%
0
1
2
3
950120
0.728
, http://www.100md.com
0.576
0.350
0.340
53.3
950128
0.698
0.516
0.363
0.312
55.3
950207
0.580
0.507
, 百拇医药
0.398
0.282
49.7
3 讨 论
3.1 本品经加热回流提取，所 溶出的杂质较多，在定容中有部分残渣难以转移，故参照中国药典1995年版一部“穿心莲” 项下以超声提取，经比较超声30,40和60min,结果以超声60min提取最为完全，实验证明，提 取1h后，加样回收率为97.89%,测定值精密度和重现性均较好，表明穿心莲内酯已提取完全 。
3.2 由于本品中含有穿心莲生药粉，经无水乙醇提取后，所得的供 试液中含有大量的叶绿素及其他酯溶性杂质，对高效液色谱分析柱污染严重；经大孔树脂吸 附后，以45%的乙醇洗脱，洗脱液浓缩后进样，在样品峰后仍有一杂质峰，且保留时间过长( 约30min),故未采用。现采用薄层色离的方法，刮取条斑洗脱后进样，杂质减少，每针的分 析时间缩短为10min左右，且阴性无干扰。
3.3 本品在室温下放置3个月后测定，穿心莲内酯的含量无明显变化。而 在39℃和相对湿度75%的环境下，每放置一个月，穿心莲内酯的含量相应降低，放置3个月后 ，3批样品穿心莲内酯的含量分别降低了53.3%,55.3%和49.7%,3批平均下降了53%,这与 文献[徐礼(焱)/(木)，沙世炎等编著.中草 药有效成分分析法.北京：人民卫生出版社，1984∶230.]中穿心莲药材中穿心莲内酯随着 贮藏时间增长而显著下降基本一致，至于穿心莲内酯在放置过程中作何转化，有待进一步研究。
黄捷，30岁。1990年毕业于广西中医学院药学系，主管药师
收稿日期：1999-03-15, 百拇医药
单位：南宁 530021 广西药品检验所
关键词：清火栀麦胶囊；高效液相色谱法；穿心莲内酯；质量稳定性
摘要 目的摘要 目的：采用高效液相色谱法测定了清火栀麦胶囊的含量并对其进 行稳定性考察。方法：用高效液相色谱法对其中的指标成分穿心莲内酯 进行了含量测定。紫外检测波长为λ225nm。加速稳定性试验环境：39℃，相对湿度75%，每 月考核1次。结果和结论：本品含测结果准确，精密度、回收率、重现性 均较好，经加速稳定性试验，放置3个月后，穿心莲内酯含量下降了约50%。
Determination of andrographolide in Qinghuozhimai
capsules and examination of its quality stability by HPLC
, 百拇医药
Huang Jie
(Guangxi Institute for Drug Control,Nanning 530021)
ABSTRACT OBJECTIVE：To establish a method for determinat ion of andrographolide in Qinghuozhimai capsules(QHZMC) and examine the quality stability of QHZMC.METHODS:The content of andrographolide in QHZMC w as determined by HPLC.QHZMC was stored for 3 months at the temperature of 38～40 ℃ with relative humidity of 75%.Andrographolide was assayed every month.R ESULTS:Linear range was 0.20～1.23μg(r=0.9994).The average re covery rate was 97.89% with RSD=2.3%(n=6).The content of andrographolide in QHZMC was decreased by 53% within 3 months.CONCLUSION: The HPLC method can be used for determinationg of andrographolide in QHZMC .The quality of QHZMC is not stable.
, 百拇医药
KEY WORDS qinghuozhimai capsules,HPLC,andrographolide,quality stability
清火栀麦胶囊为南方地区常用的中成药，由穿心莲、栀子、麦冬三 味组成，具清热解毒，凉血消肿之功效，收载于卫生部药品标准中药成方制剂第9册(1994年 )。为了进一步探讨和完善质量控制指标，本文采用高效液相色谱法对君药穿心莲所含穿心 莲内酯(andrographolide)进行了含量测定研究，并对其进行了稳定性考察。
1 仪器与药品
Waters高效液相色谱仪:490E型多功能紫外检测器，510型泵，745型处理机,U6K进样器。
穿心莲内酯对照品(中国药品生物制品检定所)，清火栀麦胶囊(广西柳州市柳城制药厂)。
, 百拇医药
2 方法与结果
2.1 试液的制备
对照品溶液：精密 称取穿心莲内酯对照品适量，加甲醇使溶解并制成每1ml含200μg的溶液，作为对照品溶液 。
样品溶液：取本品内容物，混匀，取约2.5g,精密称定，加无水乙醇50ml,超声处理1h, 滤过，滤渣用无水乙醇洗涤3次，并入滤液中，蒸干，残渣加氯仿-甲醇(7∶3)混合液使溶解，置5ml量瓶中，加混合液稀释至刻度，摇匀，作为样品原液。精密量取原液2 50μl点于硅胶GF254薄层板上，使成条状，在样品条斑侧1.5cm处，随行点穿心莲内 酯对照品(3mg/ml)5μl作对照。以氯仿-醋酸乙酯-无水乙醇(9∶6∶1)为展开剂，展开， 取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视(见图1)，刮取与穿心莲内酯对照品相对应的条斑， 置5ml离心管中，精密加入甲醇5ml,搅拌10min,离心，取上清液，作为样品溶液。
, http://www.100md.com
2.2 色谱条件及色谱行为
色谱柱：μBondpack C18,10μm,4×3 0mm(中国科学院大连化学物所)。流动相：甲醇-水(55∶45)；流速:1.0ml/min；检测 波长:225nm;灵敏度:0.2AUFS;处理机1024;柱温：室温。在以上条件下，注入样品溶液，塔 板 数以穿心莲内酯峰计大于2000,分离度大于2.1。
图1 清火栀麦胶囊薄层色谱图
1-供试品原液；2-穿心莲内酯对照品
2.3 阴性试验
按清火栀麦胶囊的处方、工艺，不加穿心莲，制成阴性 样品，同样品溶液的制备法制成阴性试液，进样10μl,结果本品中穿心莲之外的其它药味对 穿心莲内酯峰无干扰，见图2。
, 百拇医药
图2 清火栀麦胶囊中穿心莲内酯HPLC图
A-穿心莲内酯对照品；B-清火栀麦胶囊样品；C-阴性样品
2.4 稳定性试验
在选定条件下，注入样品溶液，结果在6h内基本稳定, RSD=1.37%(n=8)。
2.5 线性范围试验
精 密吸取对照品溶液1,2,3,4,5,6和7ml,加甲醇稀释并定容至10ml,精密吸取以上7种溶液各10 μl,分别注入液相色谱仪，以穿心莲对照品浓度为自变量(X),以穿心莲内酯峰面积为 应变量(Y),求得回归方程:Y=189571X+543671,峰面积与浓度在20～140μg/ml范围内 呈良好线性关系(r=0.9994)。
2.6 精密度试验
, http://www.100md.com
在选定 条件下，注入样品溶液，连续进样6次,RSD=0.61%。
2.7 回收率试验
取已知含量的清火栀麦胶囊适量，加入一定量的穿心 莲内酯，按样品溶液的制备及测定的方法试验，结果平均回收率为97.89%,RSD =2.3%(n=6)，见表1。
表1 穿心莲内酯回收率测定结果
测得量
/mg
加入量
/mg
样品含量
/mg
, http://www.100md.com
回收率
/%
X
/%
RSD
/%
6.472
2.146
4.339
99.36
6.440
2.146
4.378
, http://www.100md.com
96.11
6.446
3.219
3.263
98.88
97.89
2.27
6.296
3.219
3.256
94.43
6.405
4.292
, 百拇医药
2.192
98.16
6.454
4.292
2.146
100.37
2.8 重现性试验
按样品的测定项下的方法测定950120批样 品5次，平均含量为0.728mg/粒,RSD=0.93%。
2.9 样品的测定
分别精密吸取浓度为60μg/ml的对照品溶液10μl,样 品溶液10μl;注入液相色谱仪，测定，按外标法计算，即得。共测样品10批，结果见表2。表2 样品的含量测定结果
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批 号
测定量(mg/粒)
批 号
测定量(mg/粒 )
950120
0.672
950128
0.698
950207
0.580
950 127
0.477
, http://www.100md.com 950127-2
0.480
950329
0.468
950403
0.514
950408
0.452
950410
0.529
950610
0.352
2.10 加速稳定性试验
, 百拇医药
将本品3批在上市包装条件下，于 39℃和相对湿度75%保存，每月考核一次，连续3个月，对其穿心莲内酯的含量进行考察，结 果见表3。表3 加速稳定性考察结果
批 号
月份(mg/粒)
3个月内损
失率/%
0
1
2
3
950120
0.728
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0.576
0.350
0.340
53.3
950128
0.698
0.516
0.363
0.312
55.3
950207
0.580
0.507
, 百拇医药
0.398
0.282
49.7
3 讨 论
3.1 本品经加热回流提取，所 溶出的杂质较多，在定容中有部分残渣难以转移，故参照中国药典1995年版一部“穿心莲” 项下以超声提取，经比较超声30,40和60min,结果以超声60min提取最为完全，实验证明，提 取1h后，加样回收率为97.89%,测定值精密度和重现性均较好，表明穿心莲内酯已提取完全 。
3.2 由于本品中含有穿心莲生药粉，经无水乙醇提取后，所得的供 试液中含有大量的叶绿素及其他酯溶性杂质，对高效液色谱分析柱污染严重；经大孔树脂吸 附后，以45%的乙醇洗脱，洗脱液浓缩后进样，在样品峰后仍有一杂质峰，且保留时间过长( 约30min),故未采用。现采用薄层色离的方法，刮取条斑洗脱后进样，杂质减少，每针的分 析时间缩短为10min左右，且阴性无干扰。
3.3 本品在室温下放置3个月后测定，穿心莲内酯的含量无明显变化。而 在39℃和相对湿度75%的环境下，每放置一个月，穿心莲内酯的含量相应降低，放置3个月后 ，3批样品穿心莲内酯的含量分别降低了53.3%,55.3%和49.7%,3批平均下降了53%,这与 文献[徐礼(焱)/(木)，沙世炎等编著.中草 药有效成分分析法.北京：人民卫生出版社，1984∶230.]中穿心莲药材中穿心莲内酯随着 贮藏时间增长而显著下降基本一致，至于穿心莲内酯在放置过程中作何转化，有待进一步研究。
黄捷，30岁。1990年毕业于广西中医学院药学系，主管药师
收稿日期：1999-03-15, 百拇医药