原发性肝癌血管起源的研究
作者：程天明 潘石蕾 刘晓霞 袁爱力 李朝龙
单位：程天明(第一军医大学 南方医院全军消化病研究所，广东 广州 510515)；潘石蕾(第一军医大学南方医院 肝胆外科，广东 广州 510515)；刘晓霞(第一军医大学 南方医院全军消化病研究所，广东 广州 510515)；袁爱力(第一军医大学 南方医院全军消化病研究所，广东 广州 510515)；李朝龙(珠江医院妇产科，广东 广州 510282)
关键词：肝癌；CD34；荆豆凝聚素；血管形成
第一军医大学学报000425 摘要：目的 研究原发性肝癌的血管起源。方法 用病理及CD34、荆豆凝聚素(UEA-1)免疫组化的方法对21例肝癌及癌旁组织中血管形成进行检测和观察。结果 癌旁组织血窦内皮细胞CD34及UEA-1染色阴性, 炎症组织内的血管染色阳性。肿瘤血管与癌旁组织血管相连或不相连。结论 部分原发性肝癌血管可能起源于毛细血管化的癌旁肝血窦。
, 百拇医药
中图分类号：R735.705 文献标识码：A
文章编号：1000-2588(2000)04-0342-02
Initial study on angiogenesis of primary hepatocellular carcinoma
CHENG Tian-ming,LIU Xiao-xia, YUAN Ai-li
(Institute of Digestive Diseases Nanfang Hospital, First Military Medical University, Guangzhou 510515, China)
LI Chao-long
, 百拇医药
(Institute of Department of Hepatobiliary Surgery, Nanfang Hospital, First Military Medical University, Guangzhou 510515, China)
PAN Shi-lei
(Department of Obstetrics and Gynecology, Zhujiang Hospital, First Military Medical University, Guangzhou 510282, China)Abstract：Objective To study the angiogenesis of primary hepatocellular carcinoma (PHC). Methods The blood vessel formation in the cancerous and adjacent normal liver tissues in 21 patients with PHC were studied by pathological and immunohistochemical examinations (CD34 and Ulex europaeus agglutinin 1,UEA-1). Results The positive staining of CD34 and UEA-1 could not be seen in liver sinusoidal endothelial cells of patients with liver cirrhosis chronic hepatitis, but could be seen in the vessels in inflammatory tissues. The endothelial cells showed marked staining for CD34 and UEA-1 PHC. The tumor vessels had continuity with the vessels in tissues adjacent to PHC in some regions. Conclusion The PHC vessels might be derived from the capillarized liver in the parineoplastic liver tissues sinusoid.
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Key words: primary hepatocellular carcinoma; CD34; UEA-1; angiogenesis
血管形成与肿瘤的发展和转移密切相关。有研究表明，肝内转移瘤的血管生成部分来源于邻近的肝血窦内皮细胞[1]。我们用相似的研究方法了解原发性肝癌(PHC)的血管起源。
1 材料与方法
1.1 材料
手术标本取自我院1996～1998年间肝胆外科手术切除的原发性肝癌21例，男20例，女1例，年龄31～70岁，平均(46.7±12.4)岁。每例标本均取癌及癌旁组织，部分-70 ℃保存，其余当即用4%的多聚甲醛固定，石蜡包埋，5 μm厚连续切片，常规HE染色以确定诊断和病理分级。
1.2 免疫组化染色
, 百拇医药
5 μm石蜡切片，脱蜡，水浴法抗原修复。一抗[鼠抗人CD34、荆豆凝聚素(UEA-1)(购自Santa Cruze公司)]1:50稀释，37 ℃ 1 h，二抗及三抗(北京中山公司SP9000通用型试剂盒)于室温下分别作用30 min，DAB显色，苏木素复染、脱水、透明、中性树胶封片。UEA-1无需二抗，直接加三抗，后续步骤同上。阴性对照以PBS代替一抗。
1.3 病理组织学诊断及分级
21例均经病理组织学诊断确定，高、中、低分化各为4、12、5例。
2 结果
CD34 和UEA-1都是血管内皮细胞的标记物，阳性反应可见血管内皮呈棕色或棕黄色条带。21例肝癌组织中CD34 和UEA-1均呈阳性，但部分血管UEA-1表达弱于CD34。癌旁组织中血窦内皮细胞CD34及UEA-1均未见表达。但在癌旁炎症组织内的血管，CD34及UEA-1染色均呈阳性(图1)。部分肿瘤组织有较完整的纤维包膜或炎症反应隔离带，肿瘤血管与癌旁肝炎肝硬化组织中血窦内皮细胞不连续(图2)。部分肿瘤组织包膜不完整或无包膜，肿瘤血管与癌旁肝炎肝硬化组织中血窦内皮细胞相连续。
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图1炎症区内血管CD34染色阳性(10×20)
Fig.1 The positive staining of CD34 in the vessels
in inflammatory liver tissues (10×20)
图2肝肿瘤血管与癌旁组织中血窦内皮细胞不连续(CD34，10×20)
Fig.2 There is no continuity between the tumor vessels and
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the sinusoid adjacent to the tumor in the liver(CD34，10×20)
3 讨论
血管形成是一种与炎症、损伤以及肿瘤形成等有关的过程。其形成机制至少有两种：(1)基质中的成血管细胞分化形成内皮细胞，进而形成血管，这种形式的血管形成不依赖于组织的生理需要，而可能是由遗传因子编码的细胞自发过程，称之为血管发生；(2)在原有血管存在的条件下，血管的内皮细胞由于环境或旁分泌的刺激，表面受体被激活，内皮细胞开始分化、增殖、移行、成熟或死亡，从原有血管经芽生形成[2], 称之为血管生成。
凝集素是一种植物或动物蛋白，它可以与糖蛋白或糖脂的糖部分特异地结合。UEA-1是一种来源于荆豆种子的凝集素，它可以与红细胞上的H抗原相结合，血管内皮细胞也表达相似的抗原，故UEA-1也可以与之结合。 UEA-1通常被认为是肝血窦毛细血管化的标志，而不是反映肿瘤血管形成的抗原[3、4]。
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CD34是一种相对分子质量接近15 000的细胞膜表面蛋白，是标记内皮细胞的敏感物质。在肿瘤组织的血管内皮细胞上特异地表达，其表达与内皮细胞的增殖和移行有关。CD34在肿瘤内皮细胞上的标记强于相邻的良性毛细血管内皮细胞，提示CD34蛋白在肿瘤组织中表达水平高，与内皮细胞的增殖有关[5～7]。CD34除了在肿瘤组织中表达外，还可在门脉区纤维分隔中的动脉、静脉及毛细血管中表达，尤其在炎症的门脉区。CD34的表达提示这些部位的血管发生内皮细胞增殖。有学者[4、7]研究发现所有的肝癌组织中血管CD34、UEA-I均呈阳性。Terayama[2]从肝转移癌的研究中得出UEA-1对肿瘤血管的标记率是82%。
本研究表明，肝癌组织血管CD34、UEA-1染色均呈阳性。癌旁组织中血窦内皮细胞CD34及UEA-1均未见表达。但在门脉区炎症组织内的血管，CD34及UEA-1染色均可见阳性，未见UEA-1染色阳性而CD34染色阴性区。肿瘤血管与癌旁组织血管相连或不相连，这提示肝血窦的毛细血管化是肝癌发生的前奏，并且说明了肝癌血管起源于毛细血管化的癌旁肝血窦，与Terayama等人[1]研究的结果有相似之处。
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作者简介：程天明(1964-)，男，福建莆田人，1999年毕业于第一军医大学，博士，主治医师，讲师，电话：85141535
参考文献：
[1] Terayama N, Terada T, Nakanuma Y. A morphometric and immunohistochemical study on angiogenesis of human metastatic carcinomas of the liver[J]. Hepatology, 1996, 24(4):816-9.
[2] Risau W. What, if anything, is an angiogenic factor[J]? Cancer Metastasis Rev, 1996,15(2):149-51.
[3] Ordonez NG, Batsakis JG. Comparison of ulex europaeus lectin and factor -related antigen invascular lesions[J]. Arch Pathol Lab Med, 1984, 108:129-32.
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[4] Terada T, Nakanuma Y. Expression of ABH blood group antigens, Ulex europaeus agglutinin , and type collagen in the sinusoids of hepatocellular carcinoma[J]. Arch Pathol Lab Med, 1991, 115(1):50-5.
[5] Kimura H, Nakajima T, Kagawa K, et al. Angiogeneesis in hepatocellular carcinoma as evaluated by CD34 immunohistochemistry[J]. Liver, 1998, 18(1):14-9.
[6] Traweek ST, Kandalaft PL, Mehta P, et al. The human hematopoietic progenitor cell antigen (CD34) in vascular neoplasia[J]. Am J Clin Pathol, 1991, 96(1):25-31.
[7] Ruck P, Xiao JC, Kaiserling E. Immunoreactivity of sinusoids in hepatocellular carcinoma[J]. Arch Pathol Lab Med, 1995, 119(2): 173-78.
收稿日期：1999-10-23, 百拇医药
单位：程天明(第一军医大学 南方医院全军消化病研究所，广东 广州 510515)；潘石蕾(第一军医大学南方医院 肝胆外科，广东 广州 510515)；刘晓霞(第一军医大学 南方医院全军消化病研究所，广东 广州 510515)；袁爱力(第一军医大学 南方医院全军消化病研究所，广东 广州 510515)；李朝龙(珠江医院妇产科，广东 广州 510282)
关键词：肝癌；CD34；荆豆凝聚素；血管形成
第一军医大学学报000425 摘要：目的 研究原发性肝癌的血管起源。方法 用病理及CD34、荆豆凝聚素(UEA-1)免疫组化的方法对21例肝癌及癌旁组织中血管形成进行检测和观察。结果 癌旁组织血窦内皮细胞CD34及UEA-1染色阴性, 炎症组织内的血管染色阳性。肿瘤血管与癌旁组织血管相连或不相连。结论 部分原发性肝癌血管可能起源于毛细血管化的癌旁肝血窦。
, 百拇医药
中图分类号：R735.705 文献标识码：A
文章编号：1000-2588(2000)04-0342-02
Initial study on angiogenesis of primary hepatocellular carcinoma
CHENG Tian-ming,LIU Xiao-xia, YUAN Ai-li
(Institute of Digestive Diseases Nanfang Hospital, First Military Medical University, Guangzhou 510515, China)
LI Chao-long
, 百拇医药
(Institute of Department of Hepatobiliary Surgery, Nanfang Hospital, First Military Medical University, Guangzhou 510515, China)
PAN Shi-lei
(Department of Obstetrics and Gynecology, Zhujiang Hospital, First Military Medical University, Guangzhou 510282, China)Abstract：Objective To study the angiogenesis of primary hepatocellular carcinoma (PHC). Methods The blood vessel formation in the cancerous and adjacent normal liver tissues in 21 patients with PHC were studied by pathological and immunohistochemical examinations (CD34 and Ulex europaeus agglutinin 1,UEA-1). Results The positive staining of CD34 and UEA-1 could not be seen in liver sinusoidal endothelial cells of patients with liver cirrhosis chronic hepatitis, but could be seen in the vessels in inflammatory tissues. The endothelial cells showed marked staining for CD34 and UEA-1 PHC. The tumor vessels had continuity with the vessels in tissues adjacent to PHC in some regions. Conclusion The PHC vessels might be derived from the capillarized liver in the parineoplastic liver tissues sinusoid.
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Key words: primary hepatocellular carcinoma; CD34; UEA-1; angiogenesis
血管形成与肿瘤的发展和转移密切相关。有研究表明，肝内转移瘤的血管生成部分来源于邻近的肝血窦内皮细胞[1]。我们用相似的研究方法了解原发性肝癌(PHC)的血管起源。
1 材料与方法
1.1 材料
手术标本取自我院1996～1998年间肝胆外科手术切除的原发性肝癌21例，男20例，女1例，年龄31～70岁，平均(46.7±12.4)岁。每例标本均取癌及癌旁组织，部分-70 ℃保存，其余当即用4%的多聚甲醛固定，石蜡包埋，5 μm厚连续切片，常规HE染色以确定诊断和病理分级。
1.2 免疫组化染色
, 百拇医药
5 μm石蜡切片，脱蜡，水浴法抗原修复。一抗[鼠抗人CD34、荆豆凝聚素(UEA-1)(购自Santa Cruze公司)]1:50稀释，37 ℃ 1 h，二抗及三抗(北京中山公司SP9000通用型试剂盒)于室温下分别作用30 min，DAB显色，苏木素复染、脱水、透明、中性树胶封片。UEA-1无需二抗，直接加三抗，后续步骤同上。阴性对照以PBS代替一抗。
1.3 病理组织学诊断及分级
21例均经病理组织学诊断确定，高、中、低分化各为4、12、5例。
2 结果
CD34 和UEA-1都是血管内皮细胞的标记物，阳性反应可见血管内皮呈棕色或棕黄色条带。21例肝癌组织中CD34 和UEA-1均呈阳性，但部分血管UEA-1表达弱于CD34。癌旁组织中血窦内皮细胞CD34及UEA-1均未见表达。但在癌旁炎症组织内的血管，CD34及UEA-1染色均呈阳性(图1)。部分肿瘤组织有较完整的纤维包膜或炎症反应隔离带，肿瘤血管与癌旁肝炎肝硬化组织中血窦内皮细胞不连续(图2)。部分肿瘤组织包膜不完整或无包膜，肿瘤血管与癌旁肝炎肝硬化组织中血窦内皮细胞相连续。
, 百拇医药
图1炎症区内血管CD34染色阳性(10×20)
Fig.1 The positive staining of CD34 in the vessels
in inflammatory liver tissues (10×20)
图2肝肿瘤血管与癌旁组织中血窦内皮细胞不连续(CD34，10×20)
Fig.2 There is no continuity between the tumor vessels and
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the sinusoid adjacent to the tumor in the liver(CD34，10×20)
3 讨论
血管形成是一种与炎症、损伤以及肿瘤形成等有关的过程。其形成机制至少有两种：(1)基质中的成血管细胞分化形成内皮细胞，进而形成血管，这种形式的血管形成不依赖于组织的生理需要，而可能是由遗传因子编码的细胞自发过程，称之为血管发生；(2)在原有血管存在的条件下，血管的内皮细胞由于环境或旁分泌的刺激，表面受体被激活，内皮细胞开始分化、增殖、移行、成熟或死亡，从原有血管经芽生形成[2], 称之为血管生成。
凝集素是一种植物或动物蛋白，它可以与糖蛋白或糖脂的糖部分特异地结合。UEA-1是一种来源于荆豆种子的凝集素，它可以与红细胞上的H抗原相结合，血管内皮细胞也表达相似的抗原，故UEA-1也可以与之结合。 UEA-1通常被认为是肝血窦毛细血管化的标志，而不是反映肿瘤血管形成的抗原[3、4]。
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CD34是一种相对分子质量接近15 000的细胞膜表面蛋白，是标记内皮细胞的敏感物质。在肿瘤组织的血管内皮细胞上特异地表达，其表达与内皮细胞的增殖和移行有关。CD34在肿瘤内皮细胞上的标记强于相邻的良性毛细血管内皮细胞，提示CD34蛋白在肿瘤组织中表达水平高，与内皮细胞的增殖有关[5～7]。CD34除了在肿瘤组织中表达外，还可在门脉区纤维分隔中的动脉、静脉及毛细血管中表达，尤其在炎症的门脉区。CD34的表达提示这些部位的血管发生内皮细胞增殖。有学者[4、7]研究发现所有的肝癌组织中血管CD34、UEA-I均呈阳性。Terayama[2]从肝转移癌的研究中得出UEA-1对肿瘤血管的标记率是82%。
本研究表明，肝癌组织血管CD34、UEA-1染色均呈阳性。癌旁组织中血窦内皮细胞CD34及UEA-1均未见表达。但在门脉区炎症组织内的血管，CD34及UEA-1染色均可见阳性，未见UEA-1染色阳性而CD34染色阴性区。肿瘤血管与癌旁组织血管相连或不相连，这提示肝血窦的毛细血管化是肝癌发生的前奏，并且说明了肝癌血管起源于毛细血管化的癌旁肝血窦，与Terayama等人[1]研究的结果有相似之处。
, http://www.100md.com
作者简介：程天明(1964-)，男，福建莆田人，1999年毕业于第一军医大学，博士，主治医师，讲师，电话：85141535
参考文献：
[1] Terayama N, Terada T, Nakanuma Y. A morphometric and immunohistochemical study on angiogenesis of human metastatic carcinomas of the liver[J]. Hepatology, 1996, 24(4):816-9.
[2] Risau W. What, if anything, is an angiogenic factor[J]? Cancer Metastasis Rev, 1996,15(2):149-51.
[3] Ordonez NG, Batsakis JG. Comparison of ulex europaeus lectin and factor -related antigen invascular lesions[J]. Arch Pathol Lab Med, 1984, 108:129-32.
, http://www.100md.com
[4] Terada T, Nakanuma Y. Expression of ABH blood group antigens, Ulex europaeus agglutinin , and type collagen in the sinusoids of hepatocellular carcinoma[J]. Arch Pathol Lab Med, 1991, 115(1):50-5.
[5] Kimura H, Nakajima T, Kagawa K, et al. Angiogeneesis in hepatocellular carcinoma as evaluated by CD34 immunohistochemistry[J]. Liver, 1998, 18(1):14-9.
[6] Traweek ST, Kandalaft PL, Mehta P, et al. The human hematopoietic progenitor cell antigen (CD34) in vascular neoplasia[J]. Am J Clin Pathol, 1991, 96(1):25-31.
[7] Ruck P, Xiao JC, Kaiserling E. Immunoreactivity of sinusoids in hepatocellular carcinoma[J]. Arch Pathol Lab Med, 1995, 119(2): 173-78.
收稿日期：1999-10-23, 百拇医药