血清糖基化终产物水平与小鼠糖尿病肾病的关系
作者：孙子林 刘必成 刘乃丰 孙桂菊 王基平 翟卫中
单位：210009 南京铁道医学院附属医院内科
关键词：
中华肾病杂志000417我们分别采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和流动注射分析法测定了糖尿病小鼠血清总糖基化终产物(AGEs)和AGE-肽(AGE-peptide，AGE-P)水平，并分析了其与肾功能、尿蛋白及尿微白蛋白排泄之间的关系。
一、材料与方法
1.试剂：牛血清白蛋白(BSA，BM产品)，人血清白蛋白(HAS)、四氧嘧啶为Sigma产品，生物素化羊抗兔IgG、链霉亲和素-HRP系Vector产品。
2.仪器及器材：Model550酶标仪
表1糖尿病小鼠与对照组血清AGEs、AGE-P、血糖、肾功能及尿蛋白等比较与对照组比较，aP<0.05，bP<0.0l，cP<0.001，dP<0.0001；与30d糖尿病小鼠比较，aP<0.05，Βp<0.01(美国Bio-Rad公司)，带荧光检测器的高效液相色谱仪(HPLC，日本岛津公司)，650-60荧光检测器(日本日立公司)。
3.动物：雌性新西兰白兔2只，兔龄4～5月，体重2～2.5kg(江苏省农科院种殖场)；雄性昆明种小鼠，18～22g(南京铁道医学院动物实验中心)。
4.糖尿病动物模型的制备：小白鼠40只随机分为两组，实验组按400mg/kg腹腔一次性注入四氧嘧啶。分别于30d、60d各处死—半,处死前24h收集尿液计算尿量(UV)并测定24h尿蛋白定量(24h、Upro)、尿白蛋白排泄量(UAE)，收集血清测血糖(Glu)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、AGEs、AGE-P等。
5.AGEs的制备：50g/LHAS、BSA分别与0.5mol/L葡萄糖共溶于Ph7.4、0.2mol/L磷酸盐缓冲液(PBS)中，过滤灭菌后置37℃避光孵育90d，用PBS充分透析。不加葡萄糖的HAS、BSA同上操作用做对照。样品调定至1mg/ml按常规方法测定AGE荧光值及荧光光谱扫描。Sephadex-G200纯化AGE-BSA。
基金项目：国家自然科学基金资助项目(39470314)
参考文献：
[1]Horiuchi S，Araki N，Morino Y.Immunochemical apprnach to characterize advanced glycation end prnducts of the Maillard reaction.J Biol Chem.1991.266：7329-7322.
[2]孙子林，刘乃仁，刘必成，等.糖基化终产物抗血清的制备及应用.中华医学检验杂志，1999，22：293-295.
[3]侯凡凡，张训，王斌会，等.Nε-羧甲基赖氨酸是慢性血液透析病人晚期糖基化终产物的天然结构，中华内科杂志，1998，37：663-666., http://www.100md.com
单位：210009 南京铁道医学院附属医院内科
关键词：
中华肾病杂志000417我们分别采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和流动注射分析法测定了糖尿病小鼠血清总糖基化终产物(AGEs)和AGE-肽(AGE-peptide，AGE-P)水平，并分析了其与肾功能、尿蛋白及尿微白蛋白排泄之间的关系。
一、材料与方法
1.试剂：牛血清白蛋白(BSA，BM产品)，人血清白蛋白(HAS)、四氧嘧啶为Sigma产品，生物素化羊抗兔IgG、链霉亲和素-HRP系Vector产品。
2.仪器及器材：Model550酶标仪
表1糖尿病小鼠与对照组血清AGEs、AGE-P、血糖、肾功能及尿蛋白等比较与对照组比较，aP<0.05，bP<0.0l，cP<0.001，dP<0.0001；与30d糖尿病小鼠比较，aP<0.05，Βp<0.01(美国Bio-Rad公司)，带荧光检测器的高效液相色谱仪(HPLC，日本岛津公司)，650-60荧光检测器(日本日立公司)。
3.动物：雌性新西兰白兔2只，兔龄4～5月，体重2～2.5kg(江苏省农科院种殖场)；雄性昆明种小鼠，18～22g(南京铁道医学院动物实验中心)。
4.糖尿病动物模型的制备：小白鼠40只随机分为两组，实验组按400mg/kg腹腔一次性注入四氧嘧啶。分别于30d、60d各处死—半,处死前24h收集尿液计算尿量(UV)并测定24h尿蛋白定量(24h、Upro)、尿白蛋白排泄量(UAE)，收集血清测血糖(Glu)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、AGEs、AGE-P等。
5.AGEs的制备：50g/LHAS、BSA分别与0.5mol/L葡萄糖共溶于Ph7.4、0.2mol/L磷酸盐缓冲液(PBS)中，过滤灭菌后置37℃避光孵育90d，用PBS充分透析。不加葡萄糖的HAS、BSA同上操作用做对照。样品调定至1mg/ml按常规方法测定AGE荧光值及荧光光谱扫描。Sephadex-G200纯化AGE-BSA。
基金项目：国家自然科学基金资助项目(39470314)
参考文献：
[1]Horiuchi S，Araki N，Morino Y.Immunochemical apprnach to characterize advanced glycation end prnducts of the Maillard reaction.J Biol Chem.1991.266：7329-7322.
[2]孙子林，刘乃仁，刘必成，等.糖基化终产物抗血清的制备及应用.中华医学检验杂志，1999，22：293-295.
[3]侯凡凡，张训，王斌会，等.Nε-羧甲基赖氨酸是慢性血液透析病人晚期糖基化终产物的天然结构，中华内科杂志，1998，37：663-666., http://www.100md.com