非霍奇金淋巴瘤核仁组成区检测的临床意义
作者：勇威本 孟松娘 张运涛 郑文 卫燕 朱军
单位：勇威本(北京医科大学临床肿瘤学院 北京肿瘤医院 邮政编码 100036)；孟松娘(北京医科大学临床肿瘤学院 北京肿瘤医院 邮政编码 100036)；张运涛(北京医科大学临床肿瘤学院 北京肿瘤医院 邮政编码 100036)；郑文(北京医科大学临床肿瘤学院 北京肿瘤医院 邮政编码 100036)；卫燕(北京医科大学临床肿瘤学院 北京肿瘤医院 邮政编码 100036)；朱军(北京医科大学临床肿瘤学院 北京肿瘤医院 邮政编码 100036)
关键词：非霍奇金淋巴瘤；核仁组成区
北京医学000506 【摘要】 目的 探讨应用核仁组成区嗜银蛋白(AgNOR)染色对非霍奇金淋巴瘤恶性度的分级及与良性淋巴结病变鉴别的意义。方法 应用AgNOR染色技术检测良性淋巴结病15例，非霍奇金淋巴瘤(NHL)66例。结果 AgNOR计数均值(
)和标准差(s)分别为：良性淋巴结病1.85±0.50，低度恶性NHL 2.50±0.78，中度NHL 3.95±2.07，高度NHL 5.47±2.42，T细胞NHL 4.27±2.62，B细胞NHL 4.40±2.42。AgNOR均数良性淋巴结病与低度NHL间无显著性差异(P>0.05)，但与中度和高度NHL间均有非常显著性差异(P均<0.001)；低度NHL、中度NHL及高度NHL相互间均有显著性差异(P均<0.05)；T细胞NHL与B细胞NHL间无显著性差异(P>0.05)。结论 本研究说明AgNOR检测对区分NHL恶性度，良性淋巴结病与中度和高度NHL鉴别是一项有意义的参考指标。
, http://www.100md.com
The clinical significance of nucleolar organizer region in non-Hodgkin lymphomas
Yong Weiben Meng Songniang Zang Yuntao
(The school of Oncology,Beijing Medical University Beijing Cancer
Hospital,Beijing 100036)
【Abstract】 Objective To investigate the clinical significance of nucleolar organizer region(NOR) staining in the malignant grades of non-Hodgkin lymphomas (NHL) and in differentiating NHL from benign lymphadenopathies.Methods Using a silver staining technique,NOR associated proteins were studied in smear samples of 66 NHL and 15 benign lymphadenopathies.Results The mean numbers and standard deviation of AgNOR counts are as follows:benign lymphadenopathy 1.85±0.50,low-grade and high-grade NHL (P<0.05),and also between benign lymphadenopathys and intermediate-grade as well as high-grade NHL (P<0.001).Conclusions The results indicate that AgNOR counts may help differentiate the malignant grades of NHL,and fifferenteate intermediate-grade,high-grade NHL from benign lymphadenopathys.But it can't help differentiate low-grade NHL from benign lymphadenopathy (P>0.05),neither can it differentiate T-cell NHL from B-cell NHL (P>0.05).
, 百拇医药
【Key words】 Non-Hodgkin lymphoma Nucleolar organizer region
核仁组成区(nucleolar organizer region，NOR)是细胞核仁的重要组成部分，核糖体基因盘聚于13、14、15、21和22号染色体近端着丝点的短臂次缢痕区域即为NOR。NOR参与转录核糖体RNA(rRNA)、合成蛋白质。NOR数目和形状可能反映rRNA合成水平、细胞增殖状况。银染法是显示NOR最简易的方法，通过银与NOR相关蛋白(一种相对分子质量100 000的酸性非组蛋白，定位于核仁内)的化学结合，光镜下呈现黑色颗粒。
本文应用AgNOR染色技术探讨AgNOR计数及形态分型对NHL恶性分级、T细胞与B细胞NHL分型及区分良性淋巴结病变的临床意义。
材料和方法
一、材料
, 百拇医药
采取淋巴结针吸细胞涂片或淋巴结活检组织印片，共81例。其中66例为经病理组织学诊断的NHL。本文按淋巴瘤国际工作规范病理分类，低度恶性NHL 15例，中度NHL 39例，高度NHL(参考国内成都分类将T细胞透明细胞型和多形型归入高度NHL组)12例。其中49例NHL按免疫表型(应用CD45、CD45RO、CD45RA、CD20及CD43单抗行免疫组织化学测定)确定T细胞型NHL 19例和B细胞型NHL 30例(均属中度及高度NHL)，其余17例因未行免疫表型检测不能分型。良性淋巴结病变共15例，其中淋巴结结核4例、淋巴结反应性增生6例、坏死性淋巴结炎4例、猫爪病1例。全组年龄分布11～78岁，男56例，女25例。
二、方法
制片采取淋巴结涂片及印片，采用ploton一步银染法，50% AgNO3与2%胶蛋白，按2∶1容积比制成混合液染色。油镜下观察AgNOR形状，每片随机计数200个淋巴细胞或淋巴瘤细胞。按第五届全国临床细胞学会议修改后的“上海方案”[1]进行AgNOR计数，形态分为单一型(细胞核内颗粒直径多为1～2μm，多为1个)、弥散型(细胞核浆内散在大小不一颗粒，数目可多至10～20个)、聚集型(核浆内散在大小不一颗粒，常聚集呈团块状、条状或不规则形)、核仁内型(核仁内有数量不等颗粒)、混合型(上述不同型混合存在，各占比例大致相同)。本文将弥散型、聚集型、核仁内型和混合型均归并为非单一型。
, 百拇医药
三、统计学处理
统计学计算每个细胞核的AgNOR颗粒数及各组的均数及标准差，显著性差异应用t检验。形态构型计算各组各型所占百分率。鉴于AgNOR颗粒计数较构型更准确的反映核仁组成区[1～4]，故主要应用AgNOR计数进行分析。
结 果
表1列出各组的AgNOR计数均值及标准差。表2为各组的AgNOR形态分型所占百分率的分布。结果表明良性淋巴结病变与低度NHL间AgNOR均数无显著性差异(P>0.05)，形态构型均主要表现为单一型，分别为100.0%及80.0%。良性淋巴结病与中度和高度NHL的AgNOR均值间均有非常显著性差异(P均<0.001)，形态构型中度及高度NHL不同于良性淋巴结病，主要表现为非单一型(表2)，单一型仅占33.3%及0(表2)。T细胞NHL与B细胞NHL(均属中度及高度NHL)间AgNOR均值无显著性差异(P>0.05)，但均与良性淋巴结病有非常显著性差异(P<0.001)。低度与中度NHL间，中度与高度NHL间AgNOR均值均有显著性差异。
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表1 AgNOR构型的分布 AgNOR
构型
良性淋巴结病
低度NHL
中度NHL
高度NHL
T-NHL
B-NHL
例数
%
例数
%
例数
, http://www.100md.com
%
例数
%
例数
%
例数
%
单一型
15
100.0
12
80.0
13
25.5
, 百拇医药
0
0
7
36.8
12
40.0
非单一型
0
0
3
20.0
38
74.4
12
, http://www.100md.com
100.0
12
63.2
18
59.9
表2 不同病变AgNOR均值/核的结果(
±s) 病变分组
例数
AgNOR均值/核均值±标准差
良性淋巴结病
15
1.85±0.50
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低度NHL
15
2.15±0.78
中度NHL
39
3.95±2.07
高度NHL
12
5.47±2.40
T-NHL
19
4.27±2.62
B-NHL
, 百拇医药
30
4.40±2.42
讨 论
NHL与良性淋巴结疾病的鉴别和NHL的恶性度分级对临床诊断和治疗有重要意义，是长期来亟待解决的问题。目前强调以传统的病理组织学、细胞形态学为基础，采用多指标综合分析，做出判断。Crocker等[2]最早(1987年)报告AgNOR技术用于NHL的恶性分级，此后国内、国外均有报道[1～6]。
本文结果良性淋巴结病变组与低度NHL组AgNOR计数均值间无显著性差异，形态分型主要为单一型，二组的计数和分型均有较多重叠交叉，不能用AgNOR作为二组的鉴别指标。这一结果与Crocker等[2]及国内许氏[3]、杜氏[4]的报告提示AgNOR计数对NHL与良性疾患鉴别十分有价值的结果不同。如许氏报告[1，3]淋巴结良性病变AgNOR分别为1.13±0.14，1.48±0.25，1.16±0.10，而NHL为6.58±2.37，二者有显著性差异，但文中未提及低度NHL是否与良性病变AgNOR有显著性差异。本文这一结果与Cronin等[5]及Cibull等[6]报告结果一致。如Cronin等报告AgNOR计数滤泡型淋巴瘤(属低度恶性)为3.11±0.90，而滤泡反应性增生为3.17±0.83，后者反高于前者，Cronin认为二组间有过多重叠不能用于二者的鉴别。应当说明本文限于病例数较少，尚待进一步验证。
, 百拇医药
本文结果良性淋巴结病变的AgNOR均数与中度及高度NHL均有显著性差异，低度NHL与中度、中度与高度NHL均有显著性差异，与国内外报道一致[1～4]。本文AgNOR形态构型分析表明，良性淋巴结病变及低度NHL多呈单一型，中度和高度NHL表现多为由多颗粒构成的非单一型。说明AgNOR构型可作为AgNOR计数分析的补充参考。
Hall等[7]的研究表明，NHL细胞的AgNOR均数与单抗Ki67(Ki67为增殖细胞核抗原)阳性细胞的百分率呈线性相关。Crocker等[8]应用流式细胞光度计检验AgNOR均数与S期细胞百分率密切相关，说明AgNOR数量、构型主要反映细胞的增殖状况。AgNOR检测从反映细胞增殖状况的侧面用于NHL恶性度分级，和中度、高度NHL与良性淋巴结病变鉴别是一项有意义的参考指标。这一检测方法简便，易于推广应用。
参 考 文 献
, 百拇医药
1，许良中.核仁组织区嗜银染色法(AgNOR)在肿瘤病理学上的应用.见曹世龙主编.肿瘤学新理论与新技术.第1版，上海：上海科学技术教育出版社，1997：539～567.
2，Crocker J,Nar P.Nucleolar organizer regions in lymphomas.J Pathol,1987,151:111.
3，Xu LZ,Wang LF.Nucleolar organizer regions in Aspirates of malignant lymphomas and benign disorders of the lymph nodes.Anal and Quant Cytol and Histol,1992,14:148.
4，杜 豫，许良中.非何杰金淋巴瘤核仁组成区蛋白的研究.第二军医大学学报，1995，16：63.
, http://www.100md.com
5，Cronin K,Loftus BM,Dervan PA.Are AgNOR useful in distinguishing follicular heperplasia from follicular lymphoma.J Clin Pathol,1989,42:1267.
6，Cibull ML,Heryet A,Galter K,et al.The utility of Ki67 immunostating,nuclear organizer region counting,and morphology in the assessment of follicular lymphomas.J Pathol,1989,158:189.
7，Hall PA,Crocker J,Watts A,et al.A comparison of nucleolar organiazer region staining and Ki67 immunostaining in non-Hodgkin's lymphoma.Histopathology,1987,12:373.
8，Crocker J,Macartney JC,Smith P.Correlation between DNA flow cytometric and nucleolar organizer region data in non-Hodgkin's lymphomas.J Pathol,1988,154:151.
收稿：1999-07-20
修回：1999-11-23, 百拇医药
单位：勇威本(北京医科大学临床肿瘤学院 北京肿瘤医院 邮政编码 100036)；孟松娘(北京医科大学临床肿瘤学院 北京肿瘤医院 邮政编码 100036)；张运涛(北京医科大学临床肿瘤学院 北京肿瘤医院 邮政编码 100036)；郑文(北京医科大学临床肿瘤学院 北京肿瘤医院 邮政编码 100036)；卫燕(北京医科大学临床肿瘤学院 北京肿瘤医院 邮政编码 100036)；朱军(北京医科大学临床肿瘤学院 北京肿瘤医院 邮政编码 100036)
关键词：非霍奇金淋巴瘤；核仁组成区
北京医学000506 【摘要】 目的 探讨应用核仁组成区嗜银蛋白(AgNOR)染色对非霍奇金淋巴瘤恶性度的分级及与良性淋巴结病变鉴别的意义。方法 应用AgNOR染色技术检测良性淋巴结病15例，非霍奇金淋巴瘤(NHL)66例。结果 AgNOR计数均值(
)和标准差(s)分别为：良性淋巴结病1.85±0.50，低度恶性NHL 2.50±0.78，中度NHL 3.95±2.07，高度NHL 5.47±2.42，T细胞NHL 4.27±2.62，B细胞NHL 4.40±2.42。AgNOR均数良性淋巴结病与低度NHL间无显著性差异(P>0.05)，但与中度和高度NHL间均有非常显著性差异(P均<0.001)；低度NHL、中度NHL及高度NHL相互间均有显著性差异(P均<0.05)；T细胞NHL与B细胞NHL间无显著性差异(P>0.05)。结论 本研究说明AgNOR检测对区分NHL恶性度，良性淋巴结病与中度和高度NHL鉴别是一项有意义的参考指标。, http://www.100md.com
The clinical significance of nucleolar organizer region in non-Hodgkin lymphomas
Yong Weiben Meng Songniang Zang Yuntao
(The school of Oncology,Beijing Medical University Beijing Cancer
Hospital,Beijing 100036)
【Abstract】 Objective To investigate the clinical significance of nucleolar organizer region(NOR) staining in the malignant grades of non-Hodgkin lymphomas (NHL) and in differentiating NHL from benign lymphadenopathies.Methods Using a silver staining technique,NOR associated proteins were studied in smear samples of 66 NHL and 15 benign lymphadenopathies.Results The mean numbers and standard deviation of AgNOR counts are as follows:benign lymphadenopathy 1.85±0.50,low-grade and high-grade NHL (P<0.05),and also between benign lymphadenopathys and intermediate-grade as well as high-grade NHL (P<0.001).Conclusions The results indicate that AgNOR counts may help differentiate the malignant grades of NHL,and fifferenteate intermediate-grade,high-grade NHL from benign lymphadenopathys.But it can't help differentiate low-grade NHL from benign lymphadenopathy (P>0.05),neither can it differentiate T-cell NHL from B-cell NHL (P>0.05).
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【Key words】 Non-Hodgkin lymphoma Nucleolar organizer region
核仁组成区(nucleolar organizer region，NOR)是细胞核仁的重要组成部分，核糖体基因盘聚于13、14、15、21和22号染色体近端着丝点的短臂次缢痕区域即为NOR。NOR参与转录核糖体RNA(rRNA)、合成蛋白质。NOR数目和形状可能反映rRNA合成水平、细胞增殖状况。银染法是显示NOR最简易的方法，通过银与NOR相关蛋白(一种相对分子质量100 000的酸性非组蛋白，定位于核仁内)的化学结合，光镜下呈现黑色颗粒。
本文应用AgNOR染色技术探讨AgNOR计数及形态分型对NHL恶性分级、T细胞与B细胞NHL分型及区分良性淋巴结病变的临床意义。
材料和方法
一、材料
, 百拇医药
采取淋巴结针吸细胞涂片或淋巴结活检组织印片，共81例。其中66例为经病理组织学诊断的NHL。本文按淋巴瘤国际工作规范病理分类，低度恶性NHL 15例，中度NHL 39例，高度NHL(参考国内成都分类将T细胞透明细胞型和多形型归入高度NHL组)12例。其中49例NHL按免疫表型(应用CD45、CD45RO、CD45RA、CD20及CD43单抗行免疫组织化学测定)确定T细胞型NHL 19例和B细胞型NHL 30例(均属中度及高度NHL)，其余17例因未行免疫表型检测不能分型。良性淋巴结病变共15例，其中淋巴结结核4例、淋巴结反应性增生6例、坏死性淋巴结炎4例、猫爪病1例。全组年龄分布11～78岁，男56例，女25例。
二、方法
制片采取淋巴结涂片及印片，采用ploton一步银染法，50% AgNO3与2%胶蛋白，按2∶1容积比制成混合液染色。油镜下观察AgNOR形状，每片随机计数200个淋巴细胞或淋巴瘤细胞。按第五届全国临床细胞学会议修改后的“上海方案”[1]进行AgNOR计数，形态分为单一型(细胞核内颗粒直径多为1～2μm，多为1个)、弥散型(细胞核浆内散在大小不一颗粒，数目可多至10～20个)、聚集型(核浆内散在大小不一颗粒，常聚集呈团块状、条状或不规则形)、核仁内型(核仁内有数量不等颗粒)、混合型(上述不同型混合存在，各占比例大致相同)。本文将弥散型、聚集型、核仁内型和混合型均归并为非单一型。
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三、统计学处理
统计学计算每个细胞核的AgNOR颗粒数及各组的均数及标准差，显著性差异应用t检验。形态构型计算各组各型所占百分率。鉴于AgNOR颗粒计数较构型更准确的反映核仁组成区[1～4]，故主要应用AgNOR计数进行分析。
结 果
表1列出各组的AgNOR计数均值及标准差。表2为各组的AgNOR形态分型所占百分率的分布。结果表明良性淋巴结病变与低度NHL间AgNOR均数无显著性差异(P>0.05)，形态构型均主要表现为单一型，分别为100.0%及80.0%。良性淋巴结病与中度和高度NHL的AgNOR均值间均有非常显著性差异(P均<0.001)，形态构型中度及高度NHL不同于良性淋巴结病，主要表现为非单一型(表2)，单一型仅占33.3%及0(表2)。T细胞NHL与B细胞NHL(均属中度及高度NHL)间AgNOR均值无显著性差异(P>0.05)，但均与良性淋巴结病有非常显著性差异(P<0.001)。低度与中度NHL间，中度与高度NHL间AgNOR均值均有显著性差异。
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表1 AgNOR构型的分布 AgNOR
构型
良性淋巴结病
低度NHL
中度NHL
高度NHL
T-NHL
B-NHL
例数
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例数
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例数
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单一型
15
100.0
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80.0
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25.5
, 百拇医药
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7
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12
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非单一型
0
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74.4
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100.0
12
63.2
18
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表2 不同病变AgNOR均值/核的结果(
±s) 病变分组例数
AgNOR均值/核均值±标准差
良性淋巴结病
15
1.85±0.50
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低度NHL
15
2.15±0.78
中度NHL
39
3.95±2.07
高度NHL
12
5.47±2.40
T-NHL
19
4.27±2.62
B-NHL
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4.40±2.42
讨 论
NHL与良性淋巴结疾病的鉴别和NHL的恶性度分级对临床诊断和治疗有重要意义，是长期来亟待解决的问题。目前强调以传统的病理组织学、细胞形态学为基础，采用多指标综合分析，做出判断。Crocker等[2]最早(1987年)报告AgNOR技术用于NHL的恶性分级，此后国内、国外均有报道[1～6]。
本文结果良性淋巴结病变组与低度NHL组AgNOR计数均值间无显著性差异，形态分型主要为单一型，二组的计数和分型均有较多重叠交叉，不能用AgNOR作为二组的鉴别指标。这一结果与Crocker等[2]及国内许氏[3]、杜氏[4]的报告提示AgNOR计数对NHL与良性疾患鉴别十分有价值的结果不同。如许氏报告[1，3]淋巴结良性病变AgNOR分别为1.13±0.14，1.48±0.25，1.16±0.10，而NHL为6.58±2.37，二者有显著性差异，但文中未提及低度NHL是否与良性病变AgNOR有显著性差异。本文这一结果与Cronin等[5]及Cibull等[6]报告结果一致。如Cronin等报告AgNOR计数滤泡型淋巴瘤(属低度恶性)为3.11±0.90，而滤泡反应性增生为3.17±0.83，后者反高于前者，Cronin认为二组间有过多重叠不能用于二者的鉴别。应当说明本文限于病例数较少，尚待进一步验证。
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本文结果良性淋巴结病变的AgNOR均数与中度及高度NHL均有显著性差异，低度NHL与中度、中度与高度NHL均有显著性差异，与国内外报道一致[1～4]。本文AgNOR形态构型分析表明，良性淋巴结病变及低度NHL多呈单一型，中度和高度NHL表现多为由多颗粒构成的非单一型。说明AgNOR构型可作为AgNOR计数分析的补充参考。
Hall等[7]的研究表明，NHL细胞的AgNOR均数与单抗Ki67(Ki67为增殖细胞核抗原)阳性细胞的百分率呈线性相关。Crocker等[8]应用流式细胞光度计检验AgNOR均数与S期细胞百分率密切相关，说明AgNOR数量、构型主要反映细胞的增殖状况。AgNOR检测从反映细胞增殖状况的侧面用于NHL恶性度分级，和中度、高度NHL与良性淋巴结病变鉴别是一项有意义的参考指标。这一检测方法简便，易于推广应用。
参 考 文 献
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1，许良中.核仁组织区嗜银染色法(AgNOR)在肿瘤病理学上的应用.见曹世龙主编.肿瘤学新理论与新技术.第1版，上海：上海科学技术教育出版社，1997：539～567.
2，Crocker J,Nar P.Nucleolar organizer regions in lymphomas.J Pathol,1987,151:111.
3，Xu LZ,Wang LF.Nucleolar organizer regions in Aspirates of malignant lymphomas and benign disorders of the lymph nodes.Anal and Quant Cytol and Histol,1992,14:148.
4，杜 豫，许良中.非何杰金淋巴瘤核仁组成区蛋白的研究.第二军医大学学报，1995，16：63.
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5，Cronin K,Loftus BM,Dervan PA.Are AgNOR useful in distinguishing follicular heperplasia from follicular lymphoma.J Clin Pathol,1989,42:1267.
6，Cibull ML,Heryet A,Galter K,et al.The utility of Ki67 immunostating,nuclear organizer region counting,and morphology in the assessment of follicular lymphomas.J Pathol,1989,158:189.
7，Hall PA,Crocker J,Watts A,et al.A comparison of nucleolar organiazer region staining and Ki67 immunostaining in non-Hodgkin's lymphoma.Histopathology,1987,12:373.
8，Crocker J,Macartney JC,Smith P.Correlation between DNA flow cytometric and nucleolar organizer region data in non-Hodgkin's lymphomas.J Pathol,1988,154:151.
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修回：1999-11-23, 百拇医药