对中国药典收载品种熊去氧胆酸中胆石酸检出量的考察及修订建议
作者：黄哲甦 李海生▲
单位：黄哲甦 李海生(天津市药品检验所 300070)；周珺(天津医科大学药学院)
关键词：
药物分析杂志000418
熊去氧胆酸(ursodesoxycholic acid,UDCA)在自然界主要存在于熊胆汁中，1937年确定了结构[1]，1952年由胆酸(cholic acid,CA)为原料合成生产了UDCA。目前多由鹅去氧胆酸(chenodeoxycholic acid,CDCA)为原料合成UDCA。在临床上用作利胆药和治疗胆固醇型结石[2]。中国药典1995年版[3]和日本药局方第十二版中收载了该药品。
熊去氧胆酸中的有关物质主要有CDCA和胆石酸(lithocholic acid,LCA)。中国药典1995年版和日本药局方第十二版规定的限度相同分别应在1.5%和0.1%以下，在薄层色谱法的操作中LCA点样量中国药典为0.01 μg，日本药局方为0.02 μg，经实验室考察表明：LCA的目视最低检出量为0.04 μg，适宜的检测量为0.08 μg以上，现将有关实验结果及建议介绍如下。
, 百拇医药
1 仪器及试剂
硅胶G高效板分别采用青岛海洋化工厂和烟台市化学工业研究院产品。硅胶G自制板为薄层层析用硅胶G(上海化学试剂采购供应站)。
CA、去氧胆酸(DCA)、UDCA、CDCA对照品约由中国药品生物制品检定所提供，LCA为Sigma公司产品。
其它试剂均为分析纯。
2 展开与显色方法
将展开剂置双槽展开缸中一侧槽中，将点样后的薄层板置于另一侧槽中，盖严盖后，使之饱和30 min，将板置展开剂中展开约7～8 cm后取出，晾干，置干燥箱中120 ℃加热除尽溶剂后，喷20%磷钼酸乙醇溶液(新鲜配制)，再置120 ℃干燥箱中2～3 min使显色。
3 溶液的配制
, 百拇医药
对照品溶液：准确称取UDCA、CDCA、DCA、CA、LCA对照品适量，用乙醇溶解并制成每1 mL中含0.05 mg的溶液；另准确量取7份LCA溶液各1 mL，分别用乙醇稀释至2，2.5，4，5，6.7，10，20 mL，得到25，20，12.5，10，7.5，5，2.5 μg.mL-1的对照品溶液，点样4 μL。
4 展开剂的选择
中国药典中规定的展开剂为氯仿-丙酮-冰醋酸(7∶2∶1)，简称A系统，笔者经参考有关资料，发现也可采用乙醚-氯仿-冰醋酸(5∶4∶1)，简称B系统。经多次比较实验结果表明：2种系统均能较好地分离上述5种胆酸成分(图1)，但在A系统中LCA斑点与溶剂前沿很近(Rf值为0.96)，而在B系统中，各斑点的Rf值较合适，其中LCA的Rf值为0.91。故笔者认为B系统较A系统合适。
, 百拇医药
图1 A系统(A)及B系统(B)色谱图
1.CDCA 2.UDCA 3.LCA 4.CA 5.DCA 6.混合对照品
5 最小检出量
经实验结果表明：无论在高效板还是在实验室中手铺的硅胶G板上，LCA的最小检出量为0.04 μg,0.03 μg及以下均不能目视检出。
6 显色剂的使用时间
显色剂应新鲜配制或置冰箱中可用3 d，实验结果表明：显色剂溶液放置时间过长，影响显色强度。
7 结论
实验结果表明：LCA的最低检出量为0.04 μg，适宜的检出量为0.08 μg，建议在新版药典制订时予以考虑和修订，建议的检查方法中对照品与供试品溶液配制方法如下：
, http://www.100md.com
取本品，加氯仿-乙醇(9∶1)制成每1 mL中含8.0 mg的溶液，作为供试品溶液；另取LCA对照品，用氯仿-乙醇(9∶1)制成每1 mL中含8.0 μg作为对照品溶液，吸取上述溶液各10 μL点于同一硅胶G薄层板上……。■
参考文献
1.第十三改正日本药局方解说书C-263.1996
2.日本药局方第十二改正版.1991
3.中国药典.1995.二部：1058
(本文于1999年4月5日收到), 百拇医药
单位：黄哲甦 李海生(天津市药品检验所 300070)；周珺(天津医科大学药学院)
关键词：
药物分析杂志000418
熊去氧胆酸(ursodesoxycholic acid,UDCA)在自然界主要存在于熊胆汁中，1937年确定了结构[1]，1952年由胆酸(cholic acid,CA)为原料合成生产了UDCA。目前多由鹅去氧胆酸(chenodeoxycholic acid,CDCA)为原料合成UDCA。在临床上用作利胆药和治疗胆固醇型结石[2]。中国药典1995年版[3]和日本药局方第十二版中收载了该药品。
熊去氧胆酸中的有关物质主要有CDCA和胆石酸(lithocholic acid,LCA)。中国药典1995年版和日本药局方第十二版规定的限度相同分别应在1.5%和0.1%以下，在薄层色谱法的操作中LCA点样量中国药典为0.01 μg，日本药局方为0.02 μg，经实验室考察表明：LCA的目视最低检出量为0.04 μg，适宜的检测量为0.08 μg以上，现将有关实验结果及建议介绍如下。
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1 仪器及试剂
硅胶G高效板分别采用青岛海洋化工厂和烟台市化学工业研究院产品。硅胶G自制板为薄层层析用硅胶G(上海化学试剂采购供应站)。
CA、去氧胆酸(DCA)、UDCA、CDCA对照品约由中国药品生物制品检定所提供，LCA为Sigma公司产品。
其它试剂均为分析纯。
2 展开与显色方法
将展开剂置双槽展开缸中一侧槽中，将点样后的薄层板置于另一侧槽中，盖严盖后，使之饱和30 min，将板置展开剂中展开约7～8 cm后取出，晾干，置干燥箱中120 ℃加热除尽溶剂后，喷20%磷钼酸乙醇溶液(新鲜配制)，再置120 ℃干燥箱中2～3 min使显色。
3 溶液的配制
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对照品溶液：准确称取UDCA、CDCA、DCA、CA、LCA对照品适量，用乙醇溶解并制成每1 mL中含0.05 mg的溶液；另准确量取7份LCA溶液各1 mL，分别用乙醇稀释至2，2.5，4，5，6.7，10，20 mL，得到25，20，12.5，10，7.5，5，2.5 μg.mL-1的对照品溶液，点样4 μL。
4 展开剂的选择
中国药典中规定的展开剂为氯仿-丙酮-冰醋酸(7∶2∶1)，简称A系统，笔者经参考有关资料，发现也可采用乙醚-氯仿-冰醋酸(5∶4∶1)，简称B系统。经多次比较实验结果表明：2种系统均能较好地分离上述5种胆酸成分(图1)，但在A系统中LCA斑点与溶剂前沿很近(Rf值为0.96)，而在B系统中，各斑点的Rf值较合适，其中LCA的Rf值为0.91。故笔者认为B系统较A系统合适。
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图1 A系统(A)及B系统(B)色谱图
1.CDCA 2.UDCA 3.LCA 4.CA 5.DCA 6.混合对照品
5 最小检出量
经实验结果表明：无论在高效板还是在实验室中手铺的硅胶G板上，LCA的最小检出量为0.04 μg,0.03 μg及以下均不能目视检出。
6 显色剂的使用时间
显色剂应新鲜配制或置冰箱中可用3 d，实验结果表明：显色剂溶液放置时间过长，影响显色强度。
7 结论
实验结果表明：LCA的最低检出量为0.04 μg，适宜的检出量为0.08 μg，建议在新版药典制订时予以考虑和修订，建议的检查方法中对照品与供试品溶液配制方法如下：
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取本品，加氯仿-乙醇(9∶1)制成每1 mL中含8.0 mg的溶液，作为供试品溶液；另取LCA对照品，用氯仿-乙醇(9∶1)制成每1 mL中含8.0 μg作为对照品溶液，吸取上述溶液各10 μL点于同一硅胶G薄层板上……。■
参考文献
1.第十三改正日本药局方解说书C-263.1996
2.日本药局方第十二改正版.1991
3.中国药典.1995.二部：1058
(本文于1999年4月5日收到), 百拇医药