TAME法测定金龙消栓合剂中吲激酶单位效价
作者：焦连庆 于敏 黄青 张志伟 何亚全
单位：焦连庆 于敏 黄青 张志伟(吉林省中医中药研究院长春 130021)；何亚全(长春市儿童医院药剂科)
关键词：
中草药000415 金龙消栓合剂由地龙、川芎等5 味中药组成，具有化痰熄风，祛瘀通络之功，用于中风引起的半身不遂，口舌歪斜等症。地龙为其主药，其有效成分为纤溶蛋白水解酶。为了控制该药品内在质量，我们对其酶活性进行效价测定。蚓激酶的效价测定有对甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯法(TAME)、尿激酶琼脂糖-纤维蛋白平板法及组织纤溶酶原激活剂琼脂-纤维蛋白平板法[1]。我们采用TAME法，并对其进行了一些改变，以期对中药复方中酶活力的效价测定也能够运用。
1 实验部分
1.1 仪器与试药：紫外光谱分光光度仪U-3400(日本)，超级恒温水浴(重庆试验设备厂CS50型)，金龙消栓合剂(辽宁微生物研究所制药厂)；试剂均为AR级。
, 百拇医药
1.2 对照品溶液制备：精密量取甲醇0.1 mL，置25 mL量瓶中，加磷酸盐缓冲液(0.1 mol/L，pH 8.0，以下同)至刻度，摇匀。取此液0.2 mL，置5 mL量瓶中，以磷酸盐缓冲液稀释至刻度，摇匀。
1.3 供试品溶液的制备：精密量取本品2.0 mL(相当于0.24 g生药)，置250 mL量瓶中，加入磷酸缓冲液稀释至刻度，摇匀。
1.4 测定方法
1.4.1 线性关系考查：取试管12 支，6 管分别加入磷酸盐缓冲液(mL)0.30，0.25，0.20，0.15，0.10，0.05，1 支空白管不加，其余分别加入标准甲醇液(mL)0.05，0.10，0.15，0.20，0.25，各管加入15%三氯醋酸溶液0.2 mL，2%高锰酸钾溶液0.1 mL，振摇90 s，各管加入10%无水亚硫酸钠溶液0.1 mL和0.4%变色酸67%(g/g)硫酸溶液40 mL，然后放入沸水浴煮沸25 min，取出置冷水浴中10 min，照分光光度法[2]在575 nm波长处测定吸光度。
, 百拇医药
以甲醇量为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线，回归方程Y=2.242×10-3+0.507 4X，r=0.998 9，Y=-3.762×10-3+0.520 6X，r=0.9997。
吸收波长的确定按1.4测定方法，对照品甲醇、供试品的最大吸收波长分别为575 nm和571.4 nm，去除地龙的阴性对照品在401 nm有微弱吸收，故选择575 nm为测定波长。
1.4.2 取具塞试管6 支，2 支空白管，4 支样品管，于各管中加入对甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯0.1 mL，磷酸盐缓冲液0.1 mL，再于空白管中加入15%三氯醋酸溶液0.2 mL，其它管中各加供试品溶液0.1 mL，供试品管中各加15%三氯醋酸溶液0.2 mL，以下步骤同标准曲线，用测定的样品吸光度，在标准曲线上查出甲醇的量，依照下面公式计算出供试品中的TAME单位效价。
, 百拇医药 TAME单位/毫升=(甲醇摩尔数)/(供试品取量×时间)
1.5 稳定性试验：同一供试品溶液，依上述测定方法每隔10 min测定一次，共测定1 h，结果表明供试品溶液在1 h内稳定性良好。
1.6 重现性试验：同一批样品，依照上述方法重复测定5 次，其TAME(单位效价/毫升)X=8.57，RSD=4.42%。
1.7 回收率试验：采用加样回收法，按上述条件操作，回收率为97.76%，RSD=1.82%(n=5)。
1.8 样品测定：分别精密吸取供试品溶液，按上述方法测定，计算样品的TAME单位效价。结果5 批样品每1 mL TAME单位效价为8.51，8.36，9.28，9.38，8.85。
2 讨论
, 百拇医药
2.1 本法对卫生部蚓激酶效价测定TAME法做了部分修改，以适应中药复方中地龙中蚓激酶的效价测定。卫生部标准中67%硫酸溶液单位为g/mL，在标准曲线制备及样品测定中吸收值较高(吸光度超过1)，而且样品的空白值也相当高。本法将67%硫酸溶液改为67%(g/g)，获得了理想的结果。样品空白值0.005水平，可忽略不计。
2.2 TAME单位效价测定方法为双标准曲线，曲线r值应大于0.999 0，以r值大者为最佳选择。
2.3 TAME法用于中药复方中蚓激酶的效价测定未见报道，本文结果表明中药复方中蚓激酶的效价测定用TAME法是可行的。
参考文献
1.中华人民共和国卫生部标准(试行)WS-302(X-257)-95
2.中华人民共和国药典.一部，1995年版附录Ⅴ
(1999-06-14收稿), 百拇医药
单位：焦连庆 于敏 黄青 张志伟(吉林省中医中药研究院长春 130021)；何亚全(长春市儿童医院药剂科)
关键词：
中草药000415 金龙消栓合剂由地龙、川芎等5 味中药组成，具有化痰熄风，祛瘀通络之功，用于中风引起的半身不遂，口舌歪斜等症。地龙为其主药，其有效成分为纤溶蛋白水解酶。为了控制该药品内在质量，我们对其酶活性进行效价测定。蚓激酶的效价测定有对甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯法(TAME)、尿激酶琼脂糖-纤维蛋白平板法及组织纤溶酶原激活剂琼脂-纤维蛋白平板法[1]。我们采用TAME法，并对其进行了一些改变，以期对中药复方中酶活力的效价测定也能够运用。
1 实验部分
1.1 仪器与试药：紫外光谱分光光度仪U-3400(日本)，超级恒温水浴(重庆试验设备厂CS50型)，金龙消栓合剂(辽宁微生物研究所制药厂)；试剂均为AR级。
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1.2 对照品溶液制备：精密量取甲醇0.1 mL，置25 mL量瓶中，加磷酸盐缓冲液(0.1 mol/L，pH 8.0，以下同)至刻度，摇匀。取此液0.2 mL，置5 mL量瓶中，以磷酸盐缓冲液稀释至刻度，摇匀。
1.3 供试品溶液的制备：精密量取本品2.0 mL(相当于0.24 g生药)，置250 mL量瓶中，加入磷酸缓冲液稀释至刻度，摇匀。
1.4 测定方法
1.4.1 线性关系考查：取试管12 支，6 管分别加入磷酸盐缓冲液(mL)0.30，0.25，0.20，0.15，0.10，0.05，1 支空白管不加，其余分别加入标准甲醇液(mL)0.05，0.10，0.15，0.20，0.25，各管加入15%三氯醋酸溶液0.2 mL，2%高锰酸钾溶液0.1 mL，振摇90 s，各管加入10%无水亚硫酸钠溶液0.1 mL和0.4%变色酸67%(g/g)硫酸溶液40 mL，然后放入沸水浴煮沸25 min，取出置冷水浴中10 min，照分光光度法[2]在575 nm波长处测定吸光度。
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以甲醇量为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线，回归方程Y=2.242×10-3+0.507 4X，r=0.998 9，Y=-3.762×10-3+0.520 6X，r=0.9997。
吸收波长的确定按1.4测定方法，对照品甲醇、供试品的最大吸收波长分别为575 nm和571.4 nm，去除地龙的阴性对照品在401 nm有微弱吸收，故选择575 nm为测定波长。
1.4.2 取具塞试管6 支，2 支空白管，4 支样品管，于各管中加入对甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯0.1 mL，磷酸盐缓冲液0.1 mL，再于空白管中加入15%三氯醋酸溶液0.2 mL，其它管中各加供试品溶液0.1 mL，供试品管中各加15%三氯醋酸溶液0.2 mL，以下步骤同标准曲线，用测定的样品吸光度，在标准曲线上查出甲醇的量，依照下面公式计算出供试品中的TAME单位效价。
, 百拇医药 TAME单位/毫升=(甲醇摩尔数)/(供试品取量×时间)
1.5 稳定性试验：同一供试品溶液，依上述测定方法每隔10 min测定一次，共测定1 h，结果表明供试品溶液在1 h内稳定性良好。
1.6 重现性试验：同一批样品，依照上述方法重复测定5 次，其TAME(单位效价/毫升)X=8.57，RSD=4.42%。
1.7 回收率试验：采用加样回收法，按上述条件操作，回收率为97.76%，RSD=1.82%(n=5)。
1.8 样品测定：分别精密吸取供试品溶液，按上述方法测定，计算样品的TAME单位效价。结果5 批样品每1 mL TAME单位效价为8.51，8.36，9.28，9.38，8.85。
2 讨论
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2.1 本法对卫生部蚓激酶效价测定TAME法做了部分修改，以适应中药复方中地龙中蚓激酶的效价测定。卫生部标准中67%硫酸溶液单位为g/mL，在标准曲线制备及样品测定中吸收值较高(吸光度超过1)，而且样品的空白值也相当高。本法将67%硫酸溶液改为67%(g/g)，获得了理想的结果。样品空白值0.005水平，可忽略不计。
2.2 TAME单位效价测定方法为双标准曲线，曲线r值应大于0.999 0，以r值大者为最佳选择。
2.3 TAME法用于中药复方中蚓激酶的效价测定未见报道，本文结果表明中药复方中蚓激酶的效价测定用TAME法是可行的。
参考文献
1.中华人民共和国卫生部标准(试行)WS-302(X-257)-95
2.中华人民共和国药典.一部，1995年版附录Ⅴ
(1999-06-14收稿), 百拇医药