红细胞结合荧光标记抗人IgG值的测定及临床应用
作者：陈澍英 邹小立 张静然 林伟
单位：广州市，广东省人民医院血液内科 510080
关键词：
实用医学杂志000449 近40年来，对免疫性溶血性贫血的诊断，Coombs试验是一种经典的检验方法。但Coombs试验敏感度不高，相当部分患者因此被误诊。为寻找一种敏感性高、特异性强的定量检测红细胞抗体的方法，我们采用Chandor[1]的定量检测方法，即荧光标记羊抗人IgG(FITC-SAHIgG)结合红细胞值，测定血液病患者的红细胞IgG水平，将结果报道如下。
1 材料与方法
1.1 试剂与仪器 (1)荧光标记羊抗人IgG(FITC-SAHIgG)，上海生物制品研究所生产，效价1∶16；(2)0.8%乙二胺四乙酸二钠(EDTA二钠)；(3)磷酸盐缓冲液(PBS)pH 7.1～7.2；(4)0.25%氯化钠液(NaCl)；(5)0.1%小牛血清白蛋白(BSA)-PBS液；(6)0.5% Nonidel-P40-PBS液，用Nonidel-P40溶于PBS中；(7)Coombs试剂，效价1∶8；(8)日本650-60荧光分光光度计；(9)低温高速离心机。
1.2 检测对象 1997～1999年各种血液病住院患者63例，男40例，女23例，男∶女＝1.7∶1，年龄15～47岁，平均41岁，其中非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)10例，慢性髓性白血病(CML)7例，急性白血病(AL)9例，骨髓增生异常综合征(MDS)2例，多发性骨髓瘤(MM)5例，骨髓纤维化(MF)3例，血小板减少性紫癜(ITP)4例，血液病恶性肿瘤合并溶血10例，自身免疫性溶血性贫血(AIHA)13例。
1.3 检测方法 操作步骤参照文献[1]。
2 结果
血液病肿瘤患者40例，作Coombs试验(间接，直接)均阴性。测FITC-SAHIgG值(0.100～0.497)×10-5M，均值(0.302±0.115)×10-5M；溶血性贫血23例，作Coombs试验除2例阳性，3例C3b阳性外，余均阴性。测FITC-SAHIgG值(0.529～1.9)×10-5M，均值(0.833±0.348)×10-5M；溶血性贫血的FITC-SAHIgG值明显高于血液病肿瘤患者，二者差异有显著意义(t＝10.2，P<0.01)。
3 讨论
经典的Coombs试验是自身免疫性溶血性贫血(AIHA)的常用诊断方法。Coombs试验阳性取决于红细胞膜上抗体的数量[2]，只有当红细胞膜上IgG数量达到≥500个时，才能与Coombs试验发生凝集反应。因此，该方法敏感性差，临床误诊率高。
我们采用荧光标记羊抗人IgG(FITC-SAHIgG)结合红细胞值法，对溶血性贫血和血液病肿瘤患者进行比较；前者的FITC-SAHIgG值明显高于后者(P<0.01)；认为FITC-SAHIgG值>5×10-5M，即可诊断溶血性贫血。本方法由于移去了能吸附荧光的血红蛋白，又将其红细胞膜溶于亲水剂Nonidel-P40中，促使与荧光标记的IgG抗体结合，减少了播散性，因而结果可靠，敏感性高，对溶血性贫血能作出早期诊断和及时治疗，此方法值得推广。
4 参考文献
1，Chandor SB. Autoimmune phenomena in lymphoid malignancies. Clin Lab Med. 1988,8(2)：373～384.
2，陈澍英，邹小立，林 伟. 自身免疫性溶血性贫血. 实用医学杂志，1998，4(14)：299～300., 百拇医药
单位：广州市，广东省人民医院血液内科 510080
关键词：
实用医学杂志000449 近40年来，对免疫性溶血性贫血的诊断，Coombs试验是一种经典的检验方法。但Coombs试验敏感度不高，相当部分患者因此被误诊。为寻找一种敏感性高、特异性强的定量检测红细胞抗体的方法，我们采用Chandor[1]的定量检测方法，即荧光标记羊抗人IgG(FITC-SAHIgG)结合红细胞值，测定血液病患者的红细胞IgG水平，将结果报道如下。
1 材料与方法
1.1 试剂与仪器 (1)荧光标记羊抗人IgG(FITC-SAHIgG)，上海生物制品研究所生产，效价1∶16；(2)0.8%乙二胺四乙酸二钠(EDTA二钠)；(3)磷酸盐缓冲液(PBS)pH 7.1～7.2；(4)0.25%氯化钠液(NaCl)；(5)0.1%小牛血清白蛋白(BSA)-PBS液；(6)0.5% Nonidel-P40-PBS液，用Nonidel-P40溶于PBS中；(7)Coombs试剂，效价1∶8；(8)日本650-60荧光分光光度计；(9)低温高速离心机。
1.2 检测对象 1997～1999年各种血液病住院患者63例，男40例，女23例，男∶女＝1.7∶1，年龄15～47岁，平均41岁，其中非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)10例，慢性髓性白血病(CML)7例，急性白血病(AL)9例，骨髓增生异常综合征(MDS)2例，多发性骨髓瘤(MM)5例，骨髓纤维化(MF)3例，血小板减少性紫癜(ITP)4例，血液病恶性肿瘤合并溶血10例，自身免疫性溶血性贫血(AIHA)13例。
1.3 检测方法 操作步骤参照文献[1]。
2 结果
血液病肿瘤患者40例，作Coombs试验(间接，直接)均阴性。测FITC-SAHIgG值(0.100～0.497)×10-5M，均值(0.302±0.115)×10-5M；溶血性贫血23例，作Coombs试验除2例阳性，3例C3b阳性外，余均阴性。测FITC-SAHIgG值(0.529～1.9)×10-5M，均值(0.833±0.348)×10-5M；溶血性贫血的FITC-SAHIgG值明显高于血液病肿瘤患者，二者差异有显著意义(t＝10.2，P<0.01)。
3 讨论
经典的Coombs试验是自身免疫性溶血性贫血(AIHA)的常用诊断方法。Coombs试验阳性取决于红细胞膜上抗体的数量[2]，只有当红细胞膜上IgG数量达到≥500个时，才能与Coombs试验发生凝集反应。因此，该方法敏感性差，临床误诊率高。
我们采用荧光标记羊抗人IgG(FITC-SAHIgG)结合红细胞值法，对溶血性贫血和血液病肿瘤患者进行比较；前者的FITC-SAHIgG值明显高于后者(P<0.01)；认为FITC-SAHIgG值>5×10-5M，即可诊断溶血性贫血。本方法由于移去了能吸附荧光的血红蛋白，又将其红细胞膜溶于亲水剂Nonidel-P40中，促使与荧光标记的IgG抗体结合，减少了播散性，因而结果可靠，敏感性高，对溶血性贫血能作出早期诊断和及时治疗，此方法值得推广。
4 参考文献
1，Chandor SB. Autoimmune phenomena in lymphoid malignancies. Clin Lab Med. 1988,8(2)：373～384.
2，陈澍英，邹小立，林 伟. 自身免疫性溶血性贫血. 实用医学杂志，1998，4(14)：299～300., 百拇医药