人转铁蛋白-阿霉素结合物的制备及其体外细胞毒作用
作者：林溪 黄秀旺
单位：林溪 黄秀旺(福建医科大学临床药理研究所 福州350004)
关键词：转铁蛋白；阿霉素；肿瘤细胞，培养的
肿瘤000409 摘要：目的 介绍人转铁蛋白-阿霉素结合物的制备及其细胞毒性 。方法 采用氧化葡聚糖(DEX)T-40作为中介体，联结人转铁蛋白(HTF)与 阿霉素(ADR)制备人转铁蛋白-阿霉素交联物(HTF-DEX-ADR)。HTF与ADR的克分子比为1∶4 0～45。以MTT法测其细胞毒性。结果 交联物对肿瘤细胞K562 1 h处理的IC 50是游离ADR的4.2倍，对正常人单核细胞48 h处理的杀伤只有游离ADR的1/9。结论 结合物对肿瘤细胞(K562)有选择性杀伤作用。
中图分类号：R73-361 文献标识码：A 文章编号：1000-7431(2000)04 -0263-03
, http://www.100md.com
PREPARATION OF HUMAN TRANSFERRIN-ADRIAMYCIN CONJUGATE AND CYTOTOXIC EFFECT OF THE CONJUGATES IN VITRO
LIN Xi
(Institute of Clinical Pharmacology, Fujian Medical University，Fu-zhou 350004 China)
HUANG Xiu-wang.
(Institute of Clinical Pharmacology, Fujian Medical University，Fu-zhou 350004 China)
Abstract：Objective Preparation of human transferrin-adriamycin conjug ate and its cytotoxicity was described. Methods Human transferrin (HTF) was conjugatd w ith adriamycin (ADR), via oxidative dextran T-40 as linker, to construct HTF-D EX-ADR. The molarratio of HTF to drug was to 40-45. The cytotoxicity of HTF-D EX-ADR to K562 cells was determined by MTT method. Results The cytotoxicity of HTF-DEX-ADR to K562 cells was 4.2 times than that of free ADR, while to norm al peripheral blood mononuclear cells was only 1/9 that of free ADR. Conclusion It suggests that the conjugate shows a selective cyt otoxicity to K562 cells.
, 百拇医药
Key words： Transferrin; Adriamycin; Tumor cells, cult ured
免疫导向药物是特异性抗肿瘤治疗有前途的药物，但鼠源单位的异源性问题制约了免疫导向 的临床应用。人转铁蛋白受体(Human transferrin receptor HTFR)的表达受细胞增殖调节 。恶性肿瘤细胞表面HTFR的超量表达提示人转铁蛋白(HTF)作为抗肿瘤导向药物载体的可能 性。本文采用HTF作为导向载体，以葡聚糖(Dextran T-40，DEX)为中介体，选用过碘酸钠 法将HTF与阿霉素(Adriamycin, ADR)交联，制备交联物HTF-DEX-ADR，并观察交联物对肿 瘤细胞的杀伤作用，以探讨HTF作为内源性导向载体的可行性。
材料与方法
1.人转铁蛋白-阿霉素结合物的制备 阿霉素由意大利Farmitalia Carbo Erbaltd生产， 桔红色冻干粉剂；人转铁蛋白、葡聚糖(平均分子量40 000)系Sigma公司产品；标准分 子量 蛋白是Serva公司产品；Sephacryl S-300购于Pharmasia公司；其余试剂均为分析纯。结合 物制备参照文献[1]进行。结合物经Sephacryl S-300分离纯化，收集第一峰，结 合物中人转铁蛋白含量测定用LOWRY氏法；ADR测定根据495 nm百分消光系数E1% 1 cm=196 [2]计算，然后计算人转铁蛋白与ADR的克分子比。Sephacryl S-300柱用标准蛋白 标定分子量标准曲线。
, 百拇医药
2.交联物中ADR药物敏感度检测 采用试管稀释法测定。试验菌为大肠杆菌(由本校微生物 教研室引种)，培养基为肉浸液。
3.交联物对肿瘤细胞的杀伤作用测定 选用K562细胞(引自本校肿瘤研究室)为实验细胞， 人 单个核细胞为参照细胞；以MTT法测定不同浓度交联物对上述细胞的杀伤作用：K562细胞制 成悬液，每孔2×104铺96孔板。人单个核细胞由人外周血经分层液密度梯度离心法制取， 每孔2×105铺板，以上孔加不同浓度结合物。游离ADR作比较，不加药组为对照，无细胞 孔为背景。各设三个重复孔，分两组培养，一组37℃培养48 h，另一组37 ℃培养1 h后，10 00/min离心10 min后吸去上清液，用培养液洗涤两次，继续培养48 h后；每孔加5 mg/ml的M TT(Sigma产品)20 μl，再培养4 h后加入二甲基亚枫，测OD 590值。
, 百拇医药
4.结合物的保存 结合物过滤除菌后4℃保存1个月，经试管稀释法测定交联物对大肠杆菌 的药物敏感度及结合物对肿瘤细胞的杀伤作用无明显降低。
结果
一、交联物HTF-DEX-ADR经Sephacryl S-300凝胶过滤层析，分别用波长280 nm，和 495 nm测定每管OD值。结果280 nm一个峰，495 nm两个峰。495 nm的前峰与280 nm峰 重叠。从标准分子量蛋白曲线计算第一峰的分子量为140 kD(见图1)。HTF与ADR的分子比为1 ∶40-45；分光光度计(日立557型)200-600 nm扫描结果见图2。
图1 Sephacryl S-300(1.6 42 cm)纯化HTF-DEX-ADR
结合物洗脱曲线 ——OD 280；……OD 495
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图2 结合物200～550 nm扫描图形
——HTF-DEX-ADR；-.-.HTF；---ADR
二、经试管稀释法测定大肠杆菌对交联物的灵敏度比游离ADR降低1～2滴度。
三、结合物对肿瘤细胞的杀伤作用 MTT法测定HTF-DEX-ADR以及游离ADR对K562细 胞48 h的杀伤作用结果见图3。1 h的杀伤作用结果(见图3)。各种浓度药物对K562细胞的50 %抑制浓 度(IC50)见附表。结合物对K562细胞48 h的杀伤明显强于对人单核细胞的杀伤 ，是后 者的10倍左右，1 h细胞毒作用显示结合物对K562细胞的杀伤优于游离ADR，是其4倍 左右。HTF和ADR的混合物对K562细胞及人单核细胞的杀伤效果与游离ADR近似。
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图3 HTF-DEX-ADR对K562细胞及人单核细胞48 h杀伤 作用
K562：HTF-DEX-ADR.-.；HTF+ADR*-*；ADR°-°
人单核细胞：HTF-DEX-ADR.…….；HTF+ADR*-*；ADR°……°
图4 HTF-DEX-ADR对K562细胞及人单核细胞1 h杀伤作用
K562：HTF-DEX-ADR.-.；HTF+ADR°-°；ADR*-*
, 百拇医药
人单核细胞：HTF-DEX-ADR.…….；HTF+ADR°……°；ADR*……*
附表 结合物的细胞毒IC50 药物
IC50(μg/ml)
48 h
1 h
K562
人单核细胞
K562
人单核细胞
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HTF-DEX-ADR
1.0
9.8
5.0
>39
ADR
0.9
1.1
21
32
HTF+ADR
0.9
1.0
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20
34
讨论
采用对肿瘤具有亲和力的特异载体，携带化疗药物，核素或生物毒素，对肿瘤进行特异性攻 击，以增加治疗指数，避免或最大限度地降低药物的毒副作用的导向抗肿瘤药研究 是近年来医学界普遍关注的课题。国内外都得出用单克隆抗体作为导向载体在体外细胞培 养体系以及人体肿瘤动物移植模型中显示出特异性抑制肿瘤生长能力的报道。临床应用也都 得出肯定的结果[3～5，8]。但是由于鼠源性单抗系异源性蛋白，除了人体对结合 物的免疫作用产生过敏反应，抗体的生成外，单抗是恶性永存肿瘤细胞的产物，必须建立无 转化活性的安全指标，从而影响这类药物的临床应用。
恶性肿瘤细胞表面TFR的超量表达[6，7]提供了人体内源性蛋白-转铁蛋白作 为导 向载体的可能性。人们用125Ⅰ-标记人转铁蛋白(125Ⅰ-HTF)作移 植性人肝癌细胞裸大鼠的扫描。显示肝癌组织对125Ⅰ-HTF的摄取比同一动物肝 脏及其它各组织显著增高。肝癌/肝的放射强度比平均为3.58；肝癌/血放射比为1.8，肝 癌与其他各组织的放射强度比除甲状腺、肺、脊椎较低外均在3以上[9]；比国内报 道的用抗癌单抗作导向载体的结果都好[4，10]。
, 百拇医药
国外对HTF与化疗药物的结合物进行了一系列药理研究，结合物表现为对正常细胞低毒和抑 瘤的高活性结果[11]。
本文采用过碘酸钠法，用DEX作中介体制备结合物HTF-DEX-ADR，其分子量为14 kD，每个 分子的HTF可引入40～45个分子的ADR。DEX经过碘酸钠氧化后形成的PAD(多醛葡聚糖)在先与 过量ADR结合后再与HTF反应，则DEX与HTF的分子比基本可以控制在1∶1。结合物中ADR的活 性和HTF与受体的结合力都得到保护。
体外细胞毒实验显示交联物对肿瘤细胞K562有较强的杀伤作用，48 h细胞生长抑制试 验中结 合物杀伤K562细胞的IC50为1.0 μg/ml，对人单核细胞的毒性很低，其IC 50 是游离ADR的9倍，显示出结合物针对增殖超旺盛细胞的导向杀伤能力。1 h细胞毒实验结果 显示结合物对K562细胞的杀伤明显优于游离ADR，是后者的4倍，对人单核细胞的杀伤 显著低 于游离ADR，显示出HTF-DEX-ADR的高效低毒的特点。微生物法测定大肠杆菌对结合物的药 物灵敏度降低1-2个滴度，可能系制备过程ADR受到一定的损伤。HTF与ADR混合物对K56 2细 胞及人单核细胞的杀伤效果与游离ADR近似，提示ADR与HTF结合后才显示出对肿瘤细胞的选 择性杀伤作用。
, 百拇医药
恶性肿瘤细胞对人体许多内源性蛋白具有超量吸收的能力(如生长因子等)，本文用人转铁蛋 白作代表将其与ADR交联制备HTF-DEX-ADR交联物，并检测其体外细胞毒作用，以期提供一 种能替代单抗的新的安全有效广谱的抗肿瘤导向药物。
作者简介：林 溪，女，大学本科，助理研究员。
参考文献
[1]Yang Y, Roffler SR, Yu MS. Doxorubicin: monoclonal antibo dy conj ugate for therapy of human cervical carcinoma〔J〕. Int J Cancer, 1992, 51:274
[2]Hurwitz E, Levy R, Maron R, et al. The covalent binding of daunomy cin and a driamycin to antibodies with retention of both drug and antibody activities. Can cer Res, 1975, 35:1175
, 百拇医药
[3]杨克政，周德南，甘友全，等：药物与抗AFP抗体联结物治疗晚期肝癌Ⅰ期 临床试验。肿瘤， 1992，1，12(1)：1
[4]汤钊猷，刘康达，范祯，等. 肝癌导向治疗的实验与临床研究. 肿瘤，1990 ，11(6)：3241
[5]章咏裳，李龙承，林乔，等. 单克隆抗体阿霉素偶联物导向治疗膀胱癌的临 床研究. 中华实验外科杂志，1994，11(4)：207
[6]林菊生、李绍白、王家，等：肝细胞癌转铁蛋白受体表达的免疫组化研究. 中华医学杂志，1992，72(2)：111
[7]林菊生，李绍白，过晋源，等：受体放射分析法定量测定肝癌细胞和正常肝 细胞的转铁蛋白受体. 中华核医学杂志，1993，13(1)：113
[8]林菊生，李绍白，汪芳裕，等. 转铁蛋白受体单克隆抗体WuT 9与阿霉素偶 联物对肝细胞癌患者导向治疗的初步临床观察. 中华消化杂志，1993，13(1)：25
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[9]周惠人，晏日强，蒋长英，等：125Ⅰ标记铁传递蛋白作移植性 人肝癌LTNR裸大鼠的扫描。上海医科大学学报，1987，14(5)：339
[10]张玉蛟、汤钊猷、谢弘，等：131Ⅰ-标记抗人肝癌单抗在裸鼠人肝癌模 型的定位. 肿瘤，1990，10(4)：145
[11]Lemieux P, Page M, Sensitivity of multidrug-resistant MCF-7 cells to a t rasferrin-doxorubicin conjugate. Anti Cancer Res, 1994, 14(A):397
(收稿日期：1998-12-28；修回日期：1999-04-21), 百拇医药
单位：林溪 黄秀旺(福建医科大学临床药理研究所 福州350004)
关键词：转铁蛋白；阿霉素；肿瘤细胞，培养的
肿瘤000409 摘要：目的 介绍人转铁蛋白-阿霉素结合物的制备及其细胞毒性 。方法 采用氧化葡聚糖(DEX)T-40作为中介体，联结人转铁蛋白(HTF)与 阿霉素(ADR)制备人转铁蛋白-阿霉素交联物(HTF-DEX-ADR)。HTF与ADR的克分子比为1∶4 0～45。以MTT法测其细胞毒性。结果 交联物对肿瘤细胞K562 1 h处理的IC 50是游离ADR的4.2倍，对正常人单核细胞48 h处理的杀伤只有游离ADR的1/9。结论 结合物对肿瘤细胞(K562)有选择性杀伤作用。
中图分类号：R73-361 文献标识码：A 文章编号：1000-7431(2000)04 -0263-03
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PREPARATION OF HUMAN TRANSFERRIN-ADRIAMYCIN CONJUGATE AND CYTOTOXIC EFFECT OF THE CONJUGATES IN VITRO
LIN Xi
(Institute of Clinical Pharmacology, Fujian Medical University，Fu-zhou 350004 China)
HUANG Xiu-wang.
(Institute of Clinical Pharmacology, Fujian Medical University，Fu-zhou 350004 China)
Abstract：Objective Preparation of human transferrin-adriamycin conjug ate and its cytotoxicity was described. Methods Human transferrin (HTF) was conjugatd w ith adriamycin (ADR), via oxidative dextran T-40 as linker, to construct HTF-D EX-ADR. The molarratio of HTF to drug was to 40-45. The cytotoxicity of HTF-D EX-ADR to K562 cells was determined by MTT method. Results The cytotoxicity of HTF-DEX-ADR to K562 cells was 4.2 times than that of free ADR, while to norm al peripheral blood mononuclear cells was only 1/9 that of free ADR. Conclusion It suggests that the conjugate shows a selective cyt otoxicity to K562 cells.
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Key words： Transferrin; Adriamycin; Tumor cells, cult ured
免疫导向药物是特异性抗肿瘤治疗有前途的药物，但鼠源单位的异源性问题制约了免疫导向 的临床应用。人转铁蛋白受体(Human transferrin receptor HTFR)的表达受细胞增殖调节 。恶性肿瘤细胞表面HTFR的超量表达提示人转铁蛋白(HTF)作为抗肿瘤导向药物载体的可能 性。本文采用HTF作为导向载体，以葡聚糖(Dextran T-40，DEX)为中介体，选用过碘酸钠 法将HTF与阿霉素(Adriamycin, ADR)交联，制备交联物HTF-DEX-ADR，并观察交联物对肿 瘤细胞的杀伤作用，以探讨HTF作为内源性导向载体的可行性。
材料与方法
1.人转铁蛋白-阿霉素结合物的制备 阿霉素由意大利Farmitalia Carbo Erbaltd生产， 桔红色冻干粉剂；人转铁蛋白、葡聚糖(平均分子量40 000)系Sigma公司产品；标准分 子量 蛋白是Serva公司产品；Sephacryl S-300购于Pharmasia公司；其余试剂均为分析纯。结合 物制备参照文献[1]进行。结合物经Sephacryl S-300分离纯化，收集第一峰，结 合物中人转铁蛋白含量测定用LOWRY氏法；ADR测定根据495 nm百分消光系数E1% 1 cm=196 [2]计算，然后计算人转铁蛋白与ADR的克分子比。Sephacryl S-300柱用标准蛋白 标定分子量标准曲线。
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2.交联物中ADR药物敏感度检测 采用试管稀释法测定。试验菌为大肠杆菌(由本校微生物 教研室引种)，培养基为肉浸液。
3.交联物对肿瘤细胞的杀伤作用测定 选用K562细胞(引自本校肿瘤研究室)为实验细胞， 人 单个核细胞为参照细胞；以MTT法测定不同浓度交联物对上述细胞的杀伤作用：K562细胞制 成悬液，每孔2×104铺96孔板。人单个核细胞由人外周血经分层液密度梯度离心法制取， 每孔2×105铺板，以上孔加不同浓度结合物。游离ADR作比较，不加药组为对照，无细胞 孔为背景。各设三个重复孔，分两组培养，一组37℃培养48 h，另一组37 ℃培养1 h后，10 00/min离心10 min后吸去上清液，用培养液洗涤两次，继续培养48 h后；每孔加5 mg/ml的M TT(Sigma产品)20 μl，再培养4 h后加入二甲基亚枫，测OD 590值。
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4.结合物的保存 结合物过滤除菌后4℃保存1个月，经试管稀释法测定交联物对大肠杆菌 的药物敏感度及结合物对肿瘤细胞的杀伤作用无明显降低。
结果
一、交联物HTF-DEX-ADR经Sephacryl S-300凝胶过滤层析，分别用波长280 nm，和 495 nm测定每管OD值。结果280 nm一个峰，495 nm两个峰。495 nm的前峰与280 nm峰 重叠。从标准分子量蛋白曲线计算第一峰的分子量为140 kD(见图1)。HTF与ADR的分子比为1 ∶40-45；分光光度计(日立557型)200-600 nm扫描结果见图2。
图1 Sephacryl S-300(1.6 42 cm)纯化HTF-DEX-ADR
结合物洗脱曲线 ——OD 280；……OD 495
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图2 结合物200～550 nm扫描图形
——HTF-DEX-ADR；-.-.HTF；---ADR
二、经试管稀释法测定大肠杆菌对交联物的灵敏度比游离ADR降低1～2滴度。
三、结合物对肿瘤细胞的杀伤作用 MTT法测定HTF-DEX-ADR以及游离ADR对K562细 胞48 h的杀伤作用结果见图3。1 h的杀伤作用结果(见图3)。各种浓度药物对K562细胞的50 %抑制浓 度(IC50)见附表。结合物对K562细胞48 h的杀伤明显强于对人单核细胞的杀伤 ，是后 者的10倍左右，1 h细胞毒作用显示结合物对K562细胞的杀伤优于游离ADR，是其4倍 左右。HTF和ADR的混合物对K562细胞及人单核细胞的杀伤效果与游离ADR近似。
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图3 HTF-DEX-ADR对K562细胞及人单核细胞48 h杀伤 作用
K562：HTF-DEX-ADR.-.；HTF+ADR*-*；ADR°-°
人单核细胞：HTF-DEX-ADR.…….；HTF+ADR*-*；ADR°……°
图4 HTF-DEX-ADR对K562细胞及人单核细胞1 h杀伤作用
K562：HTF-DEX-ADR.-.；HTF+ADR°-°；ADR*-*
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人单核细胞：HTF-DEX-ADR.…….；HTF+ADR°……°；ADR*……*
附表 结合物的细胞毒IC50 药物
IC50(μg/ml)
48 h
1 h
K562
人单核细胞
K562
人单核细胞
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HTF-DEX-ADR
1.0
9.8
5.0
>39
ADR
0.9
1.1
21
32
HTF+ADR
0.9
1.0
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34
讨论
采用对肿瘤具有亲和力的特异载体，携带化疗药物，核素或生物毒素，对肿瘤进行特异性攻 击，以增加治疗指数，避免或最大限度地降低药物的毒副作用的导向抗肿瘤药研究 是近年来医学界普遍关注的课题。国内外都得出用单克隆抗体作为导向载体在体外细胞培 养体系以及人体肿瘤动物移植模型中显示出特异性抑制肿瘤生长能力的报道。临床应用也都 得出肯定的结果[3～5，8]。但是由于鼠源性单抗系异源性蛋白，除了人体对结合 物的免疫作用产生过敏反应，抗体的生成外，单抗是恶性永存肿瘤细胞的产物，必须建立无 转化活性的安全指标，从而影响这类药物的临床应用。
恶性肿瘤细胞表面TFR的超量表达[6，7]提供了人体内源性蛋白-转铁蛋白作 为导 向载体的可能性。人们用125Ⅰ-标记人转铁蛋白(125Ⅰ-HTF)作移 植性人肝癌细胞裸大鼠的扫描。显示肝癌组织对125Ⅰ-HTF的摄取比同一动物肝 脏及其它各组织显著增高。肝癌/肝的放射强度比平均为3.58；肝癌/血放射比为1.8，肝 癌与其他各组织的放射强度比除甲状腺、肺、脊椎较低外均在3以上[9]；比国内报 道的用抗癌单抗作导向载体的结果都好[4，10]。
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国外对HTF与化疗药物的结合物进行了一系列药理研究，结合物表现为对正常细胞低毒和抑 瘤的高活性结果[11]。
本文采用过碘酸钠法，用DEX作中介体制备结合物HTF-DEX-ADR，其分子量为14 kD，每个 分子的HTF可引入40～45个分子的ADR。DEX经过碘酸钠氧化后形成的PAD(多醛葡聚糖)在先与 过量ADR结合后再与HTF反应，则DEX与HTF的分子比基本可以控制在1∶1。结合物中ADR的活 性和HTF与受体的结合力都得到保护。
体外细胞毒实验显示交联物对肿瘤细胞K562有较强的杀伤作用，48 h细胞生长抑制试 验中结 合物杀伤K562细胞的IC50为1.0 μg/ml，对人单核细胞的毒性很低，其IC 50 是游离ADR的9倍，显示出结合物针对增殖超旺盛细胞的导向杀伤能力。1 h细胞毒实验结果 显示结合物对K562细胞的杀伤明显优于游离ADR，是后者的4倍，对人单核细胞的杀伤 显著低 于游离ADR，显示出HTF-DEX-ADR的高效低毒的特点。微生物法测定大肠杆菌对结合物的药 物灵敏度降低1-2个滴度，可能系制备过程ADR受到一定的损伤。HTF与ADR混合物对K56 2细 胞及人单核细胞的杀伤效果与游离ADR近似，提示ADR与HTF结合后才显示出对肿瘤细胞的选 择性杀伤作用。
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恶性肿瘤细胞对人体许多内源性蛋白具有超量吸收的能力(如生长因子等)，本文用人转铁蛋 白作代表将其与ADR交联制备HTF-DEX-ADR交联物，并检测其体外细胞毒作用，以期提供一 种能替代单抗的新的安全有效广谱的抗肿瘤导向药物。
作者简介：林 溪，女，大学本科，助理研究员。
参考文献
[1]Yang Y, Roffler SR, Yu MS. Doxorubicin: monoclonal antibo dy conj ugate for therapy of human cervical carcinoma〔J〕. Int J Cancer, 1992, 51:274
[2]Hurwitz E, Levy R, Maron R, et al. The covalent binding of daunomy cin and a driamycin to antibodies with retention of both drug and antibody activities. Can cer Res, 1975, 35:1175
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[3]杨克政，周德南，甘友全，等：药物与抗AFP抗体联结物治疗晚期肝癌Ⅰ期 临床试验。肿瘤， 1992，1，12(1)：1
[4]汤钊猷，刘康达，范祯，等. 肝癌导向治疗的实验与临床研究. 肿瘤，1990 ，11(6)：3241
[5]章咏裳，李龙承，林乔，等. 单克隆抗体阿霉素偶联物导向治疗膀胱癌的临 床研究. 中华实验外科杂志，1994，11(4)：207
[6]林菊生、李绍白、王家，等：肝细胞癌转铁蛋白受体表达的免疫组化研究. 中华医学杂志，1992，72(2)：111
[7]林菊生，李绍白，过晋源，等：受体放射分析法定量测定肝癌细胞和正常肝 细胞的转铁蛋白受体. 中华核医学杂志，1993，13(1)：113
[8]林菊生，李绍白，汪芳裕，等. 转铁蛋白受体单克隆抗体WuT 9与阿霉素偶 联物对肝细胞癌患者导向治疗的初步临床观察. 中华消化杂志，1993，13(1)：25
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[9]周惠人，晏日强，蒋长英，等：125Ⅰ标记铁传递蛋白作移植性 人肝癌LTNR裸大鼠的扫描。上海医科大学学报，1987，14(5)：339
[10]张玉蛟、汤钊猷、谢弘，等：131Ⅰ-标记抗人肝癌单抗在裸鼠人肝癌模 型的定位. 肿瘤，1990，10(4)：145
[11]Lemieux P, Page M, Sensitivity of multidrug-resistant MCF-7 cells to a t rasferrin-doxorubicin conjugate. Anti Cancer Res, 1994, 14(A):397
(收稿日期：1998-12-28；修回日期：1999-04-21), 百拇医药