P16蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义
作者：李小钢 付静 赵克熹 史春祥
单位：李小钢(北京市海淀医院胸外科 邮政编码 100080)；付静(北京市海淀医院病理科 邮政编码 100080)；赵克熹(北京市海淀医院胸外科 邮政编码 100080)；史春祥(北京市海淀医院病理科 邮政编码 100080)
关键词：非小细胞肺癌；P16蛋白；免疫组化
北京医学000507 【摘要】 目的 探讨P16蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)及癌旁组织中的表达及临床意义。方法 采用SP免疫组化方法测定P16蛋白在64例NSCLC及癌旁1～2cm组织中的表达。结果 P16蛋白的阳性表达主要位于细胞胞浆，部分同时出现于胞核。P16蛋白在NSCLC中的表达率为40.6%，在癌旁组织中的表达率为74.4%，与NSCLC的分化程度及患者术后生存期有关(P<0.05)，而与组织学类型及有无局部淋巴结转移无明显关系(P>0.05)。结论 P16蛋白表达缺失可作为临床判断NSCLC的分化程度及预测患者预后的参考指标。
, 百拇医药
The expression of P16 protein in non-small cell lung cancer and its clinical significance
Li Xiaogang Fu Jing Zhao kexi
(Department of Thoracic Surgery,Haidian Hospital,Beijing 100080)
【Abstract】 Objective To elucidate the expression of P16 in non-small cell lung cancer (NSCLC) and the tissue adjacent to carcinoma and its clinical significance.Methods Streotavidin perxidase immunohistochemical staining method was used to examine the expression of P16 in 64 NSCLC and the tissue adjacent tocarcinoma.Results The expression of P16 protein was mainly located in cytoplasmin.The positive rate of P16 protein in NSCLC was 40.6%,much lower than 74.4% in the tissue adjacent carcinoma.The positive rate of P16 protein was related to the degree of differentiation and prognosis (P<0.05),but it not correlate with lymph node metastasis and histologic type (P>0.05).Conclusions The absence of P16 protein expression may be con-sidered as a parameter for judging the degree of differentiation of NSCLC and clinical prognosis.
, 百拇医药
【Key words】 NSCLC P16 protein Immunohistochemistry
P16基因是近年来发现的一种新的肿瘤抑制基因，其与肿瘤发生的关系在已有的多种肿瘤的研究中已得到证实。我们用SP免疫组化方法，探讨P16基因编码的P16蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)及癌旁组织中的表达及其临床意义。
材料与方法
1.收集本院及中日友好医院病理科1992年7月至1998年8月手术切除之肺癌标本，经病理证实为原发性非小细胞肺癌，其中鳞癌41例，腺癌17例，腺鳞癌6例。
2.方法：免疫组化采用SP方法，P16单克隆抗体和SP试剂盒均为北京中山生物技术公司提供的ZYMED公司产品。P16抗体稀释度为1∶100，切片经0.4%胃酶消化及枸橼酸盐缓冲液抗原修复后，按SP法染色。
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3.结果判断：以细胞出现明显棕色为阳性，阳性细胞<25%为(-)，阳性细胞>25%为(+)。
4.统计学处理：采用χ2检验。
结 果
1.P16蛋白的表达：阳性物质主要定位于胞浆，部分出现于胞核。
2.P16蛋白在NSCLC中的表达，见表1。
表1 P16蛋白在NSCLC中的表达(例) 组织学类型
例数
P16(+)
P16(-)
阳性率(%)
, 百拇医药
腺 癌
17
8
9
47.1
鳞 癌
41
15
26
36.7
腺鳞癌
6
3
3
, 百拇医药
50.0
合 计
64
26
38
40.6
P>0.05
64例NSCLC中，P16蛋白的阳性表达率为40.6%，各组织学类型间无显著性差异(P>0.05)。
3.癌旁1～2cm处支气管腺体及粘膜上皮细胞P16蛋白表达率为74.4%(32/43)，明显高于P16蛋白在NSCLC中的表达。
4.P16蛋白的表达与NSCLC分化程度的关系，见表2。表2 P16蛋白的表达与NSCLC组织学
, http://www.100md.com
分级的关系(例) 组织学分级
例数
P16(+)
P16(-)
阳性率(%)
高分化
16
10
6
62.5
中分化
24
11
, http://www.100md.com
13
45.8
低分化
24
5
19
20.8
合 计
64
26
38
40.6
P<0.05
, http://www.100md.com
P16蛋白的表达随NSCLC分化程度的降低而降低，有显著性差异(P<0.05)。
5.P16蛋白的表达与NSCLC患者术后生存期的关系，见表3。
64例NSCLC中有3年以上随访资料的有33例，如表3显示，P16蛋白的表达与肺癌患者术后生存期呈正相关，术后生存期长的患者中，P16蛋白阳性表达高(P<0.05)。
6.P16蛋白的表达与NSCLC淋巴结转移的关系，见表4。表3 P16蛋白表达与NSCLC患者术后
生存期的关系(例) 术后生存期
例数
P16(+)
P16(-)
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阳性率(%)
<1年
5
0
5
0
1～3年
16
5
11
32.2
>3年
12
9
, 百拇医药
3
75.4
合 计
33
14
19
42.4
P<0.05表4 P16蛋白的表达与NSCLC局部淋巴结
转移情况的关系(例) 淋巴结情况
例数
P16(+)
P16(-)
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阳性率(%)
有淋巴结转移
25
11
14
44.0
无淋巴经转移
26
9
17
34.6
合 计
51
, 百拇医药
20
31
39.2
P>0.05
64例NSCLC中，资料提示了淋巴结情况的有51例，表4提示肺癌组织P16蛋白的表达与局部淋巴结转移间无显著相关性(P>0.05)。
讨 论
P16基因于1993年由Serrano等[1]发现并被克隆成功，它编码的P16蛋白可以与CDK4/Cyclin D复合物竞争性结合，从而抑制CDK4/Cyclin D复合物的活性，阻止细胞周期从G1期向S期过渡，在正常细胞周期中起负反馈调节作用。当P16基因突变或丢失时，P16蛋白的合成发生障碍，能引起细胞生长失控，导致癌变[2，3]。
, 百拇医药
肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，其发病率及死亡率都很高。NSCLC占全部肺癌的75%～90%。以往的研究表明，P16基因的突变和丢失在NSCLC的形成及进展中起着较重要的作用，但不是早发事件[4]。我们应用免疫组化SP方法研究了P16蛋白在人原发性NSCLC及癌旁1～2cm肺组织的表达，并分析其与临床病理相关性，结果表明：P16蛋白表达率在NSCLC中明显低于癌旁组织，且与NSCLC的分化程度呈正相关，此结论与国内同类报道相符(P<0.05)[5～7]；NSCLC各组织学类型间P16蛋白的阳性表达无显著性差异(P>0.05)；伴或不伴局部淋巴结转移的NSCLC P16蛋白的阳性表达无显著性差异(P>0.05)；在NSCLC预后方面，我们的研究显示：P16蛋白的表达率与NSCLC患者的术后生存期显著相关，术后生存3年以上的患者组肺癌组织中P16蛋白的阳性表达率明显高于1～3年和1年以下患者组，三组间有显著性差异(P<0.05)。
综上所述，本研究提示：①P16蛋白主要定位于细胞的胞浆，部分同时出现于胞核；②P16蛋白表达缺失与NSCLC的发生及细胞分化不良有关；与NSCLC患者术后生存期有关，可作为临床判断NSCLC的分化程度及预测患者预后的参考指标；③P16蛋白的表达缺失与NSCLC的组织学类型及有无局部淋巴结转移关系不明显。
, 百拇医药
参 考 文 献
1，Serrano M,Hunnon GJ,Beach DA.A how regulatory motif in cell-cycle control causing specific inhibition of Cyclin D/CDK4.Nature,1993,366:704.
2，赵温利，郭卫星，田志刚.肿瘤抑制基因P16的研究进展.国外医学肿瘤学分册，1997，24：199.
3，温桂兰，范希光，饶纬华.肿瘤抑制基因CDKN2与肺癌.中华结核与呼吸杂志，1998，21：198.
4，李伟峰，赵 彤.P16基因与肺癌.国外医学呼吸系统分册，1997，17：5.
5，战雪梅，孙崇伟，王国新，等.肺癌P16蛋白表达及临床意义.诊断病理学杂志，1998，5：89.
6，张尚福，张 声，李 羽，等.肺癌中P16蛋白表达的意义.中华肿瘤杂志，1997，19：259.
7，姜彦多，夏书月，戴晓淳，等.肺癌CDKN2基因产物表达的研究.中华结核和呼吸杂志，1996，19：81.
收稿：1999-01-12
修回：1999-08-27, http://www.100md.com
单位：李小钢(北京市海淀医院胸外科 邮政编码 100080)；付静(北京市海淀医院病理科 邮政编码 100080)；赵克熹(北京市海淀医院胸外科 邮政编码 100080)；史春祥(北京市海淀医院病理科 邮政编码 100080)
关键词：非小细胞肺癌；P16蛋白；免疫组化
北京医学000507 【摘要】 目的 探讨P16蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)及癌旁组织中的表达及临床意义。方法 采用SP免疫组化方法测定P16蛋白在64例NSCLC及癌旁1～2cm组织中的表达。结果 P16蛋白的阳性表达主要位于细胞胞浆，部分同时出现于胞核。P16蛋白在NSCLC中的表达率为40.6%，在癌旁组织中的表达率为74.4%，与NSCLC的分化程度及患者术后生存期有关(P<0.05)，而与组织学类型及有无局部淋巴结转移无明显关系(P>0.05)。结论 P16蛋白表达缺失可作为临床判断NSCLC的分化程度及预测患者预后的参考指标。
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The expression of P16 protein in non-small cell lung cancer and its clinical significance
Li Xiaogang Fu Jing Zhao kexi
(Department of Thoracic Surgery,Haidian Hospital,Beijing 100080)
【Abstract】 Objective To elucidate the expression of P16 in non-small cell lung cancer (NSCLC) and the tissue adjacent to carcinoma and its clinical significance.Methods Streotavidin perxidase immunohistochemical staining method was used to examine the expression of P16 in 64 NSCLC and the tissue adjacent tocarcinoma.Results The expression of P16 protein was mainly located in cytoplasmin.The positive rate of P16 protein in NSCLC was 40.6%,much lower than 74.4% in the tissue adjacent carcinoma.The positive rate of P16 protein was related to the degree of differentiation and prognosis (P<0.05),but it not correlate with lymph node metastasis and histologic type (P>0.05).Conclusions The absence of P16 protein expression may be con-sidered as a parameter for judging the degree of differentiation of NSCLC and clinical prognosis.
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【Key words】 NSCLC P16 protein Immunohistochemistry
P16基因是近年来发现的一种新的肿瘤抑制基因，其与肿瘤发生的关系在已有的多种肿瘤的研究中已得到证实。我们用SP免疫组化方法，探讨P16基因编码的P16蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)及癌旁组织中的表达及其临床意义。
材料与方法
1.收集本院及中日友好医院病理科1992年7月至1998年8月手术切除之肺癌标本，经病理证实为原发性非小细胞肺癌，其中鳞癌41例，腺癌17例，腺鳞癌6例。
2.方法：免疫组化采用SP方法，P16单克隆抗体和SP试剂盒均为北京中山生物技术公司提供的ZYMED公司产品。P16抗体稀释度为1∶100，切片经0.4%胃酶消化及枸橼酸盐缓冲液抗原修复后，按SP法染色。
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3.结果判断：以细胞出现明显棕色为阳性，阳性细胞<25%为(-)，阳性细胞>25%为(+)。
4.统计学处理：采用χ2检验。
结 果
1.P16蛋白的表达：阳性物质主要定位于胞浆，部分出现于胞核。
2.P16蛋白在NSCLC中的表达，见表1。
表1 P16蛋白在NSCLC中的表达(例) 组织学类型
例数
P16(+)
P16(-)
阳性率(%)
, 百拇医药
腺 癌
17
8
9
47.1
鳞 癌
41
15
26
36.7
腺鳞癌
6
3
3
, 百拇医药
50.0
合 计
64
26
38
40.6
P>0.05
64例NSCLC中，P16蛋白的阳性表达率为40.6%，各组织学类型间无显著性差异(P>0.05)。
3.癌旁1～2cm处支气管腺体及粘膜上皮细胞P16蛋白表达率为74.4%(32/43)，明显高于P16蛋白在NSCLC中的表达。
4.P16蛋白的表达与NSCLC分化程度的关系，见表2。表2 P16蛋白的表达与NSCLC组织学
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分级的关系(例) 组织学分级
例数
P16(+)
P16(-)
阳性率(%)
高分化
16
10
6
62.5
中分化
24
11
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13
45.8
低分化
24
5
19
20.8
合 计
64
26
38
40.6
P<0.05
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P16蛋白的表达随NSCLC分化程度的降低而降低，有显著性差异(P<0.05)。
5.P16蛋白的表达与NSCLC患者术后生存期的关系，见表3。
64例NSCLC中有3年以上随访资料的有33例，如表3显示，P16蛋白的表达与肺癌患者术后生存期呈正相关，术后生存期长的患者中，P16蛋白阳性表达高(P<0.05)。
6.P16蛋白的表达与NSCLC淋巴结转移的关系，见表4。表3 P16蛋白表达与NSCLC患者术后
生存期的关系(例) 术后生存期
例数
P16(+)
P16(-)
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阳性率(%)
<1年
5
0
5
0
1～3年
16
5
11
32.2
>3年
12
9
, 百拇医药
3
75.4
合 计
33
14
19
42.4
P<0.05表4 P16蛋白的表达与NSCLC局部淋巴结
转移情况的关系(例) 淋巴结情况
例数
P16(+)
P16(-)
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阳性率(%)
有淋巴结转移
25
11
14
44.0
无淋巴经转移
26
9
17
34.6
合 计
51
, 百拇医药
20
31
39.2
P>0.05
64例NSCLC中，资料提示了淋巴结情况的有51例，表4提示肺癌组织P16蛋白的表达与局部淋巴结转移间无显著相关性(P>0.05)。
讨 论
P16基因于1993年由Serrano等[1]发现并被克隆成功，它编码的P16蛋白可以与CDK4/Cyclin D复合物竞争性结合，从而抑制CDK4/Cyclin D复合物的活性，阻止细胞周期从G1期向S期过渡，在正常细胞周期中起负反馈调节作用。当P16基因突变或丢失时，P16蛋白的合成发生障碍，能引起细胞生长失控，导致癌变[2，3]。
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肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，其发病率及死亡率都很高。NSCLC占全部肺癌的75%～90%。以往的研究表明，P16基因的突变和丢失在NSCLC的形成及进展中起着较重要的作用，但不是早发事件[4]。我们应用免疫组化SP方法研究了P16蛋白在人原发性NSCLC及癌旁1～2cm肺组织的表达，并分析其与临床病理相关性，结果表明：P16蛋白表达率在NSCLC中明显低于癌旁组织，且与NSCLC的分化程度呈正相关，此结论与国内同类报道相符(P<0.05)[5～7]；NSCLC各组织学类型间P16蛋白的阳性表达无显著性差异(P>0.05)；伴或不伴局部淋巴结转移的NSCLC P16蛋白的阳性表达无显著性差异(P>0.05)；在NSCLC预后方面，我们的研究显示：P16蛋白的表达率与NSCLC患者的术后生存期显著相关，术后生存3年以上的患者组肺癌组织中P16蛋白的阳性表达率明显高于1～3年和1年以下患者组，三组间有显著性差异(P<0.05)。
综上所述，本研究提示：①P16蛋白主要定位于细胞的胞浆，部分同时出现于胞核；②P16蛋白表达缺失与NSCLC的发生及细胞分化不良有关；与NSCLC患者术后生存期有关，可作为临床判断NSCLC的分化程度及预测患者预后的参考指标；③P16蛋白的表达缺失与NSCLC的组织学类型及有无局部淋巴结转移关系不明显。
, 百拇医药
参 考 文 献
1，Serrano M,Hunnon GJ,Beach DA.A how regulatory motif in cell-cycle control causing specific inhibition of Cyclin D/CDK4.Nature,1993,366:704.
2，赵温利，郭卫星，田志刚.肿瘤抑制基因P16的研究进展.国外医学肿瘤学分册，1997，24：199.
3，温桂兰，范希光，饶纬华.肿瘤抑制基因CDKN2与肺癌.中华结核与呼吸杂志，1998，21：198.
4，李伟峰，赵 彤.P16基因与肺癌.国外医学呼吸系统分册，1997，17：5.
5，战雪梅，孙崇伟，王国新，等.肺癌P16蛋白表达及临床意义.诊断病理学杂志，1998，5：89.
6，张尚福，张 声，李 羽，等.肺癌中P16蛋白表达的意义.中华肿瘤杂志，1997，19：259.
7，姜彦多，夏书月，戴晓淳，等.肺癌CDKN2基因产物表达的研究.中华结核和呼吸杂志，1996，19：81.
收稿：1999-01-12
修回：1999-08-27, http://www.100md.com