反相高效液相色谱法测定人参及其制剂中人参皂苷Rg1含量
作者：于超 刁长发 夏文娟 周碧珍
单位：于超 刁长发 夏文娟 周碧珍(重庆市中药研究院 重庆 400065)
关键词：人参皂苷Rg1；参附冻干粉针；反相高效液相色谱法
药物分析杂志000417 摘要 目的：建立用反相高效液相色谱法测定人参及其注射剂中人参皂苷Rg1含量。方法：用复合柱吸附层析法除去注射剂中干扰物质。采用LUNA C18色谱柱，乙腈-水-0.1%磷酸溶液(20∶40∶40)为流动相，流速1.2 mL.min-1， 203 nm为检测波长，柱温35 ℃，对人参及其注射剂进行含量测定。结果：人参皂苷Rg1的峰面积与其浓度线性关系良好(r=0.999 2)；样品平均回收率为98.8%；精密度RSD为0.65%(n=5)。结论：该法简便、快速、专属性强，能满足制剂的质量控制要求。
, 百拇医药
Determination of Ginsenoside Rg1 in Shenfu Injection by RP-HPLC
Yu Chao Diao Changfa Xia Wenjuan and Zhou Bizhen
(Chongqing Institute of Traditional Chinese Medicine，400065)
Abstract Objective:To establish a method using RP-HPLC for determination of the ginsenoside Rg1 in Panax ginseng G.A.Meyer and Shenfu injection.Method:It can be separated the ginsenoside and its primary impurity materials by compound chromatography column.The HPLC system consisted of LUNA C18 column (150 mm×4.6 mm,5 μm),acetonitrile-water-0.1% phosphoric acid (20∶40∶40) mixture as mobile phase,with detection at 203 nm,flow rate 1.2 mL.min-1 and column temperature at 35 ℃.Results:The calibration curve was linear (r=0.999 2), the mean recovery was 98.8%, the precision RSD was 0.65%(n=5).Conclusion:This method is simple,quick and specific, suitable for the quality control of the drug and its preparation.
, 百拇医药
Key words ginsenoside Rg1,Shenfu injection,RP-HPLC▲
人参皂苷是珍贵传统中药人参的主要活性成分，常被用来作为人参制剂中定量指标。对不同的人参皂苷组分的分析，方法也各不相同，如薄层扫描法[1]、比色法[2]、分光光度法[3]。近年来高效液相色谱法以其分离效果好、准确、快速、样品制备简单等优势而广泛用于人参制品的质量标准研究[4，5]。复方参附冻干粉针由人参、附子组成，为阳厥脱急症用药。本文采用反相高效液相色谱法测定复方参附冻干粉针中人参皂苷Rg1的含量，得到较满意的结果。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪：GILSON 307和306 PUMP，Unipoint工作站；HP1100型检测器；7725I进样阀；Eppendorf柱恒温箱。
, http://www.100md.com
人参皂苷Rg1对照品由中国药品生物制品检定所提供。人参药材为市售，经本院生药室鉴定为药典收载品种；参附冻干粉针和人参阴性对照品由本院药化室研制。
DA201大孔树脂为天津农药厂产品；732H阳离子交换树脂为河北保定化学试剂厂产品；中性氧化铝为上海市五四农场化学试剂厂产品。
甲醇、乙醇、乙腈、磷酸均为市售分析纯。
2 色谱条件
LUNA C18分析柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，美国Phenomenex产品。流动相：乙腈-水-0.1%磷酸溶液(20∶40∶40)，流速1.2 mL.min-1。紫外检测器203 nm波长处检测，柱温35 ℃。人参皂苷Rg1对照品在上述色谱条件下的色谱图见图1-A。
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图1 人参皂苷Rg1对照品(A)、参附冻干粉针(B)、参附冻干粉针阴性对照品(C)色谱图
1.人参皂苷Rg1(9.4 min)
3 复合树脂-氧化铝柱制备
树脂处理：732H阳离子树脂，用10%氯化钠溶液浸泡18 h后，用水洗20 min。然后按顺序分别用2倍于树脂量的5%盐酸、2%氢氧化钠溶液、5%盐酸、水清洗后备用；DA201树脂，用水洗后，再用5%氢氧化钠溶液清洗，最后用水洗至近无色即可。
使用0.7 cm×7 cm玻璃柱，取已处理好的DA201大孔树脂湿重4 g放入柱底，上盖脱脂棉少许，加中性氧化铝0.4 g再盖脱脂棉，加入已处理的732H型阳离子交换树脂湿重1.0 g，盖上脱脂棉，用水平衡待用。
4 线性关系考察
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精密称取人参皂苷Rg1对照品，用乙腈-水-0.1%磷酸溶液(20∶40∶40)配成1 g.L-1的对照品溶液。
准确吸取1 g.L-1对照品溶液2.0，6.0，10.0，14.0，16.0 μL，依次进样，按上述色谱条件测定峰面积，以平均峰面积的积分值(n=2)为纵坐标，对照品进样量(μg)为横坐标，进行线性回归，得回归方程(n=5)为：
Y=-3.163×106+4.716×106X r=0.999 2
5 精密度试验
取1 g.L-1对照品溶液，重复进样5次，每次10 μL，求得峰面积的RSD为0.65%。
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6 加样回收试验
精密称取人参皂苷Rg1对照品用水溶解配成2 g.L-1和4 g.L-1的对照品溶液。取20支参附冻干粉针分为2组，每组10支，一组中每支分别加2 g.L-1对照品溶液1 mL溶解，再加水1 mL洗出合并，精密量取5 mL按“7.2”方法处理后，取10 μL进样测定，计算平均回收率为98.6%, RSD为1.5% (n=3)。另一组中每支分别加4 g.L-1对照品溶液1 mL溶解，再加水1 mL洗出合并，重复上述方法，进样量为10 μL,测得平均回收率为98.8%, RSD为1.7% (n=3)。
7 样品测定
7.1 人参药材 将人参药材粉碎，于80 ℃干燥至恒重，称取1.0 g置于索氏提取器中，加入甲醇100 mL提取5 h，浓缩回收甲醇至20 mL，挥干甲醇，用乙腈-水-0.1%磷酸溶液(20∶40∶40)溶解于50 mL量瓶中并稀释至刻度。精密吸取10 μL测定含量，结果人参中人参皂苷Rg1的含量为1.38 mg.g-1，RSD为1.9%(n=3)。
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7.2 参附冻干粉针 取参附冻干粉针10支，每支用2 mL水溶解后洗出合并。精密量取5 mL加至上述复合树脂-氧化铝柱上，用水洗脱，弃去流出液。再用乙醇洗脱，流出液置水浴上蒸发干燥后，用乙腈-水-0.1%磷酸溶液(20∶40∶40)溶解，移入10 mL量瓶中，稀释至刻度。精密吸取10 μL进样，结果2批样品中人参皂苷Rg1含量分别为0.181 g.L-1和0.179 g.L-1，RSD分别为1.8%和2.6%(n=3)。色谱图见图1-B。
7.3 缺人参对照品 取缺人参对照品10支，按“7.2”方法处理后，吸取10 μL进样。结果见图1-C。在人参皂苷Rg1的保留时间处未见明显干扰峰出现。
8 讨论
采用高效液相色谱法测定人参皂苷Rg1的含量，所得的色谱峰型比较宽，对精确积分有一定影响。因此选择适当的柱温及合适的流动相非常重要。
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实验中使用甲醇或乙醇溶解样品常常干扰结果，稳定性也比较差。改用流动相直接溶解样品后，得到了较好的实验结果。■
参考文献
1.徐晖，曾元儿，钟镜全.薄层扫描法测定人参及其制剂中人参皂甙Rg1含量.中药新药与临床药理，1998，9(2)：106
2.王林.比色法测定君春乐胶囊中人参皂甙的含量.中国药学杂志，1995，30(6)：364
3.阎天午.人参首乌精中人参皂甙含量测定.中成药，1993，15(11)：14
4.王宝NFDA3.中成药质量标准与标准物质研究.第1版.北京：中国医药科技出版社，1994.247
5.刘军.高效液相色谱法分析人参皂甙.药物分析杂志，1998，18(2)：132
(本文于1999年10月12日收到), http://www.100md.com
单位：于超 刁长发 夏文娟 周碧珍(重庆市中药研究院 重庆 400065)
关键词：人参皂苷Rg1；参附冻干粉针；反相高效液相色谱法
药物分析杂志000417 摘要 目的：建立用反相高效液相色谱法测定人参及其注射剂中人参皂苷Rg1含量。方法：用复合柱吸附层析法除去注射剂中干扰物质。采用LUNA C18色谱柱，乙腈-水-0.1%磷酸溶液(20∶40∶40)为流动相，流速1.2 mL.min-1， 203 nm为检测波长，柱温35 ℃，对人参及其注射剂进行含量测定。结果：人参皂苷Rg1的峰面积与其浓度线性关系良好(r=0.999 2)；样品平均回收率为98.8%；精密度RSD为0.65%(n=5)。结论：该法简便、快速、专属性强，能满足制剂的质量控制要求。
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Determination of Ginsenoside Rg1 in Shenfu Injection by RP-HPLC
Yu Chao Diao Changfa Xia Wenjuan and Zhou Bizhen
(Chongqing Institute of Traditional Chinese Medicine，400065)
Abstract Objective:To establish a method using RP-HPLC for determination of the ginsenoside Rg1 in Panax ginseng G.A.Meyer and Shenfu injection.Method:It can be separated the ginsenoside and its primary impurity materials by compound chromatography column.The HPLC system consisted of LUNA C18 column (150 mm×4.6 mm,5 μm),acetonitrile-water-0.1% phosphoric acid (20∶40∶40) mixture as mobile phase,with detection at 203 nm,flow rate 1.2 mL.min-1 and column temperature at 35 ℃.Results:The calibration curve was linear (r=0.999 2), the mean recovery was 98.8%, the precision RSD was 0.65%(n=5).Conclusion:This method is simple,quick and specific, suitable for the quality control of the drug and its preparation.
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Key words ginsenoside Rg1,Shenfu injection,RP-HPLC▲
人参皂苷是珍贵传统中药人参的主要活性成分，常被用来作为人参制剂中定量指标。对不同的人参皂苷组分的分析，方法也各不相同，如薄层扫描法[1]、比色法[2]、分光光度法[3]。近年来高效液相色谱法以其分离效果好、准确、快速、样品制备简单等优势而广泛用于人参制品的质量标准研究[4，5]。复方参附冻干粉针由人参、附子组成，为阳厥脱急症用药。本文采用反相高效液相色谱法测定复方参附冻干粉针中人参皂苷Rg1的含量，得到较满意的结果。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪：GILSON 307和306 PUMP，Unipoint工作站；HP1100型检测器；7725I进样阀；Eppendorf柱恒温箱。
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人参皂苷Rg1对照品由中国药品生物制品检定所提供。人参药材为市售，经本院生药室鉴定为药典收载品种；参附冻干粉针和人参阴性对照品由本院药化室研制。
DA201大孔树脂为天津农药厂产品；732H阳离子交换树脂为河北保定化学试剂厂产品；中性氧化铝为上海市五四农场化学试剂厂产品。
甲醇、乙醇、乙腈、磷酸均为市售分析纯。
2 色谱条件
LUNA C18分析柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，美国Phenomenex产品。流动相：乙腈-水-0.1%磷酸溶液(20∶40∶40)，流速1.2 mL.min-1。紫外检测器203 nm波长处检测，柱温35 ℃。人参皂苷Rg1对照品在上述色谱条件下的色谱图见图1-A。
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图1 人参皂苷Rg1对照品(A)、参附冻干粉针(B)、参附冻干粉针阴性对照品(C)色谱图
1.人参皂苷Rg1(9.4 min)
3 复合树脂-氧化铝柱制备
树脂处理：732H阳离子树脂，用10%氯化钠溶液浸泡18 h后，用水洗20 min。然后按顺序分别用2倍于树脂量的5%盐酸、2%氢氧化钠溶液、5%盐酸、水清洗后备用；DA201树脂，用水洗后，再用5%氢氧化钠溶液清洗，最后用水洗至近无色即可。
使用0.7 cm×7 cm玻璃柱，取已处理好的DA201大孔树脂湿重4 g放入柱底，上盖脱脂棉少许，加中性氧化铝0.4 g再盖脱脂棉，加入已处理的732H型阳离子交换树脂湿重1.0 g，盖上脱脂棉，用水平衡待用。
4 线性关系考察
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精密称取人参皂苷Rg1对照品，用乙腈-水-0.1%磷酸溶液(20∶40∶40)配成1 g.L-1的对照品溶液。
准确吸取1 g.L-1对照品溶液2.0，6.0，10.0，14.0，16.0 μL，依次进样，按上述色谱条件测定峰面积，以平均峰面积的积分值(n=2)为纵坐标，对照品进样量(μg)为横坐标，进行线性回归，得回归方程(n=5)为：
Y=-3.163×106+4.716×106X r=0.999 2
5 精密度试验
取1 g.L-1对照品溶液，重复进样5次，每次10 μL，求得峰面积的RSD为0.65%。
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6 加样回收试验
精密称取人参皂苷Rg1对照品用水溶解配成2 g.L-1和4 g.L-1的对照品溶液。取20支参附冻干粉针分为2组，每组10支，一组中每支分别加2 g.L-1对照品溶液1 mL溶解，再加水1 mL洗出合并，精密量取5 mL按“7.2”方法处理后，取10 μL进样测定，计算平均回收率为98.6%, RSD为1.5% (n=3)。另一组中每支分别加4 g.L-1对照品溶液1 mL溶解，再加水1 mL洗出合并，重复上述方法，进样量为10 μL,测得平均回收率为98.8%, RSD为1.7% (n=3)。
7 样品测定
7.1 人参药材 将人参药材粉碎，于80 ℃干燥至恒重，称取1.0 g置于索氏提取器中，加入甲醇100 mL提取5 h，浓缩回收甲醇至20 mL，挥干甲醇，用乙腈-水-0.1%磷酸溶液(20∶40∶40)溶解于50 mL量瓶中并稀释至刻度。精密吸取10 μL测定含量，结果人参中人参皂苷Rg1的含量为1.38 mg.g-1，RSD为1.9%(n=3)。
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7.2 参附冻干粉针 取参附冻干粉针10支，每支用2 mL水溶解后洗出合并。精密量取5 mL加至上述复合树脂-氧化铝柱上，用水洗脱，弃去流出液。再用乙醇洗脱，流出液置水浴上蒸发干燥后，用乙腈-水-0.1%磷酸溶液(20∶40∶40)溶解，移入10 mL量瓶中，稀释至刻度。精密吸取10 μL进样，结果2批样品中人参皂苷Rg1含量分别为0.181 g.L-1和0.179 g.L-1，RSD分别为1.8%和2.6%(n=3)。色谱图见图1-B。
7.3 缺人参对照品 取缺人参对照品10支，按“7.2”方法处理后，吸取10 μL进样。结果见图1-C。在人参皂苷Rg1的保留时间处未见明显干扰峰出现。
8 讨论
采用高效液相色谱法测定人参皂苷Rg1的含量，所得的色谱峰型比较宽，对精确积分有一定影响。因此选择适当的柱温及合适的流动相非常重要。
, http://www.100md.com
实验中使用甲醇或乙醇溶解样品常常干扰结果，稳定性也比较差。改用流动相直接溶解样品后，得到了较好的实验结果。■
参考文献
1.徐晖，曾元儿，钟镜全.薄层扫描法测定人参及其制剂中人参皂甙Rg1含量.中药新药与临床药理，1998，9(2)：106
2.王林.比色法测定君春乐胶囊中人参皂甙的含量.中国药学杂志，1995，30(6)：364
3.阎天午.人参首乌精中人参皂甙含量测定.中成药，1993，15(11)：14
4.王宝NFDA3.中成药质量标准与标准物质研究.第1版.北京：中国医药科技出版社，1994.247
5.刘军.高效液相色谱法分析人参皂甙.药物分析杂志，1998，18(2)：132
(本文于1999年10月12日收到), http://www.100md.com