系统性红斑狼疮病人HLA-Ⅲ类抗原 C4 Bf同种异型的检测
作者：陈盛强 陈柏铭 陈明春
单位：陈盛强(510182广州医学院检验系)；陈柏铭(510182广州医学院检验系)；陈明春(中山医科大学附属第二医院皮肤科)
关键词：
中华风湿病学杂志000418 系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematous,SLE)是一种累及全身多器官，呈现许多复杂症状及体征、伴有多种免疫异常、多发于女性的自身免疫性疾病，其病因及发病机制尚未完全清楚，此病发病率高，预后不良。SLE病人有较多方面的补体变化，如补体两条途径50%的溶血活性下降，C3、C4含量降低，C4Q0增加等。补体C4、Bf定位于HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗原之间，亦具有复杂的遗传多态性，为了解不同地区的SLE病人的C4、Bf别型的变化，我们对广东籍的SLE病人的C4、Bf别型进行了检测，现报道如下。
1 资料与方法
, 百拇医药
1.1 一般资料：65例份肝素抗凝血浆采自中山医科大学附属第二医院皮肤科SLE专科门诊。SLE的诊断符合1982年修订的美国风湿病协会(ARA)规定的标准。110名正常人血浆取自广州医学院卫生所体检正常的健康人，其相互间无血缘关系。病人组及对照组均是广东籍汉族人。标本分装后于-70 ℃保存，6个月内检测完毕。
1.2 方法：参照Zhang等[1]推荐的两酶法(神经氨酸酶+羧肽酶B)对血浆进行消化透析，然后进行琼脂糖高压电泳与免疫固定，Bf的检测方法采用琼脂糖高压电泳加免疫固定技术。C4、Bf标准品由同济医科大学中澳友谊补体实验室赠送，抗C4、Bf血清购自上海静安区医化所。
1.3 命名和统计：C4命名参照第四届国际补体遗传专题讨论会上C4命名小组提出的别型的共同命名法[2]，Bf命名采用Mauff等[3]提出的命名法命名，基因频率的计算采用直接计数法[4]，并计算其正常对照的相对危险度(RR)及其显著性检验。
, 百拇医药
2 结 果
2.1 SLE病人与正常人C4基因频率的比较：见表1。
表1 SLE病人与正常人C4基因频率的比较 基因型
SLE (65例)
正常人(98名)
基因数
频率
基因数
频率
C4A5
2
0.015 4
, 百拇医药
5
0.025 5
C4A4
12
0.092 3
26
0.132 7
C4A3
56*
0.430 8
124
0.632 7
C4A2
, http://www.100md.com
11
0.084 6
18
0.091 8
C4A1
0
0.000 0
3
0.005 3
Q0
43*
0.330 8
20
, 百拇医药
0.102 0
C4B5
0
0.000 0
3
0.015 2
C4B3
4
0.030 8
2
0.010 2
C4B2
27
, http://www.100md.com
0.207 8
87
0.441 6
C4B1
50
0.384 6
90
0.456 9
C4B92
0
0.000 0
1
0.005 1
, http://www.100md.com
C4B96
2
0.015 4
3
0.015 2
Q0
41*
0.315 4
11
0.055 8
注：*与对照组比较P<0.001
2.2 SLE病人与正常人Bf基因频率的比较：见表2。
, http://www.100md.com
表2 SLE病人与正常人Bf基因频率的比较 基因型
SLE (65例)
正常人(110名)
基因数
频率
基因数
频率
S
98
0.753 9
184
0.830 4
, 百拇医药
F
30
0.246 1*
31
0.140 9
S07
—
—
2
0.009 1
S025
—
—
, http://www.100md.com
2
0.009 1
S055
—
—
1
0.004 5
注：*与对照组比较P<0.05
我们在98例正常人中检出C4A五型，C4B六型，而在SLE病人组中检出C4A四型，C4B四型。从表中可以看出，病人C4各基因与正常人相比都有不同的变化，其中C4A3，C4B1，C4*B2基因频率降低，C4*AQ0，C4*BQ0频率明显增高，对它们进行显著性检验则只有C4*A3，C4*AQ0，C4*BQ0有统计学上的差异(P<0.001)。SLE病人的Bf检出SS、FS、FF三种常见表型，而未检出罕见型，与正常对比可见SLE病人的F基因频率增高(P<0.05)。
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3 讨 论
由于HLA具有高度的遗传多态性，并且被认为免疫应答基因和疾病易感有关，因此研究HLA抗原与疾病的关联有重要意义。对于HLA-Ⅰ及Ⅱ类抗原与SLE的关系，国外已有众多报道[5-7]，至少发现DR2、DR5、B8与之相关，并且也发现HLA-Ⅲ类抗原与SLE相关，但国内的报道不多，因HLA-Ⅲ类抗原(C2、C4、Bf)亦具有明显的多态性，特别是C4其别型变化高达40多种。因此研究与疾病的关联时，C4同种异型的变化值得注意。C4的主要功能分段C4b通过C4b/C3b受体结合，对清除免疫复合物甚为重要，故C4Q0的增加就使免疫复合物清除不全而容易出现自身免疫性疾病。本文的检测结果表明，C4*AQ0，C4*BQ0明显增高，差异有非常显著性，这与国内外的一些报道是相似的[5，6，8]。以往检查多种疾病如，Graves氏病、胰岛素依赖型糖尿病等与Bf的关系时发现BfF频率升高，因此有学者提出Bf*F可能为与致病有关的基因；由此而减少的Bf*S为“保护性基因”。本研究中，同样发现Bf*F基因频率升高，亦支持这个见解。由于HLA系统的抗原具有两个特点：①同一座位的抗原之间相互排斥，某座位上的一个抗原在一个方面上的改变造成该座位上的其他抗原频率的相反方向的变化；②不同位座位之间的连锁不平衡。因此本文得到的C4*A3，C4*B1，C4*B2基因频率的下降究竟是由于C4*AQ0，C4*BQ0的频率上升所致的继发性改变抑或确是真实情况，还有待继续进一步做家系调查求取补体型及MHC扩展单倍型的研究。
, 百拇医药
参 考 文 献
1.Zhang WJ,Kay PH,Cobain TJ,et al.C4 allotyping on plasma or serum:application to routine laboratories.Human Immunol,1998,21:165.
2.Mauff G,Alper CA,Awdch Z,et al.Statement on the nomenclature of human C4 allotypes.Immunobiology,1983,164:184.
3.Mauff G,Hauptmann G,Hitzeroth HW,et al.The nomenclature of properdin factor B allotypes.Z Immunitaets Forwd,1978,154:115.
, http://www.100md.com
4.赵桐茂.HLA分型原理和应用.上海：上海科学技术出版社，1984.208-240.
5.Sjoholm AG,Kjellman NI,Low B,et al.C4 allotypes and HLA-DR antigens in the family of a patient with C4 deficiency.Clin Genet,1985,28:385.
6.Fielder AHL,Walpor MJ,Batchelor JR,et al.Family study of the majar histocompatibity complex in patients with systemic lupus erythimatous:importance of null alleles of C4A and C4B in determining disease susceptitility.Br Med J,1983,286:385.
7.Reveille JD,Arnett FC,Wilson RW,et al.Null alleles of the fourth component of complement and HLA haplotypes in familial systemic lupus erythematous.Immunogenetics,1985,21:299.
8.赵修竹，张文杰，田延武，等.全身性红斑狼疮病人补体第四成分(C4)的别型变化及C4Q0的检出频率.科学通报，1988，13：1030.
(收稿：2000-03-30), 百拇医药
单位：陈盛强(510182广州医学院检验系)；陈柏铭(510182广州医学院检验系)；陈明春(中山医科大学附属第二医院皮肤科)
关键词：
中华风湿病学杂志000418 系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematous,SLE)是一种累及全身多器官，呈现许多复杂症状及体征、伴有多种免疫异常、多发于女性的自身免疫性疾病，其病因及发病机制尚未完全清楚，此病发病率高，预后不良。SLE病人有较多方面的补体变化，如补体两条途径50%的溶血活性下降，C3、C4含量降低，C4Q0增加等。补体C4、Bf定位于HLA-Ⅰ、Ⅱ类抗原之间，亦具有复杂的遗传多态性，为了解不同地区的SLE病人的C4、Bf别型的变化，我们对广东籍的SLE病人的C4、Bf别型进行了检测，现报道如下。
1 资料与方法
, 百拇医药
1.1 一般资料：65例份肝素抗凝血浆采自中山医科大学附属第二医院皮肤科SLE专科门诊。SLE的诊断符合1982年修订的美国风湿病协会(ARA)规定的标准。110名正常人血浆取自广州医学院卫生所体检正常的健康人，其相互间无血缘关系。病人组及对照组均是广东籍汉族人。标本分装后于-70 ℃保存，6个月内检测完毕。
1.2 方法：参照Zhang等[1]推荐的两酶法(神经氨酸酶+羧肽酶B)对血浆进行消化透析，然后进行琼脂糖高压电泳与免疫固定，Bf的检测方法采用琼脂糖高压电泳加免疫固定技术。C4、Bf标准品由同济医科大学中澳友谊补体实验室赠送，抗C4、Bf血清购自上海静安区医化所。
1.3 命名和统计：C4命名参照第四届国际补体遗传专题讨论会上C4命名小组提出的别型的共同命名法[2]，Bf命名采用Mauff等[3]提出的命名法命名，基因频率的计算采用直接计数法[4]，并计算其正常对照的相对危险度(RR)及其显著性检验。
, 百拇医药
2 结 果
2.1 SLE病人与正常人C4基因频率的比较：见表1。
表1 SLE病人与正常人C4基因频率的比较 基因型
SLE (65例)
正常人(98名)
基因数
频率
基因数
频率
C4A5
2
0.015 4
, 百拇医药
5
0.025 5
C4A4
12
0.092 3
26
0.132 7
C4A3
56*
0.430 8
124
0.632 7
C4A2
, http://www.100md.com
11
0.084 6
18
0.091 8
C4A1
0
0.000 0
3
0.005 3
Q0
43*
0.330 8
20
, 百拇医药
0.102 0
C4B5
0
0.000 0
3
0.015 2
C4B3
4
0.030 8
2
0.010 2
C4B2
27
, http://www.100md.com
0.207 8
87
0.441 6
C4B1
50
0.384 6
90
0.456 9
C4B92
0
0.000 0
1
0.005 1
, http://www.100md.com
C4B96
2
0.015 4
3
0.015 2
Q0
41*
0.315 4
11
0.055 8
注：*与对照组比较P<0.001
2.2 SLE病人与正常人Bf基因频率的比较：见表2。
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表2 SLE病人与正常人Bf基因频率的比较 基因型
SLE (65例)
正常人(110名)
基因数
频率
基因数
频率
S
98
0.753 9
184
0.830 4
, 百拇医药
F
30
0.246 1*
31
0.140 9
S07
—
—
2
0.009 1
S025
—
—
, http://www.100md.com
2
0.009 1
S055
—
—
1
0.004 5
注：*与对照组比较P<0.05
我们在98例正常人中检出C4A五型，C4B六型，而在SLE病人组中检出C4A四型，C4B四型。从表中可以看出，病人C4各基因与正常人相比都有不同的变化，其中C4A3，C4B1，C4*B2基因频率降低，C4*AQ0，C4*BQ0频率明显增高，对它们进行显著性检验则只有C4*A3，C4*AQ0，C4*BQ0有统计学上的差异(P<0.001)。SLE病人的Bf检出SS、FS、FF三种常见表型，而未检出罕见型，与正常对比可见SLE病人的F基因频率增高(P<0.05)。
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3 讨 论
由于HLA具有高度的遗传多态性，并且被认为免疫应答基因和疾病易感有关，因此研究HLA抗原与疾病的关联有重要意义。对于HLA-Ⅰ及Ⅱ类抗原与SLE的关系，国外已有众多报道[5-7]，至少发现DR2、DR5、B8与之相关，并且也发现HLA-Ⅲ类抗原与SLE相关，但国内的报道不多，因HLA-Ⅲ类抗原(C2、C4、Bf)亦具有明显的多态性，特别是C4其别型变化高达40多种。因此研究与疾病的关联时，C4同种异型的变化值得注意。C4的主要功能分段C4b通过C4b/C3b受体结合，对清除免疫复合物甚为重要，故C4Q0的增加就使免疫复合物清除不全而容易出现自身免疫性疾病。本文的检测结果表明，C4*AQ0，C4*BQ0明显增高，差异有非常显著性，这与国内外的一些报道是相似的[5，6，8]。以往检查多种疾病如，Graves氏病、胰岛素依赖型糖尿病等与Bf的关系时发现BfF频率升高，因此有学者提出Bf*F可能为与致病有关的基因；由此而减少的Bf*S为“保护性基因”。本研究中，同样发现Bf*F基因频率升高，亦支持这个见解。由于HLA系统的抗原具有两个特点：①同一座位的抗原之间相互排斥，某座位上的一个抗原在一个方面上的改变造成该座位上的其他抗原频率的相反方向的变化；②不同位座位之间的连锁不平衡。因此本文得到的C4*A3，C4*B1，C4*B2基因频率的下降究竟是由于C4*AQ0，C4*BQ0的频率上升所致的继发性改变抑或确是真实情况，还有待继续进一步做家系调查求取补体型及MHC扩展单倍型的研究。
, 百拇医药
参 考 文 献
1.Zhang WJ,Kay PH,Cobain TJ,et al.C4 allotyping on plasma or serum:application to routine laboratories.Human Immunol,1998,21:165.
2.Mauff G,Alper CA,Awdch Z,et al.Statement on the nomenclature of human C4 allotypes.Immunobiology,1983,164:184.
3.Mauff G,Hauptmann G,Hitzeroth HW,et al.The nomenclature of properdin factor B allotypes.Z Immunitaets Forwd,1978,154:115.
, http://www.100md.com
4.赵桐茂.HLA分型原理和应用.上海：上海科学技术出版社，1984.208-240.
5.Sjoholm AG,Kjellman NI,Low B,et al.C4 allotypes and HLA-DR antigens in the family of a patient with C4 deficiency.Clin Genet,1985,28:385.
6.Fielder AHL,Walpor MJ,Batchelor JR,et al.Family study of the majar histocompatibity complex in patients with systemic lupus erythimatous:importance of null alleles of C4A and C4B in determining disease susceptitility.Br Med J,1983,286:385.
7.Reveille JD,Arnett FC,Wilson RW,et al.Null alleles of the fourth component of complement and HLA haplotypes in familial systemic lupus erythematous.Immunogenetics,1985,21:299.
8.赵修竹，张文杰，田延武，等.全身性红斑狼疮病人补体第四成分(C4)的别型变化及C4Q0的检出频率.科学通报，1988，13：1030.
(收稿：2000-03-30), 百拇医药