疏肝健脾方对溃疡性结肠炎肝郁脾虚证大鼠结肠溃疡的影响
作者：顾立刚 郭学志 王庆国 柳翼 洪燕珠
单位：北京中医药大学基础医学院 北京100029
关键词：溃疡性结肠炎；肝郁脾虚； 疏肝健脾；大鼠
北京中医药大学学报000411
摘要:为观察疏肝健脾方药对溃疡性结肠炎肝郁脾虚证大鼠结肠溃疡修复的影响，在大鼠造成结肠溃疡后，治疗组开始每天用药，并在3、6、9 d后处死大鼠检测结肠组织。结果表明：大鼠溃疡性结肠炎肝郁脾虚证模型组，结肠溃疡粘膜组织在光镜下可见到大量炎细胞浸润、出血、水肿、结肠溃疡比单纯溃疡性结肠炎组严重。另外结肠粘膜组织一氧化氮(NO)含量和髓过氧化物酶(MPO)活性也比单纯溃疡性结肠炎组显著升高。然后用疏肝健脾方药治疗后上述实验指标改善明显。说明疏肝健脾方药对溃疡性结肠炎肝郁脾虚证大鼠结肠溃疡有较好的修复作用。
, 百拇医药
中图分类号：R285.5
Effects of TCM Prescription of “Dispersing the Depressed Liver-energy and Invigorating the Spleen" on Rat Model of Ulcerative Colitis with the TCM Syndrome of “Depression of Liver-energy and Asthenia of Spleen"
Gu Ligang Guo Xuezhi Wang Qingguo et al.
(Beijing University of Traditional Chinese Medicine, Beijing100029)
ABSTRACT：The study was to develop a rat model of ulcerative colitis with the “Depression of liver-energy and Asthenia of Spleen", which could be treated with the TCM prescription. The results showed that: In histologic examinations, 3 days after acetic acid-induced colitis in rats, it was appeared the TCM syndrome of “Depression of liver-energy and Asthenia of Spleen". The inflammatory response in the colonic mucosa was marked by neutrophil infiltration, hemorrhage, edema, and mucosal ulceration, which was more than the only acetic acid-induced colitis in rats. There were also greatly increased concentrations of nitric oxide (NO) and myeloperoxidase (MPO) activity in the rectum compared with the acetic acid-induced colitis in rats. Further, improvement was achieved by the treatment with the TCM prescription of “dispersing the depressed liver-energy and invigorating the spleen".
, 百拇医药
KEY WORDS: Ulcerative colitis; TCM syndrome of “depression of liver-energy and asthenia of spleen"; TCM prescription of “dispersing the depressed liver-energy and invigorating the spleen"; Rat model “depression of liver-energy and asthenia of spleen"; TCM prescription of “dispersing the depressed liver-energy and invigorating the spleen"; Rat model
溃疡性结肠炎属祖国医学“久泻、久痢”的范畴，临床上本病多见脾虚而兼肝郁。我们在前期研究工作的基础上，建立了大鼠溃疡性结肠炎肝郁脾虚证模型[1]，目前虽有结肠粘膜免疫系统受机体内外环境影响而发生改变的报道[2]。如单核巨噬细胞、中性粒细胞等炎细胞浸润，激活和递呈抗原给致敏T淋巴细胞，造成结肠粘膜组织免疫病理性损伤。但疏肝健脾方药对大鼠溃疡性结肠炎肝郁脾虚证模型结肠粘膜病理损伤的治疗作用尚无报道，本实验将进一步研究溃疡性结肠炎肝郁脾虚证大鼠结肠粘膜病理损伤变化及疏肝健脾方药对结肠溃疡的修复作用。
, http://www.100md.com
1 材料和方法
1.1 动物分组及疏肝健脾方药的制备
健康Wistar 雄性大鼠，体重150～200 g，中国中医研究院动物室提供。大鼠随机分为健康正常组、大鼠单纯溃疡性结肠炎组(简称单纯组)、大鼠溃疡性结肠炎肝郁脾虚证组(简称肝郁脾虚组)、大鼠溃疡性结肠炎肝郁脾虚证治疗大剂量、中剂量和小剂量组(简称大、中、小剂量治疗组)，每组9只。疏肝健脾方药由柴胡、桂枝、干姜、炒黄芩、川连、党参、黄芪、陈皮、防风、炒白术、白芍、炒枳实、炙甘草等组成。100%水煎剂，大鼠灌胃大、中、小剂量分别为3、2、1 mL/只。
1.2 大鼠单纯溃疡性结肠炎模型复制
实验方法参照文献[1，3]进行，用20%乌拉坦4 mL/kg麻醉大鼠后，用特制包有圆头的长注射针头插入空腹大鼠肛门内约10 cm处结肠内，并注入5%醋酸1 mL，复制醋酸诱导大鼠溃疡性结肠炎模型，在3、6、9 d后处死大鼠测定结肠溃疡粘膜组织。
, 百拇医药
1.3 大鼠溃疡性结肠炎肝郁脾虚证模型复制
参照文献[1]方法，大鼠每天不定时放入特制圆形箱内限制活动和饮食，并用胶布束绑大鼠后肢，每天约8 h，3周后用醋酸诱导溃疡性结肠炎方法同上，大鼠每天继续叠加肝郁脾虚因素，并分别于醋酸诱导结肠溃疡3、6、9 d后处死大鼠，测定结肠粘膜溃疡组织。
1.4 大鼠溃疡性结肠炎肝郁脾虚证治疗组模型复制
大鼠溃疡性结肠炎肝郁脾虚证模型制备同上，大鼠用醋酸诱导溃疡性结肠炎后，大鼠每天继续叠加肝郁脾虚因素的同时分别给予灌胃疏肝健脾方药，大、中、小3个剂量，并分别于醋酸诱导结肠溃疡3、6、9d后处死大鼠，测定结肠粘膜溃疡组织。
1.5 实验方法
上述各组大鼠分别于醋酸灌注结肠3, 6, 9 d后处死，观察结肠粘膜病理变化、结肠粘膜溃疡组织一氧化氮(NO)含量和髓过氧化物酶(MPO)活性。结肠粘膜NO含量测定和MPO酶活性测定分别参照文献[4]和[5]。
, 百拇医药
1.6 结肠粘膜病理形态学观察
分别取上述模型大鼠结肠溃疡粘膜组织1 cm2大小及正常组大鼠结肠粘膜组织1 cm2用福尔马林液固定，常规HE染色。光镜下观察结肠粘膜组织病理变化。
2 结果
2.1 对大鼠结肠粘膜组织病理形态学变化的影响
光镜检查：溃疡性结肠炎肝郁脾虚证大鼠经醋酸诱导结肠溃疡后3 d，结肠粘膜出现大片坏死，结构破坏，形成大面积溃疡，大部分切片均为溃疡所占，或仅见少量残留粘膜上皮，粘膜层及粘膜下层有大量炎细胞浸润，粘膜厚度变薄。溃疡性结肠炎肝郁脾虚证大鼠与单纯溃疡性结肠炎大鼠比较，结肠粘膜病理损伤严重。用疏肝健脾方药治疗6 d后结肠粘膜病理变化与上述两组比较，大鼠结肠粘膜仅见轻度充血，溃疡基本愈合，光镜下观察结肠粘膜结构基本完整，上皮细胞间有生成，腺体大小不一，呈新生状，结肠粘膜层及粘膜下层炎细胞浸润明显减少，提示疏肝健脾方药对结肠粘膜溃疡组织有修复作用。但随着时间的延长上述各组结肠粘膜溃疡组织差异不明显，提示大鼠经醋酸诱导的急性结肠粘膜溃疡组织有自行修复的能力。
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2.2 对大鼠结肠粘膜溃疡组织细胞NO产生的影响
大鼠经醋酸诱导结肠溃疡3、6、9d后，溃疡性结肠炎肝郁脾虚证大鼠结肠粘膜溃疡组织NO含量与单纯溃疡性结肠炎大鼠比较，升高显著(P<0.01)。结肠粘膜溃疡组织NO含量升高与炎细胞浸润有关。用疏肝健脾方药治疗后能显著改善，但随时间延长其结肠溃疡粘膜组织炎细胞浸润明显减少，结肠溃疡逐渐恢复正常，各组间无明显差异，结果见表1。
表1 各组对大鼠结肠粘膜细胞产生NO的影响 (
±s；nmol/L) 组 别
n
3 d
6 d
9 d
, http://www.100md.com
正常对照组
9
88.50±6.37
90.16±4.49
84.35±3.89
单纯组
9
112.32±10.44##
100.54±2.34##
90.35±10.10
肝郁脾虚组
, http://www.100md.com 9
146.20±11.33**
139.04±18.39**
100.87±14.28
大剂量治疗组
9
133.47±7.81
116.99±3.77△
96.94±4.02
中剂量治疗组
9
, http://www.100md.com
100.75±7.86△△
96.79±6.60△△
88.84±3.92
小剂量治疗组
9
107.03±9.27△△
101.12±8.49△△
90.91±2.72
注：与正常对照组比较##P<0.01; 与单纯组比较**P<0.01; 与肝郁脾虚组比较△P<0.05 △△P<0.012.3 对大鼠结肠粘膜溃疡组织细胞MPO酶活性的影响
, 百拇医药
大鼠经醋酸诱导结肠溃疡3、6、9d后，溃疡性结肠炎肝郁脾虚证大鼠结肠粘膜溃疡组织MPO含量与单纯溃疡性结肠炎大鼠比较，升高显著(P<0.01)。结肠粘膜溃疡组织MPO酶活性升高也与炎细胞浸润有关。用疏肝健脾方药治疗后能显著改善，但随时间延长其结肠溃疡粘膜组织炎细胞浸润明显减少，结肠溃疡粘膜组织逐渐恢复正常，各组间无明显差异，结果见表2。
表2 各组对大鼠结肠粘膜细胞MPO酶活性变化的影响 [±s；U/(g.min)] 组 别
n
3 d
6 d
9 d
正常对照组
, http://www.100md.com
9
7.00±0.47
7.34±0.40
6.80±0.49
单纯组
9
8.86±0.08##
8.54±0.10##
7.18±0.44
肝郁脾虚组
9
10.20±0.82**
, 百拇医药
9.06±0.06**
7.40±0.50
大剂量治疗组
9
8.00±0.30△△
7.40±0.38△△
6.90±0.60
中剂量治疗组
9
7.96±0.32△△
7.36±0.40△△
, 百拇医药
7.00±0.32
小剂量治疗组
9
8.70±0.50△△
7.86±0.24△△
7.80±2.60
注： 与正常对照组比较##P<0.01; 与单纯组比较**P<0.01; 与肝郁脾虚组比较△△P<0.013 讨论
在最近的研究中我们建立了大鼠溃疡性结肠炎肝郁脾虚证模型[1]。该模型大鼠主要特征表现为体重下降、粪便溏泄、免疫器官萎缩、免疫功能下降；体内去甲肾上腺素、多巴胺 、5-羟色胺等儿茶酚胺类激素分泌增加；肾上腺重量增加、血液粘度升高等症状。同时结合结肠粘膜组织形态学观察，溃疡性结肠炎肝郁脾虚证大鼠结肠粘膜充血水肿，糜烂出血，结肠粘膜溃疡形成，甚至出现结肠穿孔，溃疡表面布满脓苔。溃疡形成程度明显比单纯溃疡性结肠炎大鼠严重。本实验在前期研究工作的基础上，应用疏肝健脾方药对该模型大鼠结肠粘膜溃疡组织进行观察，结果发现，溃疡性结肠炎肝郁脾虚证大鼠经疏肝健脾方药治疗6 d后与溃疡性结肠炎肝郁脾虚证大鼠和单纯溃疡性结肠炎大鼠比较，大鼠结肠粘膜仅见轻度充血，溃疡基本愈合，光镜下观察结肠粘膜结构基本完整，结肠粘膜层及粘膜下层炎细胞浸润明显减少，提示疏肝健脾方药对结肠粘膜溃疡组织有修复作用。已知，炎症的基本病理变化通常为组织的质变、渗出和增生。其中白细胞的渗出是炎症反应的重要特征，中性粒细胞和单核细胞的渗出，并吞噬和降解细菌等坏死细胞，构成炎症反应的主要防御环节。但白细胞在发挥作用的同时也释放一些酶类物质造成周围组织的损伤。为进一步分析结肠粘膜组织的病理变化，我们同时取结肠粘膜溃疡组织测定了NO含量和MPO酶活性。结果发现，溃疡性结肠炎肝郁脾虚证模型大鼠结肠粘膜组织细胞NO产生以及MPO酶活性比单纯溃疡性结肠炎大鼠明显升高。结肠粘膜组织NO含量和MPO酶活性升高，说明结肠粘膜溃疡组织中单核巨噬细胞和中性粒细胞浸润增多，与结肠粘膜组织炎症有关[5]，虽然这些细胞在抗感染方面起一定作用，但其产生的NO和MPO也造成了结肠局部粘膜组织的损伤。然后应用疏肝健脾方药治疗3～6 d后，发现结肠粘膜组织细胞NO产生和MPO酶活性明显下降，但从实验给出的大、中、小3个剂量来看，量效关系不明显，说明实验选用的3个剂量还有待确定，但其中中剂量效果最好。说明该方药其有减少溃疡性结肠炎肝郁脾虚证大鼠结肠粘膜组织炎性细胞的浸润，促进炎症修复的作用。
, 百拇医药
综上所述，大鼠肝郁脾虚证溃疡性结肠炎模型的建立，不仅能为中医证候模型的研究探讨新的途径，为中西医在病理研究领域的结合增添新的内容，为揭示中医证候的实质提供科学的依据，而且还能为中医药治疗本病的实验及临床研究奠定基础。
国家中医药管理局重点课题(No.950489),国家教委博士点课题
顾立刚,男,48岁,教授,硕士生导师.
参 考 文 献
1，顾立刚,郭学志,王庆国,等.大鼠溃疡性肠炎肝郁脾虚证模型的研究. 北京中医药大学学报,1999,22(2):21～23
2，Nielsen O.H, Rudiger N, Gaustadnes M, et al. Intestinal interleukin-8 concentration and gene expression in inflammatory bowel disease. Scand J Gastroenterol， 1997， 32:1028～1034
, http://www.100md.com
3，Elson C.O, Sartor R.B, Tennyson G.S, et al. Experimental models of inflammatory bowel disease. Gastroenterology, 1995， 109:1344～1367
4，Ding AH, Nathan CF, Stuehr DJ. Release of reactive nitrogen intermediates and reactive oxygen intermediates from mouse peritoneal macrophage. J Immunol, 1988, 141:2407～2413
5，Vincenzo C.R, Monsacchi L, Vosbeck K, et al. Anti-inflammatory effects of CGP 479696A, a novel inhibitor of proinflammatory cytokine synthesis, in rabbit immune colitis. Gastroenterology, 1995， 109:812～816
6，伏兴华，王大观，马逢升. 慢性非特异性溃疡性结肠炎的研究进展. 云南中医学院学报，1995,18(3):43～45
(收稿日期：1999-12-30), 百拇医药
单位：北京中医药大学基础医学院 北京100029
关键词：溃疡性结肠炎；肝郁脾虚； 疏肝健脾；大鼠
北京中医药大学学报000411
摘要:为观察疏肝健脾方药对溃疡性结肠炎肝郁脾虚证大鼠结肠溃疡修复的影响，在大鼠造成结肠溃疡后，治疗组开始每天用药，并在3、6、9 d后处死大鼠检测结肠组织。结果表明：大鼠溃疡性结肠炎肝郁脾虚证模型组，结肠溃疡粘膜组织在光镜下可见到大量炎细胞浸润、出血、水肿、结肠溃疡比单纯溃疡性结肠炎组严重。另外结肠粘膜组织一氧化氮(NO)含量和髓过氧化物酶(MPO)活性也比单纯溃疡性结肠炎组显著升高。然后用疏肝健脾方药治疗后上述实验指标改善明显。说明疏肝健脾方药对溃疡性结肠炎肝郁脾虚证大鼠结肠溃疡有较好的修复作用。
, 百拇医药
中图分类号：R285.5
Effects of TCM Prescription of “Dispersing the Depressed Liver-energy and Invigorating the Spleen" on Rat Model of Ulcerative Colitis with the TCM Syndrome of “Depression of Liver-energy and Asthenia of Spleen"
Gu Ligang Guo Xuezhi Wang Qingguo et al.
(Beijing University of Traditional Chinese Medicine, Beijing100029)
ABSTRACT：The study was to develop a rat model of ulcerative colitis with the “Depression of liver-energy and Asthenia of Spleen", which could be treated with the TCM prescription. The results showed that: In histologic examinations, 3 days after acetic acid-induced colitis in rats, it was appeared the TCM syndrome of “Depression of liver-energy and Asthenia of Spleen". The inflammatory response in the colonic mucosa was marked by neutrophil infiltration, hemorrhage, edema, and mucosal ulceration, which was more than the only acetic acid-induced colitis in rats. There were also greatly increased concentrations of nitric oxide (NO) and myeloperoxidase (MPO) activity in the rectum compared with the acetic acid-induced colitis in rats. Further, improvement was achieved by the treatment with the TCM prescription of “dispersing the depressed liver-energy and invigorating the spleen".
, 百拇医药
KEY WORDS: Ulcerative colitis; TCM syndrome of “depression of liver-energy and asthenia of spleen"; TCM prescription of “dispersing the depressed liver-energy and invigorating the spleen"; Rat model “depression of liver-energy and asthenia of spleen"; TCM prescription of “dispersing the depressed liver-energy and invigorating the spleen"; Rat model
溃疡性结肠炎属祖国医学“久泻、久痢”的范畴，临床上本病多见脾虚而兼肝郁。我们在前期研究工作的基础上，建立了大鼠溃疡性结肠炎肝郁脾虚证模型[1]，目前虽有结肠粘膜免疫系统受机体内外环境影响而发生改变的报道[2]。如单核巨噬细胞、中性粒细胞等炎细胞浸润，激活和递呈抗原给致敏T淋巴细胞，造成结肠粘膜组织免疫病理性损伤。但疏肝健脾方药对大鼠溃疡性结肠炎肝郁脾虚证模型结肠粘膜病理损伤的治疗作用尚无报道，本实验将进一步研究溃疡性结肠炎肝郁脾虚证大鼠结肠粘膜病理损伤变化及疏肝健脾方药对结肠溃疡的修复作用。
, http://www.100md.com
1 材料和方法
1.1 动物分组及疏肝健脾方药的制备
健康Wistar 雄性大鼠，体重150～200 g，中国中医研究院动物室提供。大鼠随机分为健康正常组、大鼠单纯溃疡性结肠炎组(简称单纯组)、大鼠溃疡性结肠炎肝郁脾虚证组(简称肝郁脾虚组)、大鼠溃疡性结肠炎肝郁脾虚证治疗大剂量、中剂量和小剂量组(简称大、中、小剂量治疗组)，每组9只。疏肝健脾方药由柴胡、桂枝、干姜、炒黄芩、川连、党参、黄芪、陈皮、防风、炒白术、白芍、炒枳实、炙甘草等组成。100%水煎剂，大鼠灌胃大、中、小剂量分别为3、2、1 mL/只。
1.2 大鼠单纯溃疡性结肠炎模型复制
实验方法参照文献[1，3]进行，用20%乌拉坦4 mL/kg麻醉大鼠后，用特制包有圆头的长注射针头插入空腹大鼠肛门内约10 cm处结肠内，并注入5%醋酸1 mL，复制醋酸诱导大鼠溃疡性结肠炎模型，在3、6、9 d后处死大鼠测定结肠溃疡粘膜组织。
, 百拇医药
1.3 大鼠溃疡性结肠炎肝郁脾虚证模型复制
参照文献[1]方法，大鼠每天不定时放入特制圆形箱内限制活动和饮食，并用胶布束绑大鼠后肢，每天约8 h，3周后用醋酸诱导溃疡性结肠炎方法同上，大鼠每天继续叠加肝郁脾虚因素，并分别于醋酸诱导结肠溃疡3、6、9 d后处死大鼠，测定结肠粘膜溃疡组织。
1.4 大鼠溃疡性结肠炎肝郁脾虚证治疗组模型复制
大鼠溃疡性结肠炎肝郁脾虚证模型制备同上，大鼠用醋酸诱导溃疡性结肠炎后，大鼠每天继续叠加肝郁脾虚因素的同时分别给予灌胃疏肝健脾方药，大、中、小3个剂量，并分别于醋酸诱导结肠溃疡3、6、9d后处死大鼠，测定结肠粘膜溃疡组织。
1.5 实验方法
上述各组大鼠分别于醋酸灌注结肠3, 6, 9 d后处死，观察结肠粘膜病理变化、结肠粘膜溃疡组织一氧化氮(NO)含量和髓过氧化物酶(MPO)活性。结肠粘膜NO含量测定和MPO酶活性测定分别参照文献[4]和[5]。
, 百拇医药
1.6 结肠粘膜病理形态学观察
分别取上述模型大鼠结肠溃疡粘膜组织1 cm2大小及正常组大鼠结肠粘膜组织1 cm2用福尔马林液固定，常规HE染色。光镜下观察结肠粘膜组织病理变化。
2 结果
2.1 对大鼠结肠粘膜组织病理形态学变化的影响
光镜检查：溃疡性结肠炎肝郁脾虚证大鼠经醋酸诱导结肠溃疡后3 d，结肠粘膜出现大片坏死，结构破坏，形成大面积溃疡，大部分切片均为溃疡所占，或仅见少量残留粘膜上皮，粘膜层及粘膜下层有大量炎细胞浸润，粘膜厚度变薄。溃疡性结肠炎肝郁脾虚证大鼠与单纯溃疡性结肠炎大鼠比较，结肠粘膜病理损伤严重。用疏肝健脾方药治疗6 d后结肠粘膜病理变化与上述两组比较，大鼠结肠粘膜仅见轻度充血，溃疡基本愈合，光镜下观察结肠粘膜结构基本完整，上皮细胞间有生成，腺体大小不一，呈新生状，结肠粘膜层及粘膜下层炎细胞浸润明显减少，提示疏肝健脾方药对结肠粘膜溃疡组织有修复作用。但随着时间的延长上述各组结肠粘膜溃疡组织差异不明显，提示大鼠经醋酸诱导的急性结肠粘膜溃疡组织有自行修复的能力。
, http://www.100md.com
2.2 对大鼠结肠粘膜溃疡组织细胞NO产生的影响
大鼠经醋酸诱导结肠溃疡3、6、9d后，溃疡性结肠炎肝郁脾虚证大鼠结肠粘膜溃疡组织NO含量与单纯溃疡性结肠炎大鼠比较，升高显著(P<0.01)。结肠粘膜溃疡组织NO含量升高与炎细胞浸润有关。用疏肝健脾方药治疗后能显著改善，但随时间延长其结肠溃疡粘膜组织炎细胞浸润明显减少，结肠溃疡逐渐恢复正常，各组间无明显差异，结果见表1。
表1 各组对大鼠结肠粘膜细胞产生NO的影响 (
±s；nmol/L) 组 别n
3 d
6 d
9 d
, http://www.100md.com
正常对照组
9
88.50±6.37
90.16±4.49
84.35±3.89
单纯组
9
112.32±10.44##
100.54±2.34##
90.35±10.10
肝郁脾虚组
, http://www.100md.com 9
146.20±11.33**
139.04±18.39**
100.87±14.28
大剂量治疗组
9
133.47±7.81
116.99±3.77△
96.94±4.02
中剂量治疗组
9
, http://www.100md.com
100.75±7.86△△
96.79±6.60△△
88.84±3.92
小剂量治疗组
9
107.03±9.27△△
101.12±8.49△△
90.91±2.72
注：与正常对照组比较##P<0.01; 与单纯组比较**P<0.01; 与肝郁脾虚组比较△P<0.05 △△P<0.012.3 对大鼠结肠粘膜溃疡组织细胞MPO酶活性的影响
, 百拇医药
大鼠经醋酸诱导结肠溃疡3、6、9d后，溃疡性结肠炎肝郁脾虚证大鼠结肠粘膜溃疡组织MPO含量与单纯溃疡性结肠炎大鼠比较，升高显著(P<0.01)。结肠粘膜溃疡组织MPO酶活性升高也与炎细胞浸润有关。用疏肝健脾方药治疗后能显著改善，但随时间延长其结肠溃疡粘膜组织炎细胞浸润明显减少，结肠溃疡粘膜组织逐渐恢复正常，各组间无明显差异，结果见表2。
表2 各组对大鼠结肠粘膜细胞MPO酶活性变化的影响 [
±s；U/(g.min)] 组 别n
3 d
6 d
9 d
正常对照组
, http://www.100md.com
9
7.00±0.47
7.34±0.40
6.80±0.49
单纯组
9
8.86±0.08##
8.54±0.10##
7.18±0.44
肝郁脾虚组
9
10.20±0.82**
, 百拇医药
9.06±0.06**
7.40±0.50
大剂量治疗组
9
8.00±0.30△△
7.40±0.38△△
6.90±0.60
中剂量治疗组
9
7.96±0.32△△
7.36±0.40△△
, 百拇医药
7.00±0.32
小剂量治疗组
9
8.70±0.50△△
7.86±0.24△△
7.80±2.60
注： 与正常对照组比较##P<0.01; 与单纯组比较**P<0.01; 与肝郁脾虚组比较△△P<0.013 讨论
在最近的研究中我们建立了大鼠溃疡性结肠炎肝郁脾虚证模型[1]。该模型大鼠主要特征表现为体重下降、粪便溏泄、免疫器官萎缩、免疫功能下降；体内去甲肾上腺素、多巴胺 、5-羟色胺等儿茶酚胺类激素分泌增加；肾上腺重量增加、血液粘度升高等症状。同时结合结肠粘膜组织形态学观察，溃疡性结肠炎肝郁脾虚证大鼠结肠粘膜充血水肿，糜烂出血，结肠粘膜溃疡形成，甚至出现结肠穿孔，溃疡表面布满脓苔。溃疡形成程度明显比单纯溃疡性结肠炎大鼠严重。本实验在前期研究工作的基础上，应用疏肝健脾方药对该模型大鼠结肠粘膜溃疡组织进行观察，结果发现，溃疡性结肠炎肝郁脾虚证大鼠经疏肝健脾方药治疗6 d后与溃疡性结肠炎肝郁脾虚证大鼠和单纯溃疡性结肠炎大鼠比较，大鼠结肠粘膜仅见轻度充血，溃疡基本愈合，光镜下观察结肠粘膜结构基本完整，结肠粘膜层及粘膜下层炎细胞浸润明显减少，提示疏肝健脾方药对结肠粘膜溃疡组织有修复作用。已知，炎症的基本病理变化通常为组织的质变、渗出和增生。其中白细胞的渗出是炎症反应的重要特征，中性粒细胞和单核细胞的渗出，并吞噬和降解细菌等坏死细胞，构成炎症反应的主要防御环节。但白细胞在发挥作用的同时也释放一些酶类物质造成周围组织的损伤。为进一步分析结肠粘膜组织的病理变化，我们同时取结肠粘膜溃疡组织测定了NO含量和MPO酶活性。结果发现，溃疡性结肠炎肝郁脾虚证模型大鼠结肠粘膜组织细胞NO产生以及MPO酶活性比单纯溃疡性结肠炎大鼠明显升高。结肠粘膜组织NO含量和MPO酶活性升高，说明结肠粘膜溃疡组织中单核巨噬细胞和中性粒细胞浸润增多，与结肠粘膜组织炎症有关[5]，虽然这些细胞在抗感染方面起一定作用，但其产生的NO和MPO也造成了结肠局部粘膜组织的损伤。然后应用疏肝健脾方药治疗3～6 d后，发现结肠粘膜组织细胞NO产生和MPO酶活性明显下降，但从实验给出的大、中、小3个剂量来看，量效关系不明显，说明实验选用的3个剂量还有待确定，但其中中剂量效果最好。说明该方药其有减少溃疡性结肠炎肝郁脾虚证大鼠结肠粘膜组织炎性细胞的浸润，促进炎症修复的作用。
, 百拇医药
综上所述，大鼠肝郁脾虚证溃疡性结肠炎模型的建立，不仅能为中医证候模型的研究探讨新的途径，为中西医在病理研究领域的结合增添新的内容，为揭示中医证候的实质提供科学的依据，而且还能为中医药治疗本病的实验及临床研究奠定基础。
国家中医药管理局重点课题(No.950489),国家教委博士点课题
顾立刚,男,48岁,教授,硕士生导师.
参 考 文 献
1，顾立刚,郭学志,王庆国,等.大鼠溃疡性肠炎肝郁脾虚证模型的研究. 北京中医药大学学报,1999,22(2):21～23
2，Nielsen O.H, Rudiger N, Gaustadnes M, et al. Intestinal interleukin-8 concentration and gene expression in inflammatory bowel disease. Scand J Gastroenterol， 1997， 32:1028～1034
, http://www.100md.com
3，Elson C.O, Sartor R.B, Tennyson G.S, et al. Experimental models of inflammatory bowel disease. Gastroenterology, 1995， 109:1344～1367
4，Ding AH, Nathan CF, Stuehr DJ. Release of reactive nitrogen intermediates and reactive oxygen intermediates from mouse peritoneal macrophage. J Immunol, 1988, 141:2407～2413
5，Vincenzo C.R, Monsacchi L, Vosbeck K, et al. Anti-inflammatory effects of CGP 479696A, a novel inhibitor of proinflammatory cytokine synthesis, in rabbit immune colitis. Gastroenterology, 1995， 109:812～816
6，伏兴华，王大观，马逢升. 慢性非特异性溃疡性结肠炎的研究进展. 云南中医学院学报，1995,18(3):43～45
(收稿日期：1999-12-30), 百拇医药
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