白细胞介素1α对椎间盘蛋白多糖代谢的影响
作者：田庆显 胡有谷 郑洪军 齐宗华
单位：田庆显(252000山东省聊城市人民医院骨科)；胡有谷 郑洪军 齐宗华(青岛医学院附属医院骨科研究室)
关键词：椎间盘；白细胞介素1；代谢
中华骨科杂志000415
【摘要】目的研究白细胞介素1α(interleukin-1α，IL-1α)对椎间盘髓核中蛋白多糖代谢的影响。方法取自然流产的胎儿1具，胎龄8个月，术后4h内无菌取出椎间盘，进行髓核组织块的体外培养，在培养液中分别加入IL-1α0.1、0.2、0.4nmol/L，培养30h后，用Alcian法检测培养液中硫酸软骨素的含量。在髓核组织培养液中加入IL-1α0.3nmol/L，分别培养12、24、72h，然后检测培养液中硫酸软骨素的含量。结果IL-1α实验组较对照组培养液中硫酸软骨素的含量增加，随着IL-1α浓度的增加，培养液中硫酸软骨素的含量也增加，呈浓度依赖性。随着时间的增加，培养液中硫酸软骨素的含量也增加，呈现明显的时间依赖性。结论IL-1α可以刺激椎间盘基质中蛋白多糖降解，呈现明显的时间和浓度依赖性。
, http://www.100md.com
The effects of the interleukin- 1α on the metabolism of proteoglycan in the lumbar intervertebral disc
TIAN Qingxian, HU Yougu, ZHENG Hongjun, et al.
Department of Orthopaedics, Liaocheng People s Hospital, Shandong 252000， China
【 Abstract】 Objective To study the effects of the interleukin- 1α (IL- 1α ) on the metabolism of the proteoglycan in the nucleus pulposus of lumbar intervertebral disc. Methods A fetus specimen of 8 months obtained from spontaneous abortion was used for this study. The lumbar intervertebral disc was harvested 4 hours after abortion, and the pieces of intervertebral disc was cultured in vitro. After 30 hours of culture and the addition of IL- 1α ( 0.1, 0.2 , 0.4 nmol/L ), the content of the chondroitin sulfate in culture medium was measured by Alcian method. And after the addition of IL- 1α (0.3 nmol/L) to the tissue culture medium of the nucleus pulposus, chondroitin sulfate of the culture medium was measured in 12 , 24 and 72 hours. Results The concentrations of chondroitin sulfate in culture medium with the addition IL- 1α increaed markedly than the controls, and the content of the chondroitin sulfate in culture medium increased progressively along with the concentrations of the IL- 1α , and the concentrations of the culture medium markedly increased with the time of culture. Conclusion IL- 1α can stimulate degradation of proteoglycan of the lumbar intervertebral disc. The effect shows a concentration- and time- dependency.
, 百拇医药
【 Key words】 Intervertebral disk; Interleukin- 1; Metabolism
椎间盘退变及其诱发的腰背痛是一种常见病，已有证据证明椎间盘的退变与蛋白多糖(proteoglycan，PG)的降解有关。近年来，人们对白细胞介素(interleukin，IL)对软骨基质中PG代谢的影响进行了研究。研究表明，小剂量的IL-1对软骨基质中PG的合成具有抑制作用[1]，而较大剂量的IL-1对软骨基质中PG的降解具有刺激作用[2]。说明IL-1在软骨基质的新陈代谢中起着重要的作用。由于椎间盘软骨终板和髓核与关节软骨具有相似的基质组成，故有理由认为调节基质中PG降解和合成的生物化学机制是相似的。但有关IL-1对人椎间盘基质中PG代谢的影响还没有进一步的报告。本研究通过对胎儿椎间盘髓核的组织培养，探讨IL-1对椎间盘基质中PG代谢的影响，以进一步阐明腰椎间盘退变的原因。
材料与方法
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一、椎间盘髓核组织块的分离和培养
取胎龄8个月,自然流产的胎儿1具。在术后4h内无菌取出椎间盘，用缓冲液冲洗干净，然后分离出髓核,浸于D-Hanks液中。用直径为2mm的组织环钻把髓核组织钻成直径约2mm，高约1～2mm的组织块。用DMEM-5%FBS培养液冲洗3次后,转移到培养瓶中，加入25mlDMEM-5%FBS培养液。在37℃、体积分数为5%的CO2培养箱中培养2d。组织块在不含血清的DMEM液中冲洗3次。把组织块转移到每孔装有150μlDMEM培养液(不含血清)的96孔培养板中。备用。
表1加入不同浓度IL-1α的培养液中硫酸软骨素的浓度(
±s) 浓度(nmol/L)
n
硫酸软骨素浓度(μg/ml)
, 百拇医药
t值
P值
0.1
10
56.27±8.36
-
-
0.2
10
73.52±8.52
4.40
<0.01
0.4
, 百拇医药
10
98.57±17.24
6.88
<0.01
注：以上t值均为与0.1nmol/L组相比
二、IL-1α对髓核基质中PG代谢的影响
1.不同浓度的IL-1α对髓核中PG代谢的影响
在96孔培养板中标出30孔，分成3组，分别加入IL-1α0.1、0.2、0.4nmol/L。放入37℃、体积分数为5%的CO2培养箱中培养30h。分别测定加有不同浓度IL-1α的培养液中硫酸软骨素的含量。
2.IL-1α在不同培养时间对PG代谢的影响
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在96孔培养板中标出36孔，分成3组，每组配成6对，并将每对中两孔随机分配为对照组和实验组,分别在实验组培养孔中加入IL-1α0.3nmol/L。在37℃、体积分数为5%的CO2培养箱中培养12、24、72h。分别在不同时间测定培养液中硫酸软骨素的含量。
三、硫酸软骨素的检测方法
取待测样本50μl，加入8mol/L的盐酸胍50μl，静置15min后，加入试剂1(高浓度的Alcian液)50μl，振荡至完全溶解。然后加入试剂2B(低浓度的Alcian液)750μl，在4℃下孵育1h；12000r/min离心15min，去除上清液；加入DMSO洗脱液750μl，室温搅拌30min；12000r/min离心15min，去除上清液；加入溶解液500μl，室温搅拌15min。在同一样本液中取240μl相同的两份转移到96孔比色板中，600nm波长下测量样本中硫酸软骨素的含量。
结果
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一、IL-1α对髓核基质中PG降解的影响
经30h培养后发现，IL-1α可刺激PG的降解。方差分析检验，不同浓度组间硫酸软骨素浓度的差异有非常显著性意义(F=30.1，P<0.01)。随着IL-1α浓度的增加，PG的降解明显增加，0.2、0.4nmol/L组较0.1nmol/L组硫酸软骨素浓度明显增加，差异有非常显著性意义(表1)，0.4nmol/L组较0.2nmol/L组硫酸软骨素浓度有明显增加，差异有非常显著性意义(t=4.12，P<0.01)。表明IL-1α以浓度依赖的方式促进椎间盘基质中PG的降解。
二、髓核基质中PG降解的时间依赖性
在髓核组织培养液中加入0.3nmol/L的IL-1α，发现培养液中硫酸软骨素的浓度较对照组有明显的增加。经配对资料的t检验，每个时间段实验组和对照组的差异有非常显著性意义，t值分别为t12=13.51，P<0.01；t24=13.53，P<0.01；t72=14.64，P<0.01。随着培养时间的延长，培养液中硫酸软骨素浓度增加。经方差分析，12、24和72h每个时间段实验组与对照组间浓度之差(d)的差异亦有非常显著性意义(F=53.01，P<0.01)。24、72h组均较12h组浓度增加，差异有非常显著性意义(表2)。72h组较24h组浓度有明显的增加，差异有非常显著性意义(t=6.28，P<0.01)。证明IL-1α可以通过时间依赖的方式促进椎间盘基质中PG的降解。
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表2不同时间培养液中硫酸软骨素的浓度(±s，μg/ml) 时间
n
实验组
对照组
d值
t值
P值
12h
6
54.00±6.69
30.58±3.19
, http://www.100md.com
23.42±4.24
-
-
24h
6
85.98±16.52
50.45±13.02
35.53±6.43
3.85
<0.01
72h
6
158.10±19.41
, http://www.100md.com
88.43±11.45
69.67±11.64
9.13
<0.01
注:以上t值均为与12h组相比讨论
退变的椎间盘组织可以自发地产生相当数量的金属蛋白酶和IL-6、IL-1α、IL-1β、TNF-α和粒细胞-巨噬细胞克隆刺激因子[3,4]。但是，这些细胞因子在椎间盘退变中的确切作用还不清楚。
本实验前对髓核组织进行为期14d的培养，对培养前后的髓核组织进行了组织学观察，发现细胞形态没有发生明显的改变，说明组织培养是成功的。为检测IL-1对椎间盘基质中PG代谢的影响提供了可靠的实验基础。
, 百拇医药 在关节软骨退变过程中，IL-1可以刺激大部分硫酸化的和含有硫酸软骨素的PG降解[5]。在椎间盘基质中含有大量的PG，其中以髓核中PG的含量最高[6]。Smith等[7]的研究发现：可以诱导PG降解的最低IL-1α浓度为15pmol/L。在本实验中加入IL-1α0.1nmol/L可以显著增加培养液中硫酸软骨素的含量，这与Smith的实验结果相一致，也证明较低浓度的IL-1α就可以使PG的降解显著增加。在组织培养中IL-1刺激软骨中PG的降解具有浓度依赖性[8]。本实验在髓核组织的培养液中分别加入IL-1α0.1、0.2、0.4nmol/L，观察到随着浓度的增加，髓核基质中PG的降解显著增加，即出现浓度依赖性。
在软骨的体外培养中，证实IL-1α刺激PG降解与金属蛋白酶的产生有关[8]。也有研究表明，在IL-1诱导的软骨PG降解过程中,色氨酸内肽酶起部分作用[9]。这说明IL-1诱导的PG降解可能是通过多种机制进行的。由于髓核组织与软骨的组织相似性，可以认为在髓核组织中也存在相似的机制。
, 百拇医药
本实验也对IL-1α的作用时间对髓核中PG降解的影响进行了检测。发现在作用12h后，髓核组织中PG的降解就有明显的增加，随着时间的延长，PG的降解呈逐渐递增趋势。这说明在髓核组织体外培养过程中，IL-1α刺激PG降解呈现明显的时间依赖性。Arner等[10]在对牛鼻中隔的软骨培养中发现,IL-1诱导软骨基质中PG降解有时间和浓度依赖性，这与本实验的结果一致。在软骨培养中加入纯化的IL-1，出现金属蛋白酶的持续释放[11]。说明随着时间的延长，IL-1刺激软骨细胞产生的金属蛋白酶增加。从一个方面解释了IL-1刺激PG降解的时间依赖性。同时，在没有加入IL-1的对照组中，随着时间的延长，PG的降解也增加，说明在椎间盘组织中有可能同时存在引起PG降解的其它因素,有待进一步的研究。
总之，椎间盘退变是一个复杂的过程，本实验证明IL-1α可以刺激椎间盘基质中PG的降解，并且这种作用呈浓度和时间依赖性。这为阐明椎间盘的退变过程提供了一定的理论依据。
, http://www.100md.com
参考文献
1，Neidel J, Zeidler U. Independent effects of interleukin- 1 on proteoglycan synthesis and proteoglycan breakdowm of bovine articular cartilage in vitro. Agents Actions, 1993, 39: 82- 90.
2，Campbell IK, Roughley PJ, Mort JS. The action of human articular- cartilage metalloproteinase on proteoglycan and link protein: similarities between products of degradation in situ and in vitro. Biochem J, 1986, 237:117- 122.
, 百拇医药
3，Kang JD, Georgescu HI,Mclntyre- Larkin L, et al. Herniated lumbar intervertebral discs spontaneously produce matrix metalloproteinases, nitric oxide, interleukin- 6, and prostaglandin E2. Spine, 1996,21:271- 277.
4，Takahashi H, Suguro T, Okazima Y, et al. Inflammatory cytokines in the herniated disc of the lumbar spine. Spine, 1996, 21: 218- 224.
5，O Byrne EM, Schroder HC, Stefano C , et al. Catabolin/ interleukin- 1 regulation of cartilage and chondrocyte metabolism. Agents Actions, 1987,21:341- 344.
, 百拇医药
6，胡有谷，主编.腰椎间盘突出症.第2版.北京:人民卫生出版社,1995.79-81.Smith RL, Allison AC, Schurman DJ. Induction of articular cartilage degradation by recombinant interleukin 1 alpha and 1 beta. Connect Tissue Res, 1989,18:307- 316.
7，Arner EC, Darnell LR, Pratta MA, et al. Effect of antiinflammatory drugs on human interleukin- 1- induced cartilage degradation. Agents Actions, 1987, 21: 334- 336.
8，Buttle DJ, Saklatvala J, Barrett AJ. The inhibition of interleukin 1- stimulated cartilage proteoglycan degradation by cysteine endopeptidase inactivators. Agents Actions Suppl, 1993, 39: 161- 165.
, 百拇医药
9，Arner EC, Pratta MA. Independent effects of interleukin- 1 on proteoglycan breakdown, proteoglycan synthesis , and prostaglandin E2 release from cartilage in organ culture. Arthritis Rheum, 1989,32:288- 297.
10，Mort JS, Campbell IK, Guttman A, et al. The role of mononuclear cell products as modulators of cartilage degradation. J Rheumatol, 1987, 14: 86- 87.
(收稿日期:1999-04-05), 百拇医药
单位：田庆显(252000山东省聊城市人民医院骨科)；胡有谷 郑洪军 齐宗华(青岛医学院附属医院骨科研究室)
关键词：椎间盘；白细胞介素1；代谢
中华骨科杂志000415
【摘要】目的研究白细胞介素1α(interleukin-1α，IL-1α)对椎间盘髓核中蛋白多糖代谢的影响。方法取自然流产的胎儿1具，胎龄8个月，术后4h内无菌取出椎间盘，进行髓核组织块的体外培养，在培养液中分别加入IL-1α0.1、0.2、0.4nmol/L，培养30h后，用Alcian法检测培养液中硫酸软骨素的含量。在髓核组织培养液中加入IL-1α0.3nmol/L，分别培养12、24、72h，然后检测培养液中硫酸软骨素的含量。结果IL-1α实验组较对照组培养液中硫酸软骨素的含量增加，随着IL-1α浓度的增加，培养液中硫酸软骨素的含量也增加，呈浓度依赖性。随着时间的增加，培养液中硫酸软骨素的含量也增加，呈现明显的时间依赖性。结论IL-1α可以刺激椎间盘基质中蛋白多糖降解，呈现明显的时间和浓度依赖性。
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The effects of the interleukin- 1α on the metabolism of proteoglycan in the lumbar intervertebral disc
TIAN Qingxian, HU Yougu, ZHENG Hongjun, et al.
Department of Orthopaedics, Liaocheng People s Hospital, Shandong 252000， China
【 Abstract】 Objective To study the effects of the interleukin- 1α (IL- 1α ) on the metabolism of the proteoglycan in the nucleus pulposus of lumbar intervertebral disc. Methods A fetus specimen of 8 months obtained from spontaneous abortion was used for this study. The lumbar intervertebral disc was harvested 4 hours after abortion, and the pieces of intervertebral disc was cultured in vitro. After 30 hours of culture and the addition of IL- 1α ( 0.1, 0.2 , 0.4 nmol/L ), the content of the chondroitin sulfate in culture medium was measured by Alcian method. And after the addition of IL- 1α (0.3 nmol/L) to the tissue culture medium of the nucleus pulposus, chondroitin sulfate of the culture medium was measured in 12 , 24 and 72 hours. Results The concentrations of chondroitin sulfate in culture medium with the addition IL- 1α increaed markedly than the controls, and the content of the chondroitin sulfate in culture medium increased progressively along with the concentrations of the IL- 1α , and the concentrations of the culture medium markedly increased with the time of culture. Conclusion IL- 1α can stimulate degradation of proteoglycan of the lumbar intervertebral disc. The effect shows a concentration- and time- dependency.
, 百拇医药
【 Key words】 Intervertebral disk; Interleukin- 1; Metabolism
椎间盘退变及其诱发的腰背痛是一种常见病，已有证据证明椎间盘的退变与蛋白多糖(proteoglycan，PG)的降解有关。近年来，人们对白细胞介素(interleukin，IL)对软骨基质中PG代谢的影响进行了研究。研究表明，小剂量的IL-1对软骨基质中PG的合成具有抑制作用[1]，而较大剂量的IL-1对软骨基质中PG的降解具有刺激作用[2]。说明IL-1在软骨基质的新陈代谢中起着重要的作用。由于椎间盘软骨终板和髓核与关节软骨具有相似的基质组成，故有理由认为调节基质中PG降解和合成的生物化学机制是相似的。但有关IL-1对人椎间盘基质中PG代谢的影响还没有进一步的报告。本研究通过对胎儿椎间盘髓核的组织培养，探讨IL-1对椎间盘基质中PG代谢的影响，以进一步阐明腰椎间盘退变的原因。
材料与方法
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一、椎间盘髓核组织块的分离和培养
取胎龄8个月,自然流产的胎儿1具。在术后4h内无菌取出椎间盘，用缓冲液冲洗干净，然后分离出髓核,浸于D-Hanks液中。用直径为2mm的组织环钻把髓核组织钻成直径约2mm，高约1～2mm的组织块。用DMEM-5%FBS培养液冲洗3次后,转移到培养瓶中，加入25mlDMEM-5%FBS培养液。在37℃、体积分数为5%的CO2培养箱中培养2d。组织块在不含血清的DMEM液中冲洗3次。把组织块转移到每孔装有150μlDMEM培养液(不含血清)的96孔培养板中。备用。
表1加入不同浓度IL-1α的培养液中硫酸软骨素的浓度(
±s) 浓度(nmol/L)n
硫酸软骨素浓度(μg/ml)
, 百拇医药
t值
P值
0.1
10
56.27±8.36
-
-
0.2
10
73.52±8.52
4.40
<0.01
0.4
, 百拇医药
10
98.57±17.24
6.88
<0.01
注：以上t值均为与0.1nmol/L组相比
二、IL-1α对髓核基质中PG代谢的影响
1.不同浓度的IL-1α对髓核中PG代谢的影响
在96孔培养板中标出30孔，分成3组，分别加入IL-1α0.1、0.2、0.4nmol/L。放入37℃、体积分数为5%的CO2培养箱中培养30h。分别测定加有不同浓度IL-1α的培养液中硫酸软骨素的含量。
2.IL-1α在不同培养时间对PG代谢的影响
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在96孔培养板中标出36孔，分成3组，每组配成6对，并将每对中两孔随机分配为对照组和实验组,分别在实验组培养孔中加入IL-1α0.3nmol/L。在37℃、体积分数为5%的CO2培养箱中培养12、24、72h。分别在不同时间测定培养液中硫酸软骨素的含量。
三、硫酸软骨素的检测方法
取待测样本50μl，加入8mol/L的盐酸胍50μl，静置15min后，加入试剂1(高浓度的Alcian液)50μl，振荡至完全溶解。然后加入试剂2B(低浓度的Alcian液)750μl，在4℃下孵育1h；12000r/min离心15min，去除上清液；加入DMSO洗脱液750μl，室温搅拌30min；12000r/min离心15min，去除上清液；加入溶解液500μl，室温搅拌15min。在同一样本液中取240μl相同的两份转移到96孔比色板中，600nm波长下测量样本中硫酸软骨素的含量。
结果
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一、IL-1α对髓核基质中PG降解的影响
经30h培养后发现，IL-1α可刺激PG的降解。方差分析检验，不同浓度组间硫酸软骨素浓度的差异有非常显著性意义(F=30.1，P<0.01)。随着IL-1α浓度的增加，PG的降解明显增加，0.2、0.4nmol/L组较0.1nmol/L组硫酸软骨素浓度明显增加，差异有非常显著性意义(表1)，0.4nmol/L组较0.2nmol/L组硫酸软骨素浓度有明显增加，差异有非常显著性意义(t=4.12，P<0.01)。表明IL-1α以浓度依赖的方式促进椎间盘基质中PG的降解。
二、髓核基质中PG降解的时间依赖性
在髓核组织培养液中加入0.3nmol/L的IL-1α，发现培养液中硫酸软骨素的浓度较对照组有明显的增加。经配对资料的t检验，每个时间段实验组和对照组的差异有非常显著性意义，t值分别为t12=13.51，P<0.01；t24=13.53，P<0.01；t72=14.64，P<0.01。随着培养时间的延长，培养液中硫酸软骨素浓度增加。经方差分析，12、24和72h每个时间段实验组与对照组间浓度之差(d)的差异亦有非常显著性意义(F=53.01，P<0.01)。24、72h组均较12h组浓度增加，差异有非常显著性意义(表2)。72h组较24h组浓度有明显的增加，差异有非常显著性意义(t=6.28，P<0.01)。证明IL-1α可以通过时间依赖的方式促进椎间盘基质中PG的降解。
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表2不同时间培养液中硫酸软骨素的浓度(
±s，μg/ml) 时间n
实验组
对照组
d值
t值
P值
12h
6
54.00±6.69
30.58±3.19
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23.42±4.24
-
-
24h
6
85.98±16.52
50.45±13.02
35.53±6.43
3.85
<0.01
72h
6
158.10±19.41
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88.43±11.45
69.67±11.64
9.13
<0.01
注:以上t值均为与12h组相比讨论
退变的椎间盘组织可以自发地产生相当数量的金属蛋白酶和IL-6、IL-1α、IL-1β、TNF-α和粒细胞-巨噬细胞克隆刺激因子[3,4]。但是，这些细胞因子在椎间盘退变中的确切作用还不清楚。
本实验前对髓核组织进行为期14d的培养，对培养前后的髓核组织进行了组织学观察，发现细胞形态没有发生明显的改变，说明组织培养是成功的。为检测IL-1对椎间盘基质中PG代谢的影响提供了可靠的实验基础。
, 百拇医药 在关节软骨退变过程中，IL-1可以刺激大部分硫酸化的和含有硫酸软骨素的PG降解[5]。在椎间盘基质中含有大量的PG，其中以髓核中PG的含量最高[6]。Smith等[7]的研究发现：可以诱导PG降解的最低IL-1α浓度为15pmol/L。在本实验中加入IL-1α0.1nmol/L可以显著增加培养液中硫酸软骨素的含量，这与Smith的实验结果相一致，也证明较低浓度的IL-1α就可以使PG的降解显著增加。在组织培养中IL-1刺激软骨中PG的降解具有浓度依赖性[8]。本实验在髓核组织的培养液中分别加入IL-1α0.1、0.2、0.4nmol/L，观察到随着浓度的增加，髓核基质中PG的降解显著增加，即出现浓度依赖性。
在软骨的体外培养中，证实IL-1α刺激PG降解与金属蛋白酶的产生有关[8]。也有研究表明，在IL-1诱导的软骨PG降解过程中,色氨酸内肽酶起部分作用[9]。这说明IL-1诱导的PG降解可能是通过多种机制进行的。由于髓核组织与软骨的组织相似性，可以认为在髓核组织中也存在相似的机制。
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本实验也对IL-1α的作用时间对髓核中PG降解的影响进行了检测。发现在作用12h后，髓核组织中PG的降解就有明显的增加，随着时间的延长，PG的降解呈逐渐递增趋势。这说明在髓核组织体外培养过程中，IL-1α刺激PG降解呈现明显的时间依赖性。Arner等[10]在对牛鼻中隔的软骨培养中发现,IL-1诱导软骨基质中PG降解有时间和浓度依赖性，这与本实验的结果一致。在软骨培养中加入纯化的IL-1，出现金属蛋白酶的持续释放[11]。说明随着时间的延长，IL-1刺激软骨细胞产生的金属蛋白酶增加。从一个方面解释了IL-1刺激PG降解的时间依赖性。同时，在没有加入IL-1的对照组中，随着时间的延长，PG的降解也增加，说明在椎间盘组织中有可能同时存在引起PG降解的其它因素,有待进一步的研究。
总之，椎间盘退变是一个复杂的过程，本实验证明IL-1α可以刺激椎间盘基质中PG的降解，并且这种作用呈浓度和时间依赖性。这为阐明椎间盘的退变过程提供了一定的理论依据。
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参考文献
1，Neidel J, Zeidler U. Independent effects of interleukin- 1 on proteoglycan synthesis and proteoglycan breakdowm of bovine articular cartilage in vitro. Agents Actions, 1993, 39: 82- 90.
2，Campbell IK, Roughley PJ, Mort JS. The action of human articular- cartilage metalloproteinase on proteoglycan and link protein: similarities between products of degradation in situ and in vitro. Biochem J, 1986, 237:117- 122.
, 百拇医药
3，Kang JD, Georgescu HI,Mclntyre- Larkin L, et al. Herniated lumbar intervertebral discs spontaneously produce matrix metalloproteinases, nitric oxide, interleukin- 6, and prostaglandin E2. Spine, 1996,21:271- 277.
4，Takahashi H, Suguro T, Okazima Y, et al. Inflammatory cytokines in the herniated disc of the lumbar spine. Spine, 1996, 21: 218- 224.
5，O Byrne EM, Schroder HC, Stefano C , et al. Catabolin/ interleukin- 1 regulation of cartilage and chondrocyte metabolism. Agents Actions, 1987,21:341- 344.
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6，胡有谷，主编.腰椎间盘突出症.第2版.北京:人民卫生出版社,1995.79-81.Smith RL, Allison AC, Schurman DJ. Induction of articular cartilage degradation by recombinant interleukin 1 alpha and 1 beta. Connect Tissue Res, 1989,18:307- 316.
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(收稿日期:1999-04-05), 百拇医药