复方氨肽口服液的制备及免疫调节作用研究
作者：黄巧玲 王玖君 许爱娥
单位：杭州 310009 杭州市第三人民医院
关键词：转移因子；免疫调节；黄芪；硫酸锌
摘要 目的摘要 目的：研究转移因子与常用中药复方配伍后的稳定性及对实验 小鼠的免疫调节作用。方法：稳定性试验用留样观察法通过测定巨噬细 胞吞噬功能、NK细胞活性及T、B淋巴细胞转化功能，观察其免疫调节作用，并与同剂量单方 制剂比较。结果：转移因子复方制剂性质稳定，其对CTX所致实验小鼠免 疫抑制状态有明显的提高作用。结论：转移因子复方制剂(复方氨肽口服 液)对实验小鼠免疫抑制状态的调节作用明显优于同剂量的单方制剂。
Preparation and immune regulative
effect of Fufang Antai Koufuye
, 百拇医药
Huang Qiaoling
(Hangzhou NO.3 People′s Hospital,Hangzhou 310009)
Wang Jiujun
(Hangzhou NO.3 People′s Hospital,Hangzhou 310009)
Xu Ai′e
(Hangzhou NO.3 People′s Hospital,Hangzhou 310009)
ABSTRACT OBJECTIVE：To study the stability of the mixture of transfer factor and conventional Chinese medicine and to learn its immunore gulatory function on mice.METHODS:The sample were kept to study thei r stablitities.The immunoregulatory functions were observed by investigating the phagocytic percentage of macrophage,activity of NK cell and T,B lymphocytes tra nsformations,which were compared with those results from the group administrated with the same dosage of single regent.RESULTS:The mixture of transf er factor and conventional Chinese medicine had good stability,and significantly raised the immunoregulartory function on the CTX-suppressed experimental mice. CONCLUSION:The immunoregulatory function of the mixture of transfer factor and conventional Chinese medicine(Fufang Antai Koufuye) is considerably s uperior than single regent at the same dosage.
, 百拇医药
KEY WORDS transfer factor,immunoregulartory,zine suffate,radix astR AGALI
目前临床上用于调节免疫功能的药物有干扰素IL-2、RNA、TF等， 由于它们都是注射给药，有的价格昂贵，使用有一定的局限性。临床上迫切需要一种价格适 宜、药效确切且使用方便的口服制剂。近年来研究证明，从动物脾脏中提取的转移因子具有 提高机体免疫功能的作用，且其活性不被胃蛋白酶、胃酸及胰蛋白酶所破坏[1],而 黄芪为常用补益中药，具扶正固本之功效[2],锌是人体所必需的微量元素，为此我 们将这三部分按一定比例配制成复方氨肽口服液，在对其进行稳定性、安全性试验的基础上 观察其对由环磷酰胺诱导实验小鼠免疫抑制状态的调节作用，并与同剂量单方制剂进行了对 比研究。现将结果报告如下。
1 材 料
1.1 动物
, 百拇医药
ICR小鼠，体重(20±2)g(浙江省中医药研究院实验动物室)。
1.2 药品与试剂
复方氨肽口服液、猪脾转移因子口服液、黄芪锌口服 液(杭州市第三人民医院制剂室)；环磷酰胺(CTX,200mg/瓶，上海华联制药公司)；刀豆蛋白 A(con-A,200mg/瓶，美国Sigma)；脂多糖(LPS,1mg/ml，上海第二军医大学)。
2 方法与结果
2.1 复方氨肽口服液的制备
2.1.1 处方 氨肽原液80ml,黄芪提取液10ml,硫酸锌1.0g,苯甲酸0.2g,柠檬 酸0.2g,蒸馏水加至100ml。
2.1.2 工艺 取健康猪脾，无菌水净后剪 去筋膜，加一定量无菌蒸馏水，捣碎，冻融，离心。取上清液，经超滤后即得氨肽原液(要 求每ml多肽含量在0.5mg以上者为合格)；另取黄芪置适当容器中加水煎煮2次，合并煎液， 沉淀后过滤，按1∶1浓缩后，置消毒的容器中备用。按处方量称取硫酸锌、苯甲酸、柠檬酸 用适量蒸馏水溶解，加入氨肽原液及黄芪提取液，加水至足量，灌封，包装，即得(每支10m l内含多肽4mg,黄芪以生药计1g,硫酸锌100mg)。
, 百拇医药
2.2 鉴别
2.2.1 取样品适量，加0.2%茚三酮溶液，在沸水中加热5min ,冷后应显紫色。
2.2.2 取样品适量，于60℃水浴加热10min,加5%α-萘酚乙醇溶液数滴，摇匀，沿管壁缓缓加入浓硫酸，接界面应出现紫红色环。
2.2.3 取本品适量，加亚铁氰化钾试液，应立即发生白色浑浊。
2.3 稳定性试验
取3个不同批号样品，用留样观察法，常温放置，分别 在1月、3月、半年、1年等不同时间检测其各项理化指标及微生物限量检查，结果表明复方 氨肽口服液常温保存1年性质稳定。
2.4 安全性试验
经预试，进行最大耐受量测定试验，选择健康小鼠20只，雌雄各半，体重(20±2)g,于24h内 分3次灌胃复方氨肽口服液，每次0.8ml/只，总剂量达120mg/kg,此剂量相当于成年人日服剂 量的300倍，小鼠给药后按常规饲养并观察10d,未见动物死亡和出现明显毒性反应，表明该 制剂急性毒性甚小，口服安全。
, http://www.100md.com
2.5 对实验小鼠免疫抑制状态的调节作用
将实验小鼠随机分成A、B、C 、D和E 5组，每组12只，雌雄各半，其中A、B、C和D组小鼠，每天分别经口灌注复方氨肽口 服液、猪脾转移因子口服液、黄芪锌口服液、蒸馏水各0.5ml/只，连续12d;E组小鼠为正常 对照组。A～D组小鼠均于实验第4天及第8天分别于腹腔内各注射一次CTX 0.1ml/只(相当于1 00mg/kg)。各组小鼠均于实验第13天摘眼球取血，作中性白细胞装数；另取腹腔洗液作巨噬 细胞吞噬功能测定，取脾脏作NK细胞活性[3]及T、B淋巴细胞转化功能测定[4 ],结果见表1～3。
表1 复方氨肽口服液等对实验小 鼠中性白细胞数的影响
±s,n=12
, 百拇医药
Groups
WBC(109/L)
P
A
7.35±4.93
<0.01
B
5.23±2.89
<0.01
C
3.18±1.21
>0.05
, 百拇医药
D
2.39±1.13
-
E
8.69±3.73
<0.01
Note:The control is D group表2 复方氨肽口服液等对实验小鼠巨噬细胞和NK细胞功 能的影响±s,n=12
Group
Phagocytic percentage
, 百拇医药
of macroph age/%
P
Activity of NK
cell/CI%
P
A
11.6±3.0
<0.01
14.0 ±1.1
<0.01
B
9.1±2.2
, http://www.100md.com
>0.05
10.8±5.6
>0.05
C
8.2±2.5
>0.05
11.5±8.9
>0.05
D
8.2±2.0
-
8.9±5.2
-
, http://www.100md.com
E
16.5±4.2
<0.01
37.8±7.6
<0.01
Note:The control is D group
由表1可见，复方氨肽口服液和猪脾转移因子口服液对提高实验小鼠中性白细胞数均较明显 ，与水对照组比较有非常显著差异(P<0.01),而黄芪锌口服液作用不明显(P>0.05)。
表3 复方氨肽口服液等对实验小鼠T淋转及B淋转功 能的影响±s,n=12
, 百拇医药
Gropu
T lymphocyte
Tranformation/CPM
P
B lymphocyte
Tranformation/CPM
P
A
37766±15286
<0.05
38230±21116
>0.05
, 百拇医药
B
37830±20848
<0.05
38006±15476
>0.05
C
34649±23181
>0.05
37718±18418
>0.05
D
25305±15188
, 百拇医药
-
35079±23389
-
E
52818±19935
<0.05
42419±26924
>0.05
Note:The control is D group
由表2可见，复方氨肽口服液对实验小鼠巨噬细胞吞噬功能及NK细胞活性有明显的促进作 用(P<0.01),而同剂量的单方制剂则作用不明显(P>0.05)。
, 百拇医药
由表3可见，复方氨肽口服液和猪脾转移因子口服液均可明显提高实验小鼠T淋巴细胞转化功 能(P<0.05),而黄芪锌口服液作用并不明显(P>0.05)。但3种制剂对B淋巴细 胞转化功能均无显著影响。
3 讨 论
通过以上对比 研究，结果表明小剂量的黄芪和硫酸锌与猪脾转移因子配合制成复方制剂后，不仅质量稳定 ，口服安全，而且对实验小鼠免疫抑制状态的调节作用明显优于同剂量的单方制剂。因其服 用方便，价格低廉，不仅可减少病人的注射痛苦，而且可减轻病人的经济负担。为免疫相关 性疾病的治疗提供了新的手段，同时提高了猪的综合利用价值，具较好的社会效益和经济效益。
参考文献
1，姜训，陈伟平，马焱，等.胃蛋白酶在体外对转移因子生 物特性及生物活性的影响.中国生物制品学杂志，1995，8(1)∶12.
2，赵武述主编.现代临床免疫学.北京：人民军医出版社，1 994∶684.
3，李求是，杨贵贞，周严恒，等.生物反应调变剂Gwe抗肿 瘤效应的实验研究.中国免疫学杂志，1991，7(1)∶35.
4，杨锋，胡成均，章建民，等.温阳药、滋阴药对“阳虚” 小鼠T细胞和B细胞转化功能的影响.中国实验临床免疫学杂志，1990，2(2)∶31.
收稿日期：1999-11-02, http://www.100md.com
单位：杭州 310009 杭州市第三人民医院
关键词：转移因子；免疫调节；黄芪；硫酸锌
摘要 目的摘要 目的：研究转移因子与常用中药复方配伍后的稳定性及对实验 小鼠的免疫调节作用。方法：稳定性试验用留样观察法通过测定巨噬细 胞吞噬功能、NK细胞活性及T、B淋巴细胞转化功能，观察其免疫调节作用，并与同剂量单方 制剂比较。结果：转移因子复方制剂性质稳定，其对CTX所致实验小鼠免 疫抑制状态有明显的提高作用。结论：转移因子复方制剂(复方氨肽口服 液)对实验小鼠免疫抑制状态的调节作用明显优于同剂量的单方制剂。
Preparation and immune regulative
effect of Fufang Antai Koufuye
, 百拇医药
Huang Qiaoling
(Hangzhou NO.3 People′s Hospital,Hangzhou 310009)
Wang Jiujun
(Hangzhou NO.3 People′s Hospital,Hangzhou 310009)
Xu Ai′e
(Hangzhou NO.3 People′s Hospital,Hangzhou 310009)
ABSTRACT OBJECTIVE：To study the stability of the mixture of transfer factor and conventional Chinese medicine and to learn its immunore gulatory function on mice.METHODS:The sample were kept to study thei r stablitities.The immunoregulatory functions were observed by investigating the phagocytic percentage of macrophage,activity of NK cell and T,B lymphocytes tra nsformations,which were compared with those results from the group administrated with the same dosage of single regent.RESULTS:The mixture of transf er factor and conventional Chinese medicine had good stability,and significantly raised the immunoregulartory function on the CTX-suppressed experimental mice. CONCLUSION:The immunoregulatory function of the mixture of transfer factor and conventional Chinese medicine(Fufang Antai Koufuye) is considerably s uperior than single regent at the same dosage.
, 百拇医药
KEY WORDS transfer factor,immunoregulartory,zine suffate,radix astR AGALI
目前临床上用于调节免疫功能的药物有干扰素IL-2、RNA、TF等， 由于它们都是注射给药，有的价格昂贵，使用有一定的局限性。临床上迫切需要一种价格适 宜、药效确切且使用方便的口服制剂。近年来研究证明，从动物脾脏中提取的转移因子具有 提高机体免疫功能的作用，且其活性不被胃蛋白酶、胃酸及胰蛋白酶所破坏[1],而 黄芪为常用补益中药，具扶正固本之功效[2],锌是人体所必需的微量元素，为此我 们将这三部分按一定比例配制成复方氨肽口服液，在对其进行稳定性、安全性试验的基础上 观察其对由环磷酰胺诱导实验小鼠免疫抑制状态的调节作用，并与同剂量单方制剂进行了对 比研究。现将结果报告如下。
1 材 料
1.1 动物
, 百拇医药
ICR小鼠，体重(20±2)g(浙江省中医药研究院实验动物室)。
1.2 药品与试剂
复方氨肽口服液、猪脾转移因子口服液、黄芪锌口服 液(杭州市第三人民医院制剂室)；环磷酰胺(CTX,200mg/瓶，上海华联制药公司)；刀豆蛋白 A(con-A,200mg/瓶，美国Sigma)；脂多糖(LPS,1mg/ml，上海第二军医大学)。
2 方法与结果
2.1 复方氨肽口服液的制备
2.1.1 处方 氨肽原液80ml,黄芪提取液10ml,硫酸锌1.0g,苯甲酸0.2g,柠檬 酸0.2g,蒸馏水加至100ml。
2.1.2 工艺 取健康猪脾，无菌水净后剪 去筋膜，加一定量无菌蒸馏水，捣碎，冻融，离心。取上清液，经超滤后即得氨肽原液(要 求每ml多肽含量在0.5mg以上者为合格)；另取黄芪置适当容器中加水煎煮2次，合并煎液， 沉淀后过滤，按1∶1浓缩后，置消毒的容器中备用。按处方量称取硫酸锌、苯甲酸、柠檬酸 用适量蒸馏水溶解，加入氨肽原液及黄芪提取液，加水至足量，灌封，包装，即得(每支10m l内含多肽4mg,黄芪以生药计1g,硫酸锌100mg)。
, 百拇医药
2.2 鉴别
2.2.1 取样品适量，加0.2%茚三酮溶液，在沸水中加热5min ,冷后应显紫色。
2.2.2 取样品适量，于60℃水浴加热10min,加5%α-萘酚乙醇溶液数滴，摇匀，沿管壁缓缓加入浓硫酸，接界面应出现紫红色环。
2.2.3 取本品适量，加亚铁氰化钾试液，应立即发生白色浑浊。
2.3 稳定性试验
取3个不同批号样品，用留样观察法，常温放置，分别 在1月、3月、半年、1年等不同时间检测其各项理化指标及微生物限量检查，结果表明复方 氨肽口服液常温保存1年性质稳定。
2.4 安全性试验
经预试，进行最大耐受量测定试验，选择健康小鼠20只，雌雄各半，体重(20±2)g,于24h内 分3次灌胃复方氨肽口服液，每次0.8ml/只，总剂量达120mg/kg,此剂量相当于成年人日服剂 量的300倍，小鼠给药后按常规饲养并观察10d,未见动物死亡和出现明显毒性反应，表明该 制剂急性毒性甚小，口服安全。
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2.5 对实验小鼠免疫抑制状态的调节作用
将实验小鼠随机分成A、B、C 、D和E 5组，每组12只，雌雄各半，其中A、B、C和D组小鼠，每天分别经口灌注复方氨肽口 服液、猪脾转移因子口服液、黄芪锌口服液、蒸馏水各0.5ml/只，连续12d;E组小鼠为正常 对照组。A～D组小鼠均于实验第4天及第8天分别于腹腔内各注射一次CTX 0.1ml/只(相当于1 00mg/kg)。各组小鼠均于实验第13天摘眼球取血，作中性白细胞装数；另取腹腔洗液作巨噬 细胞吞噬功能测定，取脾脏作NK细胞活性[3]及T、B淋巴细胞转化功能测定[4 ],结果见表1～3。
表1 复方氨肽口服液等对实验小 鼠中性白细胞数的影响
±s,n=12, 百拇医药
Groups
WBC(109/L)
P
A
7.35±4.93
<0.01
B
5.23±2.89
<0.01
C
3.18±1.21
>0.05
, 百拇医药
D
2.39±1.13
-
E
8.69±3.73
<0.01
Note:The control is D group表2 复方氨肽口服液等对实验小鼠巨噬细胞和NK细胞功 能的影响
±s,n=12Group
Phagocytic percentage
, 百拇医药
of macroph age/%
P
Activity of NK
cell/CI%
P
A
11.6±3.0
<0.01
14.0 ±1.1
<0.01
B
9.1±2.2
, http://www.100md.com
>0.05
10.8±5.6
>0.05
C
8.2±2.5
>0.05
11.5±8.9
>0.05
D
8.2±2.0
-
8.9±5.2
-
, http://www.100md.com
E
16.5±4.2
<0.01
37.8±7.6
<0.01
Note:The control is D group
由表1可见，复方氨肽口服液和猪脾转移因子口服液对提高实验小鼠中性白细胞数均较明显 ，与水对照组比较有非常显著差异(P<0.01),而黄芪锌口服液作用不明显(P>0.05)。
表3 复方氨肽口服液等对实验小鼠T淋转及B淋转功 能的影响
±s,n=12, 百拇医药
Gropu
T lymphocyte
Tranformation/CPM
P
B lymphocyte
Tranformation/CPM
P
A
37766±15286
<0.05
38230±21116
>0.05
, 百拇医药
B
37830±20848
<0.05
38006±15476
>0.05
C
34649±23181
>0.05
37718±18418
>0.05
D
25305±15188
, 百拇医药
-
35079±23389
-
E
52818±19935
<0.05
42419±26924
>0.05
Note:The control is D group
由表2可见，复方氨肽口服液对实验小鼠巨噬细胞吞噬功能及NK细胞活性有明显的促进作 用(P<0.01),而同剂量的单方制剂则作用不明显(P>0.05)。
, 百拇医药
由表3可见，复方氨肽口服液和猪脾转移因子口服液均可明显提高实验小鼠T淋巴细胞转化功 能(P<0.05),而黄芪锌口服液作用并不明显(P>0.05)。但3种制剂对B淋巴细 胞转化功能均无显著影响。
3 讨 论
通过以上对比 研究，结果表明小剂量的黄芪和硫酸锌与猪脾转移因子配合制成复方制剂后，不仅质量稳定 ，口服安全，而且对实验小鼠免疫抑制状态的调节作用明显优于同剂量的单方制剂。因其服 用方便，价格低廉，不仅可减少病人的注射痛苦，而且可减轻病人的经济负担。为免疫相关 性疾病的治疗提供了新的手段，同时提高了猪的综合利用价值，具较好的社会效益和经济效益。
参考文献
1，姜训，陈伟平，马焱，等.胃蛋白酶在体外对转移因子生 物特性及生物活性的影响.中国生物制品学杂志，1995，8(1)∶12.
2，赵武述主编.现代临床免疫学.北京：人民军医出版社，1 994∶684.
3，李求是，杨贵贞，周严恒，等.生物反应调变剂Gwe抗肿 瘤效应的实验研究.中国免疫学杂志，1991，7(1)∶35.
4，杨锋，胡成均，章建民，等.温阳药、滋阴药对“阳虚” 小鼠T细胞和B细胞转化功能的影响.中国实验临床免疫学杂志，1990，2(2)∶31.
收稿日期：1999-11-02, http://www.100md.com