胆囊癌组织CDl5抗原表达意义
作者：谷化平 尚培中 李全华 苏 红
单位：李全华(中国人民解放军第二军医大学长海医院病理科 上海市 200433) ;谷化平 尚培中 苏 红(中国人民解放军251医院 病理科河北省张家口市 075000)
关键词：癌；胆囊细胞；代谢CD15抗原；代谢；免疫组织化学；图象分析
摘 要摘 要：目的 探讨CD15抗原的表达及含量与胆囊癌的临床病理意义。方法 应用微波-LSAB免疫组织化学法和图象分析技术，检测45例胆囊癌，17例胆囊腺瘤和10例慢性胆囊炎组织中CDl5抗原表达及含量。结果 CDl5抗原表达阳性率及阳性细胞积分A值，在胆囊癌中(71%，4.0±3.2)显著高于胆囊腺瘤(35%，0.9±0.3)和慢性胆囊炎(20%，O.4±0.1)(P<0.05，P<0.01)；胆囊癌Ⅱ，Ⅲ级(90%，5.4±1.7)显著高于I级(58%，2.2±3.1)(P<0.05，P<0.01)；有转移的肿瘤(88%，6.5±3.5)(P<0.05，P<0.01)；显著高于无转移的肿瘤(52%，3.3±2.1)(P<0.01).结论 CDl5抗原表达与胆囊癌的发生、细胞增殖、分化和转移相关。对判断胆囊癌的恶性程度、预测生物学行为和预后具有一定临床意义。
, http://www.100md.com
Significance of CD15 antigen expression in human gallbladder carcinoma
Hua Ping Gu ,Pei Zhong Shang
(Department of Pathology, 2Department of General Surgery, Chinese PLA 251Hospital,Zhangjiakou 075000,Hebei Province,China)
Ouan Hua Li
(Department of pathology,Changhai Hospital,Second Military Medical University,Shanghai 200433,China)
, 百拇医药
Hong Su
(Department of Pathology, 2Department of General Surgery, Chinese PLA 251Hospital,Zhangjiakou 075000,Hebei Province,China)
Abstract：AIM To study the clinicopathological significance of CD15 antigen expression and its contents in human carcinoma.METHODS CD15 expression and its contents in 45 casesof caminorna of the gallbladder, 17 cases of adenoma of the gallbladder and 10 cases of chronic cholecystitis were evaluated by microwave-LSAB immunohistochemical technique combined with image analysis.RESULTS Positive rate of CD15 and its integral absorbanca (optic density) in carcinoma of the gallbladder were 71% (32/45) and 4.0±3.2 respectively,significantly higher then 35% (6/17) and 0.9±0.3 in adenoma of the gallbladder, 20% (2/10) and 0.4±0.1 in chronic cholecystitis (P<0.05, P<0.01). In grade Ⅱ-Ⅲ cancer, they were 90% (17/19) end 5.4±1.7,significantly higher than 58% (15/26) and 2.2±3.1 in grade Ⅰcancer (P<0.05, P<0.01). In lymph node positive cases, they were 88% (21/24) and 6.5±3.5, significantly higher than 52% (11/21) and 3.3±2.1 in negative ones (P<0.025, P<0.01 ).CONCLUSION CD15 expression and its contents could be involved in aggresiveness of carcinoma of the gallbladder and might be a useful indicator to evaluate the malignancy and biological features, and could be consldered as a good prognostic predictor for patients with carcinoma of the gallbladder.
, http://www.100md.com
Keywords：carcinoma, gallbladder cell/metabolism; CD15 antigen/metabolism;immunohistochemistry; image analysis
0引言肿瘤细胞表面糖蛋白在肿瘤转移中起着重要作用，其中包括选择素所识别并能结合的配基.CDl5抗原(又叫粒细胞相关抗原，或LewisX)是一种糖蛋白，为选择素所识别的比较确定的一个配基[1].CDl5表达与许多肿瘤的发生发展、侵袭转移和预后相关[2-11].我们应用免疫组织化学方法和图象分析技术，对胆囊癌组织进行CDl5表达及定量检测，旨在探讨CDl5表达与胆囊癌的发生发展和转移的关系，为胆囊癌的发病机制和临床防治的研究探索新途径。1材料和方法1.1材料取我院手术切除胆囊良恶性病变标本，其中原发性胆囊癌45例，腺瘤17例和慢性胆囊炎10例，胆囊癌45例中男20例，女25例，年龄35岁～74岁，平均(57.8±1.5)岁.术前均未经任何药物治疗.标本均经100mL/L福尔马林固定，石蜡包埋，连续切片，厚4μm.鼠抗CDl5smAb(1：60)和LSAB试剂盒，DAB显色试剂盒均购自北京中山生物技术有限公司。1.2方法免疫组化染色采用微波-LSAB法.即切片常规脱蜡水化后放人枸橼酸缓冲液(10mmoL/L，Ph6.0)内，置78lA型医用微波仪170W辐射5min,冷却后水洗.其他步骤同常规LSAB法，所不同者为3步抗原孵育和血清封闭均用微波仪130W辐射5min、阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照，DAB显色.阳性结果判定及定量测定：组织结构及背景清晰、所测组织的腺腔缘、细胞膜和细胞质呈棕黄色反应者为阳性(+)，不着色者为阴性(-).定量测定应用CMIAS真彩色医学图象分析仪检测所有CDl5阳性切片，每张切片随机选取5个视野(×400)，总阳性细胞数在100个以上，测定其阳性细胞的平均A值以反映CDl5的阳性强度。统计学处理用x2检验和t检验。2结果CDl5阳性物质在慢性胆囊炎和胆囊腺瘤组织中主要分布于腺上皮游离面，在胆囊癌细胞主要分布于细胞膜和细胞质.CDl5染色及图象分析结果见表1.表1胆囊癌CD15表达和图象定量分析结果Ap<0.05，Bp<0.01，vs胆囊腺瘤和慢性胆囊炎；Cp<0.05，Dp<0.01，vsI级；Ep<0.05，Fp<0.01，vs无转移3讨论细胞粘附分子(celluleradhesionmolecules，CAM)是一大类位于细胞表面的糖蛋白，与其相匹配的配基间结合是介导细胞与细胞或基质间相互识别和作用的分子基础，从而在调节细胞增殖、分化、迁移等方面起着重要作用.同样，在肿瘤的发生发展、浸润转移、机体免疫反应及临床进展过程中也大多伴有CAM或配基的变化[11]，故己成为肿瘤研究的热点之一.CDl5为CAM的成员，由半乳糖、岩藻糖和N-乙酰葡萄糖胺组成的碳水化合物抗原，是选择素所识别的比较确定的一个配基[1-3].研究证实，CDl5表达与许多肿瘤的侵袭、转移和预后相关，被视为一些肿瘤预后不良的标志物.Brooksetal[2]和Toriietal[3]研究证实，CDl5表达与乳腺癌、肝细胞癌的浸润转移密切相关.Neuholdetal[4]研究了47例甲状腺髓样癌CDl5表达，阳性率为36.6%，在肿瘤>4cm的原发癌、转移癌和复发癌中CDl5表达更为强烈，CDl5表达强阳性的复发癌患者死亡率显著高于阴性者.作者认为，检测CDl5表达，更有利于指导临床对一些患者采取更大程度的根治性手术.Nakagoeetal[5]检测了120例结肠癌CDl5表达，其中87例(72.5%)呈阳性反应，CDl5阳性患者的5年生存率(60.6%)显著低于CDl5阴性患者的5年生存率(81.2%)，CDl5表达越强烈者5年生存率越低.Konetyetal[6]研究了74例膀胱移行细胞癌CDl5表达，其中57例(77.0%)呈阳性反应，并证实CDl5阳性的肿瘤容易复发.我们以前的研究证实，CDl5表达的质和量的变化与胃癌、乳腺癌、肾癌和前列腺癌的发生、浸润、转移和预后相关[7-10].我们应用免疫组化法和图象分析技术，对胆囊癌细胞进行CDl5表达及其定量分析.结果显示，CDl5表达阳性率和阳性细胞平均积分光密度值，在胆囊癌组织中均显著高于胆囊腺瘤和慢性胆囊炎，提示CDl5表达的质和量的变化均与胆囊癌的发生相关.恶性肿瘤组织分化程度越低，则级别越高，预示肿瘤生长越旺盛，恶性程度越高，级别越低者，则相反.转移是胆囊癌的重要生物学特征之一，为预后不良的标志.我们发现，CDl5阳性表达率及其阳性细胞平均积分光密度值，Ⅱ，Ⅲ级均显著高于I级者(P<0.05和P<0.01)，有转移的胆囊癌显著高于无转移者(P<0.05和P<0.01)，表明CDl5表达与胆囊癌恶性生长和临床进展之间存在着一种质和量的关系，提示在胆囊癌细胞的增值、分化和转移过程中CDl5发挥着重要作用.本组结果中亦有28.9%的胆囊癌病例CDl5表达阴性，甚至Ⅱ，Ⅲ级肿瘤中亦分别占10.5%和12.5%.表明在胆囊癌的发生发展和转移过程中亦与其他基因调控有关，从而也反映了胆囊癌的发生是由于正常细胞的多个基因发生突变所获得恶性表型所致的客观事实。本研究表明，CDl5抗原的免疫组化标记，以及图象定量分析方法的应用，从一个新的途径为胆囊癌的防治提供了较为客观的参考依据，是反映胆囊癌组织恶性生长的一个有用指标，胆囊癌组织分级、转移状况与CDl5含量的密切关系，对于研究胆囊癌的发生、发展、判断恶性程度、预测生物学行为和评估预后具有重要临床意义。
, 百拇医药
作者简介：谷化平,男,1949年11月1日出生,安徽省濉溪县人,汉族.1974年河北医学院大专毕业,副主任医师,发表论文160篇,获军队科技进步奖6项.目前主要从事CD15抗原在肿瘤表达的临床病理研究.
参考文献：
[1]Chan JL,Zou T.Advance in the study of selectin with tumor.Shengming Kexue,1996;8:31-33
[2]Brooks SA,Leathem AJC.Bxpression of the CD15 antigen (Lewis x)in breast cancer.Histohem J,1995;27:689-693
[3]Torii A,Nakayama A,Harada A,Nakao A,Nonami T,Sakamoto J,Watanabe T,Ito M,Takagi H.Expression of the CD15 antigen in hepatocellular carcinoma.Cancer,1993;71:3864-3867
, http://www.100md.com
[4]Neuhold N,Langle F,Gnant M,Hollenstein U,Niedrle B.Relationship of CD15 immunoreactivity and prognosis in sporadic medullary thyroid carcinoma.J Cancer Res Clin Oncol,1992;118:629-634
[5]Nakagoe T,Fukushima K,Hirota M,Kusano H,Ayabe H,Tomita M,Kamihira S.Immunohistochemical expression of sialyl Lex antigen in relation to survival of patients with colorectal carcinoma.Cancer,1993;72:2323-2330
[6]Konety BR,Bullou B,Jaffe R,Singh J,Reiland J,Hakala TR.Expression of SSEA-1(Lewis x)on transitional cell carcinoma of the bladder.Urol Int,1997;58:67-74
, http://www.100md.com
[7]Gu HP,Shang PZ,Ji XL,Li ZG.An immunohistochemical study on the expression of CD15 and P-gp in gastric carcinoma.Shijie Huaren Xiaohua Zazhi,1999;7:367-368
[8]Gu HP,Shang PZ,Hu HX,Li QH,Li CG.Quantitative analysis of cell adhesion molecue CD15 in human breast carcinomas.Zhonghua Yixue Zazhi,1999;79:17-18
[9]Gu HP,Hu HX,Shang PZ,Wang JM,Li QH.Expression of cell abhesion mdecule CD15 in prostate carcinoma in relation to the metastasis of prostate carcinoma.Zhongguo Zhongliu Linduang Yu Kangfu,1999;6:29-30
, 百拇医药
[10]Gu HP,Shang PZ,Ji XL,Hu HX,Wang JM.Clinical significance of CD15 and nm23/NDPK expression in renal cell carcinoma.Shiyong Aizheng Zazhi,1999;14:278-280
[11]Pei XT.The role of cytoadhesion molecules in tumorigsis and invasiveness.Zhongguo Bingli Shenglixue Zazhi,1997;13:103-106
收稿日期：1999-12-22, http://www.100md.com
单位：李全华(中国人民解放军第二军医大学长海医院病理科 上海市 200433) ;谷化平 尚培中 苏 红(中国人民解放军251医院 病理科河北省张家口市 075000)
关键词：癌；胆囊细胞；代谢CD15抗原；代谢；免疫组织化学；图象分析
摘 要摘 要：目的 探讨CD15抗原的表达及含量与胆囊癌的临床病理意义。方法 应用微波-LSAB免疫组织化学法和图象分析技术，检测45例胆囊癌，17例胆囊腺瘤和10例慢性胆囊炎组织中CDl5抗原表达及含量。结果 CDl5抗原表达阳性率及阳性细胞积分A值，在胆囊癌中(71%，4.0±3.2)显著高于胆囊腺瘤(35%，0.9±0.3)和慢性胆囊炎(20%，O.4±0.1)(P<0.05，P<0.01)；胆囊癌Ⅱ，Ⅲ级(90%，5.4±1.7)显著高于I级(58%，2.2±3.1)(P<0.05，P<0.01)；有转移的肿瘤(88%，6.5±3.5)(P<0.05，P<0.01)；显著高于无转移的肿瘤(52%，3.3±2.1)(P<0.01).结论 CDl5抗原表达与胆囊癌的发生、细胞增殖、分化和转移相关。对判断胆囊癌的恶性程度、预测生物学行为和预后具有一定临床意义。
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Significance of CD15 antigen expression in human gallbladder carcinoma
Hua Ping Gu ,Pei Zhong Shang
(Department of Pathology, 2Department of General Surgery, Chinese PLA 251Hospital,Zhangjiakou 075000,Hebei Province,China)
Ouan Hua Li
(Department of pathology,Changhai Hospital,Second Military Medical University,Shanghai 200433,China)
, 百拇医药
Hong Su
(Department of Pathology, 2Department of General Surgery, Chinese PLA 251Hospital,Zhangjiakou 075000,Hebei Province,China)
Abstract：AIM To study the clinicopathological significance of CD15 antigen expression and its contents in human carcinoma.METHODS CD15 expression and its contents in 45 casesof caminorna of the gallbladder, 17 cases of adenoma of the gallbladder and 10 cases of chronic cholecystitis were evaluated by microwave-LSAB immunohistochemical technique combined with image analysis.RESULTS Positive rate of CD15 and its integral absorbanca (optic density) in carcinoma of the gallbladder were 71% (32/45) and 4.0±3.2 respectively,significantly higher then 35% (6/17) and 0.9±0.3 in adenoma of the gallbladder, 20% (2/10) and 0.4±0.1 in chronic cholecystitis (P<0.05, P<0.01). In grade Ⅱ-Ⅲ cancer, they were 90% (17/19) end 5.4±1.7,significantly higher than 58% (15/26) and 2.2±3.1 in grade Ⅰcancer (P<0.05, P<0.01). In lymph node positive cases, they were 88% (21/24) and 6.5±3.5, significantly higher than 52% (11/21) and 3.3±2.1 in negative ones (P<0.025, P<0.01 ).CONCLUSION CD15 expression and its contents could be involved in aggresiveness of carcinoma of the gallbladder and might be a useful indicator to evaluate the malignancy and biological features, and could be consldered as a good prognostic predictor for patients with carcinoma of the gallbladder.
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Keywords：carcinoma, gallbladder cell/metabolism; CD15 antigen/metabolism;immunohistochemistry; image analysis
0引言肿瘤细胞表面糖蛋白在肿瘤转移中起着重要作用，其中包括选择素所识别并能结合的配基.CDl5抗原(又叫粒细胞相关抗原，或LewisX)是一种糖蛋白，为选择素所识别的比较确定的一个配基[1].CDl5表达与许多肿瘤的发生发展、侵袭转移和预后相关[2-11].我们应用免疫组织化学方法和图象分析技术，对胆囊癌组织进行CDl5表达及定量检测，旨在探讨CDl5表达与胆囊癌的发生发展和转移的关系，为胆囊癌的发病机制和临床防治的研究探索新途径。1材料和方法1.1材料取我院手术切除胆囊良恶性病变标本，其中原发性胆囊癌45例，腺瘤17例和慢性胆囊炎10例，胆囊癌45例中男20例，女25例，年龄35岁～74岁，平均(57.8±1.5)岁.术前均未经任何药物治疗.标本均经100mL/L福尔马林固定，石蜡包埋，连续切片，厚4μm.鼠抗CDl5smAb(1：60)和LSAB试剂盒，DAB显色试剂盒均购自北京中山生物技术有限公司。1.2方法免疫组化染色采用微波-LSAB法.即切片常规脱蜡水化后放人枸橼酸缓冲液(10mmoL/L，Ph6.0)内，置78lA型医用微波仪170W辐射5min,冷却后水洗.其他步骤同常规LSAB法，所不同者为3步抗原孵育和血清封闭均用微波仪130W辐射5min、阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照，DAB显色.阳性结果判定及定量测定：组织结构及背景清晰、所测组织的腺腔缘、细胞膜和细胞质呈棕黄色反应者为阳性(+)，不着色者为阴性(-).定量测定应用CMIAS真彩色医学图象分析仪检测所有CDl5阳性切片，每张切片随机选取5个视野(×400)，总阳性细胞数在100个以上，测定其阳性细胞的平均A值以反映CDl5的阳性强度。统计学处理用x2检验和t检验。2结果CDl5阳性物质在慢性胆囊炎和胆囊腺瘤组织中主要分布于腺上皮游离面，在胆囊癌细胞主要分布于细胞膜和细胞质.CDl5染色及图象分析结果见表1.表1胆囊癌CD15表达和图象定量分析结果Ap<0.05，Bp<0.01，vs胆囊腺瘤和慢性胆囊炎；Cp<0.05，Dp<0.01，vsI级；Ep<0.05，Fp<0.01，vs无转移3讨论细胞粘附分子(celluleradhesionmolecules，CAM)是一大类位于细胞表面的糖蛋白，与其相匹配的配基间结合是介导细胞与细胞或基质间相互识别和作用的分子基础，从而在调节细胞增殖、分化、迁移等方面起着重要作用.同样，在肿瘤的发生发展、浸润转移、机体免疫反应及临床进展过程中也大多伴有CAM或配基的变化[11]，故己成为肿瘤研究的热点之一.CDl5为CAM的成员，由半乳糖、岩藻糖和N-乙酰葡萄糖胺组成的碳水化合物抗原，是选择素所识别的比较确定的一个配基[1-3].研究证实，CDl5表达与许多肿瘤的侵袭、转移和预后相关，被视为一些肿瘤预后不良的标志物.Brooksetal[2]和Toriietal[3]研究证实，CDl5表达与乳腺癌、肝细胞癌的浸润转移密切相关.Neuholdetal[4]研究了47例甲状腺髓样癌CDl5表达，阳性率为36.6%，在肿瘤>4cm的原发癌、转移癌和复发癌中CDl5表达更为强烈，CDl5表达强阳性的复发癌患者死亡率显著高于阴性者.作者认为，检测CDl5表达，更有利于指导临床对一些患者采取更大程度的根治性手术.Nakagoeetal[5]检测了120例结肠癌CDl5表达，其中87例(72.5%)呈阳性反应，CDl5阳性患者的5年生存率(60.6%)显著低于CDl5阴性患者的5年生存率(81.2%)，CDl5表达越强烈者5年生存率越低.Konetyetal[6]研究了74例膀胱移行细胞癌CDl5表达，其中57例(77.0%)呈阳性反应，并证实CDl5阳性的肿瘤容易复发.我们以前的研究证实，CDl5表达的质和量的变化与胃癌、乳腺癌、肾癌和前列腺癌的发生、浸润、转移和预后相关[7-10].我们应用免疫组化法和图象分析技术，对胆囊癌细胞进行CDl5表达及其定量分析.结果显示，CDl5表达阳性率和阳性细胞平均积分光密度值，在胆囊癌组织中均显著高于胆囊腺瘤和慢性胆囊炎，提示CDl5表达的质和量的变化均与胆囊癌的发生相关.恶性肿瘤组织分化程度越低，则级别越高，预示肿瘤生长越旺盛，恶性程度越高，级别越低者，则相反.转移是胆囊癌的重要生物学特征之一，为预后不良的标志.我们发现，CDl5阳性表达率及其阳性细胞平均积分光密度值，Ⅱ，Ⅲ级均显著高于I级者(P<0.05和P<0.01)，有转移的胆囊癌显著高于无转移者(P<0.05和P<0.01)，表明CDl5表达与胆囊癌恶性生长和临床进展之间存在着一种质和量的关系，提示在胆囊癌细胞的增值、分化和转移过程中CDl5发挥着重要作用.本组结果中亦有28.9%的胆囊癌病例CDl5表达阴性，甚至Ⅱ，Ⅲ级肿瘤中亦分别占10.5%和12.5%.表明在胆囊癌的发生发展和转移过程中亦与其他基因调控有关，从而也反映了胆囊癌的发生是由于正常细胞的多个基因发生突变所获得恶性表型所致的客观事实。本研究表明，CDl5抗原的免疫组化标记，以及图象定量分析方法的应用，从一个新的途径为胆囊癌的防治提供了较为客观的参考依据，是反映胆囊癌组织恶性生长的一个有用指标，胆囊癌组织分级、转移状况与CDl5含量的密切关系，对于研究胆囊癌的发生、发展、判断恶性程度、预测生物学行为和评估预后具有重要临床意义。
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作者简介：谷化平,男,1949年11月1日出生,安徽省濉溪县人,汉族.1974年河北医学院大专毕业,副主任医师,发表论文160篇,获军队科技进步奖6项.目前主要从事CD15抗原在肿瘤表达的临床病理研究.
参考文献：
[1]Chan JL,Zou T.Advance in the study of selectin with tumor.Shengming Kexue,1996;8:31-33
[2]Brooks SA,Leathem AJC.Bxpression of the CD15 antigen (Lewis x)in breast cancer.Histohem J,1995;27:689-693
[3]Torii A,Nakayama A,Harada A,Nakao A,Nonami T,Sakamoto J,Watanabe T,Ito M,Takagi H.Expression of the CD15 antigen in hepatocellular carcinoma.Cancer,1993;71:3864-3867
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[4]Neuhold N,Langle F,Gnant M,Hollenstein U,Niedrle B.Relationship of CD15 immunoreactivity and prognosis in sporadic medullary thyroid carcinoma.J Cancer Res Clin Oncol,1992;118:629-634
[5]Nakagoe T,Fukushima K,Hirota M,Kusano H,Ayabe H,Tomita M,Kamihira S.Immunohistochemical expression of sialyl Lex antigen in relation to survival of patients with colorectal carcinoma.Cancer,1993;72:2323-2330
[6]Konety BR,Bullou B,Jaffe R,Singh J,Reiland J,Hakala TR.Expression of SSEA-1(Lewis x)on transitional cell carcinoma of the bladder.Urol Int,1997;58:67-74
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[7]Gu HP,Shang PZ,Ji XL,Li ZG.An immunohistochemical study on the expression of CD15 and P-gp in gastric carcinoma.Shijie Huaren Xiaohua Zazhi,1999;7:367-368
[8]Gu HP,Shang PZ,Hu HX,Li QH,Li CG.Quantitative analysis of cell adhesion molecue CD15 in human breast carcinomas.Zhonghua Yixue Zazhi,1999;79:17-18
[9]Gu HP,Hu HX,Shang PZ,Wang JM,Li QH.Expression of cell abhesion mdecule CD15 in prostate carcinoma in relation to the metastasis of prostate carcinoma.Zhongguo Zhongliu Linduang Yu Kangfu,1999;6:29-30
, 百拇医药
[10]Gu HP,Shang PZ,Ji XL,Hu HX,Wang JM.Clinical significance of CD15 and nm23/NDPK expression in renal cell carcinoma.Shiyong Aizheng Zazhi,1999;14:278-280
[11]Pei XT.The role of cytoadhesion molecules in tumorigsis and invasiveness.Zhongguo Bingli Shenglixue Zazhi,1997;13:103-106
收稿日期：1999-12-22, http://www.100md.com