nm23，p53，PCNA的表达与鼻咽癌转移预后的关系
作者：吴又明 储兵
单位：吴又明(广东省中山市陈星海医院病理科 528415)；储兵(广东省中山市人民医院病理科 528400)
关键词：鼻咽肿瘤；基因表达；免疫组织化学
广东医学000520 【摘要】 目的 探讨nm23，p53，PCNA的表达与鼻咽癌转移预后的关系。方法 应用免疫组织化学S-P法检测52例鼻咽癌标本中nm23，p53，PCNA在鼻咽癌中的表达。结果 nm23，p53，PCNA在鼻咽癌中的阳性率分别为83%(43/52)，13%(7/52)及63%(33/52)。nm23低表达与PCNA的高表达和淋巴结转移有关(P<0.05，P<0.005)，PCNA与患者5 a生存率有关(P<0.01)，p53阳性的患者PCNA均为阳性。结论 nm23低表达和PCNA高表达具有促进鼻咽癌转移的作用，PCNA可作为患者预后的一个指标，p53的表达与鼻咽癌预后无密切关系。
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我们应用免疫组织化学方法，研究鼻咽癌组织中nm23、p53、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达，并探讨它们的表达与鼻咽癌淋巴结转移及预后的关系。现报道如下。
1 资料与方法
1.1 材料 收集本院和中山市人民医院1985～1994年确诊的原发性鼻咽癌病例，筛选出临床、病理、随访资料完整的52例，全部病例取活检前未作过放疗和化疗，标本经福尔马林固定，石蜡包埋，连续切片4 μm厚，HE染色。
1.2 方法 S-P免疫组织化学染色。抗nm23抗体、抗p53抗体(Do-7)，抗PCNA抗体(pc-10)及S-P试剂盒均购自福州迈新生物技术开发公司。严格按说明书进行操作，DAB显色。用已知阳性标本作阳性对照，PBS代替一抗作阴性对照。
1.3 结果判断 染色阳性信号呈棕黄色，根据阳性细胞数量及显色强弱分为阴性(-)：p53和nm23阳性细胞<5个，PCNA阳性细胞<肿瘤细胞的15%，着色较弱；阳性(+)：p53和nm23阳性细胞>5个，PCNA阳性细胞>肿瘤细胞的15%；强阳性(+ +)：nm23阳性细胞>肿瘤细胞的30%，我们称之为高表达组，其他称为低表达组即nm23(-)及(+)，统计分析采用χ2检验。
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2 结果
2.1 nm23,p53,PCNA在鼻咽癌中的表达 nm23的表达主要位于胞浆内，胞膜及胞核内可见少量弱阳性表达，其在鼻咽癌中的表达见表1。淋巴结转移者中nm23强阳性表达(+ +)，显著低于无淋巴结转移组(χ2＝4.29，P<0.05)。PCNA的表达位于细胞核中，胞浆及胞膜中无表达，在鼻咽癌中表达见表1。生存期大于5 a组其PCNA阳性率显著高于生存期小于5 a组(χ2＝7.86，P<0.01)。在淋巴结有转移组中PCNA阳性率明显高于无淋巴结转移组(χ2＝125.39，P<0.005)。p53的表达位于细胞核内，胞浆及胞膜未见着色，在鼻咽癌中表达见表1。
2.2 鼻咽癌中p53与nm23，PCNA的关系 见表2。
表1 nm23，p53，PCNA在鼻咽癌中的表达 例 生物学
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指标
n
nm23
p53
PCNA
-
+
+ +
阳性率(%)
-
+
阳性率(%)
-
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阳性率(%)
组织学类型
低分化鳞癌
37
6
11
20
84
30
7
19
15
22
, 百拇医药
59
未分化癌
15
3
3
9
80
15
0
0
4
11
73
淋巴结转移
, 百拇医药
阳性组
42
9
13
20
79
35
7
17
10
32
76
阴性组
10
, 百拇医药
0
1
9*
100
10
0
0
9
1
10**
生存期
≥5 a
27
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6
7
14
78
24
3
11
5
22
81
<5 a
25
3
7
, 百拇医药
15
88
21
4
16
14
11
44
肿瘤分期
1～2期
24
5
6
13
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79
23
1
4
7
17
71
3～4期
28
4
8
16
86
22
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6
21
12
16
57
与阳性组比较*P<0.05，**P<0.005；与≥5 a组比较△P<0.01表2 鼻咽癌中p53与nm23，PCNA表达的关系 例 p53
n
nm23
PCNA
-
+
+ +
, 百拇医药
阳性率(%)
-
+
阳性率(%)
-
45
7
11
27
84
19
26
58
+
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7
2
3
2
71
0
7
100
3 讨论
抗转移癌基因nm23是美国国立癌症研究所于1988年在鼠黑色素细胞株中分离出来的，nm23基因的蛋白产物是NDPK，它为正常组织发育所必需，如果nm23蛋白失活或者减少，将导致一种有利于畸形分化和肿瘤转移的紊乱状态[1]。本组实验结果显示，nm23低表达与鼻咽癌淋巴结转移有关，说明nm23低表达减弱了抑制肿瘤转移的能力。故可将检测nm23的表达作为预测鼻咽癌转移情况的一项较好指标。
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p53基因定位于人17号染色体的短臂17 pl 3.1，其产物位于细胞核内，是一种由393个氨基酸组成的蛋白质，相对分子质量约50 000，具有与双链或单链DNA结合的能力，正常的p53蛋白在细胞中易水解，
为20 min左右，突变的p53蛋白为2～12 h，正常的p53基因是一种抑癌基因，而它的突变型是一种癌基因，可引起癌瘤[1]。我们采用S-P法检测52例鼻咽癌的p53蛋白表达，7例阳性，阳性表达率为13%。文献上对p53报道不尽相同，许良中等[2]报道用免疫组织化学方法检测鼻咽癌的p53蛋白阳性率为8.6%；李智等[3]报道用免疫组织化学LSAB法检测鼻咽癌的p53的过表达率为76.3%(29/38)。由于鼻咽癌组织中p53基因只有10%的突变率[4]，故可认为引起这些差别的原因，除个体差异，所用抗体，标本处理方法和免疫组化学方法敏感度不同等因素有关外，表达率非常高的方法，除可检测到突变型的p53外，野生型的p53一同被检测到而成为阳性。在本组病例中无淋巴结转移组病例中无一例p53阳性，表明p53具有促进肿瘤细胞转移的作用。p53阳性全部出现于低分化鳞癌中，这可能说明低分化鳞癌中p53的突变比率高于未分化癌。
, 百拇医药
PCNA的合成和表达与细胞增殖有关，G1期在细胞核中表达增加，S期达到高峰，G2/M期减少[5]。PCNA阳性的细胞对放射线敏感，患者预后好[6]。本组结果显示，鼻咽癌中PCNA的表达与预后有关，PCNA阳性的鼻咽癌比PCNA阴性的鼻咽癌生存期更长，PCNA也与淋巴结转移有关，它具有促进淋巴结转移的作用。还有，p53阳性的病例PCNA均为阳性，表明突变型p53抑制细胞增殖的能力减弱，S期细胞增多，细胞呈活跃增殖状态。鼻咽癌1～2期与3～4期和nm23，p53及PCNA的表达无明显相关性。
参考文献
1，纪小龙，施作霖.诊断免疫组织化学.北京：军事医学科学出版社，1997.36～44
2，许良中，张有望，朱伟萍，等.鼻咽癌的癌基因与抗癌基因蛋白表达的研究.上海医科大学学报，1997，24(4)：247
, 百拇医药
3，李 智，宗永生.鼻咽癌组织中bcl-2, bax和p53的表达及其与瘤细胞凋亡的关系.临床与实验病理学杂志，1999，15(2)：127
4，Spruck CH, Tsai YC, Huang DP, et al. Absence of p53 gene mutations in primary nasopharyngeal carcinoma. Carcer Res, 1992, 52(17):4787
5，Penney NS, Boaert M, Serfing V, et al. PCNA expression in cutaneaus. Am J Pathol, 1992,141:139
6，同济医科大学病理学教研室，中山医科大学病理学教研室.外科病理学.第2版.武汉：湖北科学技术出版社，1999.353
收稿日期：1999-09-20, http://www.100md.com
单位：吴又明(广东省中山市陈星海医院病理科 528415)；储兵(广东省中山市人民医院病理科 528400)
关键词：鼻咽肿瘤；基因表达；免疫组织化学
广东医学000520 【摘要】 目的 探讨nm23，p53，PCNA的表达与鼻咽癌转移预后的关系。方法 应用免疫组织化学S-P法检测52例鼻咽癌标本中nm23，p53，PCNA在鼻咽癌中的表达。结果 nm23，p53，PCNA在鼻咽癌中的阳性率分别为83%(43/52)，13%(7/52)及63%(33/52)。nm23低表达与PCNA的高表达和淋巴结转移有关(P<0.05，P<0.005)，PCNA与患者5 a生存率有关(P<0.01)，p53阳性的患者PCNA均为阳性。结论 nm23低表达和PCNA高表达具有促进鼻咽癌转移的作用，PCNA可作为患者预后的一个指标，p53的表达与鼻咽癌预后无密切关系。
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我们应用免疫组织化学方法，研究鼻咽癌组织中nm23、p53、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达，并探讨它们的表达与鼻咽癌淋巴结转移及预后的关系。现报道如下。
1 资料与方法
1.1 材料 收集本院和中山市人民医院1985～1994年确诊的原发性鼻咽癌病例，筛选出临床、病理、随访资料完整的52例，全部病例取活检前未作过放疗和化疗，标本经福尔马林固定，石蜡包埋，连续切片4 μm厚，HE染色。
1.2 方法 S-P免疫组织化学染色。抗nm23抗体、抗p53抗体(Do-7)，抗PCNA抗体(pc-10)及S-P试剂盒均购自福州迈新生物技术开发公司。严格按说明书进行操作，DAB显色。用已知阳性标本作阳性对照，PBS代替一抗作阴性对照。
1.3 结果判断 染色阳性信号呈棕黄色，根据阳性细胞数量及显色强弱分为阴性(-)：p53和nm23阳性细胞<5个，PCNA阳性细胞<肿瘤细胞的15%，着色较弱；阳性(+)：p53和nm23阳性细胞>5个，PCNA阳性细胞>肿瘤细胞的15%；强阳性(+ +)：nm23阳性细胞>肿瘤细胞的30%，我们称之为高表达组，其他称为低表达组即nm23(-)及(+)，统计分析采用χ2检验。
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2 结果
2.1 nm23,p53,PCNA在鼻咽癌中的表达 nm23的表达主要位于胞浆内，胞膜及胞核内可见少量弱阳性表达，其在鼻咽癌中的表达见表1。淋巴结转移者中nm23强阳性表达(+ +)，显著低于无淋巴结转移组(χ2＝4.29，P<0.05)。PCNA的表达位于细胞核中，胞浆及胞膜中无表达，在鼻咽癌中表达见表1。生存期大于5 a组其PCNA阳性率显著高于生存期小于5 a组(χ2＝7.86，P<0.01)。在淋巴结有转移组中PCNA阳性率明显高于无淋巴结转移组(χ2＝125.39，P<0.005)。p53的表达位于细胞核内，胞浆及胞膜未见着色，在鼻咽癌中表达见表1。
2.2 鼻咽癌中p53与nm23，PCNA的关系 见表2。
表1 nm23，p53，PCNA在鼻咽癌中的表达 例 生物学
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指标
n
nm23
p53
PCNA
-
+
+ +
阳性率(%)
-
+
阳性率(%)
-
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阳性率(%)
组织学类型
低分化鳞癌
37
6
11
20
84
30
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19
15
22
, 百拇医药
59
未分化癌
15
3
3
9
80
15
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0
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11
73
淋巴结转移
, 百拇医药
阳性组
42
9
13
20
79
35
7
17
10
32
76
阴性组
10
, 百拇医药
0
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9*
100
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生存期
≥5 a
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6
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<5 a
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15
88
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肿瘤分期
1～2期
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28
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与阳性组比较*P<0.05，**P<0.005；与≥5 a组比较△P<0.01表2 鼻咽癌中p53与nm23，PCNA表达的关系 例 p53
n
nm23
PCNA
-
+
+ +
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阳性率(%)
-
+
阳性率(%)
-
45
7
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27
84
19
26
58
+
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7
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100
3 讨论
抗转移癌基因nm23是美国国立癌症研究所于1988年在鼠黑色素细胞株中分离出来的，nm23基因的蛋白产物是NDPK，它为正常组织发育所必需，如果nm23蛋白失活或者减少，将导致一种有利于畸形分化和肿瘤转移的紊乱状态[1]。本组实验结果显示，nm23低表达与鼻咽癌淋巴结转移有关，说明nm23低表达减弱了抑制肿瘤转移的能力。故可将检测nm23的表达作为预测鼻咽癌转移情况的一项较好指标。
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p53基因定位于人17号染色体的短臂17 pl 3.1，其产物位于细胞核内，是一种由393个氨基酸组成的蛋白质，相对分子质量约50 000，具有与双链或单链DNA结合的能力，正常的p53蛋白在细胞中易水解，
为20 min左右，突变的p53蛋白为2～12 h，正常的p53基因是一种抑癌基因，而它的突变型是一种癌基因，可引起癌瘤[1]。我们采用S-P法检测52例鼻咽癌的p53蛋白表达，7例阳性，阳性表达率为13%。文献上对p53报道不尽相同，许良中等[2]报道用免疫组织化学方法检测鼻咽癌的p53蛋白阳性率为8.6%；李智等[3]报道用免疫组织化学LSAB法检测鼻咽癌的p53的过表达率为76.3%(29/38)。由于鼻咽癌组织中p53基因只有10%的突变率[4]，故可认为引起这些差别的原因，除个体差异，所用抗体，标本处理方法和免疫组化学方法敏感度不同等因素有关外，表达率非常高的方法，除可检测到突变型的p53外，野生型的p53一同被检测到而成为阳性。在本组病例中无淋巴结转移组病例中无一例p53阳性，表明p53具有促进肿瘤细胞转移的作用。p53阳性全部出现于低分化鳞癌中，这可能说明低分化鳞癌中p53的突变比率高于未分化癌。, 百拇医药
PCNA的合成和表达与细胞增殖有关，G1期在细胞核中表达增加，S期达到高峰，G2/M期减少[5]。PCNA阳性的细胞对放射线敏感，患者预后好[6]。本组结果显示，鼻咽癌中PCNA的表达与预后有关，PCNA阳性的鼻咽癌比PCNA阴性的鼻咽癌生存期更长，PCNA也与淋巴结转移有关，它具有促进淋巴结转移的作用。还有，p53阳性的病例PCNA均为阳性，表明突变型p53抑制细胞增殖的能力减弱，S期细胞增多，细胞呈活跃增殖状态。鼻咽癌1～2期与3～4期和nm23，p53及PCNA的表达无明显相关性。
参考文献
1，纪小龙，施作霖.诊断免疫组织化学.北京：军事医学科学出版社，1997.36～44
2，许良中，张有望，朱伟萍，等.鼻咽癌的癌基因与抗癌基因蛋白表达的研究.上海医科大学学报，1997，24(4)：247
, 百拇医药
3，李 智，宗永生.鼻咽癌组织中bcl-2, bax和p53的表达及其与瘤细胞凋亡的关系.临床与实验病理学杂志，1999，15(2)：127
4，Spruck CH, Tsai YC, Huang DP, et al. Absence of p53 gene mutations in primary nasopharyngeal carcinoma. Carcer Res, 1992, 52(17):4787
5，Penney NS, Boaert M, Serfing V, et al. PCNA expression in cutaneaus. Am J Pathol, 1992,141:139
6，同济医科大学病理学教研室，中山医科大学病理学教研室.外科病理学.第2版.武汉：湖北科学技术出版社，1999.353
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