催乳颗粒剂中黄芪甲苷的含量测定
作者：齐瑗晶 高尚先 薛克亮 李惠金 于盛海▲
单位：齐瑗晶 薛克亮 李惠金 于盛海(山东省医学科学院药物研究所 250062)；高尚先(中国药品生物制品检定所)
关键词：
药物分析杂志000422 催乳颗粒剂为国家药品监督管理局批准生产的中药三类新药，主治妇女产后缺乳、少乳。催乳颗粒剂由黄芪、党参、柴胡、当归等9味药组成，鉴于在该处方中黄芪为君药，本文对成药中的黄芪甲苷进行了含量测定的方法学研究。
1 仪器及试剂
CS-930型双波长薄层扫描仪、CS-9310型双波长薄层扫描仪(日本岛津公司) 。
黄芪甲苷对照品(781-9003，中国药品生物制品检定所)；催乳颗粒剂(青岛高科园华辰生物工程有限公司)；D101大孔吸附树脂(天津制胶厂)。
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2 方法与结果
2.1 层析条件 吸附剂为硅胶G薄层板，(10 cm×20 cm)，110 ℃活化0 .5h，置干燥器中备用。展开剂：氯仿-甲醇-水(65∶35∶10)10 ℃以下放置，取下层液，在氨饱和蒸气环境下展开。显色剂：10%硫酸乙醇溶液，105 ℃烘干5～10 min。
将样品、黄芪甲苷对照品及阴性样品依该层析条件展开，显色后扫描，阴性样品的色谱带在与黄芪甲苷对照品色谱带中黄芪甲苷相应的位置上无吸收峰。样品色谱带在与黄芪甲苷对照品色谱带中黄芪甲苷相应的位置上有吸收峰。见图1。
图1 样品(A)、不含黄芪药材的阴性样品(B)、黄芪甲苷对照品(C)的图谱
1，3.其他成分 2.黄芪甲苷
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2.2 扫描条件 双波长反射法锯齿扫描；λS=510 nm，λR=700 nm，SX=3;SLIT=1.25×1.25；DELT“Y”=0.2。全波长扫描图见图2。
2.3 对照品溶液与供试品溶液的制备
精密称取黄芪甲苷对照品，用甲醇制成每1mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。
将样品研细，精密称取20.0 g，加甲醇浸泡1 h，再超声处理30min，过滤，滤渣用80 mL 甲醇 分数次洗涤，过滤洗液，滤液合并，置水浴上蒸干，残渣用水30mL分数次定量转移至 分液漏斗中，用氯仿洗涤2次，每次15mL，弃去氯仿液，再用水饱和正丁醇提取4次，每次1 5mL，合并正丁醇提取液，用1%氢氧化钾溶液洗涤2次，每次15 mL，弃去水洗液，将正丁醇提取液置水浴上蒸干，残渣以水20 mL分数次定量转移至D101大孔树脂柱内，用水洗脱，弃去水液，再以70%乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣以甲醇2 mL溶解，作为供试品溶液。
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图2 黄芪甲苷对照品的全波长扫描图
2.4 方法学研究
2.4.1 线性关系 精密称取黄芪甲苷对照品配成1mg·mL-1的溶液，分别点样1， 2，3，4，5，6μL，依上述条件展开，显色，扫描。以对照品量为横坐标，吸收峰面积积分值为纵坐标，作图，得一不经过圆点的直线，回归方程为：
Y=9 161.84X-1 294.88 r=0.9980
线性范围：1～6 μg。
2.4.2 精密度试验 取对照品溶液点于薄层板上，展开，显色，依法测定，就该点进行连续6次扫描，记录峰面积，结果其平均值为9 648.11，RSD=0.47%。
2.4.3 稳定性试验 取对照品溶液点于薄层板上，展开，显色。每隔一段时间扫描1次， 取 3h内的测定结果，峰面积值基本不变(RSD=1.6%,n=9)。薄层显色后在3 h内 测定结果较稳定。
, 百拇医药
2.4.4 回收率试验 分别精密称取已知含量的930922批样品10.0 g，精密加入黄芪甲苷220 μg，依法测定，结果6次测定的平均回收率为97.39%，RSD=1.4%。
2.5 催乳颗粒剂中黄芪甲苷的含量测定 精密称取各批号样品 20.0 g,依法制成供试品溶液，吸取供试品溶液10 μL，对照品溶液2 μL及4 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，依法展开，扫描，以两点法进行计算，结果见表1。
表1 样品的含量测定结果(n=6) 样品批号
每包含量/mg
RSD/%
950215
0.4200
2.4
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950216
0.4202
1.1
960322
0.4214
1.5
961210
0.4559
1.9
961211
0.4601
1.2
961212
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0.4515
1.3
3 讨论
催乳颗粒剂中化学成分较多，用1%氢氧化钾溶液提取可除去当归、川芎等药材中的酸性成分[1]，以正丁醇萃取，可使背景干扰减少；采用大孔树脂分离皂苷去掉糖类等水溶性杂质[2]；柴胡[3]、党参都含有皂苷成分[4]，并且黄芪中所含皂苷也不止1个，为使样品色谱带上的斑点能明显分离，在层析缸内放一小杯氨水，可使黄芪甲苷与上下相邻的斑点明显分离。■
参考文献
1.阴健.中药现代研究与临床应用(1).北京：中医古籍出版社，1995 .108，285
2.李玲，苏健，王宝琴.黄芪及其复方制剂中黄芪甲甙的薄层扫描测定.中成药，1995，15(6)：10
3.余世春，尹双青，徐金龙等.TLCS法测定小柴胡汤口服液中柴胡皂甙含量.中成药，1993，15(5)：10
4.韩桂茹，王川平，苏喜改等.薄层层析-紫外分光光度法测定党参中党参甙的含量.中国中药杂志，1990，15(9)：41
(本文于1999年5月24日收到), 百拇医药
单位：齐瑗晶 薛克亮 李惠金 于盛海(山东省医学科学院药物研究所 250062)；高尚先(中国药品生物制品检定所)
关键词：
药物分析杂志000422 催乳颗粒剂为国家药品监督管理局批准生产的中药三类新药，主治妇女产后缺乳、少乳。催乳颗粒剂由黄芪、党参、柴胡、当归等9味药组成，鉴于在该处方中黄芪为君药，本文对成药中的黄芪甲苷进行了含量测定的方法学研究。
1 仪器及试剂
CS-930型双波长薄层扫描仪、CS-9310型双波长薄层扫描仪(日本岛津公司) 。
黄芪甲苷对照品(781-9003，中国药品生物制品检定所)；催乳颗粒剂(青岛高科园华辰生物工程有限公司)；D101大孔吸附树脂(天津制胶厂)。
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2 方法与结果
2.1 层析条件 吸附剂为硅胶G薄层板，(10 cm×20 cm)，110 ℃活化0 .5h，置干燥器中备用。展开剂：氯仿-甲醇-水(65∶35∶10)10 ℃以下放置，取下层液，在氨饱和蒸气环境下展开。显色剂：10%硫酸乙醇溶液，105 ℃烘干5～10 min。
将样品、黄芪甲苷对照品及阴性样品依该层析条件展开，显色后扫描，阴性样品的色谱带在与黄芪甲苷对照品色谱带中黄芪甲苷相应的位置上无吸收峰。样品色谱带在与黄芪甲苷对照品色谱带中黄芪甲苷相应的位置上有吸收峰。见图1。
图1 样品(A)、不含黄芪药材的阴性样品(B)、黄芪甲苷对照品(C)的图谱
1，3.其他成分 2.黄芪甲苷
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2.2 扫描条件 双波长反射法锯齿扫描；λS=510 nm，λR=700 nm，SX=3;SLIT=1.25×1.25；DELT“Y”=0.2。全波长扫描图见图2。
2.3 对照品溶液与供试品溶液的制备
精密称取黄芪甲苷对照品，用甲醇制成每1mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。
将样品研细，精密称取20.0 g，加甲醇浸泡1 h，再超声处理30min，过滤，滤渣用80 mL 甲醇 分数次洗涤，过滤洗液，滤液合并，置水浴上蒸干，残渣用水30mL分数次定量转移至 分液漏斗中，用氯仿洗涤2次，每次15mL，弃去氯仿液，再用水饱和正丁醇提取4次，每次1 5mL，合并正丁醇提取液，用1%氢氧化钾溶液洗涤2次，每次15 mL，弃去水洗液，将正丁醇提取液置水浴上蒸干，残渣以水20 mL分数次定量转移至D101大孔树脂柱内，用水洗脱，弃去水液，再以70%乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣以甲醇2 mL溶解，作为供试品溶液。
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图2 黄芪甲苷对照品的全波长扫描图
2.4 方法学研究
2.4.1 线性关系 精密称取黄芪甲苷对照品配成1mg·mL-1的溶液，分别点样1， 2，3，4，5，6μL，依上述条件展开，显色，扫描。以对照品量为横坐标，吸收峰面积积分值为纵坐标，作图，得一不经过圆点的直线，回归方程为：
Y=9 161.84X-1 294.88 r=0.9980
线性范围：1～6 μg。
2.4.2 精密度试验 取对照品溶液点于薄层板上，展开，显色，依法测定，就该点进行连续6次扫描，记录峰面积，结果其平均值为9 648.11，RSD=0.47%。
2.4.3 稳定性试验 取对照品溶液点于薄层板上，展开，显色。每隔一段时间扫描1次， 取 3h内的测定结果，峰面积值基本不变(RSD=1.6%,n=9)。薄层显色后在3 h内 测定结果较稳定。
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2.4.4 回收率试验 分别精密称取已知含量的930922批样品10.0 g，精密加入黄芪甲苷220 μg，依法测定，结果6次测定的平均回收率为97.39%，RSD=1.4%。
2.5 催乳颗粒剂中黄芪甲苷的含量测定 精密称取各批号样品 20.0 g,依法制成供试品溶液，吸取供试品溶液10 μL，对照品溶液2 μL及4 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，依法展开，扫描，以两点法进行计算，结果见表1。
表1 样品的含量测定结果(n=6) 样品批号
每包含量/mg
RSD/%
950215
0.4200
2.4
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950216
0.4202
1.1
960322
0.4214
1.5
961210
0.4559
1.9
961211
0.4601
1.2
961212
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0.4515
1.3
3 讨论
催乳颗粒剂中化学成分较多，用1%氢氧化钾溶液提取可除去当归、川芎等药材中的酸性成分[1]，以正丁醇萃取，可使背景干扰减少；采用大孔树脂分离皂苷去掉糖类等水溶性杂质[2]；柴胡[3]、党参都含有皂苷成分[4]，并且黄芪中所含皂苷也不止1个，为使样品色谱带上的斑点能明显分离，在层析缸内放一小杯氨水，可使黄芪甲苷与上下相邻的斑点明显分离。■
参考文献
1.阴健.中药现代研究与临床应用(1).北京：中医古籍出版社，1995 .108，285
2.李玲，苏健，王宝琴.黄芪及其复方制剂中黄芪甲甙的薄层扫描测定.中成药，1995，15(6)：10
3.余世春，尹双青，徐金龙等.TLCS法测定小柴胡汤口服液中柴胡皂甙含量.中成药，1993，15(5)：10
4.韩桂茹，王川平，苏喜改等.薄层层析-紫外分光光度法测定党参中党参甙的含量.中国中药杂志，1990，15(9)：41
(本文于1999年5月24日收到), 百拇医药