淋巴液抗大鼠失血性休克机理的研究
作者：王德宝 马建伟 邱丽颖 陈彦静 吕莉 张杰
单位：王德宝 马建伟 邱丽颖 陈彦静 吕莉(张家口医学院生理学教研室 张家口 075029)；张杰(张家口医学院科研处)
关键词：淋巴；生理学；休克,出血性；心肌收缩；生理学；动作电位；钙通道
河北医科大学学报000501
摘 要 目的 研究淋巴液抗失血性休克的机理。方法 观察淋巴液对失血性休克大鼠心脏收缩功能和心室肌细胞动作电位的影响。结果 淋巴液使失血性休克大鼠的平均动脉压、左心室收缩压和左心室内压最大上升速率具有显著回升作用；使心室肌细胞动作电位的50%复极化时间(APD50)和90%复极化时间显著延长，APD50的延长作用可被Ca2+通道阻断剂阻断。结论 淋巴液抗失血性休克机理可能与淋巴液促进心肌细胞Ca2+内流，增加失血性休克大鼠心脏的收缩能力有关。
, 百拇医药
中图号 R 364.1
STUDY ON MECHANISM UNDERLYING THE LYMPH PROTECTS RATS FROM HEMORRHAGIC SHOCK
Wang Debao Zhang Jie Lu Li Ma Jianwei Qiu Liying Chen Yanjin
(Department of physiology Zhangjiakou Medical College Zhangjiakou 075029)
ABSTRACT Objective To study of mechanism of Lymph on antagonism hemorrhagic shock.Methods The effect of lymph on myocardial contractility and action potential of ventricular muscles was studied.Results Lymph significantly raise up the mean arterial pressure and left ventricular systolic pressure and the maximum change rate of the left ventricular pressure(LV+dp/dt max) during hemorrhagic shock.Lymph could prolonged action potential duration at 50% and 90% repolarization,this effect could be blocked by verapamil.Conclusion These findings indicate that mechanism of lymph on hemorrhagic shock rat were belived to increase Ca2+ inflow and improve myocardial contractility.
, 百拇医药
MeSH lymph/physiology;shock,hemorrhagic;myocardial contraction/physiology;action potentials;calcium channels
有研究资料表明，淋巴液对失血性休克大鼠有较明显的升压作用[1]，但其升压机理仍需进一步论证。本实验拟通过观察淋巴液对失血性休克大鼠心脏收缩功能和心室肌细胞动作电位(action potential,AP)的影响,探讨其抗失血性休克的机理。
1 材 料 与 方 法
1.1 淋巴液对心肌收缩功能的影响:Wistar大鼠20只，雌雄不拘，体质量200～300 g，随机分成淋巴液实验组(n=10)和生理盐水对照组(n=10)。常规麻醉固定，由右颈总动脉插管入左心室，观测左心室收缩压(left ventricular systolic pressure,LVSP)，左颈总动脉插管观测平均动脉压(mean arterial pressure,MAP)，分离一侧股动脉备放血用，分离另一侧股静脉备注入淋巴液或生理盐水用。淋巴液为引流肝素化麻醉犬的肠淋巴液。用日产RM-6000八导生理记录仪同步描记大鼠的Ⅱ导心电图、MAP、LVSP、左心室舒张末期压(left ventricular end diastolic pressure,LVEDP)和左心室内压最大上升速率(LV+dp/dt max)。股动脉放血(放血量为全血量的1/3～2/3)，维持血压40 mmHg，稳定20 min后，实验组经股静脉注入1∶1生理盐水稀释的肠淋巴液(注入量为失血量1/5)，对照组注入同等量的生理盐水。记录10、20、30 min时的各项指标。
, 百拇医药
1.2 淋巴液对心室肌细胞动作电位的影响:Wistar大鼠14只,击头致死，迅速取出心脏，常规方法制备左心室流出道部位肌肉标本后，固定在微电极浴槽内，用氧饱和的改良Locke液恒温恒速灌流。用玻璃微电极引导心室肌细胞AP，示波器观察，稳定30 min后，微机实时采样记录AP，对其0期去极化幅度(action potential amplitude,APA)、0期去极化速度(slope of phase 0 depolarization,SP0D)、50 %复极化时间(APD50)、90 %复极化时间(APD90)及静息电位(rest potential,RP)进行分析作为对照。肠淋巴液组(n=8):记录对照心室肌细胞AP后，将制备好的肠淋巴液用改良的Locke液稀释5倍后，恒速恒温灌流标本，分别记录1、3、5、7 min时AP。异搏定+淋巴液组(n=6)：先以钙通道阻断剂异搏定(10-5mol/L)灌流标本，作用显著后，再用肠淋巴液灌流，记录同上。
, 百拇医药
以上实验数据,以均数±标准差(
±s)表示，给药前后各组数据行配对t检验。
2 结 果
2.1 淋巴液对失血性大鼠心脏收缩功能影响:大鼠失血性休克后，给因素前淋巴液实验组和生理盐水对照组的MAP、LVSP、LVEDP、LV+dp/dt max各项指标无显著差异。给因素后，淋巴液组MAP、LVSP二项指标均明显高于生理盐水组(P<0.01);LV+dp/dt max高于生理盐水组(P<0.05)，而LVEDP二组间无显著性差异,见表1。
2.2 淋巴液对大鼠心室肌细胞AP的影响:在8例大鼠心室肌标本中,淋巴液可使APD50、APD90显著延长，对RP、APA和SP0D无明显影响,见表2。
, http://www.100md.com
2.3 阻断钙离子通道后，淋巴液对大鼠心室肌细胞AP的影响:在6例先以异搏定阻断心室肌钙通道，使APD50和APD90明显缩短后，再用淋巴液灌流标本，APD50在各观察时间均无明显延长，APD90在1、3 min时未见明显延长，5 min时明显延长,见表3。
表1 淋巴液和0.9%NaCl对失血性休克大鼠MAP、LVSP、LVEDP和LV+dp/dt max的影响
Table 1 The effect of lymph and 0.9 % NaCl on MAP、LVSP、LVEDP and LV+dp/dt max of hemorrhagic shock rat
MAP(mmHg)
LVSP(mmHg)
, 百拇医药
LVEDP(mmHg)
LV+dp/dt max(mmHg)
Ly
NS
Ly
NS
Ly
NS
Ly
NS
Control
42.01±1.10
41.25±1.46
, 百拇医药
49.47±2.57
48.96±2.23
-15.00±1.05
-13.50±1.34
1423.54±307.29
1423.53±323.16
10 min
58.61±1.41*
50.55±2.31
66.02±3.74*
56.80±3.71
, 百拇医药
-18.00±1.49
-13.00±1.49
2987.44±309.17* *
2508.80±321.06* *
20 min
54.57±2.69*
43.51±2.25
63.71±4.07*
50.01±3.91
-14.00±1.34
, http://www.100md.com
-13.50±1.41
2446.09±340.98* *
1884.74±349.70
30 min
54.14±2.38*
40.07±2.27
60.18±2.96*
46.55±2.65
-
-
2303.76±310.60
, 百拇医药
1704.29±321.06
Ly:lymph NS:0.9% NaCl * P<0.01 **P<0.05表2 肠淋巴液对大鼠心肌细胞动作电位的影响
Table 2 The effect of lymph on AP of ventricular muscles of rat
RP(mv)
APA(mv)
SP0D(v.s-1)
APD90(ms)
APD50(ms)
, 百拇医药
Control
57.26±4.89
84.94±8.08
89.54±9.03
108.63±12.18
53.50±6.18
Lymph 1 min
62.09±9.69
81.51±9.01
84.12±1.34
115.50±11.98*
, 百拇医药
59.63±8.67
3 min
58.73±6.93
82.67±9.90
78.97±11.42
124.00±11.85*
61.91±7.84*
5 min
55.71±7.94
82.01±6.23
75.69±9.50
, 百拇医药
127.75±12.23**
64.00±6.51
7 min
55.80±7.71
83.09±8.10
80.40±13.03
124.36±11.70*
61.63±8.63
* P<0.05 ** P<0.01表3 阻断钙通道后淋巴液对大鼠心肌细胞动作电位
APD90、APD50的影响
, 百拇医药
Table 3 The effect of lymph on APD90 and APD50 of
ventricular muscles of rat after administration of verapamil
APD90(ms)
APD50(ms)
Control
112.67±7.6
50.33±2.83
Verapamil 3min
, http://www.100md.com 93.03±7.80*
39.67±5.78*
Lymph+verapamil 1 min
88.33±12.33
36.67±7.00
3 min
98.03±9.85
38.33±8.08
5 min
109.03±7.84*
39.72±8.03
, http://www.100md.com
* P<0.053 讨 论 与 结 论
有研究表明，淋巴液对失血性休克大鼠血压的升高有明显的促进作用，并证明淋巴液的升压作用与注入淋巴液恢复一定的血容量无关[1]。因此，淋巴液对失血性休克大鼠的升压作用，只能从影响血压的两个主要方面，心脏和血管来解释。
失血性休克对心脏功能的影响，国内外均有许多报道[2,3]。本实验也观察到，大鼠失血性休克后，其MAP、LVSP、LVEDP和LV+dp/dt max都有明显改变,说明失血性休克后，大鼠心脏的收缩和舒张功能均受到抑制。在我们实验中，对失血性休克大鼠实验组和对照组分别给予淋巴液和生理盐水后，淋巴液组的MAP、LVSP、LV+dp/dt max增幅均明显高于对照组。由于我们以前的工作证明了淋巴液对血压的影响不是通过补充一定血容量和血浆胶体渗透压改变的结果。因此，淋巴液使失血性休克大鼠MAP、LVSP增加，尤其使LV+dp/dt max 增加，考虑可能是淋巴液可增强失血性大鼠心脏的收缩功能，使心输出量增加，改善其低输出状态，从而起到抗失血性休克的作用。
, http://www.100md.com
本实验也表明，淋巴液可使大鼠心室肌细胞AP的APD50、APD90显著延长，而对SP0D、RP等无明显影响。说明淋巴液主要影响心肌细胞的复极2、3期，使APD延长。实验中用钙通道阻断剂异搏定后，可阻断其使APD50延长的作用，提示淋巴液使APD延长的作用主要是通过增加心室肌细胞复极2期Ca2+内流实现的。而Ca2+内流的增加，可能与淋巴液增加心肌细胞ATP与磷酸肌酸含量，改善心肌细胞的能量供应有关[4]。从影响心肌收缩特性的因素分析[5]，心肌细胞兴奋时，Ca2+内流增加，直接导致细胞内Ca2+浓度增高，从而促进心肌收缩能力提高。这也与我们的结果一致。至于异搏定不能阻断淋巴液使APD90延长的作用，则可能与淋巴液影响K+外流等因素有关。
综上所述，淋巴液抗失血性休克的机理可能是，淋巴液直接作用于心脏，促进心肌细胞兴奋时Ca2+内流，从而增强心脏的收缩功能，使心输出量增多而起到抗失血性休克作用。
, 百拇医药
至于淋巴液抗失血性休克是否与其对血管功能的影响有关，仍需进一步研究。
国家自然科学基金资助项目(No.39370297)
参考文献
1，张静,刘艳凯，姜华.肠淋巴液对大鼠血压的影响.生理学报，1997,49(4):433
2，Siegel HW,Downing SE.Reduction of left Ventricuilar contractility during acute hemorrhagic shock.Am J Physiol,1970,218(3):772
3，Alyono D,Ring WS,Chao RYN,et al.Characteristics of ventricular function in severe hemorrhagic shock.Surgery,1983,94(2):250
4，Baldwin AL,Ferrer Pozum TS,Gore RW.Regulation of water balance befween blood lymph in the frog rana pipiens.Lymhyology,1993,26(2):4
5，张镜如主编.生理学.第四版.北京:人民卫生出版社,1996.93-94
收稿日期：1999-10-18, http://www.100md.com
单位：王德宝 马建伟 邱丽颖 陈彦静 吕莉(张家口医学院生理学教研室 张家口 075029)；张杰(张家口医学院科研处)
关键词：淋巴；生理学；休克,出血性；心肌收缩；生理学；动作电位；钙通道
河北医科大学学报000501
摘 要 目的 研究淋巴液抗失血性休克的机理。方法 观察淋巴液对失血性休克大鼠心脏收缩功能和心室肌细胞动作电位的影响。结果 淋巴液使失血性休克大鼠的平均动脉压、左心室收缩压和左心室内压最大上升速率具有显著回升作用；使心室肌细胞动作电位的50%复极化时间(APD50)和90%复极化时间显著延长，APD50的延长作用可被Ca2+通道阻断剂阻断。结论 淋巴液抗失血性休克机理可能与淋巴液促进心肌细胞Ca2+内流，增加失血性休克大鼠心脏的收缩能力有关。
, 百拇医药
中图号 R 364.1
STUDY ON MECHANISM UNDERLYING THE LYMPH PROTECTS RATS FROM HEMORRHAGIC SHOCK
Wang Debao Zhang Jie Lu Li Ma Jianwei Qiu Liying Chen Yanjin
(Department of physiology Zhangjiakou Medical College Zhangjiakou 075029)
ABSTRACT Objective To study of mechanism of Lymph on antagonism hemorrhagic shock.Methods The effect of lymph on myocardial contractility and action potential of ventricular muscles was studied.Results Lymph significantly raise up the mean arterial pressure and left ventricular systolic pressure and the maximum change rate of the left ventricular pressure(LV+dp/dt max) during hemorrhagic shock.Lymph could prolonged action potential duration at 50% and 90% repolarization,this effect could be blocked by verapamil.Conclusion These findings indicate that mechanism of lymph on hemorrhagic shock rat were belived to increase Ca2+ inflow and improve myocardial contractility.
, 百拇医药
MeSH lymph/physiology;shock,hemorrhagic;myocardial contraction/physiology;action potentials;calcium channels
有研究资料表明，淋巴液对失血性休克大鼠有较明显的升压作用[1]，但其升压机理仍需进一步论证。本实验拟通过观察淋巴液对失血性休克大鼠心脏收缩功能和心室肌细胞动作电位(action potential,AP)的影响,探讨其抗失血性休克的机理。
1 材 料 与 方 法
1.1 淋巴液对心肌收缩功能的影响:Wistar大鼠20只，雌雄不拘，体质量200～300 g，随机分成淋巴液实验组(n=10)和生理盐水对照组(n=10)。常规麻醉固定，由右颈总动脉插管入左心室，观测左心室收缩压(left ventricular systolic pressure,LVSP)，左颈总动脉插管观测平均动脉压(mean arterial pressure,MAP)，分离一侧股动脉备放血用，分离另一侧股静脉备注入淋巴液或生理盐水用。淋巴液为引流肝素化麻醉犬的肠淋巴液。用日产RM-6000八导生理记录仪同步描记大鼠的Ⅱ导心电图、MAP、LVSP、左心室舒张末期压(left ventricular end diastolic pressure,LVEDP)和左心室内压最大上升速率(LV+dp/dt max)。股动脉放血(放血量为全血量的1/3～2/3)，维持血压40 mmHg，稳定20 min后，实验组经股静脉注入1∶1生理盐水稀释的肠淋巴液(注入量为失血量1/5)，对照组注入同等量的生理盐水。记录10、20、30 min时的各项指标。
, 百拇医药
1.2 淋巴液对心室肌细胞动作电位的影响:Wistar大鼠14只,击头致死，迅速取出心脏，常规方法制备左心室流出道部位肌肉标本后，固定在微电极浴槽内，用氧饱和的改良Locke液恒温恒速灌流。用玻璃微电极引导心室肌细胞AP，示波器观察，稳定30 min后，微机实时采样记录AP，对其0期去极化幅度(action potential amplitude,APA)、0期去极化速度(slope of phase 0 depolarization,SP0D)、50 %复极化时间(APD50)、90 %复极化时间(APD90)及静息电位(rest potential,RP)进行分析作为对照。肠淋巴液组(n=8):记录对照心室肌细胞AP后，将制备好的肠淋巴液用改良的Locke液稀释5倍后，恒速恒温灌流标本，分别记录1、3、5、7 min时AP。异搏定+淋巴液组(n=6)：先以钙通道阻断剂异搏定(10-5mol/L)灌流标本，作用显著后，再用肠淋巴液灌流，记录同上。
, 百拇医药
以上实验数据,以均数±标准差(
±s)表示，给药前后各组数据行配对t检验。2 结 果
2.1 淋巴液对失血性大鼠心脏收缩功能影响:大鼠失血性休克后，给因素前淋巴液实验组和生理盐水对照组的MAP、LVSP、LVEDP、LV+dp/dt max各项指标无显著差异。给因素后，淋巴液组MAP、LVSP二项指标均明显高于生理盐水组(P<0.01);LV+dp/dt max高于生理盐水组(P<0.05)，而LVEDP二组间无显著性差异,见表1。
2.2 淋巴液对大鼠心室肌细胞AP的影响:在8例大鼠心室肌标本中,淋巴液可使APD50、APD90显著延长，对RP、APA和SP0D无明显影响,见表2。
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2.3 阻断钙离子通道后，淋巴液对大鼠心室肌细胞AP的影响:在6例先以异搏定阻断心室肌钙通道，使APD50和APD90明显缩短后，再用淋巴液灌流标本，APD50在各观察时间均无明显延长，APD90在1、3 min时未见明显延长，5 min时明显延长,见表3。
表1 淋巴液和0.9%NaCl对失血性休克大鼠MAP、LVSP、LVEDP和LV+dp/dt max的影响
Table 1 The effect of lymph and 0.9 % NaCl on MAP、LVSP、LVEDP and LV+dp/dt max of hemorrhagic shock rat
MAP(mmHg)
LVSP(mmHg)
, 百拇医药
LVEDP(mmHg)
LV+dp/dt max(mmHg)
Ly
NS
Ly
NS
Ly
NS
Ly
NS
Control
42.01±1.10
41.25±1.46
, 百拇医药
49.47±2.57
48.96±2.23
-15.00±1.05
-13.50±1.34
1423.54±307.29
1423.53±323.16
10 min
58.61±1.41*
50.55±2.31
66.02±3.74*
56.80±3.71
, 百拇医药
-18.00±1.49
-13.00±1.49
2987.44±309.17* *
2508.80±321.06* *
20 min
54.57±2.69*
43.51±2.25
63.71±4.07*
50.01±3.91
-14.00±1.34
, http://www.100md.com
-13.50±1.41
2446.09±340.98* *
1884.74±349.70
30 min
54.14±2.38*
40.07±2.27
60.18±2.96*
46.55±2.65
-
-
2303.76±310.60
, 百拇医药
1704.29±321.06
Ly:lymph NS:0.9% NaCl * P<0.01 **P<0.05表2 肠淋巴液对大鼠心肌细胞动作电位的影响
Table 2 The effect of lymph on AP of ventricular muscles of rat
RP(mv)
APA(mv)
SP0D(v.s-1)
APD90(ms)
APD50(ms)
, 百拇医药
Control
57.26±4.89
84.94±8.08
89.54±9.03
108.63±12.18
53.50±6.18
Lymph 1 min
62.09±9.69
81.51±9.01
84.12±1.34
115.50±11.98*
, 百拇医药
59.63±8.67
3 min
58.73±6.93
82.67±9.90
78.97±11.42
124.00±11.85*
61.91±7.84*
5 min
55.71±7.94
82.01±6.23
75.69±9.50
, 百拇医药
127.75±12.23**
64.00±6.51
7 min
55.80±7.71
83.09±8.10
80.40±13.03
124.36±11.70*
61.63±8.63
* P<0.05 ** P<0.01表3 阻断钙通道后淋巴液对大鼠心肌细胞动作电位
APD90、APD50的影响
, 百拇医药
Table 3 The effect of lymph on APD90 and APD50 of
ventricular muscles of rat after administration of verapamil
APD90(ms)
APD50(ms)
Control
112.67±7.6
50.33±2.83
Verapamil 3min
, http://www.100md.com 93.03±7.80*
39.67±5.78*
Lymph+verapamil 1 min
88.33±12.33
36.67±7.00
3 min
98.03±9.85
38.33±8.08
5 min
109.03±7.84*
39.72±8.03
, http://www.100md.com
* P<0.053 讨 论 与 结 论
有研究表明，淋巴液对失血性休克大鼠血压的升高有明显的促进作用，并证明淋巴液的升压作用与注入淋巴液恢复一定的血容量无关[1]。因此，淋巴液对失血性休克大鼠的升压作用，只能从影响血压的两个主要方面，心脏和血管来解释。
失血性休克对心脏功能的影响，国内外均有许多报道[2,3]。本实验也观察到，大鼠失血性休克后，其MAP、LVSP、LVEDP和LV+dp/dt max都有明显改变,说明失血性休克后，大鼠心脏的收缩和舒张功能均受到抑制。在我们实验中，对失血性休克大鼠实验组和对照组分别给予淋巴液和生理盐水后，淋巴液组的MAP、LVSP、LV+dp/dt max增幅均明显高于对照组。由于我们以前的工作证明了淋巴液对血压的影响不是通过补充一定血容量和血浆胶体渗透压改变的结果。因此，淋巴液使失血性休克大鼠MAP、LVSP增加，尤其使LV+dp/dt max 增加，考虑可能是淋巴液可增强失血性大鼠心脏的收缩功能，使心输出量增加，改善其低输出状态，从而起到抗失血性休克的作用。
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本实验也表明，淋巴液可使大鼠心室肌细胞AP的APD50、APD90显著延长，而对SP0D、RP等无明显影响。说明淋巴液主要影响心肌细胞的复极2、3期，使APD延长。实验中用钙通道阻断剂异搏定后，可阻断其使APD50延长的作用，提示淋巴液使APD延长的作用主要是通过增加心室肌细胞复极2期Ca2+内流实现的。而Ca2+内流的增加，可能与淋巴液增加心肌细胞ATP与磷酸肌酸含量，改善心肌细胞的能量供应有关[4]。从影响心肌收缩特性的因素分析[5]，心肌细胞兴奋时，Ca2+内流增加，直接导致细胞内Ca2+浓度增高，从而促进心肌收缩能力提高。这也与我们的结果一致。至于异搏定不能阻断淋巴液使APD90延长的作用，则可能与淋巴液影响K+外流等因素有关。
综上所述，淋巴液抗失血性休克的机理可能是，淋巴液直接作用于心脏，促进心肌细胞兴奋时Ca2+内流，从而增强心脏的收缩功能，使心输出量增多而起到抗失血性休克作用。
, 百拇医药
至于淋巴液抗失血性休克是否与其对血管功能的影响有关，仍需进一步研究。
国家自然科学基金资助项目(No.39370297)
参考文献
1，张静,刘艳凯，姜华.肠淋巴液对大鼠血压的影响.生理学报，1997,49(4):433
2，Siegel HW,Downing SE.Reduction of left Ventricuilar contractility during acute hemorrhagic shock.Am J Physiol,1970,218(3):772
3，Alyono D,Ring WS,Chao RYN,et al.Characteristics of ventricular function in severe hemorrhagic shock.Surgery,1983,94(2):250
4，Baldwin AL,Ferrer Pozum TS,Gore RW.Regulation of water balance befween blood lymph in the frog rana pipiens.Lymhyology,1993,26(2):4
5，张镜如主编.生理学.第四版.北京:人民卫生出版社,1996.93-94
收稿日期：1999-10-18, http://www.100md.com