儿宝颗粒剂对幼鼠厌食动物模型下丘脑、垂体、胃窦及血浆中β-内啡肽含量的影响
作者：杜永平 张月萍 汪受传 汪静 史健
单位：杜永平 张月萍 汪静 史健(第四军医大学西京医院 西安710032)；汪受传(南京中医药大学儿科疾病研究室 南京210029)
关键词：儿宝颗粒剂；厌食症；β-内啡肽；大鼠
北京中医药大学学报000413
摘要：模拟小儿厌食症主要病因制作幼龄大鼠动物模型，用临床有效运脾复方儿宝颗粒剂治疗,测定大鼠下丘脑、垂体、胃窦及血浆中β-内啡肽含量，观察运脾复方对该模型中枢和外周β-内啡肽的调节作用。结果显示模型动物与正常对照动物相比，血浆和胃窦β-内啡肽含量明显减少(P<0.05)，而下丘脑、垂体含量变化不大；大小剂量治疗组血浆β-内啡肽恢复正常，大剂量组下丘脑、垂体和胃窦β-内啡肽含量增加，显著高于正常组(P<0.001)。
, 百拇医药
中图分类号：R285.5
The Influence of Erbao Granule on the Hypothalamus,Hypophysis,Sinus Ventriculi
and the Content of β-endorphin in the Plasma of Infantile Animal Pattern
Du Yongping Zhang Yueping Wang Shouchuan et al.
(The Xijing Hospital of The Forth Military Medical University, Shaanxi 710032)
ABSTRACT：Simulate main cause of the child apositia to build the infantile rat model, treat with the clinically effective compound Erbao granule, determine the hypothalamus, hypophysis, sinus ventriculi and the content of β-endorphin in the blood plasma of the rat, then observe the adjusting of the compound prescription on the pattern's central and peripheral β-endorphin. The result showed that, comparing the pattern animal with the normal animal, the contents of β-endorphin in the plasma and sinus ventriculi decreased obviously (P<0.05), while the contents didn't change much in the hypothalamus and hypophysis. Both in the large and small dosage treatment groups the β-endorphin of plasma recovered to normal. In the large dosage group, the content of β-endorphin in the hypothalamus, hypophysis and sinus ventriculi increased, obviously higher than in the normal group(P<0.001).
, 百拇医药
KEY WORDS: Erbao granule; Apositia; β-endorphin; Rat
小儿厌食症是儿科常见病，我们用运脾复方儿宝颗粒剂治疗取得了良好疗效[1]。近年来研究表明β-内啡肽参与摄食调控，具有强力促进食欲的作用[2]。本研究模拟小儿厌食症的主要病因制作幼龄大鼠厌食模型[3]，用儿宝颗粒剂进行治疗，从中枢和血浆内β-内啡肽的变化探讨该药的作用机理。
1 实验材料
1.1 动物与饲料
SD大鼠48只(第四军医大学实验动物中心提供)，日龄35～40 d，体重(60±10)g，随机分为空白对照组、模型对照组、小剂量组和大剂量组4组，单笼饲养。空白对照组喂常规鼠饲料(由第四军医大学实验动物中心提供)，其余各组喂特制高脂高蛋白饲料(用奶粉、鸡蛋、鱼松、豆粉、玉米粉等按一定比例配制[3])。所有动物均自由进食饮水。
, 百拇医药
1.2 药物与试剂
1.2.1 儿宝颗粒：南京中医药大学植物药深加工中心提供，由苍术、陈皮、鸡内金等四味中药组成，为内部制剂。
1.2.2 抑肽酶：丽珠集团丽宝生物化学制药有限公司产品，500 000 KIU/支，使用前用生理盐水稀释为25 IU/mL。
1.2.3 β-内啡肽放免药盒：第二军医大学神经生物教研室提供。
2 实验方法
2.1 灌胃
实验过程中每日记录动物进食量，实验第8天开始灌胃，空白对照组和模型对照组灌生理盐水，小剂量组灌等效量的儿宝颗粒剂(18.8 g/kg)，大剂量组灌2倍等效量的儿宝颗粒剂(37.6 g/kg)，每日1次。第28天晚8时起禁食，第29天处死。
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2.2 标本制备
2.2.1 血浆：用1%肝素(10 mL/L血样)处理试管，干燥备用。采血前每管加抑肽酶20 mL/L血样，眼眶取血后注入肝素管内充分摇匀后立即置4℃冰箱，3h内以4000 r/min低温离心10 min，分离血浆，于-70 ℃保存待测。
2.2.2 组织：取血后将大鼠迅速断头，立即取出全脑、垂体和胃，入沸生理盐水中煮5 min，分离下丘脑，用玻片刮取胃窦部粘膜，分别用分析天平称重后置玻璃匀浆管内，加入1 mol/L冰醋酸1 mL，充分匀浆后倒入塑料试管，于室温下放置100 min，加入1 mol/L NaOH 1 mL，4 000 r/min低温离心10 min，取上清液于-70 ℃保存待测。
2.3 放免测定
按放免药盒说明加样，用美国产16探头γ记数仪自动绘制标准曲线并打印结果。
, 百拇医药
3 结果
3.1 儿宝颗粒对动物模型摄食量的影响
实验第1周，各组大鼠摄食量无明显差异，第7、14、21、27天模型组平均摄食量明显低于正常动物，表明造模成功。第21、27天，大、小剂量用药组平均摄食量比模型对照组增多，与正常对照组无明显差异，表明治疗有效。结果见表1。
表1 儿宝颗粒对幼龄厌食大鼠摄食量的影响 (
±s；g) 组 别
n
第1天
第7天
第14天
, 百拇医药
第21天
第27天
空白对照组
12
10.56±2.34
13.20±2.77
16.39±2.58
18.56±3.04
19.17±3.26
模型对照组
10
9.32±2.83
, 百拇医药
9.93±1.07*
11.72±2.06***
13.47±1.99***
14.32±1.85***
小剂量治疗组
11
10.28±2.36
10.59±2.04*
13.30±3.22
15.66±3.58
, 百拇医药
16.72±3.07
大剂量治疗组
11
9.25±3.15
10.12±2.45*
13.51±3.17*
15.83±3.21
16.99±3.76
注：与空白对照组比*P<0.05 ***P<0.0013.2 儿宝颗粒对动物模型β-内啡肽的影响
模型组下丘脑和垂体的β-内啡肽浓度无明显变化。小剂量药物对下丘脑β-内啡肽无影响，大剂量组下丘脑和大、小剂量组垂体β-内啡肽均显著高于正常组。模型组胃窦部及血浆中β-内啡肽浓度均明显低于对照组，小剂量药物对模型胃窦部β-内啡肽无明显影响，可使血浆β-内啡肽增加；大剂量药物治疗不仅使模型血浆β-内啡肽增至正常水平，而且使胃窦部β-内啡肽增加，显著高于正常组。结果见表2。
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表2 各组大鼠下丘脑、垂体、胃窦和血浆β-内啡肽的含量 (±s) 组 别
n
下丘脑/μg/kg
垂体/mg/kg
胃窦/mg/kg
血浆/ng/L
空白对照组
12
24.83±6.67
1.36±0.62
, http://www.100md.com 6.28±1.43
10.25±4.86
模型对照组
10
23.00±6.01
1.28±0.43
1.45±0.60***
6.26±1.73*
小剂量治疗组
11
28.05±7.85
2.56±0.78***▲▲▲
, 百拇医药
1.38±0.32***
8.82±2.86
大剂量治疗组
11
41.56±8.74***▲▲▲
2.11±0.69*▲
16.49±4.07***▲▲▲
8.43±1.59
注：与空白对照组比较*P<0.05 ***P<0.001; 与模型对照组比较▲P<0.05 ▲▲▲P<0.0014 讨论
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β-内啡肽是一种内源性阿片肽，在脑组织和胃肠道均能合成、分泌。研究表明将微量β-内啡肽注入脑室，能使已饱食的大鼠继续进食，提示中枢β-内啡肽浓度增加可促进动物摄食[4]。本研究结果显示模型组下丘脑和垂体β-内啡肽水平无明显变化，摄食量下降；用药组动物下丘脑和垂体β-内啡肽显著增加，同时摄食量明显增多，提示儿宝颗粒剂能够通过促进中枢β-内啡肽的分泌，使动物摄食量增加。
有资料表明大鼠夜间自发摄食、或运动使摄食增加时，均见到血中β-内啡肽浓度升高，提示外周β-内啡肽与摄食活动也有关[5]。本研究显示模型动物胃窦部和血浆中β-内啡肽水平明显低于正常对照组，用药组β-内啡肽不同程度增加，提示幼龄厌食大鼠的摄食量减少与外周β-内啡肽降低有关，儿宝颗粒剂的促食欲作用与促进胃窦部β-内啡肽分泌，并使血浆β-内啡肽含量增加有关。有资料认为外周血β-内啡肽主要来源于腺垂体[6]，本研究结果垂体与血浆中β-内啡肽的变化趋势基本一致，支持这一观点。
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本研究还显示儿宝颗粒剂对β-内啡肽的调节方式与剂量有关。大剂量可促进下丘脑、垂体和胃窦部β-内啡肽分泌，增加血浆中β-内啡肽浓度。小剂量用药不影响下丘脑和胃窦部β-内啡肽的分泌，仅使垂体和血浆中的β-内啡肽增多。虽然小剂量和大剂量药物对β-内啡肽分泌的影响程度不同，但两组动物的摄食量并无显著性差异，说明β-内啡肽仅是影响动物摄食的多种因素之一。值得注意的是大剂量组下丘脑、垂体和胃窦部的β-内啡肽浓度均显著高于正常水平。本研究以高脂高蛋白饲料喂养引起动物摄食量减少，而阿片肽主要促进蛋白和脂肪的摄入[4]，所以儿宝颗粒可能通过显著增加模型动物中枢和外周β-内啡肽的分泌，使模型动物对高蛋白高脂的摄入量增加。
综上所述，本研究结果表明高蛋白高脂饲料喂养幼龄大鼠造成的厌食模型，外周β-内啡肽含量显著减少，运脾复方可以明显促进中枢和外周β-内啡肽的分泌，从而使动物摄食量增加。这一结果提示β-内啡肽在小儿厌食发病中起重要作用，促进β-内啡肽分泌是运脾复方发挥临床疗效的机理之一。
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国家自然科学基金资助项目(No.39670896)
杜永平,男,36岁,医学硕士,讲师.
参 考 文 献
1，汪受传，尤汝娣，郁晓维，等.运脾方药治疗小儿厌食症的临床及实验研究.中西医结合杂志，1991，11(2):75～78
2，江连海，沈 锷.摄食的中枢神经化学机制.生理科学进展，1984,15(2):120～125
3，汪受传，张月萍，陶 勇，等.特制饲料喂养幼龄大鼠建立小儿厌食症模型. 南京中医药大学学报， 1999, 15(3)：148～150
4，Tseng LF. Acute and chronic administration of β-Endorphin and naltrexone on food and water intake in rats. Fed Proc，1980,39: 606～612
5，周 吕.胃肠生理学.北京：科学出版社，1991.175～178
6，Kerdelhue B.β-endorphin concentrations in serum,hypothalamus and central gray of hy-pophysectomized and mediobasal Hypothalam-us lesioned rats.Brain Res，1982,231:85～94
(收稿日期：1999-08-20), http://www.100md.com
单位：杜永平 张月萍 汪静 史健(第四军医大学西京医院 西安710032)；汪受传(南京中医药大学儿科疾病研究室 南京210029)
关键词：儿宝颗粒剂；厌食症；β-内啡肽；大鼠
北京中医药大学学报000413
摘要：模拟小儿厌食症主要病因制作幼龄大鼠动物模型，用临床有效运脾复方儿宝颗粒剂治疗,测定大鼠下丘脑、垂体、胃窦及血浆中β-内啡肽含量，观察运脾复方对该模型中枢和外周β-内啡肽的调节作用。结果显示模型动物与正常对照动物相比，血浆和胃窦β-内啡肽含量明显减少(P<0.05)，而下丘脑、垂体含量变化不大；大小剂量治疗组血浆β-内啡肽恢复正常，大剂量组下丘脑、垂体和胃窦β-内啡肽含量增加，显著高于正常组(P<0.001)。
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中图分类号：R285.5
The Influence of Erbao Granule on the Hypothalamus,Hypophysis,Sinus Ventriculi
and the Content of β-endorphin in the Plasma of Infantile Animal Pattern
Du Yongping Zhang Yueping Wang Shouchuan et al.
(The Xijing Hospital of The Forth Military Medical University, Shaanxi 710032)
ABSTRACT：Simulate main cause of the child apositia to build the infantile rat model, treat with the clinically effective compound Erbao granule, determine the hypothalamus, hypophysis, sinus ventriculi and the content of β-endorphin in the blood plasma of the rat, then observe the adjusting of the compound prescription on the pattern's central and peripheral β-endorphin. The result showed that, comparing the pattern animal with the normal animal, the contents of β-endorphin in the plasma and sinus ventriculi decreased obviously (P<0.05), while the contents didn't change much in the hypothalamus and hypophysis. Both in the large and small dosage treatment groups the β-endorphin of plasma recovered to normal. In the large dosage group, the content of β-endorphin in the hypothalamus, hypophysis and sinus ventriculi increased, obviously higher than in the normal group(P<0.001).
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KEY WORDS: Erbao granule; Apositia; β-endorphin; Rat
小儿厌食症是儿科常见病，我们用运脾复方儿宝颗粒剂治疗取得了良好疗效[1]。近年来研究表明β-内啡肽参与摄食调控，具有强力促进食欲的作用[2]。本研究模拟小儿厌食症的主要病因制作幼龄大鼠厌食模型[3]，用儿宝颗粒剂进行治疗，从中枢和血浆内β-内啡肽的变化探讨该药的作用机理。
1 实验材料
1.1 动物与饲料
SD大鼠48只(第四军医大学实验动物中心提供)，日龄35～40 d，体重(60±10)g，随机分为空白对照组、模型对照组、小剂量组和大剂量组4组，单笼饲养。空白对照组喂常规鼠饲料(由第四军医大学实验动物中心提供)，其余各组喂特制高脂高蛋白饲料(用奶粉、鸡蛋、鱼松、豆粉、玉米粉等按一定比例配制[3])。所有动物均自由进食饮水。
, 百拇医药
1.2 药物与试剂
1.2.1 儿宝颗粒：南京中医药大学植物药深加工中心提供，由苍术、陈皮、鸡内金等四味中药组成，为内部制剂。
1.2.2 抑肽酶：丽珠集团丽宝生物化学制药有限公司产品，500 000 KIU/支，使用前用生理盐水稀释为25 IU/mL。
1.2.3 β-内啡肽放免药盒：第二军医大学神经生物教研室提供。
2 实验方法
2.1 灌胃
实验过程中每日记录动物进食量，实验第8天开始灌胃，空白对照组和模型对照组灌生理盐水，小剂量组灌等效量的儿宝颗粒剂(18.8 g/kg)，大剂量组灌2倍等效量的儿宝颗粒剂(37.6 g/kg)，每日1次。第28天晚8时起禁食，第29天处死。
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2.2 标本制备
2.2.1 血浆：用1%肝素(10 mL/L血样)处理试管，干燥备用。采血前每管加抑肽酶20 mL/L血样，眼眶取血后注入肝素管内充分摇匀后立即置4℃冰箱，3h内以4000 r/min低温离心10 min，分离血浆，于-70 ℃保存待测。
2.2.2 组织：取血后将大鼠迅速断头，立即取出全脑、垂体和胃，入沸生理盐水中煮5 min，分离下丘脑，用玻片刮取胃窦部粘膜，分别用分析天平称重后置玻璃匀浆管内，加入1 mol/L冰醋酸1 mL，充分匀浆后倒入塑料试管，于室温下放置100 min，加入1 mol/L NaOH 1 mL，4 000 r/min低温离心10 min，取上清液于-70 ℃保存待测。
2.3 放免测定
按放免药盒说明加样，用美国产16探头γ记数仪自动绘制标准曲线并打印结果。
, 百拇医药
3 结果
3.1 儿宝颗粒对动物模型摄食量的影响
实验第1周，各组大鼠摄食量无明显差异，第7、14、21、27天模型组平均摄食量明显低于正常动物，表明造模成功。第21、27天，大、小剂量用药组平均摄食量比模型对照组增多，与正常对照组无明显差异，表明治疗有效。结果见表1。
表1 儿宝颗粒对幼龄厌食大鼠摄食量的影响 (
±s；g) 组 别n
第1天
第7天
第14天
, 百拇医药
第21天
第27天
空白对照组
12
10.56±2.34
13.20±2.77
16.39±2.58
18.56±3.04
19.17±3.26
模型对照组
10
9.32±2.83
, 百拇医药
9.93±1.07*
11.72±2.06***
13.47±1.99***
14.32±1.85***
小剂量治疗组
11
10.28±2.36
10.59±2.04*
13.30±3.22
15.66±3.58
, 百拇医药
16.72±3.07
大剂量治疗组
11
9.25±3.15
10.12±2.45*
13.51±3.17*
15.83±3.21
16.99±3.76
注：与空白对照组比*P<0.05 ***P<0.0013.2 儿宝颗粒对动物模型β-内啡肽的影响
模型组下丘脑和垂体的β-内啡肽浓度无明显变化。小剂量药物对下丘脑β-内啡肽无影响，大剂量组下丘脑和大、小剂量组垂体β-内啡肽均显著高于正常组。模型组胃窦部及血浆中β-内啡肽浓度均明显低于对照组，小剂量药物对模型胃窦部β-内啡肽无明显影响，可使血浆β-内啡肽增加；大剂量药物治疗不仅使模型血浆β-内啡肽增至正常水平，而且使胃窦部β-内啡肽增加，显著高于正常组。结果见表2。
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表2 各组大鼠下丘脑、垂体、胃窦和血浆β-内啡肽的含量 (
±s) 组 别n
下丘脑/μg/kg
垂体/mg/kg
胃窦/mg/kg
血浆/ng/L
空白对照组
12
24.83±6.67
1.36±0.62
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10.25±4.86
模型对照组
10
23.00±6.01
1.28±0.43
1.45±0.60***
6.26±1.73*
小剂量治疗组
11
28.05±7.85
2.56±0.78***▲▲▲
, 百拇医药
1.38±0.32***
8.82±2.86
大剂量治疗组
11
41.56±8.74***▲▲▲
2.11±0.69*▲
16.49±4.07***▲▲▲
8.43±1.59
注：与空白对照组比较*P<0.05 ***P<0.001; 与模型对照组比较▲P<0.05 ▲▲▲P<0.0014 讨论
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β-内啡肽是一种内源性阿片肽，在脑组织和胃肠道均能合成、分泌。研究表明将微量β-内啡肽注入脑室，能使已饱食的大鼠继续进食，提示中枢β-内啡肽浓度增加可促进动物摄食[4]。本研究结果显示模型组下丘脑和垂体β-内啡肽水平无明显变化，摄食量下降；用药组动物下丘脑和垂体β-内啡肽显著增加，同时摄食量明显增多，提示儿宝颗粒剂能够通过促进中枢β-内啡肽的分泌，使动物摄食量增加。
有资料表明大鼠夜间自发摄食、或运动使摄食增加时，均见到血中β-内啡肽浓度升高，提示外周β-内啡肽与摄食活动也有关[5]。本研究显示模型动物胃窦部和血浆中β-内啡肽水平明显低于正常对照组，用药组β-内啡肽不同程度增加，提示幼龄厌食大鼠的摄食量减少与外周β-内啡肽降低有关，儿宝颗粒剂的促食欲作用与促进胃窦部β-内啡肽分泌，并使血浆β-内啡肽含量增加有关。有资料认为外周血β-内啡肽主要来源于腺垂体[6]，本研究结果垂体与血浆中β-内啡肽的变化趋势基本一致，支持这一观点。
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本研究还显示儿宝颗粒剂对β-内啡肽的调节方式与剂量有关。大剂量可促进下丘脑、垂体和胃窦部β-内啡肽分泌，增加血浆中β-内啡肽浓度。小剂量用药不影响下丘脑和胃窦部β-内啡肽的分泌，仅使垂体和血浆中的β-内啡肽增多。虽然小剂量和大剂量药物对β-内啡肽分泌的影响程度不同，但两组动物的摄食量并无显著性差异，说明β-内啡肽仅是影响动物摄食的多种因素之一。值得注意的是大剂量组下丘脑、垂体和胃窦部的β-内啡肽浓度均显著高于正常水平。本研究以高脂高蛋白饲料喂养引起动物摄食量减少，而阿片肽主要促进蛋白和脂肪的摄入[4]，所以儿宝颗粒可能通过显著增加模型动物中枢和外周β-内啡肽的分泌，使模型动物对高蛋白高脂的摄入量增加。
综上所述，本研究结果表明高蛋白高脂饲料喂养幼龄大鼠造成的厌食模型，外周β-内啡肽含量显著减少，运脾复方可以明显促进中枢和外周β-内啡肽的分泌，从而使动物摄食量增加。这一结果提示β-内啡肽在小儿厌食发病中起重要作用，促进β-内啡肽分泌是运脾复方发挥临床疗效的机理之一。
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国家自然科学基金资助项目(No.39670896)
杜永平,男,36岁,医学硕士,讲师.
参 考 文 献
1，汪受传，尤汝娣，郁晓维，等.运脾方药治疗小儿厌食症的临床及实验研究.中西医结合杂志，1991，11(2):75～78
2，江连海，沈 锷.摄食的中枢神经化学机制.生理科学进展，1984,15(2):120～125
3，汪受传，张月萍，陶 勇，等.特制饲料喂养幼龄大鼠建立小儿厌食症模型. 南京中医药大学学报， 1999, 15(3)：148～150
4，Tseng LF. Acute and chronic administration of β-Endorphin and naltrexone on food and water intake in rats. Fed Proc，1980,39: 606～612
5，周 吕.胃肠生理学.北京：科学出版社，1991.175～178
6，Kerdelhue B.β-endorphin concentrations in serum,hypothalamus and central gray of hy-pophysectomized and mediobasal Hypothalam-us lesioned rats.Brain Res，1982,231:85～94
(收稿日期：1999-08-20), http://www.100md.com