血管紧张素Ⅰ转换酶基因多态性与2型糖尿病缺血性脑病相关性研究
http://www.100md.com
中国糖尿病杂志 2000年第4期第8卷 短篇报道
山东医科大学附属医院内分泌科(邮政编码 250012);南海荣 王德全 许玲 徐金元 李甲芬(现在山东省滨州地区人民医院内分泌科) 南海荣 王德全 许玲 徐金元 李甲芬
关键词:
摘要:
中国糖尿病杂志000419 中国糖尿病性脑血管病发生率为3.63%~17.19%[1],尤 其是在2型糖尿病患者中,其患病率高,发病早,易反复发生,严重威胁糖尿病患者的生命 及生活质量。近年来,多采用研究候选基因这一方法,从分子遗传学角度探讨其发病机制。 肾素-血管紧张素系统(RAS)在调节血压和水、电解质平衡中起重要作用,血管紧张素Ⅰ 转换酶(ACE)基因是RAS系统的重要组成部分,其插入/缺失(I/D)多态性和脑血管病有关 [2]。我们利用PCR技术,研究了中国汉族人2型糖尿病缺血性脑病和ACE基因I/D多态性 的关系,报告如下。
, 百拇医药
对象与方法
一、对象
收集1997年7月~1998年12月在滨州地区人民医院及山东医科大学附属医院就诊或查体无 血缘关系的汉族人168例,分为二组。
1.2型糖尿病(DM)组:104例,年龄63.4±6.8岁,男61例,女43例,病程6.8±5.1(0~22)年 。按WHO 1985年诊断标准进一步分为2个亚组:糖尿病伴缺血性脑病组[DM-IC(+)],51 例,年龄64.3±6.1岁,男30例,女21例,病程7.8±4.7(0~20)年;糖尿病无缺血性脑病组 [DM-IC(-)],53例,年龄62.3±7.3岁,男31例,女22例,病程6.5±4.6(0~22)年。
2.健康对照(C)组:64例,年龄60.1±7.6岁,男38例,女26例,均无血缘关系,无糖尿病, 无缺血性脑病史。
, 百拇医药
二、方法
所有研究对象经空腹12~14小时后,于次晨采集静脉血3ml,EDTA抗凝,用异硫氰酸胍无毒 抽提法[3]从白细胞中提取DNA。基因扩增引物由上海细胞生物研究所合成。引物序 列为:①5′-CTG GAG ACC ACT CCC ATC CTT TCT-3′;②5′-GAT GTG GTG GCC ATC AC A TTC ATC AGA T-3′。25μl的PCR反应体系中含模板DNA 1μg,Tag酶(Promega公司)1U, 4dNTp(Promega公司)各1μl,引物各1μl,25μmo/氯化镁1μ1,10×缓冲夜5μ1。在PCR 仪上94℃预变性1分钟,然后扩
附表 2型糖尿病者和健康对照者ACE基因第16内含子I/D多 态等位基因及
基因型频率比较(%,例) 类别
例数
, http://www.100md.com
等位基因
基因型
D
I
DD
ID
II
DM总组
104
47.6(99)
52.4(109)
26.9(28)
41.4(43)
, http://www.100md.com
31.7(33)[ BHDWG1*2〗DM-IC(+)组
51
66.7(68)
33.3(34)
43.1(22)
47.1(24)
9.8(5)
DM-IC(-)组
53
29.3(31)
71.7(75)
, http://www.100md.com
11.4(6)
35.8(19)
52.8(28)
C组
64
39.1(50)
60.9(78)
17.2(11)
43.7(28)
39.1(25 )
DM-IC(+)组与C组及DM-IC(-)组比较 P<0.001,P<0.01
, 百拇医药
增35个循环:94℃变性45秒、55℃退火35秒、72℃延伸70秒,最后72 ℃延伸4分钟。取PCR产物8μ1,在2%琼脂糖凝胶上电泳观察结果。取空腹静脉血3ml,测定 空腹血糖(FBG)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Cr)、高密度脂蛋 白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)等。
三、统计学处理
采用Microsoft公司SAS6.11统计软件,计数资料的比较使用χ2检验,用Logistic回归法 分析各检测指标与糖尿病缺血性脑病的相关性及参与发病的独立性,以比数比表示各检测指 标参与发病的风险率。
结 果
一、ACE基因型分布(附表)
以DM组与C组比较,ACE(I/D)的等位基因及基因型频率间均无显著性差异。DM-IC(+)组D型 等位基因(66.7%)和DD基因型(43.1%)频率高于C组(39.1%和17.2%)(χ2分别为17.3和9.34 ,P分别为<0.001和<0.01)和DM-IC(-)组29.3%和11.4%(χ2分别为29.2和13.4,P 均<0.001),II基因型频率(9.8%)显著低于C组(39.1%)(χ2为12.6)和DM-IC(-)组(52.8% )(χ2为22.2,P均<0.001)。DM-IC(-)组和C组的D型等位基因和DD基因型频率无显著 性差异(P均>0.05)。
, 百拇医药
二、2型糖尿病缺血性脑病危险因素分析
多变量Logistic回归分析结果:DD、ID基因型及收缩压与缺血性脑病相关(P分别为0.00 1,0.021,0.050),其比数比分别为3.5(2.1~6.5)、2.4(1.3~4.7)、1.9(1.1~3.8)。
讨 论
ACE基因是RAS系统的重要组成部分,它催化10肽血管紧张素Ⅰ转化为强缩血管物 质--8肽血管紧张素Ⅱ,并灭活有舒血管作用的缓激肽。编码ACE的基因位于人17q2.3, 含有26个外显子和25个内含子,其16内含子I/D多态性和血浆ACE水平有关,DD型纯合子血浆 ACE水平增高[4,5]。
Catto等[2]研究发现,携带D型等位基因脑缺血患者急性期死亡危险性增加。Kario 等[6]研究结论认为,D型等位基因与日本高血压患者缺血性脑病相关,而且可能是 高血压患者发生脑血管病的独立危险因素。本组结果提示:ACE基因I/D多态性与中国2型糖 尿病缺血性脑病相关,D型等位基因参与后者的发病。
, http://www.100md.com
糖尿病缺血性脑病的发病与大、微血管病变均有关,而且脂代谢紊乱、高胰岛素血症、多元 醇途径代谢障碍等诸多因素亦参与其中。近年研究发现D型等位基因是糖尿病患者颈动脉管 壁增厚的危险因子[7]。颈动脉壁增厚是脑缺血的直接原因。我们的研究对象为中 国汉族人,两组患者病史、吸烟史、饮酒史等均有可比性。计数等位基因频率后,经检验符 合Hardy-weinburg平衡。本研究提示:ACE基因第16内含子I/D多态性与2型糖尿病缺血性脑 病相关,D型等位基因是后者的重要危险因子,II基因型可能是保护性因子,在2型糖尿病患 者中检测ACE基因I/D多态,有利于确定、监测缺血性脑病高危人群,以便及早预防、治疗。
参 考 文 献
1,蒋国彦.实用糖尿病学.第一版.北京:人民卫生出版社.1992:36.
2,Catto A,Carte AM,Barrett JH,et al.Angiotensin-converting enzyme insertion/del etion polymorphism and cerebrovascular disease.Stroke,1996,27:435.
, 百拇医药
3,马维芳,张基增,徐湘民.用异硫氰酸胍自外周血抽提DNA,临床检验杂志,1995,13:14 2.
4,Hubert C,Houot AM,Corvol P,et al.Structure of the angiotensin I converting enz yme gene.J Biol Chem,1991,266:15377.
5,Tiret L,Rigat B,Visvikis S,et al.Evidence from combined segregation and linkag e analysis that a variant of the angiotensin I converting enzyme gene controls p lasma ACE levels.Am J Genet,1992,51:197.
6,Kario K,Kanai N,Saito K,et al.Ischemic stroke and the gene for angiotensin-co nverting enzyme in Japanese hypertensins.Circulation,1996,93:1630.
7,Hosoi M,Nishizawa Y,Kogawa K,et al.Angiotensin-converting enzyme gene polymor phism is associated with arterial wall thickness in non-insulin dependent diabe tic patients.Circulation,1996,94:704.
收稿:1998-10-26
修回:2000-01-28, 百拇医药
关键词:
摘要:
中国糖尿病杂志000419 中国糖尿病性脑血管病发生率为3.63%~17.19%[1],尤 其是在2型糖尿病患者中,其患病率高,发病早,易反复发生,严重威胁糖尿病患者的生命 及生活质量。近年来,多采用研究候选基因这一方法,从分子遗传学角度探讨其发病机制。 肾素-血管紧张素系统(RAS)在调节血压和水、电解质平衡中起重要作用,血管紧张素Ⅰ 转换酶(ACE)基因是RAS系统的重要组成部分,其插入/缺失(I/D)多态性和脑血管病有关 [2]。我们利用PCR技术,研究了中国汉族人2型糖尿病缺血性脑病和ACE基因I/D多态性 的关系,报告如下。
, 百拇医药
对象与方法
一、对象
收集1997年7月~1998年12月在滨州地区人民医院及山东医科大学附属医院就诊或查体无 血缘关系的汉族人168例,分为二组。
1.2型糖尿病(DM)组:104例,年龄63.4±6.8岁,男61例,女43例,病程6.8±5.1(0~22)年 。按WHO 1985年诊断标准进一步分为2个亚组:糖尿病伴缺血性脑病组[DM-IC(+)],51 例,年龄64.3±6.1岁,男30例,女21例,病程7.8±4.7(0~20)年;糖尿病无缺血性脑病组 [DM-IC(-)],53例,年龄62.3±7.3岁,男31例,女22例,病程6.5±4.6(0~22)年。
2.健康对照(C)组:64例,年龄60.1±7.6岁,男38例,女26例,均无血缘关系,无糖尿病, 无缺血性脑病史。
, 百拇医药
二、方法
所有研究对象经空腹12~14小时后,于次晨采集静脉血3ml,EDTA抗凝,用异硫氰酸胍无毒 抽提法[3]从白细胞中提取DNA。基因扩增引物由上海细胞生物研究所合成。引物序 列为:①5′-CTG GAG ACC ACT CCC ATC CTT TCT-3′;②5′-GAT GTG GTG GCC ATC AC A TTC ATC AGA T-3′。25μl的PCR反应体系中含模板DNA 1μg,Tag酶(Promega公司)1U, 4dNTp(Promega公司)各1μl,引物各1μl,25μmo/氯化镁1μ1,10×缓冲夜5μ1。在PCR 仪上94℃预变性1分钟,然后扩
附表 2型糖尿病者和健康对照者ACE基因第16内含子I/D多 态等位基因及
基因型频率比较(%,例) 类别
例数
, http://www.100md.com
等位基因
基因型
D
I
DD
ID
II
DM总组
104
47.6(99)
52.4(109)
26.9(28)
41.4(43)
, http://www.100md.com
31.7(33)[ BHDWG1*2〗DM-IC(+)组
51
66.7(68)
33.3(34)
43.1(22)
47.1(24)
9.8(5)
DM-IC(-)组
53
29.3(31)
71.7(75)
, http://www.100md.com
11.4(6)
35.8(19)
52.8(28)
C组
64
39.1(50)
60.9(78)
17.2(11)
43.7(28)
39.1(25 )
DM-IC(+)组与C组及DM-IC(-)组比较 P<0.001,P<0.01
, 百拇医药
增35个循环:94℃变性45秒、55℃退火35秒、72℃延伸70秒,最后72 ℃延伸4分钟。取PCR产物8μ1,在2%琼脂糖凝胶上电泳观察结果。取空腹静脉血3ml,测定 空腹血糖(FBG)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Cr)、高密度脂蛋 白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)等。
三、统计学处理
采用Microsoft公司SAS6.11统计软件,计数资料的比较使用χ2检验,用Logistic回归法 分析各检测指标与糖尿病缺血性脑病的相关性及参与发病的独立性,以比数比表示各检测指 标参与发病的风险率。
结 果
一、ACE基因型分布(附表)
以DM组与C组比较,ACE(I/D)的等位基因及基因型频率间均无显著性差异。DM-IC(+)组D型 等位基因(66.7%)和DD基因型(43.1%)频率高于C组(39.1%和17.2%)(χ2分别为17.3和9.34 ,P分别为<0.001和<0.01)和DM-IC(-)组29.3%和11.4%(χ2分别为29.2和13.4,P 均<0.001),II基因型频率(9.8%)显著低于C组(39.1%)(χ2为12.6)和DM-IC(-)组(52.8% )(χ2为22.2,P均<0.001)。DM-IC(-)组和C组的D型等位基因和DD基因型频率无显著 性差异(P均>0.05)。
, 百拇医药
二、2型糖尿病缺血性脑病危险因素分析
多变量Logistic回归分析结果:DD、ID基因型及收缩压与缺血性脑病相关(P分别为0.00 1,0.021,0.050),其比数比分别为3.5(2.1~6.5)、2.4(1.3~4.7)、1.9(1.1~3.8)。
讨 论
ACE基因是RAS系统的重要组成部分,它催化10肽血管紧张素Ⅰ转化为强缩血管物 质--8肽血管紧张素Ⅱ,并灭活有舒血管作用的缓激肽。编码ACE的基因位于人17q2.3, 含有26个外显子和25个内含子,其16内含子I/D多态性和血浆ACE水平有关,DD型纯合子血浆 ACE水平增高[4,5]。
Catto等[2]研究发现,携带D型等位基因脑缺血患者急性期死亡危险性增加。Kario 等[6]研究结论认为,D型等位基因与日本高血压患者缺血性脑病相关,而且可能是 高血压患者发生脑血管病的独立危险因素。本组结果提示:ACE基因I/D多态性与中国2型糖 尿病缺血性脑病相关,D型等位基因参与后者的发病。
, http://www.100md.com
糖尿病缺血性脑病的发病与大、微血管病变均有关,而且脂代谢紊乱、高胰岛素血症、多元 醇途径代谢障碍等诸多因素亦参与其中。近年研究发现D型等位基因是糖尿病患者颈动脉管 壁增厚的危险因子[7]。颈动脉壁增厚是脑缺血的直接原因。我们的研究对象为中 国汉族人,两组患者病史、吸烟史、饮酒史等均有可比性。计数等位基因频率后,经检验符 合Hardy-weinburg平衡。本研究提示:ACE基因第16内含子I/D多态性与2型糖尿病缺血性脑 病相关,D型等位基因是后者的重要危险因子,II基因型可能是保护性因子,在2型糖尿病患 者中检测ACE基因I/D多态,有利于确定、监测缺血性脑病高危人群,以便及早预防、治疗。
参 考 文 献
1,蒋国彦.实用糖尿病学.第一版.北京:人民卫生出版社.1992:36.
2,Catto A,Carte AM,Barrett JH,et al.Angiotensin-converting enzyme insertion/del etion polymorphism and cerebrovascular disease.Stroke,1996,27:435.
, 百拇医药
3,马维芳,张基增,徐湘民.用异硫氰酸胍自外周血抽提DNA,临床检验杂志,1995,13:14 2.
4,Hubert C,Houot AM,Corvol P,et al.Structure of the angiotensin I converting enz yme gene.J Biol Chem,1991,266:15377.
5,Tiret L,Rigat B,Visvikis S,et al.Evidence from combined segregation and linkag e analysis that a variant of the angiotensin I converting enzyme gene controls p lasma ACE levels.Am J Genet,1992,51:197.
6,Kario K,Kanai N,Saito K,et al.Ischemic stroke and the gene for angiotensin-co nverting enzyme in Japanese hypertensins.Circulation,1996,93:1630.
7,Hosoi M,Nishizawa Y,Kogawa K,et al.Angiotensin-converting enzyme gene polymor phism is associated with arterial wall thickness in non-insulin dependent diabe tic patients.Circulation,1996,94:704.
收稿:1998-10-26
修回:2000-01-28, 百拇医药