荧光分光光度法测定尿液中盐酸氟桂嗪浓度
作者：郭琦 王锦秋 杨云 明新
单位：郭琦(西安医科大学药学院 西安 710061)；王锦秋(西安医科大学第二临床医学院)；杨云(西安医科大学药学院 西安 710061)；明新(西安医科大学药学院 西安 710061)
关键词：盐酸氟桂嗪；荧光分光光度法；尿药浓度
广东药学000420 摘要 研究建立了尿液中盐酸氟桂嗪的荧光分光光度法。样品经NH3.H2O碱化后，用乙酸乙酯提取，水浴挥干乙酸乙酯，残留物用0.1ml/L HCl溶解，在激发波长260nm、发射波长310nm处测定荧光强度。尿液中盐酸氟桂嗪的最低检测浓度为10ng/ml，浓度在1.0～200.0μg/ml范围内线性关系良好(r=0.9813)。平均回收率为98.1%，RSD为5.7%(n=9)。
, http://www.100md.com 盐酸氟桂嗪(Flunarizine hydrochloride)是一选择性的钙离子拮抗剂[1]。临床上主要用于预防偏头痛发作，减轻脑和外周血管循环障碍的症状。本文建立了尿液中盐酸氟桂嗪的荧光分光光度法，取得了满意的结果，可为药代动力学及生物利用度研究提供一个简便、可行的检测方法。
1 材料与方法
1.1 仪器 日本岛津RF-540型荧光分光光度计，SK-1型振荡混匀器(中国深圳)，82-1型离心机。
1.2 试药 盐酸氟桂嗪标准品(西安杨森制药有限公司)，实验中所用试剂均为分析纯。
1.3 贮备液及标准溶液 精密称取适量盐酸氟桂嗪标准品溶于乙醇中，制成浓度为1.0mg/ml的标准贮备液。吸取一定量标准贮备液制成标准溶液(400μg/ml)。
, 百拇医药
1.4 荧光测定条件 激发波长/发射波长为260nm/310nm，狭缝3/3，信号增益4。
1.5 样品测定方法 取尿样1.0ml，加氨试液1.0ml、乙酸乙酯3.0ml，旋涡混匀30秒，离心(3000r/min)3min，移取有机层。再加入2.0ml乙酸乙酯复提一次，合并两次有机层，置85℃恒温水浴上挥干，残留物用0.1mol/L HCl 3.0ml溶解后测定荧光强度。
2 实验结果
2.1 荧光测定波长的选择 取一定量的盐酸氟桂嗪标准溶液，用0.1mol/L HCl制成浓度为20.0μg/ml的溶液，分别测绘激发光谱与发射光谱。结果表明，在0.1mol/L HCl溶液中盐酸氟桂嗪的激发波长(λex)和发射波长(λem)分别为260nm和310nm。
2.2 标准曲线的测定 在空白尿液中加入不同量的盐酸氟桂嗪标准溶液，制成浓度为1.0、8.0、20.0、40.0、100.0、200.0μg/ml的系列标准溶液。分别取1.0ml按样品测定方法处理后测定荧光强度，求得荧光强度(F)与盐酸氟桂嗪浓度(C)的回归方程为：C=5.572F-20.45,r=0.9813。结果表明盐酸氟桂嗪在1.0～200.0μg/ml范围内线性关系良好，最低检出浓度为10ng/ml。
, 百拇医药
2.3 回收率实验 于1.0ml空白尿液中加入不同量的盐酸氟桂嗪标准溶液，按“1.5”项下处理后测定荧光强度。计算回收率，结果见表1。
表1 回收率实验结果(n=3) 加入量
(μg)
测得量(
±s)
(μg)
回收率
(%)
RSD
(%)
20.0
, 百拇医药
19.43±1.32
97.13
6.80
50.0
47.66±6.02
98.66
8.02
100.0
98.61±3.76
98.61
3.81
3 讨论
, http://www.100md.com 3.1 在测定波长选择中曾考察过用甲醇、氯仿及0.1mol/L HCl-50%乙醇(1∶1)作溶剂，但荧光强度较低，不如文中以0.1mol/L HCl为溶剂好。
3.2 稳定性实验 取适量盐酸氟桂嗪标准溶液于1.0ml空白尿液中，按“1.5”项下进行操作，室温放置0、0.5、1、3、8、12h，测定荧光强度值基本稳定(ΔF=37.8,RSD=0.78%)，结果表明盐酸氟桂嗪至少在12h内稳定。
3.3 尿样提取溶剂的选择 在1.0ml空白尿样中加入一定量的盐酸氟桂嗪标准溶液，分别用3.0ml不同溶剂进行提取，均按“1.5”项下操作，同时做空白对照，测定荧光强度值见表2，结果以乙酸乙酯为提取溶剂效果最好。表2 尿样提取溶剂的选择实验(n=3) 溶剂
乙醚
二氯
, http://www.100md.com 甲烷
三氯
甲烷
乙酸
乙酯
正己烷
环己烷
ΔF
22.0
17.0
27.0
42.2
12.6
, 百拇医药 29.6
3.4 提取溶剂用量的选择 尿样按“1.5”项下操作，分别用不同量乙酸乙酯提取两次，同时做空白对照，测定F值(表3)。表3 乙酸乙酯用量对尿液样品提取实验(n=3) 乙酸乙酯(ml)
(a∶b)
2∶0
2∶1
3∶1
3∶2
4∶2
4∶3
ΔF
42.7
, http://www.100md.com
48.1
50.1
54.7
53.9
53.8
注：a.为第1次加入乙酸乙酯的体积
b.为第2次加入乙酸乙酯的体积
结果以5.0ml乙酸乙酯分2次提取(第1次3.0ml，第2次2.0ml)效果最佳。
3.5 样品碱化试剂及用量对荧光强度的影响
尿液样品的碱化试剂考察过NaOH试液和氨试液，结果以氨试液为好。经实验，结果以加入1.0ml氨试液所得荧光强度值最大。
3.6 本法可以定量测定人和动物的尿液药物浓度，操作简便、成本低、结果准确可靠，便于推广。
明新 本校96届毕业生
参考文献
1.李杰有，全壬午，王国显，等.盐酸氟桂嗪的用途.中国药学杂志.1994，29(4)：229
(收稿：1999-12-22；修回：2000-03-27), 百拇医药
单位：郭琦(西安医科大学药学院 西安 710061)；王锦秋(西安医科大学第二临床医学院)；杨云(西安医科大学药学院 西安 710061)；明新(西安医科大学药学院 西安 710061)
关键词：盐酸氟桂嗪；荧光分光光度法；尿药浓度
广东药学000420 摘要 研究建立了尿液中盐酸氟桂嗪的荧光分光光度法。样品经NH3.H2O碱化后，用乙酸乙酯提取，水浴挥干乙酸乙酯，残留物用0.1ml/L HCl溶解，在激发波长260nm、发射波长310nm处测定荧光强度。尿液中盐酸氟桂嗪的最低检测浓度为10ng/ml，浓度在1.0～200.0μg/ml范围内线性关系良好(r=0.9813)。平均回收率为98.1%，RSD为5.7%(n=9)。
, http://www.100md.com 盐酸氟桂嗪(Flunarizine hydrochloride)是一选择性的钙离子拮抗剂[1]。临床上主要用于预防偏头痛发作，减轻脑和外周血管循环障碍的症状。本文建立了尿液中盐酸氟桂嗪的荧光分光光度法，取得了满意的结果，可为药代动力学及生物利用度研究提供一个简便、可行的检测方法。
1 材料与方法
1.1 仪器 日本岛津RF-540型荧光分光光度计，SK-1型振荡混匀器(中国深圳)，82-1型离心机。
1.2 试药 盐酸氟桂嗪标准品(西安杨森制药有限公司)，实验中所用试剂均为分析纯。
1.3 贮备液及标准溶液 精密称取适量盐酸氟桂嗪标准品溶于乙醇中，制成浓度为1.0mg/ml的标准贮备液。吸取一定量标准贮备液制成标准溶液(400μg/ml)。
, 百拇医药
1.4 荧光测定条件 激发波长/发射波长为260nm/310nm，狭缝3/3，信号增益4。
1.5 样品测定方法 取尿样1.0ml，加氨试液1.0ml、乙酸乙酯3.0ml，旋涡混匀30秒，离心(3000r/min)3min，移取有机层。再加入2.0ml乙酸乙酯复提一次，合并两次有机层，置85℃恒温水浴上挥干，残留物用0.1mol/L HCl 3.0ml溶解后测定荧光强度。
2 实验结果
2.1 荧光测定波长的选择 取一定量的盐酸氟桂嗪标准溶液，用0.1mol/L HCl制成浓度为20.0μg/ml的溶液，分别测绘激发光谱与发射光谱。结果表明，在0.1mol/L HCl溶液中盐酸氟桂嗪的激发波长(λex)和发射波长(λem)分别为260nm和310nm。
2.2 标准曲线的测定 在空白尿液中加入不同量的盐酸氟桂嗪标准溶液，制成浓度为1.0、8.0、20.0、40.0、100.0、200.0μg/ml的系列标准溶液。分别取1.0ml按样品测定方法处理后测定荧光强度，求得荧光强度(F)与盐酸氟桂嗪浓度(C)的回归方程为：C=5.572F-20.45,r=0.9813。结果表明盐酸氟桂嗪在1.0～200.0μg/ml范围内线性关系良好，最低检出浓度为10ng/ml。
, 百拇医药
2.3 回收率实验 于1.0ml空白尿液中加入不同量的盐酸氟桂嗪标准溶液，按“1.5”项下处理后测定荧光强度。计算回收率，结果见表1。
表1 回收率实验结果(n=3) 加入量
(μg)
测得量(
±s)(μg)
回收率
(%)
RSD
(%)
20.0
, 百拇医药
19.43±1.32
97.13
6.80
50.0
47.66±6.02
98.66
8.02
100.0
98.61±3.76
98.61
3.81
3 讨论
, http://www.100md.com 3.1 在测定波长选择中曾考察过用甲醇、氯仿及0.1mol/L HCl-50%乙醇(1∶1)作溶剂，但荧光强度较低，不如文中以0.1mol/L HCl为溶剂好。
3.2 稳定性实验 取适量盐酸氟桂嗪标准溶液于1.0ml空白尿液中，按“1.5”项下进行操作，室温放置0、0.5、1、3、8、12h，测定荧光强度值基本稳定(ΔF=37.8,RSD=0.78%)，结果表明盐酸氟桂嗪至少在12h内稳定。
3.3 尿样提取溶剂的选择 在1.0ml空白尿样中加入一定量的盐酸氟桂嗪标准溶液，分别用3.0ml不同溶剂进行提取，均按“1.5”项下操作，同时做空白对照，测定荧光强度值见表2，结果以乙酸乙酯为提取溶剂效果最好。表2 尿样提取溶剂的选择实验(n=3) 溶剂
乙醚
二氯
, http://www.100md.com 甲烷
三氯
甲烷
乙酸
乙酯
正己烷
环己烷
ΔF
22.0
17.0
27.0
42.2
12.6
, 百拇医药 29.6
3.4 提取溶剂用量的选择 尿样按“1.5”项下操作，分别用不同量乙酸乙酯提取两次，同时做空白对照，测定F值(表3)。表3 乙酸乙酯用量对尿液样品提取实验(n=3) 乙酸乙酯(ml)
(a∶b)
2∶0
2∶1
3∶1
3∶2
4∶2
4∶3
ΔF
42.7
, http://www.100md.com
48.1
50.1
54.7
53.9
53.8
注：a.为第1次加入乙酸乙酯的体积
b.为第2次加入乙酸乙酯的体积
结果以5.0ml乙酸乙酯分2次提取(第1次3.0ml，第2次2.0ml)效果最佳。
3.5 样品碱化试剂及用量对荧光强度的影响
尿液样品的碱化试剂考察过NaOH试液和氨试液，结果以氨试液为好。经实验，结果以加入1.0ml氨试液所得荧光强度值最大。
3.6 本法可以定量测定人和动物的尿液药物浓度，操作简便、成本低、结果准确可靠，便于推广。
明新 本校96届毕业生
参考文献
1.李杰有，全壬午，王国显，等.盐酸氟桂嗪的用途.中国药学杂志.1994，29(4)：229
(收稿：1999-12-22；修回：2000-03-27), 百拇医药