诃子叶与诃子硬种皮中丹宁反相高效液相色谱分析
作者：丁岗 刘延泽 冀春茹
单位：
丁岗(河南中医学院，河南 郑州 450003)；刘延泽(河南中医学院，河南 郑州 450003)；冀春茹(河南中医学院，河南 郑州 450003)
关键词：诃子叶；硬种皮；丹宁；RP-HPLC
时珍国医国药000305 提要 用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法对诃子叶、诃子硬种皮中的丹宁成分进行了分析。结果表明二者丹宁含量均较低，其中叶子中诃黎勒酸的含量为1.56%，具有一定的开发利用价值。
中图分类号：R284.2 文献标识码：A 文章编号：1008-0805(2000)03-0198-01
Determination of Hydrolyzable Tannins in the Leaves and Hard Seed Coats of Terminalia chebula Retz. by RP-HPLC
, 百拇医药
DING Gang, LIU Yan-ze, JI Chun-ru
(Department of Phytochemistry, Henan College of
Traditional Chinese Medicine, Zhengzhou 450003, China)
Abstract Quantitative analysis of hydrolyzable tannins in the leaves and hard seed coats of Terminalia chebula was carried out by using RP-HPLC method. The contents of hydrolyzable tannins in both of them were low, but the leaves of Terminalia chebula showed some utilizing value by its higher content of chebulagic acid (1.56%)。
, 百拇医药
Key words Terminalia chebula leaves； Hard seed coats； Hydrolyzable tannins； RP-HPLC
诃子为使君子科植物诃子 Terminalia chebula Retz.及其变种绒毛诃子( T. chebula Retz. var. tomentella Kurz)的干燥成熟果实，是一味临床应用广泛的收涩药，富含丹宁。诃子叶具有与诃子相似的功效，而诃子硬种皮多弃去不用[1]。我们曾利用RP-HPLC法对不同来源诃子中的主要有效成分诃子酸(chebulinic acid)等进行了分析比较(《中国中药杂志》待发表)。为进一步了解诃子叶和诃子硬种皮的应用价值，充分利用诃子植物资源，本文报道诃子叶和诃子硬种皮中丹宁成分的RP-HPLC分析。
1 仪器、药品和试剂
Waters高效液相色谱仪，包括Waters 510 型泵，Waters 486检测器，Rheodyne 7725 i/20 μl手动进样阀，Waters PC-800色谱工作站。
, 百拇医药
组织破碎提取器(河南中医学院等研制)[2]，JL-120型超声波清洗器(上海金棋实业公司)，RE-52C旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)。
3种对照品(Ⅰ～Ⅲ)及corilagin(Ⅳ)均为作者从诃子药材中提取、分离并经光谱鉴定。HPLC法检测纯度均在95%以上。
诃子叶由刘延泽教授于1997-11采自云南景洪产绒毛诃子 T.chebula Retz.var. tomentella Kurz；诃子硬种皮取自1996-11于广西南宁所采诃子 T. chebula。
蒸馏水，重蒸馏水，甲醇(分析醇、色谱纯)，丙酮(分析纯)，冰醋酸(分析纯)。所有色谱用试剂均经0.45 μm微孔滤膜过滤。柱层析用吸附剂Toyopear HW-40(C)为日本Tosoh公司产品。
2 含量测定
, 百拇医药
2.1 色谱条件：色谱NovPak C18(3.9 mm×150 mm，4 μm)，带前置保护柱；流动相为甲醇-2%冰醋酸水溶液(27∶73，V/V)；柱温30℃；流速1 ml/min；检测波长：280 nm。
2.2 样品液的制备：准确称取样品干燥粗粉1 g，置于高17 cm、直径5.5 cm 的玻璃杯中，用70%丙酮(150 ml×3)室温组织破碎提取3次(20 s/次)，提取液减压抽滤，杂质用少量70%丙酮冲洗3次，滤液合并，置于500 ml 容量瓶中用70%丙酮定容，从中精密吸取100 ml，于60℃减压浓缩至5 ml，上 Toyopearl HW-40柱(1 cm，L 20 cm，吸附剂高10 cm)进行低压柱层析，依次用蒸馏水50 ml，5%甲醇50 ml 洗脱除去杂质，然后用甲醇-丙酮-水(6∶2∶ 2)300 ml 洗脱(至洗脱液 FeCl3-铁氰化钾薄层显色反应为阴性)，所得洗脱液于60℃减压浓缩至干，用甲醇(色谱纯)溶解并定容于5 ml 容量瓶中，经0.45 μm 微孔滤膜过滤，取续滤液5～10 μl 进行 HPLC 分析。如果浓度超出或低于标准曲线的范围，则相应稀释或浓缩至一定体积后，再进行分析。
, 百拇医药
2.3 样品分析：取样品液10 μl进样分析，分别用外标两点法计算Ⅰ～Ⅲ的含量，结果见表1，色谱图见图1。
表1 诃子叶、诃子硬种皮中3种可水解丹宁的含量(%) 样品
含 量
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
叶
0.12
1.56
+
硬种皮
0.14
, 百拇医药
0.34
0.17
图1 对照品Ⅰ～Ⅳ(A)，诃子叶(B)和诃子硬种皮(C)的 HPLC 图
Ⅰ.诃子酸(tR=10.38 min)； Ⅱ.诃黎勒酸(tR=3.23 min)； Ⅲ.1，3，6-三-O-没食子酰基葡萄糖(tR=2.01 min)； Ⅳ.corilagin(tR=2.27 min)
3 讨论
3.1 诃子叶中诃子酸(Ⅰ)、1，3，6-三-O-没食子酰基葡萄糖(1，3，6-tri-O-galloyl-β-D-glucose，Ⅲ)的含量较低，而诃黎勒酸(chebulagic acid，Ⅱ)含量为1.56%，有一定的利用价值。
, 百拇医药
3.2 硬种皮中Ⅰ～Ⅲ的总含量只有0.65%，因此诃子入药时弃去硬种皮(即果核)是合理的。
基金项目：国家“九五”攻关项目“中药材质量标准的规范化研究-诃子”
作者简介：丁 岗(1967-)，男(汉族)，江西省吉安市人，现任河南中医学院植化教研室讲师，硕士学位.
参考文献：
[1]江苏新医学院.中药大辞典(上册)[M].上海：上海人民出版社，1977∶1174
[2]韩建海，章 琛，袁 珂，等.一种用于高速硬组织捣碎的破碎刀具[P].中国专利：94244358.6，1994
收稿日期：1999-09-07
修订日期：1999-12-03, 百拇医药
单位：
丁岗(河南中医学院，河南 郑州 450003)；刘延泽(河南中医学院，河南 郑州 450003)；冀春茹(河南中医学院，河南 郑州 450003)
关键词：诃子叶；硬种皮；丹宁；RP-HPLC
时珍国医国药000305 提要 用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法对诃子叶、诃子硬种皮中的丹宁成分进行了分析。结果表明二者丹宁含量均较低，其中叶子中诃黎勒酸的含量为1.56%，具有一定的开发利用价值。
中图分类号：R284.2 文献标识码：A 文章编号：1008-0805(2000)03-0198-01
Determination of Hydrolyzable Tannins in the Leaves and Hard Seed Coats of Terminalia chebula Retz. by RP-HPLC
, 百拇医药
DING Gang, LIU Yan-ze, JI Chun-ru
(Department of Phytochemistry, Henan College of
Traditional Chinese Medicine, Zhengzhou 450003, China)
Abstract Quantitative analysis of hydrolyzable tannins in the leaves and hard seed coats of Terminalia chebula was carried out by using RP-HPLC method. The contents of hydrolyzable tannins in both of them were low, but the leaves of Terminalia chebula showed some utilizing value by its higher content of chebulagic acid (1.56%)。
, 百拇医药
Key words Terminalia chebula leaves； Hard seed coats； Hydrolyzable tannins； RP-HPLC
诃子为使君子科植物诃子 Terminalia chebula Retz.及其变种绒毛诃子( T. chebula Retz. var. tomentella Kurz)的干燥成熟果实，是一味临床应用广泛的收涩药，富含丹宁。诃子叶具有与诃子相似的功效，而诃子硬种皮多弃去不用[1]。我们曾利用RP-HPLC法对不同来源诃子中的主要有效成分诃子酸(chebulinic acid)等进行了分析比较(《中国中药杂志》待发表)。为进一步了解诃子叶和诃子硬种皮的应用价值，充分利用诃子植物资源，本文报道诃子叶和诃子硬种皮中丹宁成分的RP-HPLC分析。
1 仪器、药品和试剂
Waters高效液相色谱仪，包括Waters 510 型泵，Waters 486检测器，Rheodyne 7725 i/20 μl手动进样阀，Waters PC-800色谱工作站。
, 百拇医药
组织破碎提取器(河南中医学院等研制)[2]，JL-120型超声波清洗器(上海金棋实业公司)，RE-52C旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)。
3种对照品(Ⅰ～Ⅲ)及corilagin(Ⅳ)均为作者从诃子药材中提取、分离并经光谱鉴定。HPLC法检测纯度均在95%以上。
诃子叶由刘延泽教授于1997-11采自云南景洪产绒毛诃子 T.chebula Retz.var. tomentella Kurz；诃子硬种皮取自1996-11于广西南宁所采诃子 T. chebula。
蒸馏水，重蒸馏水，甲醇(分析醇、色谱纯)，丙酮(分析纯)，冰醋酸(分析纯)。所有色谱用试剂均经0.45 μm微孔滤膜过滤。柱层析用吸附剂Toyopear HW-40(C)为日本Tosoh公司产品。
2 含量测定
, 百拇医药
2.1 色谱条件：色谱NovPak C18(3.9 mm×150 mm，4 μm)，带前置保护柱；流动相为甲醇-2%冰醋酸水溶液(27∶73，V/V)；柱温30℃；流速1 ml/min；检测波长：280 nm。
2.2 样品液的制备：准确称取样品干燥粗粉1 g，置于高17 cm、直径5.5 cm 的玻璃杯中，用70%丙酮(150 ml×3)室温组织破碎提取3次(20 s/次)，提取液减压抽滤，杂质用少量70%丙酮冲洗3次，滤液合并，置于500 ml 容量瓶中用70%丙酮定容，从中精密吸取100 ml，于60℃减压浓缩至5 ml，上 Toyopearl HW-40柱(1 cm，L 20 cm，吸附剂高10 cm)进行低压柱层析，依次用蒸馏水50 ml，5%甲醇50 ml 洗脱除去杂质，然后用甲醇-丙酮-水(6∶2∶ 2)300 ml 洗脱(至洗脱液 FeCl3-铁氰化钾薄层显色反应为阴性)，所得洗脱液于60℃减压浓缩至干，用甲醇(色谱纯)溶解并定容于5 ml 容量瓶中，经0.45 μm 微孔滤膜过滤，取续滤液5～10 μl 进行 HPLC 分析。如果浓度超出或低于标准曲线的范围，则相应稀释或浓缩至一定体积后，再进行分析。
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2.3 样品分析：取样品液10 μl进样分析，分别用外标两点法计算Ⅰ～Ⅲ的含量，结果见表1，色谱图见图1。
表1 诃子叶、诃子硬种皮中3种可水解丹宁的含量(%) 样品
含 量
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
叶
0.12
1.56
+
硬种皮
0.14
, 百拇医药
0.34
0.17
图1 对照品Ⅰ～Ⅳ(A)，诃子叶(B)和诃子硬种皮(C)的 HPLC 图
Ⅰ.诃子酸(tR=10.38 min)； Ⅱ.诃黎勒酸(tR=3.23 min)； Ⅲ.1，3，6-三-O-没食子酰基葡萄糖(tR=2.01 min)； Ⅳ.corilagin(tR=2.27 min)
3 讨论
3.1 诃子叶中诃子酸(Ⅰ)、1，3，6-三-O-没食子酰基葡萄糖(1，3，6-tri-O-galloyl-β-D-glucose，Ⅲ)的含量较低，而诃黎勒酸(chebulagic acid，Ⅱ)含量为1.56%，有一定的利用价值。
, 百拇医药
3.2 硬种皮中Ⅰ～Ⅲ的总含量只有0.65%，因此诃子入药时弃去硬种皮(即果核)是合理的。
基金项目：国家“九五”攻关项目“中药材质量标准的规范化研究-诃子”
作者简介：丁 岗(1967-)，男(汉族)，江西省吉安市人，现任河南中医学院植化教研室讲师，硕士学位.
参考文献：
[1]江苏新医学院.中药大辞典(上册)[M].上海：上海人民出版社，1977∶1174
[2]韩建海，章 琛，袁 珂，等.一种用于高速硬组织捣碎的破碎刀具[P].中国专利：94244358.6，1994
收稿日期：1999-09-07
修订日期：1999-12-03, 百拇医药
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