胆固醇酯转运蛋白Exon15D442:G突变对血脂的影响
作者：杨兵 陆凤翔 杨志健 朱铁兵 王震震
单位：210029 南京医科大学第一附属医院心脏科
关键词：
中华医学杂志000420 血浆高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)水平与动脉粥样硬化(AS)的发生、发展呈负相关。国外研究证实，胆固醇酯转运蛋白(CETP)基因突变可引起HDL-C升高，其中以Exon 15D442:G突变(简称D442:G突变)率较高，本研究拟探讨该突变对国人血脂的影响。
一、对象与方法
1.对象：154名健康体检的南京地区居民，排除器质性心脏病、肝肾功能异常和糖尿病等。其中女31名，男123名，平均年龄52岁±8岁。
2.聚合酶链反应(PCR)-限制性片段长度多态性(RFLP)法检测D442:G基因突变：详见文献[1]。
, http://www.100md.com
3.血浆脂质测定：总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)用酶法，HDL-C用磷钨酸-镁沉淀法，载脂蛋白(Apo)AI用免疫比浊法，脂蛋白(a)Lp(a)用酶联免疫法，低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)用Friedewald公式法计算。试剂盒均购自南京聚力公司，按说明书操作。
4.统计学处理：数据用
±s表示，组间差异显著性检验比较采用t检验。
二、结果
1.PCR-RFLP法检测D442:G突变的结果：正常人为180bp一条带，杂合子突变为150bp和180bp两条带，纯合子突变为150bp一条带。
2.D442:G突变发生率：在154位入选者中发现6例D442:G突变，5例为杂合子突变，1例为纯合子突变，突变率为3.90%，突变等位基因频率为2.27%。
, 百拇医药
3.D442:G突变对血浆脂质的影响：与实验室参考值比较，6例突变者中3例TC升高，4例TG升高，3例HDL-C升高(有2例接近高限)，2例LDL-C升高，4例Apo AI升高，3例LP(a)升高(表1)。为了去除性别、年龄对血脂的影响,由非突变者中根据性别、年龄按1∶2配对的方法，由计算机随机产生12位作为非突变对照组。比较发现，突变组血浆HDL-C明显升高，升高幅度为42.50%；反映血浆中致AS性/抗AS性脂蛋白的3个比值CH/HDL-C、LDL-C/HDL-C和NHDL-C/HDL-C均显著降低，幅度分别为-32.12%、-56.07%和-46.09%；TC轻度升高，TG、LDL-C、Apo A1和Lp(a)无明显变化(表2,图1)。
表1 6例突变者Exon 15 D442∶G突变情况 序号
性别
年龄
, 百拇医药 (岁)
TC
(mmol/
L)
TG
(mmol/
L)
HDL-C
(mmol/
L)
LDL-C
(mmol/
L)
, 百拇医药
ApoAI
(g/L)
Lp(a)
(mg/L)
1
女
52
5.2
2.0
1.3
2.9
0.9
384
, http://www.100md.com
2
男
58
5.0
1.4
1.6
2.8
1.8
63
3
男
52
6.0
0.8
, http://www.100md.com
1.5
4.2
1.6
510
4
男
48
4.6
3.1
1.9
1.3
0.9
100
, 百拇医药 5
男
58
6.4
2.1
2.0
3.4
1.7
367
6
女
53
6.0
3.6
, http://www.100md.com
2.0
2.2
1.9
136
注：实验室参考值TC 3.12～6.00 mmol/L，TG 0.44～1.70 mmol/L，HDL-C 1.17～1.56 mmol/L，LDL-C 2.08～3.12 mmol/L，ApoAI 1.00～1.60 g/L，LP(a)<300 mg/L
图1 D442∶G突变对血脂的影响
三、讨论
CETP在体内介导胆固醇由外周组织(包括血管壁)向肝脏转运，即胆固醇逆向转运；同时又引起脂质再分布，即促进胆固醇由HDL转运至LDL和极低密度脂蛋白[2]，其与AS的关系较为复杂。而CETP基因突变所致的CETP功能缺陷则为探讨CETP与AS的关系提供了一条新的途径。
, http://www.100md.com
D442:G突变是一种错义突变，为第442位甘氨酸(D)被天门冬氨酸(G)替代，引起血浆CETP活性明显降低，HDL-C显著升高[3]。该突变有着明显的地域差异，在欧美人群中几乎检测不到，而在日本人群中高发，自然人群突变率达4.5%～7%，在高HDL人群中可达18%[4]；Hui等[5]报道的北京地区样本突变率为4.22%。本研究中突变率为3.90%，与日本人群及国外学者对北京地区样本的研究结果相近。
Hui等[5]报道北京地区D442：G突变者HDL-C正常，而TC和LDL-C显著降低，与日本人群研究结果明显不同；而本研究证实南京地区D442：G突变者血浆HDL-C显著升高，与日本人群的研究结果相似，可能与南京在地理上更接近日本有关。
表2 CETP Exon 15 D442∶G突变者与其对照组血浆脂质的比较(±s) 组别
, 百拇医药
例数
TC
(mmol/L)
TG
(mmol/L)
HDL-C
(mmol/L)
LDL-C
(mmol/L)
apoAI
(g/L)
LP(a)
(mg/L)
, 百拇医药
CH/
HDL-C
LDL-C/
HDL-C
NHDL-C/
HDL-C
突变者
6
5.6±0.7
2.2±1.0
1.71±0.28
2.8±1.0
1.4±0.4
, 百拇医药
260±184
3.3±0.6
1.7±0.7
2.3±0.6
对照
12
4.9±0.6
1.6±0.4
1.20±0.37
3.0±0.4
1.4±0.3
188± 76
, http://www.100md.com
4.4±1.0
2.7±0.8
3.4±1.0
t值
-2.09
-1.31
-3.02
0.37
-0.13
-0.92
2.21
2.35
2.21
, 百拇医药
P值
0.053
0.24
0.008
0.72
0.90
0.39
0.042
0.032
0.042
参考文献
1，杨兵，陆凤翔，杨志健，等.健康成年人胆固醇酯转运蛋白基因外显子15 D442：G突变的检测.南京医科大学学报，1998，15：269-271.
, 百拇医药
2，Tall AR.Plasma lipid transfer proteins. Annu Rev Biochem,1995,64:235-257.
3，Takahashi K，Jiang XC，Sakai N，et al. A missense mutation in the cholesteryl ester transfer protein gene with possible dominant effects on plasma high density lipoproteins. J Clin Invest，1993，92:2060-2064.
4，Inazu A. Cholesteryl ester transfer protein deficiency and increased HDL-cholesterol (hyperalphalipoproteinemia).Rinsho Byori，1996，44:322-326.
5，Hui SP. Frequency and effect on plasma lipoprotein metabolism of a mutation in the cholesteryl ester transfer protein in the Chinese. Hokkaido Igaku Zasshi，1997，72:319-327.
(收稿日期：1999-07-12), 百拇医药
单位：210029 南京医科大学第一附属医院心脏科
关键词：
中华医学杂志000420 血浆高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)水平与动脉粥样硬化(AS)的发生、发展呈负相关。国外研究证实，胆固醇酯转运蛋白(CETP)基因突变可引起HDL-C升高，其中以Exon 15D442:G突变(简称D442:G突变)率较高，本研究拟探讨该突变对国人血脂的影响。
一、对象与方法
1.对象：154名健康体检的南京地区居民，排除器质性心脏病、肝肾功能异常和糖尿病等。其中女31名，男123名，平均年龄52岁±8岁。
2.聚合酶链反应(PCR)-限制性片段长度多态性(RFLP)法检测D442:G基因突变：详见文献[1]。
, http://www.100md.com
3.血浆脂质测定：总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)用酶法，HDL-C用磷钨酸-镁沉淀法，载脂蛋白(Apo)AI用免疫比浊法，脂蛋白(a)Lp(a)用酶联免疫法，低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)用Friedewald公式法计算。试剂盒均购自南京聚力公司，按说明书操作。
4.统计学处理：数据用
±s表示，组间差异显著性检验比较采用t检验。二、结果
1.PCR-RFLP法检测D442:G突变的结果：正常人为180bp一条带，杂合子突变为150bp和180bp两条带，纯合子突变为150bp一条带。
2.D442:G突变发生率：在154位入选者中发现6例D442:G突变，5例为杂合子突变，1例为纯合子突变，突变率为3.90%，突变等位基因频率为2.27%。
, 百拇医药
3.D442:G突变对血浆脂质的影响：与实验室参考值比较，6例突变者中3例TC升高，4例TG升高，3例HDL-C升高(有2例接近高限)，2例LDL-C升高，4例Apo AI升高，3例LP(a)升高(表1)。为了去除性别、年龄对血脂的影响,由非突变者中根据性别、年龄按1∶2配对的方法，由计算机随机产生12位作为非突变对照组。比较发现，突变组血浆HDL-C明显升高，升高幅度为42.50%；反映血浆中致AS性/抗AS性脂蛋白的3个比值CH/HDL-C、LDL-C/HDL-C和NHDL-C/HDL-C均显著降低，幅度分别为-32.12%、-56.07%和-46.09%；TC轻度升高，TG、LDL-C、Apo A1和Lp(a)无明显变化(表2,图1)。
表1 6例突变者Exon 15 D442∶G突变情况 序号
性别
年龄
, 百拇医药 (岁)
TC
(mmol/
L)
TG
(mmol/
L)
HDL-C
(mmol/
L)
LDL-C
(mmol/
L)
, 百拇医药
ApoAI
(g/L)
Lp(a)
(mg/L)
1
女
52
5.2
2.0
1.3
2.9
0.9
384
, http://www.100md.com
2
男
58
5.0
1.4
1.6
2.8
1.8
63
3
男
52
6.0
0.8
, http://www.100md.com
1.5
4.2
1.6
510
4
男
48
4.6
3.1
1.9
1.3
0.9
100
, 百拇医药 5
男
58
6.4
2.1
2.0
3.4
1.7
367
6
女
53
6.0
3.6
, http://www.100md.com
2.0
2.2
1.9
136
注：实验室参考值TC 3.12～6.00 mmol/L，TG 0.44～1.70 mmol/L，HDL-C 1.17～1.56 mmol/L，LDL-C 2.08～3.12 mmol/L，ApoAI 1.00～1.60 g/L，LP(a)<300 mg/L
图1 D442∶G突变对血脂的影响
三、讨论
CETP在体内介导胆固醇由外周组织(包括血管壁)向肝脏转运，即胆固醇逆向转运；同时又引起脂质再分布，即促进胆固醇由HDL转运至LDL和极低密度脂蛋白[2]，其与AS的关系较为复杂。而CETP基因突变所致的CETP功能缺陷则为探讨CETP与AS的关系提供了一条新的途径。
, http://www.100md.com
D442:G突变是一种错义突变，为第442位甘氨酸(D)被天门冬氨酸(G)替代，引起血浆CETP活性明显降低，HDL-C显著升高[3]。该突变有着明显的地域差异，在欧美人群中几乎检测不到，而在日本人群中高发，自然人群突变率达4.5%～7%，在高HDL人群中可达18%[4]；Hui等[5]报道的北京地区样本突变率为4.22%。本研究中突变率为3.90%，与日本人群及国外学者对北京地区样本的研究结果相近。
Hui等[5]报道北京地区D442：G突变者HDL-C正常，而TC和LDL-C显著降低，与日本人群研究结果明显不同；而本研究证实南京地区D442：G突变者血浆HDL-C显著升高，与日本人群的研究结果相似，可能与南京在地理上更接近日本有关。
表2 CETP Exon 15 D442∶G突变者与其对照组血浆脂质的比较(
±s) 组别, 百拇医药
例数
TC
(mmol/L)
TG
(mmol/L)
HDL-C
(mmol/L)
LDL-C
(mmol/L)
apoAI
(g/L)
LP(a)
(mg/L)
, 百拇医药
CH/
HDL-C
LDL-C/
HDL-C
NHDL-C/
HDL-C
突变者
6
5.6±0.7
2.2±1.0
1.71±0.28
2.8±1.0
1.4±0.4
, 百拇医药
260±184
3.3±0.6
1.7±0.7
2.3±0.6
对照
12
4.9±0.6
1.6±0.4
1.20±0.37
3.0±0.4
1.4±0.3
188± 76
, http://www.100md.com
4.4±1.0
2.7±0.8
3.4±1.0
t值
-2.09
-1.31
-3.02
0.37
-0.13
-0.92
2.21
2.35
2.21
, 百拇医药
P值
0.053
0.24
0.008
0.72
0.90
0.39
0.042
0.032
0.042
参考文献
1，杨兵，陆凤翔，杨志健，等.健康成年人胆固醇酯转运蛋白基因外显子15 D442：G突变的检测.南京医科大学学报，1998，15：269-271.
, 百拇医药
2，Tall AR.Plasma lipid transfer proteins. Annu Rev Biochem,1995,64:235-257.
3，Takahashi K，Jiang XC，Sakai N，et al. A missense mutation in the cholesteryl ester transfer protein gene with possible dominant effects on plasma high density lipoproteins. J Clin Invest，1993，92:2060-2064.
4，Inazu A. Cholesteryl ester transfer protein deficiency and increased HDL-cholesterol (hyperalphalipoproteinemia).Rinsho Byori，1996，44:322-326.
5，Hui SP. Frequency and effect on plasma lipoprotein metabolism of a mutation in the cholesteryl ester transfer protein in the Chinese. Hokkaido Igaku Zasshi，1997，72:319-327.
(收稿日期：1999-07-12), 百拇医药