急性脑梗死患者血小板内钙和TXB2含量与聚集关系的探讨
作者：余仲苟 马中富 黄帆 刘秀琴 梁秀龄
单位：中山医科大学附属第一医院核医学教研室，广州 510080
关键词：脑梗死；急性；聚集；血小板；钙；血栓素B2
中国急救医学000406 [摘 要] 目的 探讨急性脑梗死急性期患者血小板内游离钙和TXB2含量之间的相互关系及意义。方法 用Fura-2/AM荧光技术测定了46例急性脑梗死患者急性期及25例正常对照组血小板内钙含量，用放射免疫分析法测定其血小板内血栓素B2(TXB2)含量，用比浊法测定其血小板聚集。结果 患者血小板内游离Ca2+和TXB2含量均分别明显高于正常对照组(147.26±10.85 vs 119.30±10.94 nmol/L和3.38±0.78 vs 4.88±0.97 ng/109血小板，P均<0.01)；在患者中，低(0.5 μmol/L)和高(5 μmol/L)浓度二磷酸腺苷(ADP)诱导的血小板聚集均明显高于正常对照组(0.44±0.19 vs 0.26±0.14和0.73±0.13 vs 0.39±0.19，P均<0.01)；在患者中血小板内游离Ca2+含量和TXB2含量均分别与5 μmol/L二磷酸腺苷诱导的血小板呈明显的正相关性(r分别为0.786和0.593，P均<0.01)，而血小板内Ca2+与TXB2成明显的正相关性(r为0.652，P<0.01)。结论 急性脑梗死患者在急性期血小板功能处于活跃状态，可能与其内Ca2+含量增加、TXB2生成增多有关。提示在急性脑梗死急性期积极治疗的同时，使用抗血小板的药物有重要意义。
, http://www.100md.com
[中图分类号] R 743；R 364.17 [文献标识码] A
[文章编号] 1002-1949(2000)04-0210-02
Relationships among cytosolic calcium levels,thromboxane B2 levels of intraplatelet and platelet aggregation induced by ADP in acute cerebral infarction
YU Zhong-gou,MA Zhong-fu,HUANG Fan,et al.
(Emergency Department,the First Affiliated Hospital,Sun Yat-sen University of Medical Sciences,Guangzhou 510080,China)
, http://www.100md.com
[Abstract] Objective To investigate the relationships and the significantly among cytosolic calcium levels thromboxane B2 levels of intraplatelet and platelet aggregation induced by ADP in the patients with acute cerebral infarction(ACI).Methods Cytosolic calcium levels were measured in Fura-2/AM loaded platelet in 46 patients with ACI and in 25 normal controls,platelet thromboxane B2 levels were investigated by radioimmunoassy (RIA)and platelet aggregation induced by ADP were measured with lumi-aggregometer M450.Results The intraplatelet levels of calcium and thromboxane B2 in the patients with ACI were significantly higher than those in the normal controls,respectively(147.26±10.85 vs 119.30±10.94 nmol/L,and 3.38±0.78 vs 4.88±0.97 ng/109 platelet,respectively,all P<0.01)，but platelet induced by 0.5 μmol/L ADP and 5 μmol/L ADP in the patients were significantly lower than those in normal controls,respectively(0.44±0.19 vs 0.26±0.14，and 0.73±0.13 vs 0.39±0.19，respectively,all P<0.01).In the patients,moreover,the intraplatelet calcium levels and intraplatelet thromboxane B2 levels were positively correlated with the aplatelet aggregation induced by 5μmol/L ADP (r were 0.786 and 0.593，respectively,all P<0.01).And there was a positive relationship between intraplatelet calcium levels and intraplatelet thromboxane B2(r was 0.652 P<0.01).Conclusions Platelet was activative during the acute phase in the patients with ACI,which was possible related to the increase of cytosolic calcium levels and thromboxane B2 levels in intraplatelet.Their interaction activated platelet in ACI.These data suggested that using antiplatelet durgs might play an important role in the treatment of ACI.
, http://www.100md.com
[Key words] Cerebral infarction,acute； Aggregation； Platelet； Calcium； Thromboxane B2
临床和实验研究已证实，血小板在脑梗死的发病中起着重要的作用，尤其是在急性期，血小板功能处于活跃状态，聚集增加，聚集阈值降低，粘附性增加，血小板的释放反应和代谢物增加，其中血小板内颗粒内含物释放和血小板聚集一起对脑梗死的发病更为重要[1～3]，但其机制尚未完全明了。本文通过测定急性脑梗死(acute cerebral infarction,ACI)患者急性期的血小板内游离钙和TXB2含量和血小板聚集，并探讨其相互关系，旨在进一步了解ACI患者血小板活化的机制。
1 材料与方法
1.1 研究对象 46例急性脑梗死病人急性期，男26例，女20例，平均年龄61.4岁(40～83岁)，按第二届全国脑血管病学术会议制定的标准诊断，全部经CT确诊，发病前10天内均未服用过阿司匹林、力抗栓、消炎痛、潘生丁等药物，全部病例于发病后3天内清晨抽外周静脉血待测。
, http://www.100md.com
1.2 正常对照组 25例为本院健康职工，男15例，女10例，平均年龄60.7岁(40～73岁)，体检无心、肺、脑、肝、肾病变，无高血压、糖尿病及明显的动脉硬化症。所有受检对象在抽血前10天内未服阿司匹林、力抗栓、消炎痛、潘生丁等药物。
1.3 方法 血小板内胞浆游离钙含量的测定：方法同文献[1，4]；血小板内TXB2含量的测定：同文献[4]分离破碎血小板，取此液用放免分析法(125I-TXB2放免药盒由苏州医学院血栓研究室提供)，测定血小板内TXB2含量；血小板聚集的测定：用比浊法，同文献[1，5]。
1.4 统计学处理 数据用均数±标准差(
±s)表示，组间用t检验和简单相关分析，P<0.05为差异有显著性。
, 百拇医药
2 结果
2.1 急性脑梗死患者急性期血小板内游离Ca2+和TXB2含量及聚集率 急性期患者血小板内Ca2+和TXB2含量明显高于正常对照组(P均<0.01)；在低和高浓度下二磷酸腺苷诱导的血小板聚集均明显高于正常对照组(P<0.01)，见附表。
附表 急性脑梗死患者急性期血小板内游离Ca2+和TXB2含量及血小板聚集(±s)
例数
游离Ca2+含量
(nmol/L)
, 百拇医药
TXB2含量
(ng/109血小板)
血小板聚集
0.5μmol/L ADP
5μmol/L ADP
正常对照
25
119.30±10.94
3.38±0.78
0.26±0.14
0.39±0.19
, 百拇医药
急性脑梗死
46
147.26±10.85
4.88±0.97
0.44±0.19
0.73±0.13
P
<0.01
<0.01
<0.01
<0.01
2.2 急性脑梗死患者血小板内游离Ca2+和TXB2含量与血小板聚集之间的关系 血小板内游离Ca2+和TXB2含量均与5 μmol/L ADP诱导的血小板聚集之间呈明显的正相关性(r=0.786和0.593，P均<0.01)，而血小板内游离Ca2+含量与TXB2含量则成明显的正相关性(r=0.652，P<0.01)。
, http://www.100md.com
3 讨论
血小板的活化与其内Ca2+升高、cAMP降低密切相关，血小板活化后通过加速AA代谢、产生TXB2的作用来加重脑血栓的形成及脑组织细胞的损害[3]。已有大量的研究证实[3，6]，脑梗死时由于血栓的栓塞，脑组织缺血，导致脑细胞内Ca2+内流增加，而出现脑细胞代谢障碍，线粒体功能障碍和氧化磷酸化脱偶联，ATP生成减少，激活磷酯酶A2，使磷脂降解，产生大量的AA及代谢产物，如前列腺素和白三烯、TXB2等加速神经元的死亡。本文结果显示，急性脑梗死患者在急性期血小板内Ca2+含量及聚集明显升高，且两者之间成明显的正相关性，提示急性脑梗死患者急性期血小板功能处于活跃状态，这与血栓的形成及增长、脑细胞的损伤和临床症状轻重有关，此时积极治疗包括使用抗血小板的药物具有重要意义。急性脑梗死病人因脑组织缺血、缺氧，血管内皮受损，血小板粘附，释放其内容物，促进Ca2+含量升高而诱导血小板的聚集；另外脑组织缺血后，由于能量代谢障碍，导致ADP聚积，膜磷脂降解产生AA和TXB2，可使血小板激活，使其内Ca2+含量升高，但目前在急性脑梗死时血小板内Ca2+升高的机制仍未完全清楚[6，7]。
, 百拇医药
本文结果还显示，ACI患者血小板内TXB2含量明显升高，且与其内Ca2+含量和血小板聚集之间呈明显的正相关性，提示ACI患者血小板合成TXA2增加。TXA2的生成起始于血小板膜上的磷脂，在其血栓素合成酶的作用下生成TXA2，很快形成稳定的代产物TXB2，故测定TXB2可反映TXA2的含量[2]。TXA2可抑制血小板膜上的腺苷环化酶，使cAMP的生成减少，促进血小板活化；而对血小板内Ca2+含量变化具有正反馈增强作用，可促使血小板肌浆网内钙释放增加，致血小板内钙含量升高，使血小板活化；同时TXA2具有强烈的血管收缩作用，使脑组织进一步缺血、缺O2，而加速神经元的死亡；TXA2还可促进血小板活化因子产生增加、氧自由基和脑细胞内Ca2+内流增加来直接损伤神经元细胞，导致脑组织水肿，细胞变性坏死[2，3，6，7]。急性脑梗死是由于血小板血栓的形成，血小板粘附聚集过程中释放大量的TXA2致使血小板内TXB2升高；另外由于血栓形成、局部脑组织缺血损伤，膜磷脂降解产生大量的AA，转至血小板内，再经胞内环氧化酶的作用合成TXA2，致使血小板内TXB2升高[2，3，6，7]。反过来，TXA2又使脑组织进一步损伤，形成恶性循环，故在积极治疗脑梗死的同时使用抗血小板的药物如抵克力得和TXA2的拮抗剂，对于阻断血小板活化及脑组织损害可能具有一定的意义。
, 百拇医药
综上所述，急性脑梗死在急性期血小板处于活跃状态，可能与血小板内游离Ca2+和TXB2含量增加密切相关，临床上积极治疗脑梗死如溶栓、减轻脑水肿等的同时，使用抗血小板的药物如抵克力得或阿司匹林，可能有助于缓解病情，减少致残率。
[参考文献]
[1]马中富，李天木，蒋祖勋，等.急性脑梗死患者血浆内皮素与血小板内钙含量和聚集关系的探讨[J].标记免疫分析与临床，1995，2：68.
[2]Kooten FV,Ciabattoni G,Patrono C,et al.Evidence for episodic platelet activation in acute ischemic stroke[J].Stroke,1994,25:278.
[3]李泓，杨期东.花生四烯酸代谢、血小板激活因子、血小板膜蛋白与脑缺血[J].《国外医学》神经病学神经外科学分册，1996，9：216.
, http://www.100md.com
[4]马中富，李天木，黎湛兴，等.慢性肺心病急性加重期血小板内Ca2+、cAMP和TXB2含量关系的探讨[J].中国急救医学，1998，18(5)：15-16.
[5]马中富，李天木，蒋祖勋，等.慢性肺源性心脏病急性加重期血浆内皮素-1与血小板功能关系的探讨[J].中国危重病急救医学，1997，9：216.
[6]Bhakoo KK,Crockard HA,Lascelles PC,et al.Prostaglandin synthesis and oedema formation during reperfuion following weperimental brain ischemia in the gerbil[J].Stroke,1984,15:891.
[7]刘晓勤，季晓鹏，苗莉，等.抗钙和抗血栓素A2治疗急性缺血性脑卒中的疗效观察和系列生化研究[J].中风与神经疾病杂志，1994，11：72.
[收稿：2000-02-17], 百拇医药
单位：中山医科大学附属第一医院核医学教研室，广州 510080
关键词：脑梗死；急性；聚集；血小板；钙；血栓素B2
中国急救医学000406 [摘 要] 目的 探讨急性脑梗死急性期患者血小板内游离钙和TXB2含量之间的相互关系及意义。方法 用Fura-2/AM荧光技术测定了46例急性脑梗死患者急性期及25例正常对照组血小板内钙含量，用放射免疫分析法测定其血小板内血栓素B2(TXB2)含量，用比浊法测定其血小板聚集。结果 患者血小板内游离Ca2+和TXB2含量均分别明显高于正常对照组(147.26±10.85 vs 119.30±10.94 nmol/L和3.38±0.78 vs 4.88±0.97 ng/109血小板，P均<0.01)；在患者中，低(0.5 μmol/L)和高(5 μmol/L)浓度二磷酸腺苷(ADP)诱导的血小板聚集均明显高于正常对照组(0.44±0.19 vs 0.26±0.14和0.73±0.13 vs 0.39±0.19，P均<0.01)；在患者中血小板内游离Ca2+含量和TXB2含量均分别与5 μmol/L二磷酸腺苷诱导的血小板呈明显的正相关性(r分别为0.786和0.593，P均<0.01)，而血小板内Ca2+与TXB2成明显的正相关性(r为0.652，P<0.01)。结论 急性脑梗死患者在急性期血小板功能处于活跃状态，可能与其内Ca2+含量增加、TXB2生成增多有关。提示在急性脑梗死急性期积极治疗的同时，使用抗血小板的药物有重要意义。
, http://www.100md.com
[中图分类号] R 743；R 364.17 [文献标识码] A
[文章编号] 1002-1949(2000)04-0210-02
Relationships among cytosolic calcium levels,thromboxane B2 levels of intraplatelet and platelet aggregation induced by ADP in acute cerebral infarction
YU Zhong-gou,MA Zhong-fu,HUANG Fan,et al.
(Emergency Department,the First Affiliated Hospital,Sun Yat-sen University of Medical Sciences,Guangzhou 510080,China)
, http://www.100md.com
[Abstract] Objective To investigate the relationships and the significantly among cytosolic calcium levels thromboxane B2 levels of intraplatelet and platelet aggregation induced by ADP in the patients with acute cerebral infarction(ACI).Methods Cytosolic calcium levels were measured in Fura-2/AM loaded platelet in 46 patients with ACI and in 25 normal controls,platelet thromboxane B2 levels were investigated by radioimmunoassy (RIA)and platelet aggregation induced by ADP were measured with lumi-aggregometer M450.Results The intraplatelet levels of calcium and thromboxane B2 in the patients with ACI were significantly higher than those in the normal controls,respectively(147.26±10.85 vs 119.30±10.94 nmol/L,and 3.38±0.78 vs 4.88±0.97 ng/109 platelet,respectively,all P<0.01)，but platelet induced by 0.5 μmol/L ADP and 5 μmol/L ADP in the patients were significantly lower than those in normal controls,respectively(0.44±0.19 vs 0.26±0.14，and 0.73±0.13 vs 0.39±0.19，respectively,all P<0.01).In the patients,moreover,the intraplatelet calcium levels and intraplatelet thromboxane B2 levels were positively correlated with the aplatelet aggregation induced by 5μmol/L ADP (r were 0.786 and 0.593，respectively,all P<0.01).And there was a positive relationship between intraplatelet calcium levels and intraplatelet thromboxane B2(r was 0.652 P<0.01).Conclusions Platelet was activative during the acute phase in the patients with ACI,which was possible related to the increase of cytosolic calcium levels and thromboxane B2 levels in intraplatelet.Their interaction activated platelet in ACI.These data suggested that using antiplatelet durgs might play an important role in the treatment of ACI.
, http://www.100md.com
[Key words] Cerebral infarction,acute； Aggregation； Platelet； Calcium； Thromboxane B2
临床和实验研究已证实，血小板在脑梗死的发病中起着重要的作用，尤其是在急性期，血小板功能处于活跃状态，聚集增加，聚集阈值降低，粘附性增加，血小板的释放反应和代谢物增加，其中血小板内颗粒内含物释放和血小板聚集一起对脑梗死的发病更为重要[1～3]，但其机制尚未完全明了。本文通过测定急性脑梗死(acute cerebral infarction,ACI)患者急性期的血小板内游离钙和TXB2含量和血小板聚集，并探讨其相互关系，旨在进一步了解ACI患者血小板活化的机制。
1 材料与方法
1.1 研究对象 46例急性脑梗死病人急性期，男26例，女20例，平均年龄61.4岁(40～83岁)，按第二届全国脑血管病学术会议制定的标准诊断，全部经CT确诊，发病前10天内均未服用过阿司匹林、力抗栓、消炎痛、潘生丁等药物，全部病例于发病后3天内清晨抽外周静脉血待测。
, http://www.100md.com
1.2 正常对照组 25例为本院健康职工，男15例，女10例，平均年龄60.7岁(40～73岁)，体检无心、肺、脑、肝、肾病变，无高血压、糖尿病及明显的动脉硬化症。所有受检对象在抽血前10天内未服阿司匹林、力抗栓、消炎痛、潘生丁等药物。
1.3 方法 血小板内胞浆游离钙含量的测定：方法同文献[1，4]；血小板内TXB2含量的测定：同文献[4]分离破碎血小板，取此液用放免分析法(125I-TXB2放免药盒由苏州医学院血栓研究室提供)，测定血小板内TXB2含量；血小板聚集的测定：用比浊法，同文献[1，5]。
1.4 统计学处理 数据用均数±标准差(
±s)表示，组间用t检验和简单相关分析，P<0.05为差异有显著性。, 百拇医药
2 结果
2.1 急性脑梗死患者急性期血小板内游离Ca2+和TXB2含量及聚集率 急性期患者血小板内Ca2+和TXB2含量明显高于正常对照组(P均<0.01)；在低和高浓度下二磷酸腺苷诱导的血小板聚集均明显高于正常对照组(P<0.01)，见附表。
附表 急性脑梗死患者急性期血小板内游离Ca2+和TXB2含量及血小板聚集(
±s)例数
游离Ca2+含量
(nmol/L)
, 百拇医药
TXB2含量
(ng/109血小板)
血小板聚集
0.5μmol/L ADP
5μmol/L ADP
正常对照
25
119.30±10.94
3.38±0.78
0.26±0.14
0.39±0.19
, 百拇医药
急性脑梗死
46
147.26±10.85
4.88±0.97
0.44±0.19
0.73±0.13
P
<0.01
<0.01
<0.01
<0.01
2.2 急性脑梗死患者血小板内游离Ca2+和TXB2含量与血小板聚集之间的关系 血小板内游离Ca2+和TXB2含量均与5 μmol/L ADP诱导的血小板聚集之间呈明显的正相关性(r=0.786和0.593，P均<0.01)，而血小板内游离Ca2+含量与TXB2含量则成明显的正相关性(r=0.652，P<0.01)。
, http://www.100md.com
3 讨论
血小板的活化与其内Ca2+升高、cAMP降低密切相关，血小板活化后通过加速AA代谢、产生TXB2的作用来加重脑血栓的形成及脑组织细胞的损害[3]。已有大量的研究证实[3，6]，脑梗死时由于血栓的栓塞，脑组织缺血，导致脑细胞内Ca2+内流增加，而出现脑细胞代谢障碍，线粒体功能障碍和氧化磷酸化脱偶联，ATP生成减少，激活磷酯酶A2，使磷脂降解，产生大量的AA及代谢产物，如前列腺素和白三烯、TXB2等加速神经元的死亡。本文结果显示，急性脑梗死患者在急性期血小板内Ca2+含量及聚集明显升高，且两者之间成明显的正相关性，提示急性脑梗死患者急性期血小板功能处于活跃状态，这与血栓的形成及增长、脑细胞的损伤和临床症状轻重有关，此时积极治疗包括使用抗血小板的药物具有重要意义。急性脑梗死病人因脑组织缺血、缺氧，血管内皮受损，血小板粘附，释放其内容物，促进Ca2+含量升高而诱导血小板的聚集；另外脑组织缺血后，由于能量代谢障碍，导致ADP聚积，膜磷脂降解产生AA和TXB2，可使血小板激活，使其内Ca2+含量升高，但目前在急性脑梗死时血小板内Ca2+升高的机制仍未完全清楚[6，7]。
, 百拇医药
本文结果还显示，ACI患者血小板内TXB2含量明显升高，且与其内Ca2+含量和血小板聚集之间呈明显的正相关性，提示ACI患者血小板合成TXA2增加。TXA2的生成起始于血小板膜上的磷脂，在其血栓素合成酶的作用下生成TXA2，很快形成稳定的代产物TXB2，故测定TXB2可反映TXA2的含量[2]。TXA2可抑制血小板膜上的腺苷环化酶，使cAMP的生成减少，促进血小板活化；而对血小板内Ca2+含量变化具有正反馈增强作用，可促使血小板肌浆网内钙释放增加，致血小板内钙含量升高，使血小板活化；同时TXA2具有强烈的血管收缩作用，使脑组织进一步缺血、缺O2，而加速神经元的死亡；TXA2还可促进血小板活化因子产生增加、氧自由基和脑细胞内Ca2+内流增加来直接损伤神经元细胞，导致脑组织水肿，细胞变性坏死[2，3，6，7]。急性脑梗死是由于血小板血栓的形成，血小板粘附聚集过程中释放大量的TXA2致使血小板内TXB2升高；另外由于血栓形成、局部脑组织缺血损伤，膜磷脂降解产生大量的AA，转至血小板内，再经胞内环氧化酶的作用合成TXA2，致使血小板内TXB2升高[2，3，6，7]。反过来，TXA2又使脑组织进一步损伤，形成恶性循环，故在积极治疗脑梗死的同时使用抗血小板的药物如抵克力得和TXA2的拮抗剂，对于阻断血小板活化及脑组织损害可能具有一定的意义。
, 百拇医药
综上所述，急性脑梗死在急性期血小板处于活跃状态，可能与血小板内游离Ca2+和TXB2含量增加密切相关，临床上积极治疗脑梗死如溶栓、减轻脑水肿等的同时，使用抗血小板的药物如抵克力得或阿司匹林，可能有助于缓解病情，减少致残率。
[参考文献]
[1]马中富，李天木，蒋祖勋，等.急性脑梗死患者血浆内皮素与血小板内钙含量和聚集关系的探讨[J].标记免疫分析与临床，1995，2：68.
[2]Kooten FV,Ciabattoni G,Patrono C,et al.Evidence for episodic platelet activation in acute ischemic stroke[J].Stroke,1994,25:278.
[3]李泓，杨期东.花生四烯酸代谢、血小板激活因子、血小板膜蛋白与脑缺血[J].《国外医学》神经病学神经外科学分册，1996，9：216.
, http://www.100md.com
[4]马中富，李天木，黎湛兴，等.慢性肺心病急性加重期血小板内Ca2+、cAMP和TXB2含量关系的探讨[J].中国急救医学，1998，18(5)：15-16.
[5]马中富，李天木，蒋祖勋，等.慢性肺源性心脏病急性加重期血浆内皮素-1与血小板功能关系的探讨[J].中国危重病急救医学，1997，9：216.
[6]Bhakoo KK,Crockard HA,Lascelles PC,et al.Prostaglandin synthesis and oedema formation during reperfuion following weperimental brain ischemia in the gerbil[J].Stroke,1984,15:891.
[7]刘晓勤，季晓鹏，苗莉，等.抗钙和抗血栓素A2治疗急性缺血性脑卒中的疗效观察和系列生化研究[J].中风与神经疾病杂志，1994，11：72.
[收稿：2000-02-17], 百拇医药