无刺根中蛇葡萄素体外抗肿瘤作用研究
作者：周宁宁 朱孝峰 谢冰芬 冯公侃 刘德育
单位：周宁宁 朱孝峰 谢冰芬 冯公侃(中山医科大学肿瘤防治中心治疗基础室 广州 510060)；刘德育(中山医科大学肿瘤防治中心化学教研室 广州 510060)
关键词：
广东药学000403 摘要 目的：研究蛇葡萄素在体外对肿瘤细胞的生长抑制作用。方法：采用MTT法，检测蛇葡萄素对白血病细胞HL-60、K562以及肝癌Bel-7402细胞生长的抑制作用。结果：蛇葡萄素在浓度为100、50、25、12.5、6.25μg/ml下，对Bel-7402细胞增殖抑制率分别为82.3±19%、79.5±1.7%、73.4±5.5%、47.0±2.5%和6.0±3.2%，对HL-60、K562细胞增殖抑制率分别为94.1±5.1%、88.2±3.2%、67.6±3.1%、60.1±4.7%、23.5±6.2%和88.9±3.1%、83.3±2.4%、55.6±7.1%、31.5±4.6%、25.9±6.0%，抑制的IC50值分别为18.65(15.92、21.84)μg/ml、12.41(10.40、14.78)和18.39(15.59、21.70)μg/ml。结论：本研究结果显示蛇葡萄素对肿瘤细胞Bel-7402、HL-60和K562增殖有明显的抑制作用，可能具有较高的开发价值。
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关键词 蛇葡萄素 肝癌细胞 抑制作用
无刺根是葡萄科蛇葡萄属粤蛇葡萄[Ampelopsis cantoniensis(Hook.et Am.)Planch]的根或全株，主要盛产于我国华南一带，是民间的传统用药，广泛用于消炎解毒，治皮肤病、疖肿及骨髓炎、急性淋巴炎等感染性疾病[1]。蛇葡萄素(Ampelopsin)是粤蛇葡萄中提取的黄酮类单体化合物[2]。刘德育等[3、4]采用经改进的甲醇提取、水重结晶法提取分离得到蛇葡萄素，研究发现其对酪氨酸酶活性有明显的抑制作用，进一步研究发现对小鼠B16细胞有明显的抑制作用。天然植物中广泛存在黄酮类化合物，已经发现许多黄酮类化合物有抗氧化、抗菌、抗癌防癌作用。我们在药物筛选时发现蛇葡萄素体外对肿瘤细胞有抑制作用。本实验研究发现蛇葡萄素体外对HL-60、K562和肝癌Bel-7402细胞生长有明显抑制作用。
1 材料与方法
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1.1 材料
蛇葡萄素是从植物无刺根中提取的单体化合物，用DMSO溶解成100mg/ml原液保存，使用时用PBS液稀释成不同浓度。噻唑兰(MTT)、RMPI-1640均为SIGMA公司产品。其他试剂国内购买。
1.2 MTT法检测增殖抑制作用
HL-60、K562和Bel-7402细胞株用含10%的小牛血清的RMPI-1640培养液培养。取对数生长期的细胞，用新鲜培养液稀释成2×104/ml,加入96孔板中，每孔加入0.2ml。培养48 h后，每孔加入10μl药物使其终浓度分别为100、50、25、12.5和6.25μg/ml，对照加入DMSO终浓度为0.1%或生理盐水。培养2 d后，每孔加入5mg/ml MTT 10μl,再培养4 h，去上清液，加入0.2ml DMSO完全显色后，酶标仪上576nm波长测定OD值。增殖抑制率=(OD对照组-OD药物组)/OD对照组×100%。
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2 结果
增殖抑制作用：蛇葡萄素在浓度为100、50、25、12.5、6.25μg/ml下，对Bel-7402、HL-60和K562细胞有明显抑制作用，抑制率IC50值分别为18.65(15.92～21.84)、12.41(10.40～14.78)和18.39(15.59～21.70)μg/ml。见表1。蛇葡萄素对肿瘤细胞的抑制作用可能是通过诱导凋亡，细胞周期停止或生长抑制，还需进一步研究。
表1 蛇葡萄素对肿瘤细胞的抑制作用 药物浓度(μg/ml)
抑制率(%)
HL-60
K562
Bel-7402
, 百拇医药
6.25
23.5±6.2
25.9±6.0
6.0±3.2
12.5
60.1±4.7
31.5±4.6
47.0±2.5
25
67.6±3.1
55.6±7.1
73.4±5.5
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50
88.2±3.2
83.3±2.4
79.5±1.7
100
94.1±5.1
88.9±3.1
82.3±1.9
IC50
12.4
18.39
18.65
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3 讨论
蛇葡萄素是从蛇葡萄属植物粤蛇葡萄中提取分离的单体化合物。Yang等[5]发现小叶蛇葡萄有抗肝炎病毒作用；hase K等[6]在Hovenia dulcis Thumb.植物中发现对由CCl4或半乳糖胺/脂多糖诱导的实验肝损害起保护作用的有效成分为蛇葡萄素。
蛇葡萄素属黄酮类化合物。许多种黄酮类化合物如槲皮素、大黄素、茶多酚、Genistein等均具有一定的抗肿瘤作用，它们能抑制多种信号转导分子如PKC、IP3、酪氨酸激酶等[7]；同时黄酮类化合物还有抗氧化、抑制DNA拓扑异构酶、DNA多聚酶等作用。另外还有诱导细胞分化作用。刘德育等[4]还研究了蛇葡萄素的小鼠急性毒性实验，LD50为1025mg/kg，本实验研究发现蛇葡萄素对HL-60、K562以及肝癌细胞株Bel-7402有明显的抑制作用，可见蛇葡萄素可能是一种低毒抗瘤作用的植物药，具有一定的开发前景，其体内抗瘤作用及作用机理还需要进一步实验研究。
, 百拇医药
参考文献
1.江苏新医学院.中药大辞典(上册).上海科学技术出版社，1986：342
2.王玫馨，刘文粢，黄爱东，等.无刺根黄酮类成分的分离和鉴定.中药材.1989，12(7)：618
3.刘德育，雷焕强.杨梅黄素及蛇葡萄素对酪氨酸激酶的抑制作用.生物化学杂志.1996，12(5)：618
4.刘德育，丘明祺，梁婷韵，等.无刺根中蛇葡萄素的提取及其对黑色素瘤的抑制作用.中山医科大学学报.1999，20(2)：127
5.Yang LL,Yen KY,Kiso Y,et al.Antihepatotoxic actions of Formosan plant drugs.J Ethnopharmacol.1987,19(1):103
, 百拇医药
6.Hase K,Ohsugim,Xiong Q,et al.Hepatoprotective effect of Hovenia dulcis Thumb on experimental liver injuries induced by carbon tetrachloride of dgalactosamine/lipopolysaccharide.Biol Pharm Bull.1997,20(4):381
7.Weber G,Shen F,Prajda N,et al.Regulation of the sigmal transduction program by drugs.Adv Enzyme Regul. 1997,37:35～55
(收稿：1999-08-09；修回：2000-03-15), 百拇医药
单位：周宁宁 朱孝峰 谢冰芬 冯公侃(中山医科大学肿瘤防治中心治疗基础室 广州 510060)；刘德育(中山医科大学肿瘤防治中心化学教研室 广州 510060)
关键词：
广东药学000403 摘要 目的：研究蛇葡萄素在体外对肿瘤细胞的生长抑制作用。方法：采用MTT法，检测蛇葡萄素对白血病细胞HL-60、K562以及肝癌Bel-7402细胞生长的抑制作用。结果：蛇葡萄素在浓度为100、50、25、12.5、6.25μg/ml下，对Bel-7402细胞增殖抑制率分别为82.3±19%、79.5±1.7%、73.4±5.5%、47.0±2.5%和6.0±3.2%，对HL-60、K562细胞增殖抑制率分别为94.1±5.1%、88.2±3.2%、67.6±3.1%、60.1±4.7%、23.5±6.2%和88.9±3.1%、83.3±2.4%、55.6±7.1%、31.5±4.6%、25.9±6.0%，抑制的IC50值分别为18.65(15.92、21.84)μg/ml、12.41(10.40、14.78)和18.39(15.59、21.70)μg/ml。结论：本研究结果显示蛇葡萄素对肿瘤细胞Bel-7402、HL-60和K562增殖有明显的抑制作用，可能具有较高的开发价值。
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关键词 蛇葡萄素 肝癌细胞 抑制作用
无刺根是葡萄科蛇葡萄属粤蛇葡萄[Ampelopsis cantoniensis(Hook.et Am.)Planch]的根或全株，主要盛产于我国华南一带，是民间的传统用药，广泛用于消炎解毒，治皮肤病、疖肿及骨髓炎、急性淋巴炎等感染性疾病[1]。蛇葡萄素(Ampelopsin)是粤蛇葡萄中提取的黄酮类单体化合物[2]。刘德育等[3、4]采用经改进的甲醇提取、水重结晶法提取分离得到蛇葡萄素，研究发现其对酪氨酸酶活性有明显的抑制作用，进一步研究发现对小鼠B16细胞有明显的抑制作用。天然植物中广泛存在黄酮类化合物，已经发现许多黄酮类化合物有抗氧化、抗菌、抗癌防癌作用。我们在药物筛选时发现蛇葡萄素体外对肿瘤细胞有抑制作用。本实验研究发现蛇葡萄素体外对HL-60、K562和肝癌Bel-7402细胞生长有明显抑制作用。
1 材料与方法
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1.1 材料
蛇葡萄素是从植物无刺根中提取的单体化合物，用DMSO溶解成100mg/ml原液保存，使用时用PBS液稀释成不同浓度。噻唑兰(MTT)、RMPI-1640均为SIGMA公司产品。其他试剂国内购买。
1.2 MTT法检测增殖抑制作用
HL-60、K562和Bel-7402细胞株用含10%的小牛血清的RMPI-1640培养液培养。取对数生长期的细胞，用新鲜培养液稀释成2×104/ml,加入96孔板中，每孔加入0.2ml。培养48 h后，每孔加入10μl药物使其终浓度分别为100、50、25、12.5和6.25μg/ml，对照加入DMSO终浓度为0.1%或生理盐水。培养2 d后，每孔加入5mg/ml MTT 10μl,再培养4 h，去上清液，加入0.2ml DMSO完全显色后，酶标仪上576nm波长测定OD值。增殖抑制率=(OD对照组-OD药物组)/OD对照组×100%。
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2 结果
增殖抑制作用：蛇葡萄素在浓度为100、50、25、12.5、6.25μg/ml下，对Bel-7402、HL-60和K562细胞有明显抑制作用，抑制率IC50值分别为18.65(15.92～21.84)、12.41(10.40～14.78)和18.39(15.59～21.70)μg/ml。见表1。蛇葡萄素对肿瘤细胞的抑制作用可能是通过诱导凋亡，细胞周期停止或生长抑制，还需进一步研究。
表1 蛇葡萄素对肿瘤细胞的抑制作用 药物浓度(μg/ml)
抑制率(%)
HL-60
K562
Bel-7402
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6.25
23.5±6.2
25.9±6.0
6.0±3.2
12.5
60.1±4.7
31.5±4.6
47.0±2.5
25
67.6±3.1
55.6±7.1
73.4±5.5
, http://www.100md.com
50
88.2±3.2
83.3±2.4
79.5±1.7
100
94.1±5.1
88.9±3.1
82.3±1.9
IC50
12.4
18.39
18.65
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3 讨论
蛇葡萄素是从蛇葡萄属植物粤蛇葡萄中提取分离的单体化合物。Yang等[5]发现小叶蛇葡萄有抗肝炎病毒作用；hase K等[6]在Hovenia dulcis Thumb.植物中发现对由CCl4或半乳糖胺/脂多糖诱导的实验肝损害起保护作用的有效成分为蛇葡萄素。
蛇葡萄素属黄酮类化合物。许多种黄酮类化合物如槲皮素、大黄素、茶多酚、Genistein等均具有一定的抗肿瘤作用，它们能抑制多种信号转导分子如PKC、IP3、酪氨酸激酶等[7]；同时黄酮类化合物还有抗氧化、抑制DNA拓扑异构酶、DNA多聚酶等作用。另外还有诱导细胞分化作用。刘德育等[4]还研究了蛇葡萄素的小鼠急性毒性实验，LD50为1025mg/kg，本实验研究发现蛇葡萄素对HL-60、K562以及肝癌细胞株Bel-7402有明显的抑制作用，可见蛇葡萄素可能是一种低毒抗瘤作用的植物药，具有一定的开发前景，其体内抗瘤作用及作用机理还需要进一步实验研究。
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参考文献
1.江苏新医学院.中药大辞典(上册).上海科学技术出版社，1986：342
2.王玫馨，刘文粢，黄爱东，等.无刺根黄酮类成分的分离和鉴定.中药材.1989，12(7)：618
3.刘德育，雷焕强.杨梅黄素及蛇葡萄素对酪氨酸激酶的抑制作用.生物化学杂志.1996，12(5)：618
4.刘德育，丘明祺，梁婷韵，等.无刺根中蛇葡萄素的提取及其对黑色素瘤的抑制作用.中山医科大学学报.1999，20(2)：127
5.Yang LL,Yen KY,Kiso Y,et al.Antihepatotoxic actions of Formosan plant drugs.J Ethnopharmacol.1987,19(1):103
, 百拇医药
6.Hase K,Ohsugim,Xiong Q,et al.Hepatoprotective effect of Hovenia dulcis Thumb on experimental liver injuries induced by carbon tetrachloride of dgalactosamine/lipopolysaccharide.Biol Pharm Bull.1997,20(4):381
7.Weber G,Shen F,Prajda N,et al.Regulation of the sigmal transduction program by drugs.Adv Enzyme Regul. 1997,37:35～55
(收稿：1999-08-09；修回：2000-03-15), 百拇医药