HBV相关性肝细胞癌与sFas/sFasL的关系
作者：宋卫青 吕维红 王梅珍
单位：宋卫青(青岛市市立医院检验科 青岛 266011)；吕维红(青岛市市立医院检验科 青岛 266011)；王梅珍(青岛市市立医院检验科 青岛 266011)
关键词：肝肿瘤；肝炎；乙型；Fas蛋白
齐鲁医学杂志000403 [摘要] ①目的 探讨血清可溶性Fas/可溶性FasL配体(sFas/sFasL)变化与慢性乙型肝炎病毒(HBV)相关性肝细胞癌之间的关系。②方法 用酶联免疫吸附双抗体夹心(ELISA)方法，检测21例无症状HBV携带者及22例HBV相关性肝细胞癌病人血清sFas/sFasL水平。③结果 与无症状HBV携带者比较，HBV相关性肝细胞癌病人血清sFas水平明显增高(t=6.990，P<0.01)，而sFasL水平则降低(t=2.423，P<0.01)。④结论 血清sFas及sFasL变化可能与HBV相关性肝细胞癌的发生密切相关。
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[中图分类号] R735.7 [文献标识码] A [文章编号] 1008-0341(2000)04-0241-02
RELATIONSHIP BETWEEN SERUM SOLUBLE FAS/SOLUBLE FAS LIGAND AND HBV RELATED HEPATOCELLULAR CARCINOMA
SONG Weiqing, LU Weihong, WANG Meizhen
Department of Laboratory Medicine, Qingdao Municipal Hospital, Qingdao 266011
[ABSTRACT] Objective To study the relationship between soluble Fas/soluble Fas Ligand levels in serum and hepatitis B virus (HBV)related hepatocellular carcinoma. Methods Soluble Fas (sFas) and soluble Fas Ligand ( sFasL ) levels in serum were measured in 21 patients with asymptomatic HBsAg carriers (ASH) and 22 patients with HBV related hepatocellular carcinoma (HBV related HCC) with enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Results Compared with ASH, the sFas level in serum of patients with HBV related HCC were increased significantly (t=6.990, P<0.01), the sFasL level decreased significantly (t=2.423,P<0.01). Conclusion The changes of sFas/sFasL levels may have a close relationship with HBV related HCC.
, 百拇医药
[KEY WORDS] liver neoplasms； hepatitis B；Fas protein
乙型肝炎病毒(HBV)感染后机体一个重要的抗感染免疫机制是以细胞凋亡方式清除感染细胞,Fas是细胞的一种跨膜蛋白，又称Apo-1或CD95蛋白，是介导凋亡的细胞表面分子[1]。众所周知,肝细胞癌的发生机制之一是癌变细胞逃避免疫活性细胞的监视，主要是对Fas抗原介导的细胞凋亡有抵抗作用。研究发现，原发性肝细胞癌病人癌细胞表达膜性FasL[2]，同时血浆可溶性Fas(sFas)明显增多[3],且肝癌细胞对Fas介导凋亡不敏感的原因与sFas参与有关[4]。本文拟以无症状HBV携带者作为对照，观察HBV相关性肝细胞癌病人sFas及sFas配体(sFasL)变化规律，以进一步探讨肝细胞癌发病机制，为寻找新的治疗途径提供理论依据。
1 资料与方法
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1.1 一般资料
无症状HBV携带组21例，其中男12例，女9例；年龄32～57岁；均为HBsAg阳性，肝功能正常者。HBV相关性肝细胞癌组22例，其中男20例，女2例；年龄35～55岁；均为HBsAg阳性者；病理诊断为肝细胞型肝癌19例，混合型肝癌3例。诊断均符合1995年5月(北京)第五次全国传染病、寄生虫病学术会议修订的肝癌诊断标准。
1.2 标本采集
所有病人均于治疗前取全血5mL，分离血清，置于-70℃冻存备用。
1.3 试剂与仪器
血清sFas/sFasL检测酶联免疫试剂盒购自日本Medical and Biological Laborodories Co. Ltd(MBL)，酶标仪系美国Bio-Rad公司产品。
, 百拇医药
1.4 检测方法
1.4.1 sFas检测标本准备 按2.0×(1,1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64,0)μg/L稀释标准品；如果血浆标本检测值超过上限，按1∶4稀释。
1.4.2 sFasL的检测标本准备 按2.5×(1,1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64,0)μg/L稀释标准品；血浆中sFasL含量低，不再稀释。
1.4.3 血清sFas/sFasL检测 采用酶联免疫吸附双抗体夹心(ELISA)法。
2 结 果
无症状HBV携带者血清sFas及sFasL水平分别为(0.887±0.136)μg/L，(0.270±0.095)μg/L.与无症状HBV携带者比较，HBV相关性肝细胞癌病人血清sFas水平(1.210±0.460)μg/L明显增高(t=6.990，P<0.01)，而sFasL水平(0.200±0.078)μg/L则降低，差异有极显著意义(t=2.423，P<0.01)。
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3 讨 论
细胞凋亡是机体清除感染、变异、衰老的细胞，维持自身正常生理平衡的一种调节方式。在HBV感染机体之后，免疫活性细胞包括致敏T淋巴细胞(CTL)、自然杀伤细胞(NK)等通过Fas系统活化介导细胞毒作用，以凋亡方式清除感染细胞。Fas系统与CTL，NK细胞的功能密切相关，CTL，NK细胞膜上同时表达Fas和FasL，表达于膜上的FasL与靶细胞上表达的Fas结合，可传递凋亡信息，导致靶细胞的凋亡。免疫活性细胞诱导凋亡能力下降，不能清除病毒感染后的变异细胞，其生存时间延长，不断增殖，最终导致癌变。文献报道，肝癌肿瘤细胞表达膜性FasL，血清sFas水平亦明显增高，可竞争性地与免疫活性细胞膜上FasL结合，抑制其致凋亡能力，从而有利于肿瘤细胞逃避免疫活性细胞的监视。本文结果显示，HBV相关性肝细胞癌病人除sFas增高外，血清sFasL水平降低，sFasL与sFas结合少，则sFas进一步增多，sFas与免疫活性细胞膜上的FasL大量结合，封闭其免疫活性，降低其致凋亡能力，使其不能清除肿瘤细胞，导致肿瘤细胞不断繁殖、转移。
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sFas是由于膜性Fas在金属蛋白酶作用下，mRNA交替剪接，造成跨膜区缺失而使之不能与膜结合，释放入血清，sFasL也是由此而产生[5]。我们认为可通过提高肝癌细胞膜上金属蛋白酶活性，促进肝细胞膜性FasL的切割，形成sFasL，既可降低肿瘤浸润淋巴细胞的凋亡，也可阻断sFas对免疫活性细胞功能的下调作用，有利于恢复免疫活性细胞的功能，清除肿瘤细胞，提高对化疗、放疗的敏感性，达到抑制肿瘤发展及增强疗效的目的。
慢性乙型病毒性肝炎是严重危害我国人民健康的常见传染病，而病毒持续感染所致肝细胞变异，最终可发展为肝细胞癌，该病目前无有效治疗方法，5年生存率极低，且治疗费用昂贵。作者认为可以从细胞凋亡的角度，阻断肿瘤细胞的免疫逃逸，并提出了肝细胞癌新的治疗思路。
作者简介 宋卫青，男，1968年6月生，主管检验师
参考文献
, 百拇医药
1，Hiramatsu N，Hayashi N，Katayama K， et al. Immunohistochemical detection of Fas antigen in liver tissues of patients with chronic hepatitis C[J]. Hepatology，1994， 19：1354
2，Nagao M, Nakajima Y, Hisanaga M, et al. The alteration of Fas receptor and Ligand system in hepatocellular carcinomas: how do hepatoma cells escape from the host immune surveillance in vivo[J]? Hepatology， 1999 ， 30:413
3，Jodo S, Kobayashi S, Nakajima Y, et al. Elevated serum levels of soluble Fas/Apo-1 (CD95) in patients with hepatocellular carcinoma[J]. Clin Exp Immunol，1998，112:166
4，吴雪平，王江滨.Fas系统介导的细胞凋亡与肝脏疾病[J].国外医学免疫学分册，1999，2：70
5，方福德，杨焕明，张德昌,等主编.分子生物学前沿技术[M].北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1998.92～94
(2000-03-27收稿 2000-06-17修回), 百拇医药
单位：宋卫青(青岛市市立医院检验科 青岛 266011)；吕维红(青岛市市立医院检验科 青岛 266011)；王梅珍(青岛市市立医院检验科 青岛 266011)
关键词：肝肿瘤；肝炎；乙型；Fas蛋白
齐鲁医学杂志000403 [摘要] ①目的 探讨血清可溶性Fas/可溶性FasL配体(sFas/sFasL)变化与慢性乙型肝炎病毒(HBV)相关性肝细胞癌之间的关系。②方法 用酶联免疫吸附双抗体夹心(ELISA)方法，检测21例无症状HBV携带者及22例HBV相关性肝细胞癌病人血清sFas/sFasL水平。③结果 与无症状HBV携带者比较，HBV相关性肝细胞癌病人血清sFas水平明显增高(t=6.990，P<0.01)，而sFasL水平则降低(t=2.423，P<0.01)。④结论 血清sFas及sFasL变化可能与HBV相关性肝细胞癌的发生密切相关。
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[中图分类号] R735.7 [文献标识码] A [文章编号] 1008-0341(2000)04-0241-02
RELATIONSHIP BETWEEN SERUM SOLUBLE FAS/SOLUBLE FAS LIGAND AND HBV RELATED HEPATOCELLULAR CARCINOMA
SONG Weiqing, LU Weihong, WANG Meizhen
Department of Laboratory Medicine, Qingdao Municipal Hospital, Qingdao 266011
[ABSTRACT] Objective To study the relationship between soluble Fas/soluble Fas Ligand levels in serum and hepatitis B virus (HBV)related hepatocellular carcinoma. Methods Soluble Fas (sFas) and soluble Fas Ligand ( sFasL ) levels in serum were measured in 21 patients with asymptomatic HBsAg carriers (ASH) and 22 patients with HBV related hepatocellular carcinoma (HBV related HCC) with enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Results Compared with ASH, the sFas level in serum of patients with HBV related HCC were increased significantly (t=6.990, P<0.01), the sFasL level decreased significantly (t=2.423,P<0.01). Conclusion The changes of sFas/sFasL levels may have a close relationship with HBV related HCC.
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[KEY WORDS] liver neoplasms； hepatitis B；Fas protein
乙型肝炎病毒(HBV)感染后机体一个重要的抗感染免疫机制是以细胞凋亡方式清除感染细胞,Fas是细胞的一种跨膜蛋白，又称Apo-1或CD95蛋白，是介导凋亡的细胞表面分子[1]。众所周知,肝细胞癌的发生机制之一是癌变细胞逃避免疫活性细胞的监视，主要是对Fas抗原介导的细胞凋亡有抵抗作用。研究发现，原发性肝细胞癌病人癌细胞表达膜性FasL[2]，同时血浆可溶性Fas(sFas)明显增多[3],且肝癌细胞对Fas介导凋亡不敏感的原因与sFas参与有关[4]。本文拟以无症状HBV携带者作为对照，观察HBV相关性肝细胞癌病人sFas及sFas配体(sFasL)变化规律，以进一步探讨肝细胞癌发病机制，为寻找新的治疗途径提供理论依据。
1 资料与方法
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1.1 一般资料
无症状HBV携带组21例，其中男12例，女9例；年龄32～57岁；均为HBsAg阳性，肝功能正常者。HBV相关性肝细胞癌组22例，其中男20例，女2例；年龄35～55岁；均为HBsAg阳性者；病理诊断为肝细胞型肝癌19例，混合型肝癌3例。诊断均符合1995年5月(北京)第五次全国传染病、寄生虫病学术会议修订的肝癌诊断标准。
1.2 标本采集
所有病人均于治疗前取全血5mL，分离血清，置于-70℃冻存备用。
1.3 试剂与仪器
血清sFas/sFasL检测酶联免疫试剂盒购自日本Medical and Biological Laborodories Co. Ltd(MBL)，酶标仪系美国Bio-Rad公司产品。
, 百拇医药
1.4 检测方法
1.4.1 sFas检测标本准备 按2.0×(1,1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64,0)μg/L稀释标准品；如果血浆标本检测值超过上限，按1∶4稀释。
1.4.2 sFasL的检测标本准备 按2.5×(1,1/2,1/4,1/8,1/16,1/32,1/64,0)μg/L稀释标准品；血浆中sFasL含量低，不再稀释。
1.4.3 血清sFas/sFasL检测 采用酶联免疫吸附双抗体夹心(ELISA)法。
2 结 果
无症状HBV携带者血清sFas及sFasL水平分别为(0.887±0.136)μg/L，(0.270±0.095)μg/L.与无症状HBV携带者比较，HBV相关性肝细胞癌病人血清sFas水平(1.210±0.460)μg/L明显增高(t=6.990，P<0.01)，而sFasL水平(0.200±0.078)μg/L则降低，差异有极显著意义(t=2.423，P<0.01)。
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3 讨 论
细胞凋亡是机体清除感染、变异、衰老的细胞，维持自身正常生理平衡的一种调节方式。在HBV感染机体之后，免疫活性细胞包括致敏T淋巴细胞(CTL)、自然杀伤细胞(NK)等通过Fas系统活化介导细胞毒作用，以凋亡方式清除感染细胞。Fas系统与CTL，NK细胞的功能密切相关，CTL，NK细胞膜上同时表达Fas和FasL，表达于膜上的FasL与靶细胞上表达的Fas结合，可传递凋亡信息，导致靶细胞的凋亡。免疫活性细胞诱导凋亡能力下降，不能清除病毒感染后的变异细胞，其生存时间延长，不断增殖，最终导致癌变。文献报道，肝癌肿瘤细胞表达膜性FasL，血清sFas水平亦明显增高，可竞争性地与免疫活性细胞膜上FasL结合，抑制其致凋亡能力，从而有利于肿瘤细胞逃避免疫活性细胞的监视。本文结果显示，HBV相关性肝细胞癌病人除sFas增高外，血清sFasL水平降低，sFasL与sFas结合少，则sFas进一步增多，sFas与免疫活性细胞膜上的FasL大量结合，封闭其免疫活性，降低其致凋亡能力，使其不能清除肿瘤细胞，导致肿瘤细胞不断繁殖、转移。
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sFas是由于膜性Fas在金属蛋白酶作用下，mRNA交替剪接，造成跨膜区缺失而使之不能与膜结合，释放入血清，sFasL也是由此而产生[5]。我们认为可通过提高肝癌细胞膜上金属蛋白酶活性，促进肝细胞膜性FasL的切割，形成sFasL，既可降低肿瘤浸润淋巴细胞的凋亡，也可阻断sFas对免疫活性细胞功能的下调作用，有利于恢复免疫活性细胞的功能，清除肿瘤细胞，提高对化疗、放疗的敏感性，达到抑制肿瘤发展及增强疗效的目的。
慢性乙型病毒性肝炎是严重危害我国人民健康的常见传染病，而病毒持续感染所致肝细胞变异，最终可发展为肝细胞癌，该病目前无有效治疗方法，5年生存率极低，且治疗费用昂贵。作者认为可以从细胞凋亡的角度，阻断肿瘤细胞的免疫逃逸，并提出了肝细胞癌新的治疗思路。
作者简介 宋卫青，男，1968年6月生，主管检验师
参考文献
, 百拇医药
1，Hiramatsu N，Hayashi N，Katayama K， et al. Immunohistochemical detection of Fas antigen in liver tissues of patients with chronic hepatitis C[J]. Hepatology，1994， 19：1354
2，Nagao M, Nakajima Y, Hisanaga M, et al. The alteration of Fas receptor and Ligand system in hepatocellular carcinomas: how do hepatoma cells escape from the host immune surveillance in vivo[J]? Hepatology， 1999 ， 30:413
3，Jodo S, Kobayashi S, Nakajima Y, et al. Elevated serum levels of soluble Fas/Apo-1 (CD95) in patients with hepatocellular carcinoma[J]. Clin Exp Immunol，1998，112:166
4，吴雪平，王江滨.Fas系统介导的细胞凋亡与肝脏疾病[J].国外医学免疫学分册，1999，2：70
5，方福德，杨焕明，张德昌,等主编.分子生物学前沿技术[M].北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1998.92～94
(2000-03-27收稿 2000-06-17修回), 百拇医药