促甲状腺素释放激素对大鼠烧伤早期肾脏的保护作用
陈旭林 李守生 汪昌荣 王永杰
目的：探讨促甲状腺素释放激素(Thyrotropin-releasing hormone,TRH)对烧伤早期肾脏损害的作用。方法：采用大鼠40%Ⅱ度烧伤模型，烧伤后30 min给予TRH(5 mg/kg体重)，观察烧伤后2，6，12，24 h肾脏的MDA含量、SOD活性、含水量和ATP含量等变化，同时对肾脏组织病理学改变进行了观察。结果：大鼠烧伤后肾脏发生明显的脂质过氧化损害及能量代谢紊乱，而使用TRH治疗后，大鼠肾脏MDA含量明显下降，SOD活性明显回升，肾脏能量代谢紊乱有一定程度纠正。病理观察结果也表明TRH治疗组大鼠肾脏病变程度明显减轻。结论：TRH对大鼠烧伤后早期肾脏损害具有明显的保护作用。
关键词：促甲状腺素释放激素 烧伤 肾脏
, http://www.100md.com
尽管目前的抗休克措施能使绝大多数烧伤病人度过休克期，但仍不能完全消除休克造成的缺血缺氧性损害，常常出现内脏并发症，肾脏是最易出现并发症的器官，急性肾功能衰竭是烧伤病人早期死亡的主要原因[1]。促甲状腺素释放激素(Thyrotropin-releasing hormone,TRH)能增加失血性休克大鼠重要脏器的血供，改善微循环，提高休克大鼠的存活率[2]。我们采用大鼠40%Ⅱ度烧伤模型，应用TRH观察其对烧伤早期肾脏损害的作用，为临床治疗提供参考。
1 材料与方法
1.1 实验动物与分组
64只健康SD大鼠(安徽医科大学实验动物中心提供)，体重(203±18)g，雌雄不拘，随机分为烧伤对照组(32只，每时相点8只)和烧伤TRH治疗组(32只，每时相点8只)。13.3%乌拉坦-1%氯醛糖右侧肌肉注射(0.6ml/100g体重)麻醉动物，用80℃水烫伤大鼠腰部以下身体(以髂前上棘为界)30s，造成40%Ⅱ度(病理切片证实)烧伤[3]。伤后立即按Parkland公式腹腔注射乳酸林格氏液复苏，伤后30min，烧伤TRH治疗组大鼠以0.2ml/100g体重(以生理盐水配成2.5mg/ml)腹腔注射给予TRH(中科院上海丽珠东风生物技术有限公司生产)，而烧伤对照组大鼠给予等量的生理盐水。上述两组动物分别于伤后2，6，12，24h放血处死。另取8只大鼠进行同样的操作但不烧伤及补液作为伤前对照。
, http://www.100md.com
1.2 检测指标及方法
大鼠活杀后取肾脏行光镜病理检查，并测定肾组织的丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性和ATP含量以及含水量。MDA含量的测定采用硫代巴比妥酸比色法，SOD活性的测定采用改良的黄嘌呤氧化酶法，ATP含量的测定采用化学比色法，试剂盒均购自南京建成生物工程研究所，严格按说明书操作，肾脏的含水量采用干温重法[4]，含水量
。
1.3 统计学处理
所有数据均用均值±标准差(x±s)表示，采用单因素方差分析判断组间差异。所有的统计均在686微机上用SAS统计软件完成，微机和统计软件由本校卫生统计学教研室提供。
, http://www.100md.com
2 结果
2.1 大鼠烧伤后肾组织MDA含量和SOD活性变化
大鼠烧伤后肾组织MDA含量明显升高，SOD活性显著下降，TRH治疗组大鼠肾组织这二者虽有一定程度的变化，但与同时相点烧伤对照组相比，MDA含量明显降低，SOD活性明显回升，见表1。
表1 大鼠烧伤后肾组织MDA含量、SOD活性和含水量的变化
项目
组别
伤前
伤后2h
伤后6h
, 百拇医药 伤后12h
伤后24h
MDA含量
(nmol/g tissue)
烧伤对照组
TRH治疗组
261.1±17.9
261.1±17.9
318.5±23.4
268.8±18.5
337.6±38.51)
275.3±32.13)
, 百拇医药
367.9±32.72)
303.2±31.74)
407.2±34.42)
324.1±33.54)
SOD活性
(NU/mg protein)
烧伤对照组
TRH治疗组
19.03±0.61
19.03±0.61
, 百拇医药 17.15±1.67
18.75±1.32
13.06±2.111)
17.75±1.043)
12.89±1.762)
15.22±1.654)
10.78±1.212)
13.99±1.434)
含水量(%)
烧伤对照组
, http://www.100md.com
TRH治疗组
70.5±7.4
70.5±7.4
73.2±7.7
71.4±7.5
75.2±7.61)
73.9±8.13)
76.6±7.82)
74.5±6.91)3)
78.2±8.32)
, 百拇医药
75.3±7.72)4)
注：1)与同时相点烧伤对照组比较:P<0.05；
2)与同时相点烧伤对照组比较:P<0.01；
3)与伤前值比较：P<0.05；
4)与伤前值比较：P<0.012.2 大鼠烧伤后肾脏含水量的变化
从表1可看出，大鼠烧伤后肾脏含水量明显增加，TRH治疗组大鼠肾脏含水量有一定程度的减低。
2.3 大鼠烧伤后肾组织ATP含量的变化
大鼠烧伤后肾脏ATP含量明显下降，TRH治疗组大鼠肾脏ATP含量虽有一定程度的下降，但与同时相点烧伤对照组相比，ATP含量显著升高，见表2。
, http://www.100md.com
表2 大鼠烧伤后肾组织ATP含量(nmol/mg protein)的变化
组别
伤前
伤后6h
伤后12h
伤后24h
烧伤对照组
24.1±2.5
11.3±1.22)
9.7±1.02)
7.0±0.82)
, http://www.100md.com
TRH治疗组
24.1±2.5
18.2±1.91)3)
15.9±1.81)3)
12.1±1.51)4)
注：1)与同时相点烧伤对照组比较：P<0.05;
2)与同时相点烧伤对照组比较：P<0.01；
3)与伤前值比较：P<0.05；
4)与伤前值比较：P<0.012.4 肾脏病理改变
伤后24h烧伤对照组肾小管上皮细胞水肿，管内蛋白管型，肾小球和间质显著充血水肿，红细胞渗出，TRH治疗组大鼠上述病变明显减轻。
, 百拇医药
3 讨论
TRH是一种由焦谷氨酸、组氨酸和脯氨酸组成的三肽物质。大鼠烧伤后应用TRH肾脏病理性损害明显减轻，表明TRH对大鼠烧伤早期肾脏损害具有明显的保护作用。
TRH治疗的有效性主要表现在以下几个方面：
(1)增加肾脏的血供，减轻缺血缺氧性损害。严重烧伤后有效循环血量下降，交感神经兴奋和肾素-血管紧张素的作用，肾血管收缩造成肾缺血是烧伤后早期肾功能损害的主要原因之一。TRH可以显著改善休克大鼠的微循环，增加肾脏的供血供氧[5]，减轻肾脏的缺血缺氧性损害。
(2)减少氧自由基的产生，抑制脂质过氧化损害。实验研究和临床观察均证实，脂质过氧化损害是严重烧伤早期肾损害的重要原因之一[6]。本实验也再次证实，烧伤后大鼠肾组织MDA含量明显增加，而SOD活性降低，应用TRH后，肾组织MDA含量显著减低，SOD活性明显增加，说明TRH对大鼠烧伤自由基的产生及脂质过氧化损害有明显的抑制作用。其主要原因是TRH改善了肾血流灌注，减轻了缺血缺氧性损害，其次，TRH可以抑制磷脂酶A2的活性，减少各种脂性介质的释放，减少中性粒细胞聚集和活化[7]，从而抑制氧自由基的产生。
, http://www.100md.com
(3)改善肾脏的能量代谢，减轻组织水肿。蒋建新[8]通过观察线粒体呼吸率(RCR)和ADP/O值发现TRH具有改善休克细胞的线粒体的氧化磷酸化功能，从而能保障细胞正常代谢所需的能量供应，减轻因细胞供氧减少和利用氧能力下降所致的器官和组织损伤。本实验也证实TRH可以防止烧伤后肾组织ATP含量的降低，减轻肾脏因能量代谢障碍而引起的水肿，表明TRH可明显纠正烧伤大鼠能量代谢紊乱。
作者单位：陈旭林(安徽医科大学第一附属医院烧伤科 合肥 230022)
李守生(安徽医科大学第一附属医院烧伤科 合肥 230022)
汪昌荣(安徽医科大学第一附属医院烧伤科 合肥 230022)
王永杰(安徽医科大学第一附属医院烧伤科 合肥 230022)
, http://www.100md.com 参考文献：
[1]常致德，张明泉，孙永华，等编著.烧伤创面修复与全身治疗.北京：北京出版社，1993：187
[2]刘良明，胡德耀，陈惠孙，等.促甲状腺素释放激素增强失血性休克大鼠心脏受体功能及其机理.中国病理生理杂志，1995；11(5)：483
[3]吴坤莹，黄巧冰.烧伤休克微循环障碍及其与TNF的关系.中华整形烧伤外科杂志，1996；12(1)：41
[4]吴坤莹，赵克森，朱佐江，等.虎杖四号对烧伤休克大鼠微循环紊乱的防治作用.中华整形烧伤外科杂志，1992；8(2)：133
[5]Hu Dy,Chen HS,Liu LM,et al.Antishock property of TRH and its mechanism.Chin J Traumatol,1993;9(6):22
[6]高建川，吴雄飞，杨宗城，等.内皮素在大鼠烧伤早期肾脏损害中的作用.中华整形烧伤外科杂志，1997；13(1)：21
[7]胡志前，王元和，吴德敬，等.肠缺血性休克犬血清PLA2活性和MDA含量及促甲状腺素释放激素对其影响.中国病理生理杂志，1996；12(4)：392
[8]蒋建新，汪江淮，陈惠孙，等.TRH对创伤性休克大鼠线粒体呼吸功能的影响.中国药理学与毒理学杂志，1992；6(1)：64, 百拇医药
目的：探讨促甲状腺素释放激素(Thyrotropin-releasing hormone,TRH)对烧伤早期肾脏损害的作用。方法：采用大鼠40%Ⅱ度烧伤模型，烧伤后30 min给予TRH(5 mg/kg体重)，观察烧伤后2，6，12，24 h肾脏的MDA含量、SOD活性、含水量和ATP含量等变化，同时对肾脏组织病理学改变进行了观察。结果：大鼠烧伤后肾脏发生明显的脂质过氧化损害及能量代谢紊乱，而使用TRH治疗后，大鼠肾脏MDA含量明显下降，SOD活性明显回升，肾脏能量代谢紊乱有一定程度纠正。病理观察结果也表明TRH治疗组大鼠肾脏病变程度明显减轻。结论：TRH对大鼠烧伤后早期肾脏损害具有明显的保护作用。
关键词：促甲状腺素释放激素 烧伤 肾脏
, http://www.100md.com
尽管目前的抗休克措施能使绝大多数烧伤病人度过休克期，但仍不能完全消除休克造成的缺血缺氧性损害，常常出现内脏并发症，肾脏是最易出现并发症的器官，急性肾功能衰竭是烧伤病人早期死亡的主要原因[1]。促甲状腺素释放激素(Thyrotropin-releasing hormone,TRH)能增加失血性休克大鼠重要脏器的血供，改善微循环，提高休克大鼠的存活率[2]。我们采用大鼠40%Ⅱ度烧伤模型，应用TRH观察其对烧伤早期肾脏损害的作用，为临床治疗提供参考。
1 材料与方法
1.1 实验动物与分组
64只健康SD大鼠(安徽医科大学实验动物中心提供)，体重(203±18)g，雌雄不拘，随机分为烧伤对照组(32只，每时相点8只)和烧伤TRH治疗组(32只，每时相点8只)。13.3%乌拉坦-1%氯醛糖右侧肌肉注射(0.6ml/100g体重)麻醉动物，用80℃水烫伤大鼠腰部以下身体(以髂前上棘为界)30s，造成40%Ⅱ度(病理切片证实)烧伤[3]。伤后立即按Parkland公式腹腔注射乳酸林格氏液复苏，伤后30min，烧伤TRH治疗组大鼠以0.2ml/100g体重(以生理盐水配成2.5mg/ml)腹腔注射给予TRH(中科院上海丽珠东风生物技术有限公司生产)，而烧伤对照组大鼠给予等量的生理盐水。上述两组动物分别于伤后2，6，12，24h放血处死。另取8只大鼠进行同样的操作但不烧伤及补液作为伤前对照。
, http://www.100md.com
1.2 检测指标及方法
大鼠活杀后取肾脏行光镜病理检查，并测定肾组织的丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性和ATP含量以及含水量。MDA含量的测定采用硫代巴比妥酸比色法，SOD活性的测定采用改良的黄嘌呤氧化酶法，ATP含量的测定采用化学比色法，试剂盒均购自南京建成生物工程研究所，严格按说明书操作，肾脏的含水量采用干温重法[4]，含水量
。1.3 统计学处理
所有数据均用均值±标准差(x±s)表示，采用单因素方差分析判断组间差异。所有的统计均在686微机上用SAS统计软件完成，微机和统计软件由本校卫生统计学教研室提供。
, http://www.100md.com
2 结果
2.1 大鼠烧伤后肾组织MDA含量和SOD活性变化
大鼠烧伤后肾组织MDA含量明显升高，SOD活性显著下降，TRH治疗组大鼠肾组织这二者虽有一定程度的变化，但与同时相点烧伤对照组相比，MDA含量明显降低，SOD活性明显回升，见表1。
表1 大鼠烧伤后肾组织MDA含量、SOD活性和含水量的变化
项目
组别
伤前
伤后2h
伤后6h
, 百拇医药 伤后12h
伤后24h
MDA含量
(nmol/g tissue)
烧伤对照组
TRH治疗组
261.1±17.9
261.1±17.9
318.5±23.4
268.8±18.5
337.6±38.51)
275.3±32.13)
, 百拇医药
367.9±32.72)
303.2±31.74)
407.2±34.42)
324.1±33.54)
SOD活性
(NU/mg protein)
烧伤对照组
TRH治疗组
19.03±0.61
19.03±0.61
, 百拇医药 17.15±1.67
18.75±1.32
13.06±2.111)
17.75±1.043)
12.89±1.762)
15.22±1.654)
10.78±1.212)
13.99±1.434)
含水量(%)
烧伤对照组
, http://www.100md.com
TRH治疗组
70.5±7.4
70.5±7.4
73.2±7.7
71.4±7.5
75.2±7.61)
73.9±8.13)
76.6±7.82)
74.5±6.91)3)
78.2±8.32)
, 百拇医药
75.3±7.72)4)
注：1)与同时相点烧伤对照组比较:P<0.05；
2)与同时相点烧伤对照组比较:P<0.01；
3)与伤前值比较：P<0.05；
4)与伤前值比较：P<0.012.2 大鼠烧伤后肾脏含水量的变化
从表1可看出，大鼠烧伤后肾脏含水量明显增加，TRH治疗组大鼠肾脏含水量有一定程度的减低。
2.3 大鼠烧伤后肾组织ATP含量的变化
大鼠烧伤后肾脏ATP含量明显下降，TRH治疗组大鼠肾脏ATP含量虽有一定程度的下降，但与同时相点烧伤对照组相比，ATP含量显著升高，见表2。
, http://www.100md.com
表2 大鼠烧伤后肾组织ATP含量(nmol/mg protein)的变化
组别
伤前
伤后6h
伤后12h
伤后24h
烧伤对照组
24.1±2.5
11.3±1.22)
9.7±1.02)
7.0±0.82)
, http://www.100md.com
TRH治疗组
24.1±2.5
18.2±1.91)3)
15.9±1.81)3)
12.1±1.51)4)
注：1)与同时相点烧伤对照组比较：P<0.05;
2)与同时相点烧伤对照组比较：P<0.01；
3)与伤前值比较：P<0.05；
4)与伤前值比较：P<0.012.4 肾脏病理改变
伤后24h烧伤对照组肾小管上皮细胞水肿，管内蛋白管型，肾小球和间质显著充血水肿，红细胞渗出，TRH治疗组大鼠上述病变明显减轻。
, 百拇医药
3 讨论
TRH是一种由焦谷氨酸、组氨酸和脯氨酸组成的三肽物质。大鼠烧伤后应用TRH肾脏病理性损害明显减轻，表明TRH对大鼠烧伤早期肾脏损害具有明显的保护作用。
TRH治疗的有效性主要表现在以下几个方面：
(1)增加肾脏的血供，减轻缺血缺氧性损害。严重烧伤后有效循环血量下降，交感神经兴奋和肾素-血管紧张素的作用，肾血管收缩造成肾缺血是烧伤后早期肾功能损害的主要原因之一。TRH可以显著改善休克大鼠的微循环，增加肾脏的供血供氧[5]，减轻肾脏的缺血缺氧性损害。
(2)减少氧自由基的产生，抑制脂质过氧化损害。实验研究和临床观察均证实，脂质过氧化损害是严重烧伤早期肾损害的重要原因之一[6]。本实验也再次证实，烧伤后大鼠肾组织MDA含量明显增加，而SOD活性降低，应用TRH后，肾组织MDA含量显著减低，SOD活性明显增加，说明TRH对大鼠烧伤自由基的产生及脂质过氧化损害有明显的抑制作用。其主要原因是TRH改善了肾血流灌注，减轻了缺血缺氧性损害，其次，TRH可以抑制磷脂酶A2的活性，减少各种脂性介质的释放，减少中性粒细胞聚集和活化[7]，从而抑制氧自由基的产生。
, http://www.100md.com
(3)改善肾脏的能量代谢，减轻组织水肿。蒋建新[8]通过观察线粒体呼吸率(RCR)和ADP/O值发现TRH具有改善休克细胞的线粒体的氧化磷酸化功能，从而能保障细胞正常代谢所需的能量供应，减轻因细胞供氧减少和利用氧能力下降所致的器官和组织损伤。本实验也证实TRH可以防止烧伤后肾组织ATP含量的降低，减轻肾脏因能量代谢障碍而引起的水肿，表明TRH可明显纠正烧伤大鼠能量代谢紊乱。
作者单位：陈旭林(安徽医科大学第一附属医院烧伤科 合肥 230022)
李守生(安徽医科大学第一附属医院烧伤科 合肥 230022)
汪昌荣(安徽医科大学第一附属医院烧伤科 合肥 230022)
王永杰(安徽医科大学第一附属医院烧伤科 合肥 230022)
, http://www.100md.com 参考文献：
[1]常致德，张明泉，孙永华，等编著.烧伤创面修复与全身治疗.北京：北京出版社，1993：187
[2]刘良明，胡德耀，陈惠孙，等.促甲状腺素释放激素增强失血性休克大鼠心脏受体功能及其机理.中国病理生理杂志，1995；11(5)：483
[3]吴坤莹，黄巧冰.烧伤休克微循环障碍及其与TNF的关系.中华整形烧伤外科杂志，1996；12(1)：41
[4]吴坤莹，赵克森，朱佐江，等.虎杖四号对烧伤休克大鼠微循环紊乱的防治作用.中华整形烧伤外科杂志，1992；8(2)：133
[5]Hu Dy,Chen HS,Liu LM,et al.Antishock property of TRH and its mechanism.Chin J Traumatol,1993;9(6):22
[6]高建川，吴雄飞，杨宗城，等.内皮素在大鼠烧伤早期肾脏损害中的作用.中华整形烧伤外科杂志，1997；13(1)：21
[7]胡志前，王元和，吴德敬，等.肠缺血性休克犬血清PLA2活性和MDA含量及促甲状腺素释放激素对其影响.中国病理生理杂志，1996；12(4)：392
[8]蒋建新，汪江淮，陈惠孙，等.TRH对创伤性休克大鼠线粒体呼吸功能的影响.中国药理学与毒理学杂志，1992；6(1)：64, 百拇医药