人骨肉瘤细胞凋亡及p53、p170的表达研究
作者：杨群 张震宇 王立峰
单位：哈尔滨医科大学附属第一医院病理科，150001
关键词：
中国急救医学000434 我们应用Tunel法和SABC法对39例骨肉瘤细胞凋亡及p53、p170蛋白表达情况检测，以求全面了解骨肉瘤细胞的生长状态，并初步探讨其临床及生物学意义。
1 材料与方法
1.1 临床资料 1990年3月～1997年8月，经临床、X线、活检病理确诊为骨肉瘤的患者39例，男30例，女9例，发病年龄11～36岁。肿瘤部位股骨下端24例，胫骨上端13例，肱骨上端2例，肿瘤直径4～17 cm。
1.2 标本 标本均采用手术后切除的石蜡包埋组织。4 μm连续切片，分别用于HE染色、免疫组化染色。
, 百拇医药
1.3 试剂 细胞凋亡试剂盒、小鼠抗p170、p53蛋白抗体、SABC试剂盒均购自武汉博士德公司。
1.4 方法 ①细胞凋亡的检测：采用武汉博士德公司的细胞凋亡检测试剂盒。严格按照武汉博士德公司介绍的细胞凋亡检测步骤操作。②p53、p170的检测4 μm厚切片，60°烤片3小时，SABC法免疫组化染色技术，严格按照武汉博士德公司介绍的SABC法步骤操作。
1.5 判定标准 染色阳性信号为棕黄色，无阳性染色者为阴性，阳性细胞<30%为+，阳性细胞>30%者为++。
2 结果
凋亡细胞染色呈棕黄色，定位于细胞核膜，部分呈均匀的染色。突变型p53蛋白表达的切片中，可见阳性反应的细胞其着色部位主要在细胞核中，且主要见于癌变区域，常集中于癌巢边缘。p170阳性反应的细胞其着色部位主要在细胞浆或细胞膜上。
, 百拇医药
39例骨肉瘤组织中，细胞凋亡呈阳性反应24例，阳性率61.5%。p53呈阳性反应29例，阳性率74.3%。p170呈阳性反应18例，阳性率46.3%。
3 讨论
细胞凋亡是恶性肿瘤普遍的自发现象。Gest-blom运用Tunel技术，研究了神经母细胞瘤中细胞凋亡的发生情况，发现凋亡细胞多者预后较好。但LiPponen等应用形态学标准，检测膀胱癌、乳腺癌中的细胞凋亡指数，发现凋亡指数高者预后差，但凋亡指数和增殖指标呈正相关[1]。我们认为，Tunel技术形态学标准能更准确地评价细胞凋亡的程度。但是，无论是Tunel技术还是形态学标准，均只能检测某一时刻细胞凋亡发生的情况。
p53基因是一个重要的抗癌基因，可启动程序性死亡，限制携带性病损基因的细胞增殖，从而抑制细胞的恶性转化。本实验用免疫组化SABC法对p53蛋白的检测发现，骨肉瘤组织中有p53蛋白的积聚，也就是有较高水平的突变型p53蛋白的表达，表明p53基因的突变与骨肉瘤的发生和发展有密切关系。
, 百拇医药
肿瘤多药耐药性基因mdr-1编码产物P-gp(p170)是由1 280个氨基酸构成的跨膜糖蛋白，有12个具ATP结合位点的跨膜结构。它将抗癌药物泵出细胞，使细胞内药物浓度降低而使细胞产生耐药性。有研究表明膀胱癌p53过度表达可增强mdr-1基因表达而产生较高水平的耐药糖蛋白P-gp，从而使膀胱癌细胞获得MDR表型[2，3]。本实验结果恶性骨肿瘤p170阳性率为46.3%，说明有53.7%的恶性骨肿瘤无p170表达，预示这些p170阴性的患者可以接受化疗，不应该采用以往的截肢疗法。提示p170的检测对骨科临床保肢手术的开展有指导意义。
[参考文献]
[1]吴炅，邵志敏，江明，等.运用原位DNA末端标记法研究细胞凋亡对乳腺癌预后的影响.中华肿瘤杂志，1997，19(2)：100-102.
[2]Morkve O,Leaerum OD.Flow cytometry measurment of p53 protein expression and DNA contein in paraffin.embedded tissue from bronchial carcinoma.Cytometry,1991,12:438-445.
[3]Baldini N,Scotlandi K,Barlocanti-Broclano G,et al. Expression of P-glycoprotein in high-grade osteosarcomas in relation to clinical outcome.N Engl J Med,1995,333:1417-1419.
[收稿：1999-01-11，修回：1999-09-25], 百拇医药
单位：哈尔滨医科大学附属第一医院病理科，150001
关键词：
中国急救医学000434 我们应用Tunel法和SABC法对39例骨肉瘤细胞凋亡及p53、p170蛋白表达情况检测，以求全面了解骨肉瘤细胞的生长状态，并初步探讨其临床及生物学意义。
1 材料与方法
1.1 临床资料 1990年3月～1997年8月，经临床、X线、活检病理确诊为骨肉瘤的患者39例，男30例，女9例，发病年龄11～36岁。肿瘤部位股骨下端24例，胫骨上端13例，肱骨上端2例，肿瘤直径4～17 cm。
1.2 标本 标本均采用手术后切除的石蜡包埋组织。4 μm连续切片，分别用于HE染色、免疫组化染色。
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1.3 试剂 细胞凋亡试剂盒、小鼠抗p170、p53蛋白抗体、SABC试剂盒均购自武汉博士德公司。
1.4 方法 ①细胞凋亡的检测：采用武汉博士德公司的细胞凋亡检测试剂盒。严格按照武汉博士德公司介绍的细胞凋亡检测步骤操作。②p53、p170的检测4 μm厚切片，60°烤片3小时，SABC法免疫组化染色技术，严格按照武汉博士德公司介绍的SABC法步骤操作。
1.5 判定标准 染色阳性信号为棕黄色，无阳性染色者为阴性，阳性细胞<30%为+，阳性细胞>30%者为++。
2 结果
凋亡细胞染色呈棕黄色，定位于细胞核膜，部分呈均匀的染色。突变型p53蛋白表达的切片中，可见阳性反应的细胞其着色部位主要在细胞核中，且主要见于癌变区域，常集中于癌巢边缘。p170阳性反应的细胞其着色部位主要在细胞浆或细胞膜上。
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39例骨肉瘤组织中，细胞凋亡呈阳性反应24例，阳性率61.5%。p53呈阳性反应29例，阳性率74.3%。p170呈阳性反应18例，阳性率46.3%。
3 讨论
细胞凋亡是恶性肿瘤普遍的自发现象。Gest-blom运用Tunel技术，研究了神经母细胞瘤中细胞凋亡的发生情况，发现凋亡细胞多者预后较好。但LiPponen等应用形态学标准，检测膀胱癌、乳腺癌中的细胞凋亡指数，发现凋亡指数高者预后差，但凋亡指数和增殖指标呈正相关[1]。我们认为，Tunel技术形态学标准能更准确地评价细胞凋亡的程度。但是，无论是Tunel技术还是形态学标准，均只能检测某一时刻细胞凋亡发生的情况。
p53基因是一个重要的抗癌基因，可启动程序性死亡，限制携带性病损基因的细胞增殖，从而抑制细胞的恶性转化。本实验用免疫组化SABC法对p53蛋白的检测发现，骨肉瘤组织中有p53蛋白的积聚，也就是有较高水平的突变型p53蛋白的表达，表明p53基因的突变与骨肉瘤的发生和发展有密切关系。
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肿瘤多药耐药性基因mdr-1编码产物P-gp(p170)是由1 280个氨基酸构成的跨膜糖蛋白，有12个具ATP结合位点的跨膜结构。它将抗癌药物泵出细胞，使细胞内药物浓度降低而使细胞产生耐药性。有研究表明膀胱癌p53过度表达可增强mdr-1基因表达而产生较高水平的耐药糖蛋白P-gp，从而使膀胱癌细胞获得MDR表型[2，3]。本实验结果恶性骨肿瘤p170阳性率为46.3%，说明有53.7%的恶性骨肿瘤无p170表达，预示这些p170阴性的患者可以接受化疗，不应该采用以往的截肢疗法。提示p170的检测对骨科临床保肢手术的开展有指导意义。
[参考文献]
[1]吴炅，邵志敏，江明，等.运用原位DNA末端标记法研究细胞凋亡对乳腺癌预后的影响.中华肿瘤杂志，1997，19(2)：100-102.
[2]Morkve O,Leaerum OD.Flow cytometry measurment of p53 protein expression and DNA contein in paraffin.embedded tissue from bronchial carcinoma.Cytometry,1991,12:438-445.
[3]Baldini N,Scotlandi K,Barlocanti-Broclano G,et al. Expression of P-glycoprotein in high-grade osteosarcomas in relation to clinical outcome.N Engl J Med,1995,333:1417-1419.
[收稿：1999-01-11，修回：1999-09-25], 百拇医药