肝外胆管癌组织中 HBV DNA 的检测及意义
作者：陈明易 黄志强 陈乐真 高亚兵 彭瑞云 王德文
单位：陈明易 黄志强(解放军总医院肝胆外科，北京 100853)；陈乐真(解放军总医院病理科)；高亚兵 彭瑞云 王德文(军事医学科学院放射医学研究所病理室，北京 100850)
关键词：肝外胆管癌；DNA；乙型肝炎病毒
军医进修学院学报000423 中图号：R735.8 文献标识码：A
文章编号：1005-1139(2000)04-0253-01
1 材料和方法
1.1 材料 51 例肝外胆管癌(血清 HBsAg 阳性率 3.9%)来自解放军总医院，常规石蜡包埋。引物：5′GCCTTGGGTGGCTTGGGGC3′，5′CCTGAGTGCTGTATGGTGA 3′。探针：5′GAGATCTCCTTGACACCGCCTCTGC 3′，生物素标记，上海生物工程公司合成并标记。S-A/HRP购自中山生物技术有限公司。原位 PCR 扩增仪为美国 Perkin Elmer 公司产品：GeneAmp System 1000。
1.2 方法 切片脱蜡，蛋白酶 K 消化，加扩增反应液每片 50 μl(Mg2+2.5 mmol/L，1×PCR 缓冲液、引物各 1 μmol/L，dNTP 250 μmol/L，Tap 酶 4U/50 μl)，循环：94℃ 2 min，55℃ 2 min，72℃ 3 min，30 次，变性，加杂交液每片 50 μl(探针 2.5 μg/ml)，过夜，加 S-A/HRP，DAB显色。设置引物、Taq酶、探针对照。
2 结果 8 例(15.9%)检出 HBV DNA，其中 6 例呈胞浆型，2 例呈单纯胞核型。阳性信号呈棕黄色颗粒。阳性细胞多呈簇分布。
3 讨论 肝外胆管癌患者中 HBV 感染率 15.9%，较血清 HBsAg 阳性率 3.9% 明显高。HBV DNA 在胆管癌细胞中，以胞浆型(游离型)为主，少数为胞核型(整合型)。分子流行病学调查显示，部分肝外胆管癌的发病可能与 HBV 感染有关。
作者简介：陈明易，(1965-)，男，四川省德阳市人，1987年泸州医学院毕业，军医进修学院 97 级肝胆外科博士生，导师黄志强院士；发表论文 1 篇。电话：(010)66937322
收稿日期：2000-02-02； 修回日期：2000-03-08, http://www.100md.com
单位：陈明易 黄志强(解放军总医院肝胆外科，北京 100853)；陈乐真(解放军总医院病理科)；高亚兵 彭瑞云 王德文(军事医学科学院放射医学研究所病理室，北京 100850)
关键词：肝外胆管癌；DNA；乙型肝炎病毒
军医进修学院学报000423 中图号：R735.8 文献标识码：A
文章编号：1005-1139(2000)04-0253-01
1 材料和方法
1.1 材料 51 例肝外胆管癌(血清 HBsAg 阳性率 3.9%)来自解放军总医院，常规石蜡包埋。引物：5′GCCTTGGGTGGCTTGGGGC3′，5′CCTGAGTGCTGTATGGTGA 3′。探针：5′GAGATCTCCTTGACACCGCCTCTGC 3′，生物素标记，上海生物工程公司合成并标记。S-A/HRP购自中山生物技术有限公司。原位 PCR 扩增仪为美国 Perkin Elmer 公司产品：GeneAmp System 1000。
1.2 方法 切片脱蜡，蛋白酶 K 消化，加扩增反应液每片 50 μl(Mg2+2.5 mmol/L，1×PCR 缓冲液、引物各 1 μmol/L，dNTP 250 μmol/L，Tap 酶 4U/50 μl)，循环：94℃ 2 min，55℃ 2 min，72℃ 3 min，30 次，变性，加杂交液每片 50 μl(探针 2.5 μg/ml)，过夜，加 S-A/HRP，DAB显色。设置引物、Taq酶、探针对照。
2 结果 8 例(15.9%)检出 HBV DNA，其中 6 例呈胞浆型，2 例呈单纯胞核型。阳性信号呈棕黄色颗粒。阳性细胞多呈簇分布。
3 讨论 肝外胆管癌患者中 HBV 感染率 15.9%，较血清 HBsAg 阳性率 3.9% 明显高。HBV DNA 在胆管癌细胞中，以胞浆型(游离型)为主，少数为胞核型(整合型)。分子流行病学调查显示，部分肝外胆管癌的发病可能与 HBV 感染有关。
作者简介：陈明易，(1965-)，男，四川省德阳市人，1987年泸州医学院毕业，军医进修学院 97 级肝胆外科博士生，导师黄志强院士；发表论文 1 篇。电话：(010)66937322
收稿日期：2000-02-02； 修回日期：2000-03-08, http://www.100md.com