山莨菪碱对LPS诱导的急性肺损伤大鼠肺组织TNFα、IL-8表达的影响
作者：郭振辉 洪新 毛宝龄 钱桂生 陈正堂
单位：郭振辉(第三军医大学附属新桥医院全军呼吸内科研究所，重庆 400037)；洪新(第三军医大学附属新桥医院全军呼吸内科研究所，重庆 400037)；毛宝龄(第三军医大学附属新桥医院全军呼吸内科研究所，重庆 400037)；钱桂生(第三军医大学附属新桥医院全军呼吸内科研究所，重庆 400037)；陈正堂(第三军医大学附属新桥医院全军呼吸内科研究所，重庆 400037)
关键词：急性肺损伤；山莨菪碱；肿瘤坏死因子α；白介素-8
第三军医大学学报000502 提 要： 目的 探讨山莨菪碱(654-2)对内毒素致伤急性肺损伤(ALI)大鼠的防治作用和可能机制。方法 观察654-2对ALI大鼠血气分析和肺组织损伤的影响，并采用原位杂交法检测肺组织TNFα、IL-8 mRNA表达和ELISA检测肺组织匀浆TNFα、IL-8含量的改变。结果 654-2干预后可减轻ALI大鼠肺组织损伤程度，减少肺组织TNFα、IL-8 mRNA表达及其肺组织匀浆含量。结论 654-2可能通过抑制TNFα、IL-8 mRNA表达，减少肺组织中TNFα、IL-8产生而对ALI发挥防治作用。
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中图法分类号： R392.11;R563.02 文献标识码： A
文章编号：1000-5404(2000)05-0410-04
Effects of anisodamine on the expression of TNFα and IL-8 in pulmonary tissue of rats with LPS-induced acute lung injury
Guo Zheng-hui, Hong Xin, Mao Bao-ling, QIAN Gui-sheng, CHEN Zheng-tang
(Institute of Respiratory Disease, Xinqiao Hospital, Third Military Medical University, Chongqing 400037,China)
, 百拇医药
Abstract： Objective To investigate the preventive and therapeutic effects of anisodamine(654-2) on LPS-induced acute lung injury (ALI) and its mechanism. Methods The change of the expression and the content of tumor necrosis factor α (TNFα),interleukin-8(IL-8) mRNA and protein in pulmonary tissue of ansodamine-treated rats with ALI were measared with in situ hybridization and ELISA. Meanwhile, the pathologic changes were examined with light microscope. Results The administration of 654-2 inhibited the expression of TNFα, IL-8 mRNA and protein, and alleviated the pulmonary tissue damage. Conclusion 654-2 has a protective effect on rats with ALI through down regulating of the expression of TNFα and IL-8.
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Key words： acute lung injury; anisodamine; tumor necrosis factor-α;interleukin-8
机体遭受严重损伤时，可诱发全身炎症反应综合征(Systemic inflammatory respones syndrome,SIRS)，进而导致多脏器功能障碍综合征(MODS)。肺是首发靶器官，表现为急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)，促炎细胞因子，如TNFα、IL-8等是SIRS触发和“级联(Cascade)”效应的关键因素[1]。抑制炎症介质的释放已成为防治ALI的重要策略[2]。山莨菪碱(654-2)应用于ALI防治已显示良好效果，但其作用机制仍有待阐明。为此，本研究拟通过制备内毒素大鼠ALI模型，观察其肺组织TNFα、IL-8 mRNA表达，肺组织匀浆TNFα、IL-8水平改变及应用654-2干预后对TNFα、IL-8的影响。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 实验动物模型与分组
健康Wistar大鼠18只，体重180～230 g，由本校实验动物中心提供，随机分为3组：①内毒素致伤组：颈静脉注射LPS 5 mg/kg；②654-2干预组：注射LPS 5 mg/kg同时注射654-2 10 mg/kg；③对照组：颈静脉注射生理盐水0.2 ml/100 g。每组6只大鼠，观察4个时期点：处理后1、2、4、6 h。
1.2 观察指标与方法
血气分析，真空热干燥法测定肺组织湿干(W/D)比值；病理观察；原位杂交法测定TNFα、IL-8 mRNA表达。TNFαcDNA、IL-8 cDNA探针采用宝灵曼的地高辛标记检测试剂盒进标记，组织取材，切片和原位杂交均参照文献[3]的方法，ELISA法测定肺组织匀浆TNFα、IL-8含量，ELISA试剂盒购自第四军医大学免疫教研室，按试剂盒说明书进行。
, 百拇医药
1.3 统计学分析
用
±s表示，采用t检验或方差分析。
2 结果
2.1 动脉氧分压和W/D比值的变化
内毒素注射4h后PaO2显著降低，而W/D则于LPS注射后2 h显著增加，654-2干预后PaO2降低和W/D升高幅度显著减少，见表1。
2.2 病理观察
LPS致伤6 h后，肺组织肿胀，表面见散在淤血，光镜下见肺间质及肺泡腔水肿，渗出，出血，粒细胞浸润，654-2干预后病理改变减轻，见图1、2。
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图1 LPS致伤6 h大鼠肺组织病理切片(HE×200)
Fig 1 Pathological changes of rat lung tissue treated
with LPS for 6 h (HE×200)
图2 LPS+654-2干预6 h大鼠肺病理切片(HE×200)
Fig 2 Pathological changes of rat lung tissue treated
with LPS and 654-2 for 6 h (HE×200)
2.3 肺组织细胞TNFα、IL-8 mRNA表达变化
, 百拇医药
LPS致伤1 h后TNFα mRNA见最强阳性信号，而IL-8 mRNA最强阳性表达则见致伤后4 h，见图3、4。654-2干预后相应时点的mRNA表达阳性信号减弱，肺组织湿干比值减少见表2。
图3 LPS致伤6 h大鼠肺组织TNF-α原位杂交照片 (HE×200)
Fig 3 In situ hybridization of TNF-α in rat lung tissue
treated with LPS for 6 h (HE×200)
图4 LPS致伤6 h大鼠肺组织IL-8原位杂交照片 (HE×200)
, http://www.100md.com
Fig 4 In situ hybridization of IL-8 in rat lung tissue
treated with LPS for 6 h (HE×200)
表1 654-2对LPS致伤ALI大鼠PaO2的影响(±s)
Tab 1 Effect of 654-2 on PaO2 in LPS inducedALI rats(±s) Group
LPS-induced
654-2 treated
, 百拇医药
Control(n=6)
11.95±1.48
12.13±0.48
1 h(n=6)
11.25±1.30
11.75±0.56
2 h(n=6)
10.77±0.78
11.40±0.75
4 h(n=6)
9.40±0.60△
, 百拇医药
11.31±0.55△*
6 h(n=6)
9.02±0.97△
9.78±0.62△*
△：P<0.05 vs control;*:P<0.05 vs LPS-induced表2 654-2对ALI大鼠肺组织W/D比值的影响(±s)
Tab 2 Effect of 654-2 on W/D in LPS induced
ALI rats(±s) Group
, 百拇医药
W/D
LPS 6 h(n=6)
4.93±0.39△△
654-2 6 h(n=6)
4.71±0.28△*
Control (n=6)
4.56±0.15
△：P<0.05, △△：P<0.01 vs control；
*：P<0.05,**：P<0.01 vs LPS-induced
2.4 肺组织匀浆TNFα、IL-8水平的变化
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LPS致伤后TNFα、IL-8水平均显著升高，分别于致伤后1、4 h达到峰值，654-2干预后显著抑制TNFα、IL-8的升高水平，见表3。
表3 654-2对ALI大鼠肺组织中TNFα、IL-8 mRNA表达的影
Tab 3 Effects of 654-2 on the expression of TNFα，IL-8 mRNA in lung tissue LPS induced ALI rats Group
TNFα mRNA
IL-8 mRNA
LPS 1 h
(
～)
, 百拇医药
±(-～±)
LPS/654-2 1 h
(+～)
-
LPS 4 h
+(-～+)(～)
LPS/654-2 4 h
±(-～±)(+～)
, 百拇医药
Control
-
-
-：Negativity；+：Low postivity；:Positivity；：Moderate positivity；：Intensive positivity表4 LPS致伤+654-2干预对肺组织匀浆TNFα、IL-8
水平的影响(ρB/ng.ml-1，±s)
Tab 4 Effect of 654-2 on TNFα,IL-8 level in lung tissue of
with LPS induced ALI rats (ρB/ng.ml-1，±s)
, 百拇医药
TNFα
IL-8
LPS
654-2 treatment
LPS
654-2 treatment
Control
39.8±31.5
176.9±11.1
1 h
1784.6±190.8△△
1370.9±175.2△△★★
, 百拇医药
349.0±157.3△△
222.2±13.2△△★★
2 h
1604.4±167.6△△
995.6±250.7△△★★
1505.3±95.5△△
907.1±151.8△△★★
8 h
538.7±119.4△△
, 百拇医药 376.7±48.5△△★
841.7±187.7△△
600.7±154.6△△★★
△△：P<0.01 vs control；
★：P<0.05,★★：P<0.01 vs LPS-treatment
3 讨论
G-菌感染在临床感染中占有重要地位，内毒素是其主要毒性物质。LPS可引起ALI，本实验中，静注LPS后出现PaO2显著降低，W/D显著增多，肺组织病理可见间质、肺泡水肿、渗出、出血，粒细胞浸润，说明LPS致伤(5 mg/kg)可致肺组织急性损伤，LPS致伤同时应用654-2干预后，显著改善ALI大鼠的动脉氧分压和减少肺组织湿干比值，病理观察也发现其减轻肺组织的病理反应和炎症损伤。这与既往有关654-2对ALI的防治作用结果相符。
, 百拇医药
有研究表明[4，5]：TNFα主要来源于LPS刺激的单核、巨噬细胞等，在各种原因所致的ALI过程中，TNFα主要通过下列途径发挥作用。①诱导其它细胞因子，如IL-1β，IL-6，IL-8等前炎细胞因子产生和释放，造成机体损伤的同时，因可通过再激活炎症效应细胞，释放更多的炎性因子，使炎症信号进一步放大和加强，产生“级联放大”作用；②直接损伤肺血管内皮细胞和肺泡Ⅱ型上皮；③与其它细胞因子相互作用引起肺组织损伤；④激活补体和凝血系统，促进炎症在肺组织中的扩散。本实验的结果显示，大鼠注射LPS后，肺组织TNFα mRNA表达和肺组织匀浆TNFα水平显著升高。TNFα mRNA主要表达于肺泡巨噬细胞，PMN也见表达。于LPS致伤后1 h，表达阳性信号最强；肺组织匀浆TNFα峰值出现于伤后1～2 h ，与文献报道的TNFα出现峰值时间为90 min的结果基本一致。上述结果说明：一方面，同一致伤因素TNFα mRNA表达先于其蛋白合成：另一方面，LPS静注直接产生内毒素血症，通过肺循环，LPS直接刺激肺组织中炎症效应细胞产生TNFα，显示肺组织匀浆TNFα水平与同致伤因素的血清TNFα水平的动态变化相类似。
, 百拇医药
另有研究发现[6～8]：IL-8主要由受LPS或其它细胞因子作用的单核细胞，巨噬细胞和血管内皮细胞介导产生。IL-8的主要靶细胞是PMN，它通过影响粒细胞的生物活性而参与ALI的发生和发展：诱导PMN趋化进入组织间隙和炎症区域；对PMN强烈趋化同时激活PMN，促进其脱颗粒，产生氧自由基，蛋白酶等介质，直接损伤肺组织细胞；增加PMN对内皮细胞层的穿透力和血管内皮层的通透性，促进PMN跨膜运动和在肺组织的“扣押”。本实验的结果显示：大鼠注射LPS后，肺组织IL-8 mRNA表达及匀浆IL-8水平显著升高，IL-8 mRNA主要表达于肺泡巨噬细胞和PMN，尚见于血管内皮细胞，LPS致伤后2 h始见阳性信号，LPS致伤后4 h阳性信号最强；同时，肺组织匀浆IL-8水平达峰值，在同一因素作用下，IL-8 mRNA表达先于其蛋白表达，符合IL-8表达与转录的时间顺序，与此同时，同一致伤因素，从TNFα IL-8表达及其水平的动态变化中，可以发现TNFα mRNA表达及其蛋白水平峰值出现时间均早于IL-8，提示TNFα产生后可能进一步刺激效应细胞表达和释放IL-8。
, 百拇医药
654-2具有M受体的拮抗作用，通过解痉，改善微循环而广泛用于抗休克和平滑肌解痉治疗；进一步研究发现，654-2具有拮抗钙内流和抗氧化作用，抑制细胞钙超载和生物膜的脂质过氧化，对组织细胞起保护作用，同时，654-2可抑制休克因子(或炎症介质)，如前列腺素，白三烯等产生，因而654-2用于抗休克的同时，也用于各种原因所致的包括ALI在内的MODS防治并取得良好疗效[9]。已知TNFα、IL-8等在炎症细胞因子在诱导ALI中起重要作用。654-2是通过上述固有作用还是其它机制发挥其ALI的防治效果是目前研究的重点。本实验中，654-2可显著抑制LPS致伤时ALI肺组织TNFα mRNA、IL-8 mRNA的表达，降低其肺组织匀浆中的水平。上述结果表明，654-2通过抑制前细胞因子TNFα、IL-8表达而发挥其抗炎效应，达到减轻肺组织的炎症反应和炎症损伤的作用。
基金项目：国家自然科学基金重点资助项目(39730210)
作者简介：郭振辉(1962-)，男，福建省晋江市人，博士，主治医师，主要从事急性肺损伤、慢性阻塞性肺病方面的研究，发表论文10篇，现在广州军区总医院呼吸内科，广州 510010。电话：(020)86662205-53555
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参考文献：
[1] American college of chest physicians/society of critical care medicine consensus conference: definitions for sepsis and organ failure and guidelines for the use of innovative therapies in sepsis[J]. Crit Care Med,1992,20(6):864-874.
[2] Sessler C N. Bloomfield G L, Fowler A A. Current concepts of sepsis acute lung injury[J]. Clin Chest Med,1996,17(2):213-235.
[3] 蔡文琴，王伯氵 云 主编.应用免疫细胞化学与核酸分子杂交技术[M].成都：四川科学技术出版社，1994.403-427.
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[4] Aggarwal B B, Konr W J, Hass P E, et al. Human TNF: production, purification and characterization[J]. J Biol Chem,1985,260(4):2 345-2 354.
[5] Allen J N, Herzyk D J. Allen E D, et al. Human whole blood interleukin-1 β production: kinetics, cell source,and comparison with TNF-α[J]. J Lab Clin Med,1992,119(5):534-546.
[6] Akahoshi T, Endo H, Kondo H, et al. Essential involvement of interleukin-8 in neutrophil recruitment in rabbits with acute experi-mental arthritis induced by lipopolysaccharide and interleukin-1[J]. Lymphokine Cytokine Res,1994,13(2):113-116.
, 百拇医药
[7] Baggiolini M, Dewald B, Moser B. Interleukin-8 and related chemotactic cytokines-CXC and CC chemokines[J]. Adv Immunol,1994,55:97-179.
[8] Goodman R B, Strieter R M, Martin D P, et al. Inflammatory cytokines in patients with persistence of the ARDS[J]. Am J Respir Crit Care Med,1996,154(3 pt 1):602-611.
[9] 诏兆新，李培英，王炫英，等.山羊四毒素休克诱发脂质过氧化作用及654-2对其影响的研究[J].畜牧兽医学报，1998，29(2)：179-185.
收稿日期：1999-09-15；修回日期：1999-12-22, http://www.100md.com
单位：郭振辉(第三军医大学附属新桥医院全军呼吸内科研究所，重庆 400037)；洪新(第三军医大学附属新桥医院全军呼吸内科研究所，重庆 400037)；毛宝龄(第三军医大学附属新桥医院全军呼吸内科研究所，重庆 400037)；钱桂生(第三军医大学附属新桥医院全军呼吸内科研究所，重庆 400037)；陈正堂(第三军医大学附属新桥医院全军呼吸内科研究所，重庆 400037)
关键词：急性肺损伤；山莨菪碱；肿瘤坏死因子α；白介素-8
第三军医大学学报000502 提 要： 目的 探讨山莨菪碱(654-2)对内毒素致伤急性肺损伤(ALI)大鼠的防治作用和可能机制。方法 观察654-2对ALI大鼠血气分析和肺组织损伤的影响，并采用原位杂交法检测肺组织TNFα、IL-8 mRNA表达和ELISA检测肺组织匀浆TNFα、IL-8含量的改变。结果 654-2干预后可减轻ALI大鼠肺组织损伤程度，减少肺组织TNFα、IL-8 mRNA表达及其肺组织匀浆含量。结论 654-2可能通过抑制TNFα、IL-8 mRNA表达，减少肺组织中TNFα、IL-8产生而对ALI发挥防治作用。
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中图法分类号： R392.11;R563.02 文献标识码： A
文章编号：1000-5404(2000)05-0410-04
Effects of anisodamine on the expression of TNFα and IL-8 in pulmonary tissue of rats with LPS-induced acute lung injury
Guo Zheng-hui, Hong Xin, Mao Bao-ling, QIAN Gui-sheng, CHEN Zheng-tang
(Institute of Respiratory Disease, Xinqiao Hospital, Third Military Medical University, Chongqing 400037,China)
, 百拇医药
Abstract： Objective To investigate the preventive and therapeutic effects of anisodamine(654-2) on LPS-induced acute lung injury (ALI) and its mechanism. Methods The change of the expression and the content of tumor necrosis factor α (TNFα),interleukin-8(IL-8) mRNA and protein in pulmonary tissue of ansodamine-treated rats with ALI were measared with in situ hybridization and ELISA. Meanwhile, the pathologic changes were examined with light microscope. Results The administration of 654-2 inhibited the expression of TNFα, IL-8 mRNA and protein, and alleviated the pulmonary tissue damage. Conclusion 654-2 has a protective effect on rats with ALI through down regulating of the expression of TNFα and IL-8.
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Key words： acute lung injury; anisodamine; tumor necrosis factor-α;interleukin-8
机体遭受严重损伤时，可诱发全身炎症反应综合征(Systemic inflammatory respones syndrome,SIRS)，进而导致多脏器功能障碍综合征(MODS)。肺是首发靶器官，表现为急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)，促炎细胞因子，如TNFα、IL-8等是SIRS触发和“级联(Cascade)”效应的关键因素[1]。抑制炎症介质的释放已成为防治ALI的重要策略[2]。山莨菪碱(654-2)应用于ALI防治已显示良好效果，但其作用机制仍有待阐明。为此，本研究拟通过制备内毒素大鼠ALI模型，观察其肺组织TNFα、IL-8 mRNA表达，肺组织匀浆TNFα、IL-8水平改变及应用654-2干预后对TNFα、IL-8的影响。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 实验动物模型与分组
健康Wistar大鼠18只，体重180～230 g，由本校实验动物中心提供，随机分为3组：①内毒素致伤组：颈静脉注射LPS 5 mg/kg；②654-2干预组：注射LPS 5 mg/kg同时注射654-2 10 mg/kg；③对照组：颈静脉注射生理盐水0.2 ml/100 g。每组6只大鼠，观察4个时期点：处理后1、2、4、6 h。
1.2 观察指标与方法
血气分析，真空热干燥法测定肺组织湿干(W/D)比值；病理观察；原位杂交法测定TNFα、IL-8 mRNA表达。TNFαcDNA、IL-8 cDNA探针采用宝灵曼的地高辛标记检测试剂盒进标记，组织取材，切片和原位杂交均参照文献[3]的方法，ELISA法测定肺组织匀浆TNFα、IL-8含量，ELISA试剂盒购自第四军医大学免疫教研室，按试剂盒说明书进行。
, 百拇医药
1.3 统计学分析
用
±s表示，采用t检验或方差分析。2 结果
2.1 动脉氧分压和W/D比值的变化
内毒素注射4h后PaO2显著降低，而W/D则于LPS注射后2 h显著增加，654-2干预后PaO2降低和W/D升高幅度显著减少，见表1。
2.2 病理观察
LPS致伤6 h后，肺组织肿胀，表面见散在淤血，光镜下见肺间质及肺泡腔水肿，渗出，出血，粒细胞浸润，654-2干预后病理改变减轻，见图1、2。
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图1 LPS致伤6 h大鼠肺组织病理切片(HE×200)
Fig 1 Pathological changes of rat lung tissue treated
with LPS for 6 h (HE×200)
图2 LPS+654-2干预6 h大鼠肺病理切片(HE×200)
Fig 2 Pathological changes of rat lung tissue treated
with LPS and 654-2 for 6 h (HE×200)
2.3 肺组织细胞TNFα、IL-8 mRNA表达变化
, 百拇医药
LPS致伤1 h后TNFα mRNA见最强阳性信号，而IL-8 mRNA最强阳性表达则见致伤后4 h，见图3、4。654-2干预后相应时点的mRNA表达阳性信号减弱，肺组织湿干比值减少见表2。
图3 LPS致伤6 h大鼠肺组织TNF-α原位杂交照片 (HE×200)
Fig 3 In situ hybridization of TNF-α in rat lung tissue
treated with LPS for 6 h (HE×200)
图4 LPS致伤6 h大鼠肺组织IL-8原位杂交照片 (HE×200)
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Fig 4 In situ hybridization of IL-8 in rat lung tissue
treated with LPS for 6 h (HE×200)
表1 654-2对LPS致伤ALI大鼠PaO2的影响(
±s)Tab 1 Effect of 654-2 on PaO2 in LPS inducedALI rats(
±s) GroupLPS-induced
654-2 treated
, 百拇医药
Control(n=6)
11.95±1.48
12.13±0.48
1 h(n=6)
11.25±1.30
11.75±0.56
2 h(n=6)
10.77±0.78
11.40±0.75
4 h(n=6)
9.40±0.60△
, 百拇医药
11.31±0.55△*
6 h(n=6)
9.02±0.97△
9.78±0.62△*
△：P<0.05 vs control;*:P<0.05 vs LPS-induced表2 654-2对ALI大鼠肺组织W/D比值的影响(
±s)Tab 2 Effect of 654-2 on W/D in LPS induced
ALI rats(
±s) Group, 百拇医药
W/D
LPS 6 h(n=6)
4.93±0.39△△
654-2 6 h(n=6)
4.71±0.28△*
Control (n=6)
4.56±0.15
△：P<0.05, △△：P<0.01 vs control；
*：P<0.05,**：P<0.01 vs LPS-induced
2.4 肺组织匀浆TNFα、IL-8水平的变化
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LPS致伤后TNFα、IL-8水平均显著升高，分别于致伤后1、4 h达到峰值，654-2干预后显著抑制TNFα、IL-8的升高水平，见表3。
表3 654-2对ALI大鼠肺组织中TNFα、IL-8 mRNA表达的影
Tab 3 Effects of 654-2 on the expression of TNFα，IL-8 mRNA in lung tissue LPS induced ALI rats Group
TNFα mRNA
IL-8 mRNA
LPS 1 h
(～), 百拇医药
±(-～±)
LPS/654-2 1 h
(+～)-
LPS 4 h
+(-～+)
(～)LPS/654-2 4 h
±(-～±)
(+～), 百拇医药
Control
-
-
-：Negativity；+：Low postivity；:Positivity；：Moderate positivity；：Intensive positivity表4 LPS致伤+654-2干预对肺组织匀浆TNFα、IL-8
水平的影响(ρB/ng.ml-1，
±s)Tab 4 Effect of 654-2 on TNFα,IL-8 level in lung tissue of
with LPS induced ALI rats (ρB/ng.ml-1，
±s), 百拇医药
TNFα
IL-8
LPS
654-2 treatment
LPS
654-2 treatment
Control
39.8±31.5
176.9±11.1
1 h
1784.6±190.8△△
1370.9±175.2△△★★
, 百拇医药
349.0±157.3△△
222.2±13.2△△★★
2 h
1604.4±167.6△△
995.6±250.7△△★★
1505.3±95.5△△
907.1±151.8△△★★
8 h
538.7±119.4△△
, 百拇医药 376.7±48.5△△★
841.7±187.7△△
600.7±154.6△△★★
△△：P<0.01 vs control；
★：P<0.05,★★：P<0.01 vs LPS-treatment
3 讨论
G-菌感染在临床感染中占有重要地位，内毒素是其主要毒性物质。LPS可引起ALI，本实验中，静注LPS后出现PaO2显著降低，W/D显著增多，肺组织病理可见间质、肺泡水肿、渗出、出血，粒细胞浸润，说明LPS致伤(5 mg/kg)可致肺组织急性损伤，LPS致伤同时应用654-2干预后，显著改善ALI大鼠的动脉氧分压和减少肺组织湿干比值，病理观察也发现其减轻肺组织的病理反应和炎症损伤。这与既往有关654-2对ALI的防治作用结果相符。
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有研究表明[4，5]：TNFα主要来源于LPS刺激的单核、巨噬细胞等，在各种原因所致的ALI过程中，TNFα主要通过下列途径发挥作用。①诱导其它细胞因子，如IL-1β，IL-6，IL-8等前炎细胞因子产生和释放，造成机体损伤的同时，因可通过再激活炎症效应细胞，释放更多的炎性因子，使炎症信号进一步放大和加强，产生“级联放大”作用；②直接损伤肺血管内皮细胞和肺泡Ⅱ型上皮；③与其它细胞因子相互作用引起肺组织损伤；④激活补体和凝血系统，促进炎症在肺组织中的扩散。本实验的结果显示，大鼠注射LPS后，肺组织TNFα mRNA表达和肺组织匀浆TNFα水平显著升高。TNFα mRNA主要表达于肺泡巨噬细胞，PMN也见表达。于LPS致伤后1 h，表达阳性信号最强；肺组织匀浆TNFα峰值出现于伤后1～2 h ，与文献报道的TNFα出现峰值时间为90 min的结果基本一致。上述结果说明：一方面，同一致伤因素TNFα mRNA表达先于其蛋白合成：另一方面，LPS静注直接产生内毒素血症，通过肺循环，LPS直接刺激肺组织中炎症效应细胞产生TNFα，显示肺组织匀浆TNFα水平与同致伤因素的血清TNFα水平的动态变化相类似。
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另有研究发现[6～8]：IL-8主要由受LPS或其它细胞因子作用的单核细胞，巨噬细胞和血管内皮细胞介导产生。IL-8的主要靶细胞是PMN，它通过影响粒细胞的生物活性而参与ALI的发生和发展：诱导PMN趋化进入组织间隙和炎症区域；对PMN强烈趋化同时激活PMN，促进其脱颗粒，产生氧自由基，蛋白酶等介质，直接损伤肺组织细胞；增加PMN对内皮细胞层的穿透力和血管内皮层的通透性，促进PMN跨膜运动和在肺组织的“扣押”。本实验的结果显示：大鼠注射LPS后，肺组织IL-8 mRNA表达及匀浆IL-8水平显著升高，IL-8 mRNA主要表达于肺泡巨噬细胞和PMN，尚见于血管内皮细胞，LPS致伤后2 h始见阳性信号，LPS致伤后4 h阳性信号最强；同时，肺组织匀浆IL-8水平达峰值，在同一因素作用下，IL-8 mRNA表达先于其蛋白表达，符合IL-8表达与转录的时间顺序，与此同时，同一致伤因素，从TNFα IL-8表达及其水平的动态变化中，可以发现TNFα mRNA表达及其蛋白水平峰值出现时间均早于IL-8，提示TNFα产生后可能进一步刺激效应细胞表达和释放IL-8。
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654-2具有M受体的拮抗作用，通过解痉，改善微循环而广泛用于抗休克和平滑肌解痉治疗；进一步研究发现，654-2具有拮抗钙内流和抗氧化作用，抑制细胞钙超载和生物膜的脂质过氧化，对组织细胞起保护作用，同时，654-2可抑制休克因子(或炎症介质)，如前列腺素，白三烯等产生，因而654-2用于抗休克的同时，也用于各种原因所致的包括ALI在内的MODS防治并取得良好疗效[9]。已知TNFα、IL-8等在炎症细胞因子在诱导ALI中起重要作用。654-2是通过上述固有作用还是其它机制发挥其ALI的防治效果是目前研究的重点。本实验中，654-2可显著抑制LPS致伤时ALI肺组织TNFα mRNA、IL-8 mRNA的表达，降低其肺组织匀浆中的水平。上述结果表明，654-2通过抑制前细胞因子TNFα、IL-8表达而发挥其抗炎效应，达到减轻肺组织的炎症反应和炎症损伤的作用。
基金项目：国家自然科学基金重点资助项目(39730210)
作者简介：郭振辉(1962-)，男，福建省晋江市人，博士，主治医师，主要从事急性肺损伤、慢性阻塞性肺病方面的研究，发表论文10篇，现在广州军区总医院呼吸内科，广州 510010。电话：(020)86662205-53555
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收稿日期：1999-09-15；修回日期：1999-12-22, http://www.100md.com