干扰素对翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响
张俊华 金威尔 林颖 张国安
目的：研究α-干扰素(α-IFN)和γ-干扰素(γ-IFN)对翼状胬肉成纤维细胞体外增殖的影响。方法：采用组织培养技术建立翼状胬肉成纤维细胞系，用MTT比色法测定α-IFN和γ-IFN对翼状胬肉成纤维细胞的增殖的影响。结果：α-IFN和γ-IFN可明显抑制翼状胬肉成纤维细胞的增殖，并呈剂量依赖效应，γ-IFN的抑制作用略强于α-IFN。结论：IFN是一组翼状胬肉成纤维细胞增殖的负性调节因子，有望在翼状胬肉的防治中发挥重要作用。
关键词：α-干扰素 γ-干扰素 翼状胬肉
翼状胬肉是眼科的常见多发病，但其病变本质及发病机理仍有争议，临床至今也缺少根治的理想疗法。故研究其病变本质及寻找有效的防治措施，是目前急需解决的课题之一。病理学研究表明，翼状胬肉的主要成份是大量增生的成纤维细胞，并由其导致相应的病变[1]。我们对α-干扰素(α-IFN)和γ-干扰素(γ-IFN)对翼状胬肉成纤维细胞体外增殖的影响进行了研究，希望能为临床治疗翼状胬肉成提供一些新的有效的方法。
, http://www.100md.com
1 材料与方法
1.1 材料
RPMI 1640培养基，美国Gibco公司产品；胎牛血清，北京邦定公司产品；α-IFN，深圳科兴公司产品；γ-IFN，第二军医大学产品；MTT，Fluka公司产品；DMSO和胰蛋白酶均为Sigma公司产品。
1.2 方法
1.2.1 翼状胬肉成纤维细胞的培养 培养组织取自本院眼科手术切除的原发性翼状胬肉标本，采用组织块培养技术[2]，建立翼状胬肉成纤维细胞株，实验所用细胞为第3～5代细胞。
1.2.2 测定不同浓度的α-IFN和γ-IFN对翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响 将贴壁培养的翼状胬肉成纤维细胞用0.25%胰蛋白酶消化后，接种于96孔培养板中，贴壁后加入含有不同浓度的α-IFN和γ-IFN的无血清RPMI 1640培养液，对照只加培养液，每组设3复孔，培养48 h后，吸出培养液，加入终浓度为0.05%的MTT，继续培养6 h，用PBS冲洗两次后，加入DMSO，振荡混匀后，用酶联免疫测定仪(美国Biolad)测量570 nm处的吸光度值A。
, 百拇医药
1.2.3 统计学处理 所有结果均以(x±s)表示，组间比较采用配对t检验。
2 结果
2.1 翼状胬肉成纤维细胞株的建立
采用组织块培养技术，建立了翼状胬肉成纤维细胞株，传代稳定后行电镜及细胞生物学鉴定，证实为成纤维细胞，实验所用细胞为第3～5代细胞。
2.2 不同浓度的α-IFN和γ-IFN对翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响
α-IFN 102～104μ/ml，γ-IFN 10～104μ/ml均可显著抑制成纤维细胞增殖，且均呈剂量依赖效应。见附表。
附表 干扰素对翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响
, 百拇医药
细胞因子浓度
A值(x±s)
t值
P值
对照组
0.316±0.01
α-IFN(μ/ml)
10
0.318±0.02
2.324
>0.05
102
, 百拇医药
0.282±0.02
2.665
<0.05
103
0.261±0.02
3.177
<0.05
104
0.164±0.01
4.782
<0.01
γ-IFN(μ/ml)
, 百拇医药
10
0.274±0.03
2.801
<0.05
102
0.236±0.02
4.099
<0.01
103
0.185±0.02
4.385
<0.01
, 百拇医药
104
0.127±0.01
5.124
<0.01
3 讨论 翼状胬肉的发病率较高，病因仍不明确，目前治疗仍以手术切除为主，但术后复发率较高，寻找高效低毒的防止翼状胬肉术后复发的药物已是一项重要的研究课题。目前临床上所使用的预防翼状胬肉复发的药物大多是诸如丝裂霉素C，5-Fu等抗代谢药物，由于大多数抗代谢药物无细胞特异性，它们对其他组织的毒副作用限制了其应用。
干扰素是一组免疫应答过程中自然形成的多肽，α-IFN由白细胞尤其是单核细胞、巨噬细胞和B淋巴细胞分泌，γ-IFN则由T淋巴细胞和自然杀伤细胞产生。有研究表明，干扰素能抑制纤维细胞的分化、增殖及胶原产生[3]。α-IFN可抑制成纤维细胞产生葡萄糖胺聚糖而增加胶原酶的产生。在小鼠腹腔内植入异物，在有γ-IFN存在的情况下包膜形成减少。在眼科学方面，Latina等[4]研究γ-对外体培养人的Tenon囊纤维细胞生长，胶原合成及创口愈合的作用，发现其抑制创口愈合的作用与γ-IFN浓度成正比，在103Iu/ml时可抑制57%的胶原合成。在本研究中，α-IFN和γ-IFN均能明显抑制翼状胬肉成纤维细胞的体外增殖活性，且均呈剂量依赖效应，γ-IFN对翼状胬肉成纤维细胞的生长抑制优于α-IFN。
, 百拇医药
干扰素抑制细胞增殖的原理尚未完全明了，一般认为它是通过延缓细胞DNA合成和有丝分裂而实现的，而非细胞毒性作用。其作用主要发生在Go期，但细胞周期的其他阶段亦受干扰素的影响。由于干扰素不像5-Fu等抗代谢类药物一样有较大的毒副作用，因此，具有极好的临床应用前景。
作者单位：张俊华(福建省人民医院眼科 福州 350004)
金威尔(福建省人民医院眼科 福州 350004)
林颖(福建省人民医院眼科 福州 350004)
张国安(解放军第476医院临床免疫研究室 福州 350002)
参考文献：
[1]Hill JC,Maske R.Pathogenesis of pterygium.Eye,1989;3:218～226
, 百拇医药
[2]鄂 征.组织培养技术.第2版.北京：北京人民出版社，1993：125～130
[3]Euncan MR,Berman B.Gamma interferon in the lymphokine and beta interferon the monokine responsible for inhibition of fibroblast collagen production and late but not early fibroblast proliferation.J Exp Med,1985;162:516～527
[4]Latina MA,Belmonte SJ,Park C,et al.Gamma-interferon effects on human fibroblasts from Tenon's capsule.Invest Ophthalmol Vis Sci,1991;32:2806～2815, http://www.100md.com
目的：研究α-干扰素(α-IFN)和γ-干扰素(γ-IFN)对翼状胬肉成纤维细胞体外增殖的影响。方法：采用组织培养技术建立翼状胬肉成纤维细胞系，用MTT比色法测定α-IFN和γ-IFN对翼状胬肉成纤维细胞的增殖的影响。结果：α-IFN和γ-IFN可明显抑制翼状胬肉成纤维细胞的增殖，并呈剂量依赖效应，γ-IFN的抑制作用略强于α-IFN。结论：IFN是一组翼状胬肉成纤维细胞增殖的负性调节因子，有望在翼状胬肉的防治中发挥重要作用。
关键词：α-干扰素 γ-干扰素 翼状胬肉
翼状胬肉是眼科的常见多发病，但其病变本质及发病机理仍有争议，临床至今也缺少根治的理想疗法。故研究其病变本质及寻找有效的防治措施，是目前急需解决的课题之一。病理学研究表明，翼状胬肉的主要成份是大量增生的成纤维细胞，并由其导致相应的病变[1]。我们对α-干扰素(α-IFN)和γ-干扰素(γ-IFN)对翼状胬肉成纤维细胞体外增殖的影响进行了研究，希望能为临床治疗翼状胬肉成提供一些新的有效的方法。
, http://www.100md.com
1 材料与方法
1.1 材料
RPMI 1640培养基，美国Gibco公司产品；胎牛血清，北京邦定公司产品；α-IFN，深圳科兴公司产品；γ-IFN，第二军医大学产品；MTT，Fluka公司产品；DMSO和胰蛋白酶均为Sigma公司产品。
1.2 方法
1.2.1 翼状胬肉成纤维细胞的培养 培养组织取自本院眼科手术切除的原发性翼状胬肉标本，采用组织块培养技术[2]，建立翼状胬肉成纤维细胞株，实验所用细胞为第3～5代细胞。
1.2.2 测定不同浓度的α-IFN和γ-IFN对翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响 将贴壁培养的翼状胬肉成纤维细胞用0.25%胰蛋白酶消化后，接种于96孔培养板中，贴壁后加入含有不同浓度的α-IFN和γ-IFN的无血清RPMI 1640培养液，对照只加培养液，每组设3复孔，培养48 h后，吸出培养液，加入终浓度为0.05%的MTT，继续培养6 h，用PBS冲洗两次后，加入DMSO，振荡混匀后，用酶联免疫测定仪(美国Biolad)测量570 nm处的吸光度值A。
, 百拇医药
1.2.3 统计学处理 所有结果均以(x±s)表示，组间比较采用配对t检验。
2 结果
2.1 翼状胬肉成纤维细胞株的建立
采用组织块培养技术，建立了翼状胬肉成纤维细胞株，传代稳定后行电镜及细胞生物学鉴定，证实为成纤维细胞，实验所用细胞为第3～5代细胞。
2.2 不同浓度的α-IFN和γ-IFN对翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响
α-IFN 102～104μ/ml，γ-IFN 10～104μ/ml均可显著抑制成纤维细胞增殖，且均呈剂量依赖效应。见附表。
附表 干扰素对翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响
, 百拇医药
细胞因子浓度
A值(x±s)
t值
P值
对照组
0.316±0.01
α-IFN(μ/ml)
10
0.318±0.02
2.324
>0.05
102
, 百拇医药
0.282±0.02
2.665
<0.05
103
0.261±0.02
3.177
<0.05
104
0.164±0.01
4.782
<0.01
γ-IFN(μ/ml)
, 百拇医药
10
0.274±0.03
2.801
<0.05
102
0.236±0.02
4.099
<0.01
103
0.185±0.02
4.385
<0.01
, 百拇医药
104
0.127±0.01
5.124
<0.01
3 讨论 翼状胬肉的发病率较高，病因仍不明确，目前治疗仍以手术切除为主，但术后复发率较高，寻找高效低毒的防止翼状胬肉术后复发的药物已是一项重要的研究课题。目前临床上所使用的预防翼状胬肉复发的药物大多是诸如丝裂霉素C，5-Fu等抗代谢药物，由于大多数抗代谢药物无细胞特异性，它们对其他组织的毒副作用限制了其应用。
干扰素是一组免疫应答过程中自然形成的多肽，α-IFN由白细胞尤其是单核细胞、巨噬细胞和B淋巴细胞分泌，γ-IFN则由T淋巴细胞和自然杀伤细胞产生。有研究表明，干扰素能抑制纤维细胞的分化、增殖及胶原产生[3]。α-IFN可抑制成纤维细胞产生葡萄糖胺聚糖而增加胶原酶的产生。在小鼠腹腔内植入异物，在有γ-IFN存在的情况下包膜形成减少。在眼科学方面，Latina等[4]研究γ-对外体培养人的Tenon囊纤维细胞生长，胶原合成及创口愈合的作用，发现其抑制创口愈合的作用与γ-IFN浓度成正比，在103Iu/ml时可抑制57%的胶原合成。在本研究中，α-IFN和γ-IFN均能明显抑制翼状胬肉成纤维细胞的体外增殖活性，且均呈剂量依赖效应，γ-IFN对翼状胬肉成纤维细胞的生长抑制优于α-IFN。
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干扰素抑制细胞增殖的原理尚未完全明了，一般认为它是通过延缓细胞DNA合成和有丝分裂而实现的，而非细胞毒性作用。其作用主要发生在Go期，但细胞周期的其他阶段亦受干扰素的影响。由于干扰素不像5-Fu等抗代谢类药物一样有较大的毒副作用，因此，具有极好的临床应用前景。
作者单位：张俊华(福建省人民医院眼科 福州 350004)
金威尔(福建省人民医院眼科 福州 350004)
林颖(福建省人民医院眼科 福州 350004)
张国安(解放军第476医院临床免疫研究室 福州 350002)
参考文献：
[1]Hill JC,Maske R.Pathogenesis of pterygium.Eye,1989;3:218～226
, 百拇医药
[2]鄂 征.组织培养技术.第2版.北京：北京人民出版社，1993：125～130
[3]Euncan MR,Berman B.Gamma interferon in the lymphokine and beta interferon the monokine responsible for inhibition of fibroblast collagen production and late but not early fibroblast proliferation.J Exp Med,1985;162:516～527
[4]Latina MA,Belmonte SJ,Park C,et al.Gamma-interferon effects on human fibroblasts from Tenon's capsule.Invest Ophthalmol Vis Sci,1991;32:2806～2815, http://www.100md.com