巨噬细胞分泌的效应分子在小鼠急性输卵管炎中的变化
作者：李莉 郝秋芳
单位：山西医科大学第一临床医学院妇产科，030013
关键词：
中国急救医学000411 我们成功地建立了大肠杆菌所致的急性输卵管炎模型，动态观察了不同时期巨噬细胞分泌的炎性介质的含量。
1 材料与方法
1.1 实验动物 昆明种雌性小鼠，体重20±2 g，鼠龄8周。
1.2 主要试剂 大肠杆菌O-B4标准菌株，培养基，L 929细胞，小鼠成纤维细胞株，放射菌素D(sigma产品)。
1.3 实验方法
, 百拇医药 1.3.1 实验动物分组 实验动物分为正常组和模型组。动物分别在术后7、15、30天处死。对各组进行病理学及效应分子检测。
1.3.2 模型建立 将小鼠下腹壁切开，用1 ml注射器向两侧子宫角近卵巢部注入5×106/ml大肠杆菌悬液。在一定时期将动物处死，将输卵管取出，取部分行病理检查，另一部分组织匀浆后做效应分子的测定。
1.3.3 输卵管组织中的NO的检测 采用荧光分光光度法。将组织匀浆、离心取上清，采用ZnSO4去蛋白法分离上清用于NO检测。
1.3.4 输卵管组织中TNF-α的检测 采用染料摄入法，参照肿瘤坏死因子的测定[1]。
2 结果
感染7天见输卵管上皮破坏，粘膜下充血，水肿，大量的中性粒细胞浸润。15天见内膜及肌层大量中性粒细胞浸润，有巨噬细胞浸润，腺体破坏。30天输卵管壁增厚，内膜及肌层有大量炎细胞浸润，包括中性粒细胞、巨噬细胞、淋巴细胞。间质细胞减少，结构破坏。
, http://www.100md.com
各组小鼠输卵管局部巨噬细胞分泌NO含量与TNF-α的能力见表1及表2。
表1 各组小鼠输卵管局部巨噬细胞分泌NO含量
Con of NO(10-5mol/mg 组织湿重)
7 d
15 d
30 d
正常组
4.06±0.82
3.87±0.91
4.01±0.70
模型组
, http://www.100md.com
7.33±0.81*
9.01±0.59*
12.87±0.82*
*P<0.01(与正常组相比)表2 小鼠输卵管局部巨噬细胞分泌TNF-α的能力
TNF-α(OD630)
7 d
15 d
30 d
正常组
0.55±0.11
0.62±0.10
, 百拇医药
0.57±0.08
模型组
0.28±0.03*
0.27±0.02*
0.21±0.01*
*P<0.01(与正常组相比)
3 讨论
本文动态观察结果表明，在急性输卵管炎病灶内有大量的NO和TNF-α存在。考虑巨噬细胞分泌的炎性介质在急性输卵管炎组织损伤中起重要作用。NO这种重要的细胞毒效应分子，不但对抗侵入机体的微生物及病原体，同时对其附近的正常组织也有毒性作用。有研究表明[2]，在急性肾小球肾炎，实验性免疫复合物性肾损伤中均有Mψ活化，NO合成增加。已知体内多种细胞可合成NO，包括巨噬细胞、中性粒细胞、少量活化的T细胞。其中以活化的巨噬细胞为主，该细胞可在NOS作用下分解L-精氨酸为胍氨酸，释放NO[3]。我们动态观察了NO在急性输卵管炎中的变化，发现NO的含量与巨噬细胞浸润成正相关，随着巨噬细胞浸润增多，NO含量增高。NO在输卵管局部大量产生可能是导致组织损伤的重要原因之一。巨噬细胞在致炎因子的作用下，会合成NOS，NOS合成产生的NO对细菌、真菌和肿瘤细胞产生杀伤作用，对其正常组织也有损伤[4]。本实验在输卵管组织中测得NO产生明显增高，并且其量随病变程度加重而增多。输卵管组织病理检查支持生化测定结果。
, 百拇医药
有关巨噬细胞分泌的其它效应分子TNF-α，也在许多和免疫相关的损伤中发挥效应，虽然它同NO一样，均是由活化的巨噬细胞分泌的，但其分泌与NOS无关，因此是不同于NO的又一条效应途径。实验性急性输卵管炎小鼠模型组TNF-α显著高于正常组，说明TNF-α在急性输卵管炎发病过程中起重要作用。在某些情况下，过量产生的TNF-α则对机体是有害的。TNF-α能直接刺激中性粒细胞脱颗粒和“呼吸链”产生大量反应性介质，招致感染部位的组织损伤。近年来研究表明[6]，当巨噬细胞暴露于内毒素时，其释放的TNF-α能激活巨噬细胞本身，从而使炎症部位的巨噬细胞更迅速地得到增强。本实验在模型30天后，巨噬细胞浸润有逐渐增多的趋势。推测巨噬细胞在吞噬和杀灭抗原物质过程中，分泌多种活性物质，如溶酶体酶、溶菌酶、胶原酶、弹性蛋白酶等。在溶解抗原物质时，对接触到上述酶类的正常组织细胞同样溶解、液化，使正常组织结构消失，出现一个巨噬细胞浸润造成组织溶解破坏为特点的IV型变态反应机制。
[参考文献]
, http://www.100md.com
[1]杨贵贞，主编.肿瘤坏死因子的测定.免疫生物工程纲要与技术.吉林科学技术出版社，1991.205.
[2]Jackson MJ，Allen SJ.et al.Macrophage in acute glomerular inflammatory.Kidney International, 1994.45.
[3]Bredt DS, Huang PM,et al.Localization of nitric oxide synthaes indicating a neurol role for nitric oxide.Nature, 1990,347:768.
[4]Sntder SH,Bredt DS, et al.Biological roles of nitric oxide.Sciamer,1992,267(5):28.
[收稿：1999-04-06，修回：1999-11-21], 百拇医药
单位：山西医科大学第一临床医学院妇产科，030013
关键词：
中国急救医学000411 我们成功地建立了大肠杆菌所致的急性输卵管炎模型，动态观察了不同时期巨噬细胞分泌的炎性介质的含量。
1 材料与方法
1.1 实验动物 昆明种雌性小鼠，体重20±2 g，鼠龄8周。
1.2 主要试剂 大肠杆菌O-B4标准菌株，培养基，L 929细胞，小鼠成纤维细胞株，放射菌素D(sigma产品)。
1.3 实验方法
, 百拇医药 1.3.1 实验动物分组 实验动物分为正常组和模型组。动物分别在术后7、15、30天处死。对各组进行病理学及效应分子检测。
1.3.2 模型建立 将小鼠下腹壁切开，用1 ml注射器向两侧子宫角近卵巢部注入5×106/ml大肠杆菌悬液。在一定时期将动物处死，将输卵管取出，取部分行病理检查，另一部分组织匀浆后做效应分子的测定。
1.3.3 输卵管组织中的NO的检测 采用荧光分光光度法。将组织匀浆、离心取上清，采用ZnSO4去蛋白法分离上清用于NO检测。
1.3.4 输卵管组织中TNF-α的检测 采用染料摄入法，参照肿瘤坏死因子的测定[1]。
2 结果
感染7天见输卵管上皮破坏，粘膜下充血，水肿，大量的中性粒细胞浸润。15天见内膜及肌层大量中性粒细胞浸润，有巨噬细胞浸润，腺体破坏。30天输卵管壁增厚，内膜及肌层有大量炎细胞浸润，包括中性粒细胞、巨噬细胞、淋巴细胞。间质细胞减少，结构破坏。
, http://www.100md.com
各组小鼠输卵管局部巨噬细胞分泌NO含量与TNF-α的能力见表1及表2。
表1 各组小鼠输卵管局部巨噬细胞分泌NO含量
Con of NO(10-5mol/mg 组织湿重)
7 d
15 d
30 d
正常组
4.06±0.82
3.87±0.91
4.01±0.70
模型组
, http://www.100md.com
7.33±0.81*
9.01±0.59*
12.87±0.82*
*P<0.01(与正常组相比)表2 小鼠输卵管局部巨噬细胞分泌TNF-α的能力
TNF-α(OD630)
7 d
15 d
30 d
正常组
0.55±0.11
0.62±0.10
, 百拇医药
0.57±0.08
模型组
0.28±0.03*
0.27±0.02*
0.21±0.01*
*P<0.01(与正常组相比)
3 讨论
本文动态观察结果表明，在急性输卵管炎病灶内有大量的NO和TNF-α存在。考虑巨噬细胞分泌的炎性介质在急性输卵管炎组织损伤中起重要作用。NO这种重要的细胞毒效应分子，不但对抗侵入机体的微生物及病原体，同时对其附近的正常组织也有毒性作用。有研究表明[2]，在急性肾小球肾炎，实验性免疫复合物性肾损伤中均有Mψ活化，NO合成增加。已知体内多种细胞可合成NO，包括巨噬细胞、中性粒细胞、少量活化的T细胞。其中以活化的巨噬细胞为主，该细胞可在NOS作用下分解L-精氨酸为胍氨酸，释放NO[3]。我们动态观察了NO在急性输卵管炎中的变化，发现NO的含量与巨噬细胞浸润成正相关，随着巨噬细胞浸润增多，NO含量增高。NO在输卵管局部大量产生可能是导致组织损伤的重要原因之一。巨噬细胞在致炎因子的作用下，会合成NOS，NOS合成产生的NO对细菌、真菌和肿瘤细胞产生杀伤作用，对其正常组织也有损伤[4]。本实验在输卵管组织中测得NO产生明显增高，并且其量随病变程度加重而增多。输卵管组织病理检查支持生化测定结果。
, 百拇医药
有关巨噬细胞分泌的其它效应分子TNF-α，也在许多和免疫相关的损伤中发挥效应，虽然它同NO一样，均是由活化的巨噬细胞分泌的，但其分泌与NOS无关，因此是不同于NO的又一条效应途径。实验性急性输卵管炎小鼠模型组TNF-α显著高于正常组，说明TNF-α在急性输卵管炎发病过程中起重要作用。在某些情况下，过量产生的TNF-α则对机体是有害的。TNF-α能直接刺激中性粒细胞脱颗粒和“呼吸链”产生大量反应性介质，招致感染部位的组织损伤。近年来研究表明[6]，当巨噬细胞暴露于内毒素时，其释放的TNF-α能激活巨噬细胞本身，从而使炎症部位的巨噬细胞更迅速地得到增强。本实验在模型30天后，巨噬细胞浸润有逐渐增多的趋势。推测巨噬细胞在吞噬和杀灭抗原物质过程中，分泌多种活性物质，如溶酶体酶、溶菌酶、胶原酶、弹性蛋白酶等。在溶解抗原物质时，对接触到上述酶类的正常组织细胞同样溶解、液化，使正常组织结构消失，出现一个巨噬细胞浸润造成组织溶解破坏为特点的IV型变态反应机制。
[参考文献]
, http://www.100md.com
[1]杨贵贞，主编.肿瘤坏死因子的测定.免疫生物工程纲要与技术.吉林科学技术出版社，1991.205.
[2]Jackson MJ，Allen SJ.et al.Macrophage in acute glomerular inflammatory.Kidney International, 1994.45.
[3]Bredt DS, Huang PM,et al.Localization of nitric oxide synthaes indicating a neurol role for nitric oxide.Nature, 1990,347:768.
[4]Sntder SH,Bredt DS, et al.Biological roles of nitric oxide.Sciamer,1992,267(5):28.
[收稿：1999-04-06，修回：1999-11-21], 百拇医药