水飞蓟素和山莨菪碱对糖基化产物培养下牛视网膜周细胞增生的保护作用
作者：席兴华 姜德咏 唐罗生
单位：中南大学附属第二医院眼科，长沙 410011
关键词：水飞蓟素；山莨菪碱；糖基化产物；周细胞
中国中医眼科杂志000401 [摘 要]目的 研究水飞蓟素和山莨菪碱拮抗糖基化产物和抑制牛视网膜毛细血管周细胞增生的作用。方法 采用M T T比色测定结合3H-TdR掺入，观察水飞蓟素和山莨菪碱对早期糖基化白蛋白产物(early glycosylation products of albumin,EGPA)和糖基化终产物(advanced glycosylation end products of albumin,AGEPA)培养下的周细胞增生和DNA合成的影响。结果 在EGPA和 AGEPA培养下，M T T测定的A值水飞蓟素组分别为0.4919±0.0620和0.4003±0.0692，与对照组(0.4619±0.0539和0.3884±0.0826)比较分别为P<0.01和P>0.05；山莨菪碱组分别为0.4826±0.0536和0.3907±0.0748，与对照组比较P>0.05；3H-TdR掺入量(Cpm)：水飞蓟素组分别为44767.67±1633.29和40015.44±890.78，与对照组(41825.54±1452.67和38237.00±1291.25)比较P<0.01和P>0.05；山莨菪碱组分别为41751.22±1291.25和39067.67±952.19，与对照组比较P>0.05。结论 山莨菪碱能有效地拮抗EGPA培养下的周细胞增生并抑制DNA的合成，但对AGEPA培养下周细胞的上述改变无明显保护作用；山莨菪碱对EGPA和 AGEPA所致的周细胞增生的抑制和DNA合成的减少均无显著保护作用。
, 百拇医药
中图分类号：R285.5；R329.28 文献标识码：A
文章编号：1002-4379(2000)04-0187-04
The protection of silymarin and anisodamine on growth and DNA changes of bovine retinal capillary pericytes cultured in glycosylation products
XI Xinghua,JIANG Deyong,TANG Luosheng
(Department of Ophthalmology,Second Affiliated Hospital,Zhungnan University,Changsha,410011,China)
, 百拇医药
[Abstract]OBJECTIVE To investigate the protective effects of silymarin and anisodamine on growth inhibition and DNA decrease induced by glycosylation products for bovine retinal capillary pericytes.METHODS We studied the effect of silymarin and anisodamine in different concentration on DNA and growth inhibition of pericytes cultured in the medium contained early glycosylation products of bovine serum albumin (EGPA)and advanced glycosylation end products of bovine serum albumin (AGEPA),which were determined by M T T colorimetric assay and [3H]-TdR.incorporating RESULTS In the cultural condition of EGPA and AGEPA,the A value by M T T were 0.4619±0.0539 and 0.3884±0.0826 in the control groups,and were 0.4919±0.0620，0.4003±0.0692 in the silymarin groups and were 0.4826±0.0536,0.3907±0.0748 in anisodamine groups (P<0.01，and P>0.05).The amount of [3H]-TdR incorporating in pericytes were 41825.54±1452.67,38237.00±1291.25 in control groups,and were 44767.67±1633.29,40015.44±890.78 in silymarin groups respectively(P<0.01and P>0.05)，and were 41751.22±1291.25,39067.67±952.19 in anisodamine groups.CONCIUSION Silymarin may effectively protect pericytes against the proliferative inhibition and DNA decrease by EGPA-induced,but it no effect for those induced by AGEPA.Anisodamine can not protect pericytes against the proliferative inhibition and DNA decrease by EGPA-induced or by AGEPA-induced.
, http://www.100md.com
[Key words]silymarin；anisodamine；glycosylation products；pericytes
我国传统的中药在防治糖尿病及其慢性并发症方面有着悠久的历史。最近发现，中药水飞蓟素(silymarin)具有抑制蛋白质非酶糖化和氧化的作用，山莨菪碱(anisodamine)亦有较强的抗氧化功效〔1～3〕。1998年2月～12月我们观察了水飞蓟素和山莨菪碱对在早期糖基化产物(early glycation products of albumin,EGPA)和糖基化终产物(advanced glycation end products of albumin,AGEPA)培养下的牛视网膜微血管周细胞(pericytes,PC)增殖和DNA合成的影响，以探讨它们在糖尿病视网膜病变(diabetic retinopath,DR)早期防治中的作用。
1 材料和方法
, 百拇医药
1.1 实验材料
水飞蓟素由上海朝晖制药厂提供。水飞蓟素贮存液的配制：因水飞蓟素难溶于水，故先配制成水溶性的水飞蓟素葡甲胺盐结晶。然后用紫外分光光度仪在(288±1)nm波长处测定其吸收度，按水飞蓟素(C25H22O10)的吸收系数(E1%cm)为456.1计算，并与1.405相乘，换算成水飞蓟素葡甲胺盐的含量〔4，5〕。然后用DMEM培养液溶解，配成50mmol/L浓度的水飞蓟素贮存液备用。山莨菪碱注射液为江苏兴化制药厂产品。M T T：Sigma公司产品。3H-TdR：北京原子能研究所产品。液闪计数仪：美国Beckman LS3801型。
糖基化产物及其对照物的制备及检测：①EG-BSA制备；将5%的无球蛋白牛血清白蛋白与0.5mol/L D-葡萄糖和1mmol/L PMSF(phenylmethyl sulfonyl fluoride)共同溶解于0.2mol/L磷酸缓冲液中，经0.22μm滤膜过滤除菌后，置37℃孵箱内孵化10d。②AEG-BSA制备：材料及方法同上，孵化时间为60d。③EG-BSA和AGE-BSA对照物的制备：除不加葡萄糖外，其它材料及方法同上。所有糖基化产物孵化结束后，未结合物质通过对磷酸缓冲盐溶液的广泛透析而除去，然后用0.22μm滤膜过滤除菌。。同时取样用荧光光度计数仪(激发/发射波长为370/440nm)检测其荧光强度。EG-BSA和AGE-BSA的荧光强度分别较对照组高12倍和50倍。
, http://www.100md.com
周细胞的培养及鉴定：取宰后2h内牛眼，置冰盒内带回实验室，无菌操作台内摘取视网膜，剪碎。采用胶原酶消化和滤网过滤分离细胞，辅以细胞克隆的分离培养和反复除杂，以获得纯净的周细胞。并经免疫细胞化学染色证实，周细胞对单克隆抗体3G5和α-肌动蛋白抗体染色阳性，对Ⅷ因子抗体染色阴性。
1.2 方法
1.2.1 水飞蓟素和莨菪碱对EGPA和AGEPA培养下周细胞增殖影响的检测：取3～6代周细胞经0.25%胰蛋白酶消化后，用含10%FBS的RPMI1640培养液配成单个细胞悬液，1×105/孔个细胞接种于96孔培养板内，24h细胞贴壁后分组。每孔在加入500μl/ml(终浓度)EGPA或AGEPA的同时，分别加入终浓度为2.5，5.0，10，20，40，80μg/ml的水飞蓟素或山莨菪碱(同一浓度以4孔平行)，并设只加EGPA或AGEPA不加药物的对照组。各组置37℃培养箱内培养4d，按MTT检测方法于培养结束时进行MTT检测。
, 百拇医药
1.2.2 水飞蓟素和山莨菪碱对EGPA和AGEPA培养下的周细胞 DNA合成量检测：细胞接种方法及分组同上，每孔在加入终浓度500μl/ml EGPA或AGEPA的同时，分别加入水飞蓟素或山莨菪碱(终浓度同上)。置37℃培养箱内培养4d后，每孔再同时加入3H-TdR1μBq，继续培养24h后取出，于Beckman LS 3801液闪计数仪检测样品放射性CPM值。
1.2.3 统计学方法：SPSS for Windors 8.0软件包建立数据库。采用One-Way-Anova方差分析及两两比较。均数和标准差用x —±s表示，显著性检验以P<0.05为有意义。
2 结果
2.1 水飞蓟素及山莨菪碱对EGPA和AGEPA培养条件下周细胞增殖改变的影响
EGPA培养条件下，三组方差分析显示差异有显著性(F=4.376，P<0.05)；两两比较发现，水飞蓟素组与对照组之间差异亦有显著性(P<0.01)，但山莨菪碱组与对照组和水飞蓟素组与山莨菪碱组之间差异均无显著性P>0.05，表1)。AGEPA培养条件下，三组间方差分析和两两比较差异均无显著性(F=0.343，P>0.05，表1)。
, 百拇医药
2.2 水飞蓟素和山莨菪碱对EGPA和AGEPA培养条件下周细胞 DNA合成量的影响
EGPA培养条件下，方差分析显示水飞蓟素组、山莨菪碱组与对照组之间3H-TdR掺入量差异有显著性(F=10.54，P<0.01)；两两比较发现，水飞蓟素组与对照组之间差异有显著性(P<0.01)，而山莨菪碱组与对照组之间差异无显著性(P>0.05)。同时，水飞蓟素组与山莨菪碱组比较，差异也有显著性(P<0.01，表2)。AGEPA培养下，水飞蓟素组和山莨菪碱组分别与对照组比较，差异无显著性(P>0.05，表2)。
表1 水飞蓟素和山莨菪碱对糖基化产物培养
下周细胞增殖的影响(M T T法) 组 别
A值(
±s)
, http://www.100md.com
t值
P值
早期糖基化产物
对照组
0.4619±0.0539
-
-
水飞蓟素组
0.4919±0.0620
2.813
<0.01
山莨菪碱组
0.4826±0.0532
, 百拇医药
1.712
>0.05
糖基化终产物
对照组
0.3884±0.0626
-
-
水飞蓟素组
0.4003±0.0692
0.647
>0.05
山莨菪碱组
0.3907±0.0524
, 百拇医药
0.127
>0.05
3 讨论
水飞蓟素是从中药植物水飞蓟种子中提取的一种黄酮类化合物。体内外研究证实水飞蓟
素具有抑制蛋白质的非酶糖化和氧化的作用[1，2]。中药山莨菪碱除了有抗休克、解痉、止痛等功效外，还能在细胞膜水平上对抗氧自由基引起的膜脂质过氧化，保护细胞免受氧化应激反应所引起的损害〔3〕。
表2 水飞蓟素和山莨菪碱对糖基化产物培养
下周细胞3H-TdR掺入的影响(CPM) 组 别
CPM值(±s)
, 百拇医药
t值
P值
早期糖基化产物
对照组
41825.54±1452.67
-
-
水飞蓟素组
44767.67±1633.29
3.099
<0.01
山莨菪碱组
, 百拇医药 41951.22±1291.25
0.902
>0.05
糖基化终产物
对照组
38237.00±1291.25
-
-
水飞蓟素组
40015.44±890.78
3.140
>0.05
, http://www.100md.com
山莨菪碱组
39067.67±952.19
1.494
>0.05
已有研究报道，AGEPA在周细胞和内皮细胞及基底膜沉积，可产生氧化应激反应和释放自由基及蛋白酶对细胞产生损伤；同时还可作为活化蛋白激酶C(PKC)的底物，通过活化PKC途径引起DR的发生。有人证实EGPA和AGEPA都能不同程度地抑制视网膜微血管周细胞增生和DNA合成，尤以AGEPA为著〔6〕。本研究发现，在EGPA培养条件下，与未加药物的对照组比较，水飞蓟素组周细胞增殖数和DNA合成量均有显著性增高，并随着药物浓度的增高而愈加明显。这说明水飞蓟素对在EGPA培养条件下牛的周细胞具有较强的保护作用。这可能与其①抑制细胞醛糖还原酶活性，减少烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸酯消耗，提高细胞的抗氧化能力；②抑制脂质过氧化物形成，并清除超氧离子自由基及羟自由基，防止细胞内发生脂质过氧化反应及细胞膜的损害；③直接抑制AGEPA生成〔1，2，7，8，9〕有关。但对AGEPA培养条件下牛的周细胞增殖抑制和DN A合成减少无显著性保护作用。这说明水飞蓟素不能直接抑制AGEPA对周细胞的损害，可能与其作用的机制有关。山莨菪碱对在EGPA和AGEPA培养条件下牛的周细胞增殖抑制和DNA合成减少均无明显保护作用。这也从另一方面说明糖基化产物抑制周细胞增殖和DNA合成减少的机制，虽有氧化应激反应的参与，但可能不是主要的因素。
, 百拇医药
中药水飞蓟素是一种来源广泛，产量丰富的黄酮类中药。其对EGPA所致的周细胞增殖抑制和DNA合成减少所显示的保护作用，说明其确具有较强的非酶糖化抑制作用和抗氧化作用。如何分离和提取其有效药物成分，改善其制剂，使其能充分地发挥药效，对开发祖国医药宝库，利用中药防治DR具有重要的意义。基金项目：湖南省卫生厅科研基金资助项目(98029)
参考文献
1，张家庆，周云平，葛 勇，等.黄芩甙、水飞蓟素、槲皮素抑制糖尿病模型鼠醛糖还原酶和蛋白非酶糖化作用[J].中华内科杂志，1994，33：193-195.
2，徐前进，张家庆，黄庆玲.水飞蓟素对糖尿病大鼠肾组织非酶糖化及氧化的影响[J].中国糖尿病杂志，1997，5：225-228.
3，阳冠明，黄伟民，叶司原，等.山莨菪碱抗脂质过氧化的研究[J]中国药理学通报，1996，12：521-523.
, 百拇医药
4，张时行，吴知行.水溶性水飞蓟素及其制剂的制备和质量标准[J].药学通报，1981，19：7-8.
5，吴知行，张时行，徐丽蓉，等.水飞蓟素及其水溶性衍生物和制剂含量测定方法的研究[J].南京药学院学报，1981，17(2)：28-35.
6，Ruggiero-Lopez D,Rellier N,Lecomte M,et al.Growth modulation of retinal microvascular cells by early and advanced glycation products[J].Diabetes Res Clin Pract,1997,34:135-142.
7，张家庆，周云平.部分中药或其成分对大鼠晶状体醛糖还原酶的抑制作用[J].中国中药杂志，1989，14：45-47.
8，刘长山，朱禧星.7种药物对醛糖还原酶的抑制作用[J].中国中药杂志，1997，22：372-374.
9，葛 勇，张家庆，周云平.水飞蓟素及槲皮素对体外白蛋白非酶糖化的抑制作用[J].第二军医大学学报，1995，16：333-336.
收稿日期：2000-05-26, http://www.100md.com
单位：中南大学附属第二医院眼科，长沙 410011
关键词：水飞蓟素；山莨菪碱；糖基化产物；周细胞
中国中医眼科杂志000401 [摘 要]目的 研究水飞蓟素和山莨菪碱拮抗糖基化产物和抑制牛视网膜毛细血管周细胞增生的作用。方法 采用M T T比色测定结合3H-TdR掺入，观察水飞蓟素和山莨菪碱对早期糖基化白蛋白产物(early glycosylation products of albumin,EGPA)和糖基化终产物(advanced glycosylation end products of albumin,AGEPA)培养下的周细胞增生和DNA合成的影响。结果 在EGPA和 AGEPA培养下，M T T测定的A值水飞蓟素组分别为0.4919±0.0620和0.4003±0.0692，与对照组(0.4619±0.0539和0.3884±0.0826)比较分别为P<0.01和P>0.05；山莨菪碱组分别为0.4826±0.0536和0.3907±0.0748，与对照组比较P>0.05；3H-TdR掺入量(Cpm)：水飞蓟素组分别为44767.67±1633.29和40015.44±890.78，与对照组(41825.54±1452.67和38237.00±1291.25)比较P<0.01和P>0.05；山莨菪碱组分别为41751.22±1291.25和39067.67±952.19，与对照组比较P>0.05。结论 山莨菪碱能有效地拮抗EGPA培养下的周细胞增生并抑制DNA的合成，但对AGEPA培养下周细胞的上述改变无明显保护作用；山莨菪碱对EGPA和 AGEPA所致的周细胞增生的抑制和DNA合成的减少均无显著保护作用。
, 百拇医药
中图分类号：R285.5；R329.28 文献标识码：A
文章编号：1002-4379(2000)04-0187-04
The protection of silymarin and anisodamine on growth and DNA changes of bovine retinal capillary pericytes cultured in glycosylation products
XI Xinghua,JIANG Deyong,TANG Luosheng
(Department of Ophthalmology,Second Affiliated Hospital,Zhungnan University,Changsha,410011,China)
, 百拇医药
[Abstract]OBJECTIVE To investigate the protective effects of silymarin and anisodamine on growth inhibition and DNA decrease induced by glycosylation products for bovine retinal capillary pericytes.METHODS We studied the effect of silymarin and anisodamine in different concentration on DNA and growth inhibition of pericytes cultured in the medium contained early glycosylation products of bovine serum albumin (EGPA)and advanced glycosylation end products of bovine serum albumin (AGEPA),which were determined by M T T colorimetric assay and [3H]-TdR.incorporating RESULTS In the cultural condition of EGPA and AGEPA,the A value by M T T were 0.4619±0.0539 and 0.3884±0.0826 in the control groups,and were 0.4919±0.0620，0.4003±0.0692 in the silymarin groups and were 0.4826±0.0536,0.3907±0.0748 in anisodamine groups (P<0.01，and P>0.05).The amount of [3H]-TdR incorporating in pericytes were 41825.54±1452.67,38237.00±1291.25 in control groups,and were 44767.67±1633.29,40015.44±890.78 in silymarin groups respectively(P<0.01and P>0.05)，and were 41751.22±1291.25,39067.67±952.19 in anisodamine groups.CONCIUSION Silymarin may effectively protect pericytes against the proliferative inhibition and DNA decrease by EGPA-induced,but it no effect for those induced by AGEPA.Anisodamine can not protect pericytes against the proliferative inhibition and DNA decrease by EGPA-induced or by AGEPA-induced.
, http://www.100md.com
[Key words]silymarin；anisodamine；glycosylation products；pericytes
我国传统的中药在防治糖尿病及其慢性并发症方面有着悠久的历史。最近发现，中药水飞蓟素(silymarin)具有抑制蛋白质非酶糖化和氧化的作用，山莨菪碱(anisodamine)亦有较强的抗氧化功效〔1～3〕。1998年2月～12月我们观察了水飞蓟素和山莨菪碱对在早期糖基化产物(early glycation products of albumin,EGPA)和糖基化终产物(advanced glycation end products of albumin,AGEPA)培养下的牛视网膜微血管周细胞(pericytes,PC)增殖和DNA合成的影响，以探讨它们在糖尿病视网膜病变(diabetic retinopath,DR)早期防治中的作用。
1 材料和方法
, 百拇医药
1.1 实验材料
水飞蓟素由上海朝晖制药厂提供。水飞蓟素贮存液的配制：因水飞蓟素难溶于水，故先配制成水溶性的水飞蓟素葡甲胺盐结晶。然后用紫外分光光度仪在(288±1)nm波长处测定其吸收度，按水飞蓟素(C25H22O10)的吸收系数(E1%cm)为456.1计算，并与1.405相乘，换算成水飞蓟素葡甲胺盐的含量〔4，5〕。然后用DMEM培养液溶解，配成50mmol/L浓度的水飞蓟素贮存液备用。山莨菪碱注射液为江苏兴化制药厂产品。M T T：Sigma公司产品。3H-TdR：北京原子能研究所产品。液闪计数仪：美国Beckman LS3801型。
糖基化产物及其对照物的制备及检测：①EG-BSA制备；将5%的无球蛋白牛血清白蛋白与0.5mol/L D-葡萄糖和1mmol/L PMSF(phenylmethyl sulfonyl fluoride)共同溶解于0.2mol/L磷酸缓冲液中，经0.22μm滤膜过滤除菌后，置37℃孵箱内孵化10d。②AEG-BSA制备：材料及方法同上，孵化时间为60d。③EG-BSA和AGE-BSA对照物的制备：除不加葡萄糖外，其它材料及方法同上。所有糖基化产物孵化结束后，未结合物质通过对磷酸缓冲盐溶液的广泛透析而除去，然后用0.22μm滤膜过滤除菌。。同时取样用荧光光度计数仪(激发/发射波长为370/440nm)检测其荧光强度。EG-BSA和AGE-BSA的荧光强度分别较对照组高12倍和50倍。
, http://www.100md.com
周细胞的培养及鉴定：取宰后2h内牛眼，置冰盒内带回实验室，无菌操作台内摘取视网膜，剪碎。采用胶原酶消化和滤网过滤分离细胞，辅以细胞克隆的分离培养和反复除杂，以获得纯净的周细胞。并经免疫细胞化学染色证实，周细胞对单克隆抗体3G5和α-肌动蛋白抗体染色阳性，对Ⅷ因子抗体染色阴性。
1.2 方法
1.2.1 水飞蓟素和莨菪碱对EGPA和AGEPA培养下周细胞增殖影响的检测：取3～6代周细胞经0.25%胰蛋白酶消化后，用含10%FBS的RPMI1640培养液配成单个细胞悬液，1×105/孔个细胞接种于96孔培养板内，24h细胞贴壁后分组。每孔在加入500μl/ml(终浓度)EGPA或AGEPA的同时，分别加入终浓度为2.5，5.0，10，20，40，80μg/ml的水飞蓟素或山莨菪碱(同一浓度以4孔平行)，并设只加EGPA或AGEPA不加药物的对照组。各组置37℃培养箱内培养4d，按MTT检测方法于培养结束时进行MTT检测。
, 百拇医药
1.2.2 水飞蓟素和山莨菪碱对EGPA和AGEPA培养下的周细胞 DNA合成量检测：细胞接种方法及分组同上，每孔在加入终浓度500μl/ml EGPA或AGEPA的同时，分别加入水飞蓟素或山莨菪碱(终浓度同上)。置37℃培养箱内培养4d后，每孔再同时加入3H-TdR1μBq，继续培养24h后取出，于Beckman LS 3801液闪计数仪检测样品放射性CPM值。
1.2.3 统计学方法：SPSS for Windors 8.0软件包建立数据库。采用One-Way-Anova方差分析及两两比较。均数和标准差用x —±s表示，显著性检验以P<0.05为有意义。
2 结果
2.1 水飞蓟素及山莨菪碱对EGPA和AGEPA培养条件下周细胞增殖改变的影响
EGPA培养条件下，三组方差分析显示差异有显著性(F=4.376，P<0.05)；两两比较发现，水飞蓟素组与对照组之间差异亦有显著性(P<0.01)，但山莨菪碱组与对照组和水飞蓟素组与山莨菪碱组之间差异均无显著性P>0.05，表1)。AGEPA培养条件下，三组间方差分析和两两比较差异均无显著性(F=0.343，P>0.05，表1)。
, 百拇医药
2.2 水飞蓟素和山莨菪碱对EGPA和AGEPA培养条件下周细胞 DNA合成量的影响
EGPA培养条件下，方差分析显示水飞蓟素组、山莨菪碱组与对照组之间3H-TdR掺入量差异有显著性(F=10.54，P<0.01)；两两比较发现，水飞蓟素组与对照组之间差异有显著性(P<0.01)，而山莨菪碱组与对照组之间差异无显著性(P>0.05)。同时，水飞蓟素组与山莨菪碱组比较，差异也有显著性(P<0.01，表2)。AGEPA培养下，水飞蓟素组和山莨菪碱组分别与对照组比较，差异无显著性(P>0.05，表2)。
表1 水飞蓟素和山莨菪碱对糖基化产物培养
下周细胞增殖的影响(M T T法) 组 别
A值(
±s), http://www.100md.com
t值
P值
早期糖基化产物
对照组
0.4619±0.0539
-
-
水飞蓟素组
0.4919±0.0620
2.813
<0.01
山莨菪碱组
0.4826±0.0532
, 百拇医药
1.712
>0.05
糖基化终产物
对照组
0.3884±0.0626
-
-
水飞蓟素组
0.4003±0.0692
0.647
>0.05
山莨菪碱组
0.3907±0.0524
, 百拇医药
0.127
>0.05
3 讨论
水飞蓟素是从中药植物水飞蓟种子中提取的一种黄酮类化合物。体内外研究证实水飞蓟
素具有抑制蛋白质的非酶糖化和氧化的作用[1，2]。中药山莨菪碱除了有抗休克、解痉、止痛等功效外，还能在细胞膜水平上对抗氧自由基引起的膜脂质过氧化，保护细胞免受氧化应激反应所引起的损害〔3〕。
表2 水飞蓟素和山莨菪碱对糖基化产物培养
下周细胞3H-TdR掺入的影响(CPM) 组 别
CPM值(
±s), 百拇医药
t值
P值
早期糖基化产物
对照组
41825.54±1452.67
-
-
水飞蓟素组
44767.67±1633.29
3.099
<0.01
山莨菪碱组
, 百拇医药 41951.22±1291.25
0.902
>0.05
糖基化终产物
对照组
38237.00±1291.25
-
-
水飞蓟素组
40015.44±890.78
3.140
>0.05
, http://www.100md.com
山莨菪碱组
39067.67±952.19
1.494
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已有研究报道，AGEPA在周细胞和内皮细胞及基底膜沉积，可产生氧化应激反应和释放自由基及蛋白酶对细胞产生损伤；同时还可作为活化蛋白激酶C(PKC)的底物，通过活化PKC途径引起DR的发生。有人证实EGPA和AGEPA都能不同程度地抑制视网膜微血管周细胞增生和DNA合成，尤以AGEPA为著〔6〕。本研究发现，在EGPA培养条件下，与未加药物的对照组比较，水飞蓟素组周细胞增殖数和DNA合成量均有显著性增高，并随着药物浓度的增高而愈加明显。这说明水飞蓟素对在EGPA培养条件下牛的周细胞具有较强的保护作用。这可能与其①抑制细胞醛糖还原酶活性，减少烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸酯消耗，提高细胞的抗氧化能力；②抑制脂质过氧化物形成，并清除超氧离子自由基及羟自由基，防止细胞内发生脂质过氧化反应及细胞膜的损害；③直接抑制AGEPA生成〔1，2，7，8，9〕有关。但对AGEPA培养条件下牛的周细胞增殖抑制和DN A合成减少无显著性保护作用。这说明水飞蓟素不能直接抑制AGEPA对周细胞的损害，可能与其作用的机制有关。山莨菪碱对在EGPA和AGEPA培养条件下牛的周细胞增殖抑制和DNA合成减少均无明显保护作用。这也从另一方面说明糖基化产物抑制周细胞增殖和DNA合成减少的机制，虽有氧化应激反应的参与，但可能不是主要的因素。
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中药水飞蓟素是一种来源广泛，产量丰富的黄酮类中药。其对EGPA所致的周细胞增殖抑制和DNA合成减少所显示的保护作用，说明其确具有较强的非酶糖化抑制作用和抗氧化作用。如何分离和提取其有效药物成分，改善其制剂，使其能充分地发挥药效，对开发祖国医药宝库，利用中药防治DR具有重要的意义。基金项目：湖南省卫生厅科研基金资助项目(98029)
参考文献
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, 百拇医药
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收稿日期：2000-05-26, http://www.100md.com
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