P53蛋白在胃癌组织中的表达
作者：刘春林 杨堂斗 孙国臻
单位：刘春林(胶南市人民医院外科 山东省胶南市 266400)；杨堂斗(胶南市人民医院外科 山东省胶南市 266400)；孙国臻(青岛市商业局医院)
关键词：胃肿瘤；胃溃疡；蛋白质P53
齐鲁医学杂志000411 [摘要] ①目的 探讨P53蛋白在胃癌组织中表达的意义。②方法 应用免疫组织化学技术和原位杂交技术，检测45例胃癌及21例胃溃疡组织中P53蛋白的表达。③结果 P53蛋白在胃溃疡组织中无表达，在胃癌组织中表达阳性率为33.3%，两者比较差异有极显著性(χ2=8.03,P<0.01)。④结论 P53蛋白在胃癌发生中可能起重要作用。
[中图分类号] R735.2 [文献标识码] A [文章编号] 1008-0341(2000)04-0259-02
, http://www.100md.com
EXPRESSION OF P53 PROTEIN IN CARCINOMA OF THE STOMACH
LIU Chunlin, YANG Tangdou, SUN Guozhen
Department of Surgery, Jiaonan People's Hospital, Shandong Jiaonan 266400
[ABSTRACT] Objective To study the significance of the expression of P53 protein in carcinoma of the stomach. Methods Immunohistochemistry and hybridization in-situ were used to detect the expression of P53 protein in carcinoma of the stomach(n=45) and gastric ulcer(n=21). Results The positivity rate of expression of P53 protein in gastric ulcer and carcinoma was 0 and 33.3%, respectively, the difference was significant (χ2=8.03, P<0.01). Conclusion P53 protein plays an important role in histogenesis of carcinoma of the stomach.
, 百拇医药
[KEY WORDS] stomach neoplasms; stomach ulcer; P53 protein
胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，其发病率有逐年增加的趋势。研究表明，胃癌的发生与细胞凋亡和增殖失控有密切关系[1，2]。几乎50%以上的各种不同组织学类型的恶性肿瘤组织中存在P53基因的突变，携带有种系细胞起源的P53基因突变者常常表现出对多种恶性肿瘤的遗传易感性，表明P53基因突变在人类恶性肿瘤的发生或发展过程中起重要作用。为此，我们应用原位杂交及免疫组化方法检测P53蛋白在胃癌组织中的表达，以探讨其与胃癌的关系。现将结果报告如下。
1 资料和方法
1.1 标本及来源
45例胃癌(男23例，女22例；年龄35～67岁，平均53.5岁)组织标本，21例胃溃疡(男11例，女10例；年龄26～59岁，平均41.3岁)组织标本，均为胶南市人民医院1997～1998年手术切除所得，且均经病理证实。所有标本均经40g/L的甲醛固定、脱水，常规石蜡包埋，制备4μm厚连续切片。
, 百拇医药
1.2 实验方法
采用SABC法进行免疫组织化学染色，SABC试剂盒均购自Santa Cruz公司，染色步骤按说明书进行。二甲苯脱蜡10～15min,3次，体积分数1.0，0.9，0.8，0.7乙醇洗涤，各15s，1×PBS洗涤，每次15s，2次，蛋白酶K 1∶10稀释,37℃,15～30min,1×PBS洗涤，每次1min，2次，凉干切片。将TDT Buffer 4μL，3mmol/L Dig dNTP 1μL，三蒸水14.8μL，TDT酶1μL混匀，滴加于切片组织，置于湿盒，37℃，1.5～2.0h.Dig Buffer Ⅰ每次5min，2次，Anti-Dig(Dig Buffer Ⅰ 1∶500稀释)30min，37℃，Dig Buffer Ⅰ每次5min，2次，Dig Buffer Ⅲ每次5min，2次。NBT+BCIP(用Dig Buffer Ⅲ稀释100倍)滴加切片显色，避光，约10～30min，在显微镜下观察。甲基绿或深红复染核(切忌乙醇脱水，因乙醇可将颜色脱掉)，风干。蛋白甘油封固、观察。阳性对照为Bcl-2阳性的滤泡淋巴瘤组织；阴性对照为以磷酸盐缓冲液(PBS)替代一抗的空白对照和以正常兔血清(1∶50)替代一抗的替代对照。
, 百拇医药
1.3 观察指标
光镜下观察P53蛋白染色及TUNEL染色切片的显色反应,数5个以上高倍视野,不少于1 000个细胞,蛋白表达强度依照阳性产物着色深浅及阳性细胞数的多少分为4级。(-)：无阳性反应细胞，阳性细胞<10%或背景同空白对照；(+)：10%～25%的细胞明显阳性，或大多数细胞弱阳性；()：26%～50%的细胞明显阳性；()：>50%的细胞明显阳性。
2 结 果
P53蛋白阳性反应物质呈棕黄色细颗粒状，主要位于癌细胞核中。45例胃癌组织中，P53蛋白(+)6例，()4例，()5例，阳性表达率为33.3%(15/45)；21例胃溃疡组织中未见阳性表达，两组阳性表达率比较差异有显著性(χ2=8.03，P<0.01)。
3 讨 论
, 百拇医药
细胞凋亡是基因调控的细胞主动死亡过程，是程序性细胞死亡的主要形式，此过程的异常与肿瘤的发生发展有密切关系[1,2]。细胞凋亡与细胞分裂密切相关，已有证据表明，在正常和肿瘤组织中，有十分复杂的多因素控制机制决定细胞进入有丝分裂还是细胞凋亡[3～5]。如果受损细胞不能正确启动凋亡机制，就可能导致肿瘤发生，而细胞凋亡决定于多种凋亡相关基因表达产物的水平和相互作用，以及多种调定点构成的复杂调控系统[3]。调控细胞凋亡的癌基因主要有野生型P53和突变型P53.野生型P53是一种抗癌基因，负责检查细胞基因组的完整性，如DNA受损伤，则使细胞阻滞于G1期，以便其修复，若修复失败，则P53蛋白可启动细胞发生凋亡。突变型P53蛋白不仅不能抑制肿瘤发生，反而促进细胞恶性转化，抑制细胞凋亡。
本实验发现胃癌组织中P53蛋白阳性表达率为33.3%，而胃溃疡组织中阳性表达率为0，说明P53蛋白的表达与胃癌的发生有着密切关系。因此，P53蛋白可以作为反映胃癌生物学行为的重要标记物，同时也为胃癌的基因治疗提供了有效途径。
, 百拇医药
作者简介 刘春林，男，1965年9月生，主治医师
参考文献
1，Tsujitani S, Shirai H, Tatebes T, et al. Apoptosis cell death and its relationship to carcinogenesis in colorectal carcinoma[J]. Cancer, 1996,77:1711
2，Kerr JF, Winterford CM, Bio ADR, et al. Apoptosis: its signicance in cancer and cancer therapy[J].Cancer,1994,73:201
3，Korsmeyer SJ. Apoptosis: regulation and oncogenesis proceedings of AM association[J].Cancer Res,1996,37:624
4，Thompson CB. Apoptosis in the pathogenesis and treatment of the disease[J].Science,1995,267:1456
5，Sell C, Baserge R. Insulin-line growth factor Ⅰ(IFGⅠ) and the IFG-Ⅰ receptor prevent etoposideinduced apoptosis[J].Cancer Res,1995,55:303
(1999-12-31收稿 2000-05-07修回), 百拇医药
单位：刘春林(胶南市人民医院外科 山东省胶南市 266400)；杨堂斗(胶南市人民医院外科 山东省胶南市 266400)；孙国臻(青岛市商业局医院)
关键词：胃肿瘤；胃溃疡；蛋白质P53
齐鲁医学杂志000411 [摘要] ①目的 探讨P53蛋白在胃癌组织中表达的意义。②方法 应用免疫组织化学技术和原位杂交技术，检测45例胃癌及21例胃溃疡组织中P53蛋白的表达。③结果 P53蛋白在胃溃疡组织中无表达，在胃癌组织中表达阳性率为33.3%，两者比较差异有极显著性(χ2=8.03,P<0.01)。④结论 P53蛋白在胃癌发生中可能起重要作用。
[中图分类号] R735.2 [文献标识码] A [文章编号] 1008-0341(2000)04-0259-02
, http://www.100md.com
EXPRESSION OF P53 PROTEIN IN CARCINOMA OF THE STOMACH
LIU Chunlin, YANG Tangdou, SUN Guozhen
Department of Surgery, Jiaonan People's Hospital, Shandong Jiaonan 266400
[ABSTRACT] Objective To study the significance of the expression of P53 protein in carcinoma of the stomach. Methods Immunohistochemistry and hybridization in-situ were used to detect the expression of P53 protein in carcinoma of the stomach(n=45) and gastric ulcer(n=21). Results The positivity rate of expression of P53 protein in gastric ulcer and carcinoma was 0 and 33.3%, respectively, the difference was significant (χ2=8.03, P<0.01). Conclusion P53 protein plays an important role in histogenesis of carcinoma of the stomach.
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[KEY WORDS] stomach neoplasms; stomach ulcer; P53 protein
胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，其发病率有逐年增加的趋势。研究表明，胃癌的发生与细胞凋亡和增殖失控有密切关系[1，2]。几乎50%以上的各种不同组织学类型的恶性肿瘤组织中存在P53基因的突变，携带有种系细胞起源的P53基因突变者常常表现出对多种恶性肿瘤的遗传易感性，表明P53基因突变在人类恶性肿瘤的发生或发展过程中起重要作用。为此，我们应用原位杂交及免疫组化方法检测P53蛋白在胃癌组织中的表达，以探讨其与胃癌的关系。现将结果报告如下。
1 资料和方法
1.1 标本及来源
45例胃癌(男23例，女22例；年龄35～67岁，平均53.5岁)组织标本，21例胃溃疡(男11例，女10例；年龄26～59岁，平均41.3岁)组织标本，均为胶南市人民医院1997～1998年手术切除所得，且均经病理证实。所有标本均经40g/L的甲醛固定、脱水，常规石蜡包埋，制备4μm厚连续切片。
, 百拇医药
1.2 实验方法
采用SABC法进行免疫组织化学染色，SABC试剂盒均购自Santa Cruz公司，染色步骤按说明书进行。二甲苯脱蜡10～15min,3次，体积分数1.0，0.9，0.8，0.7乙醇洗涤，各15s，1×PBS洗涤，每次15s，2次，蛋白酶K 1∶10稀释,37℃,15～30min,1×PBS洗涤，每次1min，2次，凉干切片。将TDT Buffer 4μL，3mmol/L Dig dNTP 1μL，三蒸水14.8μL，TDT酶1μL混匀，滴加于切片组织，置于湿盒，37℃，1.5～2.0h.Dig Buffer Ⅰ每次5min，2次，Anti-Dig(Dig Buffer Ⅰ 1∶500稀释)30min，37℃，Dig Buffer Ⅰ每次5min，2次，Dig Buffer Ⅲ每次5min，2次。NBT+BCIP(用Dig Buffer Ⅲ稀释100倍)滴加切片显色，避光，约10～30min，在显微镜下观察。甲基绿或深红复染核(切忌乙醇脱水，因乙醇可将颜色脱掉)，风干。蛋白甘油封固、观察。阳性对照为Bcl-2阳性的滤泡淋巴瘤组织；阴性对照为以磷酸盐缓冲液(PBS)替代一抗的空白对照和以正常兔血清(1∶50)替代一抗的替代对照。
, 百拇医药
1.3 观察指标
光镜下观察P53蛋白染色及TUNEL染色切片的显色反应,数5个以上高倍视野,不少于1 000个细胞,蛋白表达强度依照阳性产物着色深浅及阳性细胞数的多少分为4级。(-)：无阳性反应细胞，阳性细胞<10%或背景同空白对照；(+)：10%～25%的细胞明显阳性，或大多数细胞弱阳性；()：26%～50%的细胞明显阳性；()：>50%的细胞明显阳性。
2 结 果
P53蛋白阳性反应物质呈棕黄色细颗粒状，主要位于癌细胞核中。45例胃癌组织中，P53蛋白(+)6例，()4例，()5例，阳性表达率为33.3%(15/45)；21例胃溃疡组织中未见阳性表达，两组阳性表达率比较差异有显著性(χ2=8.03，P<0.01)。
3 讨 论
, 百拇医药
细胞凋亡是基因调控的细胞主动死亡过程，是程序性细胞死亡的主要形式，此过程的异常与肿瘤的发生发展有密切关系[1,2]。细胞凋亡与细胞分裂密切相关，已有证据表明，在正常和肿瘤组织中，有十分复杂的多因素控制机制决定细胞进入有丝分裂还是细胞凋亡[3～5]。如果受损细胞不能正确启动凋亡机制，就可能导致肿瘤发生，而细胞凋亡决定于多种凋亡相关基因表达产物的水平和相互作用，以及多种调定点构成的复杂调控系统[3]。调控细胞凋亡的癌基因主要有野生型P53和突变型P53.野生型P53是一种抗癌基因，负责检查细胞基因组的完整性，如DNA受损伤，则使细胞阻滞于G1期，以便其修复，若修复失败，则P53蛋白可启动细胞发生凋亡。突变型P53蛋白不仅不能抑制肿瘤发生，反而促进细胞恶性转化，抑制细胞凋亡。
本实验发现胃癌组织中P53蛋白阳性表达率为33.3%，而胃溃疡组织中阳性表达率为0，说明P53蛋白的表达与胃癌的发生有着密切关系。因此，P53蛋白可以作为反映胃癌生物学行为的重要标记物，同时也为胃癌的基因治疗提供了有效途径。
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作者简介 刘春林，男，1965年9月生，主治医师
参考文献
1，Tsujitani S, Shirai H, Tatebes T, et al. Apoptosis cell death and its relationship to carcinogenesis in colorectal carcinoma[J]. Cancer, 1996,77:1711
2，Kerr JF, Winterford CM, Bio ADR, et al. Apoptosis: its signicance in cancer and cancer therapy[J].Cancer,1994,73:201
3，Korsmeyer SJ. Apoptosis: regulation and oncogenesis proceedings of AM association[J].Cancer Res,1996,37:624
4，Thompson CB. Apoptosis in the pathogenesis and treatment of the disease[J].Science,1995,267:1456
5，Sell C, Baserge R. Insulin-line growth factor Ⅰ(IFGⅠ) and the IFG-Ⅰ receptor prevent etoposideinduced apoptosis[J].Cancer Res,1995,55:303
(1999-12-31收稿 2000-05-07修回), 百拇医药