幽门螺杆菌患者多株感染的临床研究
作者：周晓晴 陈杰
单位：南充中心医院消化内科，四川南充 637000
关键词：幽门螺杆菌；胃溃疡；十二指肠溃疡；胃炎；胃镜检查
川北医学院学报000426 摘 要：目的：了解临床感染人群中的多株感染状况。方法：取因上腹 不适行内镜检查的24例Hp阳性患 (胃溃疡10例，十二指肠溃疡6例，慢性胃炎8例)的胃窦和 胃体粘膜组织，进行Hp培养。培养后，分别取胃窦和胃体各10个菌落进行传代，提取各菌落 DNA，应用DNA多态指模技术进行菌株鉴定。结果：PCR扩增产物电泳分析显示有21例患者胃 窦和胃体的Hp NDA指模一致，提示这21例患者匀是单株感染；另有3例胃体菌株表现为两种 指模形态，提示为2株Hp感染。结论：临床少数上消化道疾病存在Hp多株感染。
中图分类号：R517.9.3 文献标识 码：A
, 百拇医药
文章编号：1005-3697(2000)04-0034-01
Multiple strains of helicobacter pylori infection in clinical patients with gastropathy
ZHOU Xiao-qing CHEN Jie
(Department of Gastroenterology,Nanchong Center Hospital,Nanchong, Si chuan, 637000, China
Abstract：multiple strains of helicobacter pylori infectio n in clinic patients.METHODS H.pyloriisolated from 24 patients with gastropathy( gastric ulcer,10 patients;duodenal ulcer,6; and chronic agastritis,8)were analyz ed by PCR-based PAPD fingerprinting.Two biopsy samples were taken from the gast ric antrum and body were cultured,and generations of 24 colonies of H.pylori per subject were analyzed.RESULTS in 16 patients.DNA fingerprinting patterns of all colonies were identical,but 3 patients had wtwo patterns in gastric body.CONCLU SION Most H.pylori infection is of single strain,and multiple-strain infection is not popular in clinical.
, 百拇医药
Key words：helicobacter pylori;stomach ulcer;duodenal ulce r;gastritis;gastroscopy
幽门螺杆菌(Hp)是临床一种重要的致病菌，主要可以分为Ⅰ型(CagA +，VacA+)和Ⅱ型(CagA-，VacA-)；而从基因水平来看，各株Hp在基本原则因 组序列上均存在一定差异，在Hp感染人群中存在2株甚至2株以上Hp菌株的多株感染[1 ，2]。有关临床Hp多株感染的流行病学研究甚少，多株感染资料不仅对流行病学而且对 于了解我国与致病有关的特异基因型菌株都有重要意义。为此，我们应用DNA多态指模技术( PAPD-PCR)进行菌株鉴定，研究临床Hp感染人群中的多株感染发生率。
1 材料与方法
1.1材料：因上腹不适行内镜检查病例24例，胃溃疡10例，十二指肠溃疡6例， 慢性胃炎8例，其中男14例，女10例，取胃窦和胃体粘膜组织各一块进行Hp培养，所有病例 胃粘膜尿素酶试验均阳性。
, 百拇医药
1.2 方法：①Hp培养：采用改良Skirrow培养基(含50g/L的脱纤维羊血及万古霉素、二性 霉素、多粘菌素等抗生素)。Hp的鉴定包括菌落形态、尿素酶、涂片观察形态等。初代培养 后，各取10个边界清楚的菌落再行传代至有足够的细胞供以下的研究。②DNA抽提：将培养 菌放于10μL TE中混匀，经溶菌酶、SDS、蛋白酶K及氯仿-酚等处理，最后抽提的DNA溶于T E中，放于-20℃保存待用。③RAPD-PCR反应条件：引物序列为5′-GTGGATGCGA-3′，总 反应体积25μL，含MgCl2 3mmol/L，引物20pmol,dNTPs浓度为250μmol/L、模板20ng等 。PCR产物的分析：取产物10μL电泳，20g/L琼脂糖凝胶，EB染色。
2 结 果
所有病例的胃窦、胃体粘膜Hp培养均匀阳性，各取10个单个菌落进行传代，经1 ～2次传代后Hp菌落明显增加，除收集部分细菌保存外余供DNA抽提。按上述条件进行扩增和 分析，结果显示20例患者的Hp菌株DNA指模完全不同，呈明显多态性，说明他们的感染是由 不同Hp菌株引起。在24例患者中，有21例各自胃窦、胃体的16株Hp DNA指模安全一致，说明 这21例患者均匀为单侏感染；另有3例患者胃体分离菌表现为两种不同的DNA指模形态，同胃 窦一致，提示该患者胃体感染2株不同菌株。
, http://www.100md.com
3 讨 论
目前用于Hp菌株鉴定的方法有PCR-限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP)、P CR-单链构像多态性技术(PCR-SSCP)和PCR-随机引物扩增的DNA多态指模技术(PAPD-PCR) 等技术。曾有作者采用PAPD-PCR技术研究了40株由不同患者分离而得的Hp菌株，结果表明 不同的Hp菌株有不同的指模；我们比较了5株传代6次以上Hp菌株的DNA指模，发现各株Hp传 代前后的DNA指模相同，说明RAPD-PCR技术是稳定可靠的[3]。近年研究表明，Hp 在基因型上Hp菌株呈明显多样性。本组24例患者的DNA指模各不相同也说明这一点。由于人 群的Hp高感染和交往的频繁，这就提出Hp的感染是否为混合感染，Beji等[1]发现 在Hp感染人群中，从胃粘膜不同部位分离而得的菌株具有明显的异质性，认为Hp的感染均为 混合感染，类似的结果也有相关的报道。Hirschl等研究发现在15例患者中仅有1例患者同时 伴2株感染，余14例患者匀为单株感染。我们应用RPAD-PCR技术分析了24例患者的胃窦、胃 体各10株分离菌的DNA指模形态，表明在临床Hp多株感染并不多见，而以单株感染为主，尽 管我们的结果表明多株感染发生率仅为8%，但我们的病例均为胃癌低发区的川北，对于我国 胃癌高发区的Hp感染人群和家庭内的多株感染发生情况尚不明确，尚待进一步研究。
, 百拇医药
作者简介：周晓晴(1964-)，女，南充市人，主治医师，主要从事临床消化疾病研究。
[1] Beji A,Vincent P.Dachis L,Husson MO,Cortol A,Leelere H.Ev idence of gastritis with several Helicobacter pylori stains.Lncet,1989;2:1402-1 403.
[2] Hirschl AM,Richter M,Makristathis A,Pruckl PM,Willinger B,Schutze K.Single and multiple strain colonization in patients with Helicobacter pylori a ssociated gastritis:detection by macrorestriction DNA analysis.J Infect Dis,1994 ;170:473-475.
[3] Owen RJ,Desai M,Figura N,Bayeli PF,Di Gregorio L,Russi M.Compariso n between degree of histological gastritis and DNA fingerprint,cytotoxicity and adhesivity of Helicobacter pylori from different gastric sites.Eur J Epidemiol,1 993;9:315-321.
(收稿日期：2000-09-10), 百拇医药
单位：南充中心医院消化内科，四川南充 637000
关键词：幽门螺杆菌；胃溃疡；十二指肠溃疡；胃炎；胃镜检查
川北医学院学报000426 摘 要：目的：了解临床感染人群中的多株感染状况。方法：取因上腹 不适行内镜检查的24例Hp阳性患 (胃溃疡10例，十二指肠溃疡6例，慢性胃炎8例)的胃窦和 胃体粘膜组织，进行Hp培养。培养后，分别取胃窦和胃体各10个菌落进行传代，提取各菌落 DNA，应用DNA多态指模技术进行菌株鉴定。结果：PCR扩增产物电泳分析显示有21例患者胃 窦和胃体的Hp NDA指模一致，提示这21例患者匀是单株感染；另有3例胃体菌株表现为两种 指模形态，提示为2株Hp感染。结论：临床少数上消化道疾病存在Hp多株感染。
中图分类号：R517.9.3 文献标识 码：A
, 百拇医药
文章编号：1005-3697(2000)04-0034-01
Multiple strains of helicobacter pylori infection in clinical patients with gastropathy
ZHOU Xiao-qing CHEN Jie
(Department of Gastroenterology,Nanchong Center Hospital,Nanchong, Si chuan, 637000, China
Abstract：multiple strains of helicobacter pylori infectio n in clinic patients.METHODS H.pyloriisolated from 24 patients with gastropathy( gastric ulcer,10 patients;duodenal ulcer,6; and chronic agastritis,8)were analyz ed by PCR-based PAPD fingerprinting.Two biopsy samples were taken from the gast ric antrum and body were cultured,and generations of 24 colonies of H.pylori per subject were analyzed.RESULTS in 16 patients.DNA fingerprinting patterns of all colonies were identical,but 3 patients had wtwo patterns in gastric body.CONCLU SION Most H.pylori infection is of single strain,and multiple-strain infection is not popular in clinical.
, 百拇医药
Key words：helicobacter pylori;stomach ulcer;duodenal ulce r;gastritis;gastroscopy
幽门螺杆菌(Hp)是临床一种重要的致病菌，主要可以分为Ⅰ型(CagA +，VacA+)和Ⅱ型(CagA-，VacA-)；而从基因水平来看，各株Hp在基本原则因 组序列上均存在一定差异，在Hp感染人群中存在2株甚至2株以上Hp菌株的多株感染[1 ，2]。有关临床Hp多株感染的流行病学研究甚少，多株感染资料不仅对流行病学而且对 于了解我国与致病有关的特异基因型菌株都有重要意义。为此，我们应用DNA多态指模技术( PAPD-PCR)进行菌株鉴定，研究临床Hp感染人群中的多株感染发生率。
1 材料与方法
1.1材料：因上腹不适行内镜检查病例24例，胃溃疡10例，十二指肠溃疡6例， 慢性胃炎8例，其中男14例，女10例，取胃窦和胃体粘膜组织各一块进行Hp培养，所有病例 胃粘膜尿素酶试验均阳性。
, 百拇医药
1.2 方法：①Hp培养：采用改良Skirrow培养基(含50g/L的脱纤维羊血及万古霉素、二性 霉素、多粘菌素等抗生素)。Hp的鉴定包括菌落形态、尿素酶、涂片观察形态等。初代培养 后，各取10个边界清楚的菌落再行传代至有足够的细胞供以下的研究。②DNA抽提：将培养 菌放于10μL TE中混匀，经溶菌酶、SDS、蛋白酶K及氯仿-酚等处理，最后抽提的DNA溶于T E中，放于-20℃保存待用。③RAPD-PCR反应条件：引物序列为5′-GTGGATGCGA-3′，总 反应体积25μL，含MgCl2 3mmol/L，引物20pmol,dNTPs浓度为250μmol/L、模板20ng等 。PCR产物的分析：取产物10μL电泳，20g/L琼脂糖凝胶，EB染色。
2 结 果
所有病例的胃窦、胃体粘膜Hp培养均匀阳性，各取10个单个菌落进行传代，经1 ～2次传代后Hp菌落明显增加，除收集部分细菌保存外余供DNA抽提。按上述条件进行扩增和 分析，结果显示20例患者的Hp菌株DNA指模完全不同，呈明显多态性，说明他们的感染是由 不同Hp菌株引起。在24例患者中，有21例各自胃窦、胃体的16株Hp DNA指模安全一致，说明 这21例患者均匀为单侏感染；另有3例患者胃体分离菌表现为两种不同的DNA指模形态，同胃 窦一致，提示该患者胃体感染2株不同菌株。
, http://www.100md.com
3 讨 论
目前用于Hp菌株鉴定的方法有PCR-限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP)、P CR-单链构像多态性技术(PCR-SSCP)和PCR-随机引物扩增的DNA多态指模技术(PAPD-PCR) 等技术。曾有作者采用PAPD-PCR技术研究了40株由不同患者分离而得的Hp菌株，结果表明 不同的Hp菌株有不同的指模；我们比较了5株传代6次以上Hp菌株的DNA指模，发现各株Hp传 代前后的DNA指模相同，说明RAPD-PCR技术是稳定可靠的[3]。近年研究表明，Hp 在基因型上Hp菌株呈明显多样性。本组24例患者的DNA指模各不相同也说明这一点。由于人 群的Hp高感染和交往的频繁，这就提出Hp的感染是否为混合感染，Beji等[1]发现 在Hp感染人群中，从胃粘膜不同部位分离而得的菌株具有明显的异质性，认为Hp的感染均为 混合感染，类似的结果也有相关的报道。Hirschl等研究发现在15例患者中仅有1例患者同时 伴2株感染，余14例患者匀为单株感染。我们应用RPAD-PCR技术分析了24例患者的胃窦、胃 体各10株分离菌的DNA指模形态，表明在临床Hp多株感染并不多见，而以单株感染为主，尽 管我们的结果表明多株感染发生率仅为8%，但我们的病例均为胃癌低发区的川北，对于我国 胃癌高发区的Hp感染人群和家庭内的多株感染发生情况尚不明确，尚待进一步研究。
, 百拇医药
作者简介：周晓晴(1964-)，女，南充市人，主治医师，主要从事临床消化疾病研究。
[1] Beji A,Vincent P.Dachis L,Husson MO,Cortol A,Leelere H.Ev idence of gastritis with several Helicobacter pylori stains.Lncet,1989;2:1402-1 403.
[2] Hirschl AM,Richter M,Makristathis A,Pruckl PM,Willinger B,Schutze K.Single and multiple strain colonization in patients with Helicobacter pylori a ssociated gastritis:detection by macrorestriction DNA analysis.J Infect Dis,1994 ;170:473-475.
[3] Owen RJ,Desai M,Figura N,Bayeli PF,Di Gregorio L,Russi M.Compariso n between degree of histological gastritis and DNA fingerprint,cytotoxicity and adhesivity of Helicobacter pylori from different gastric sites.Eur J Epidemiol,1 993;9:315-321.
(收稿日期：2000-09-10), 百拇医药