系统性红斑狼疮患者外周血淋巴细胞表型分析
作者：蔡小燕 许艳丽 钟志敏 郑学毅 毛平
单位：蔡小燕(广东省广州市第一人民医院 风湿内科)；许艳丽(血液内科)；钟志敏(检验科 10180)；郑学毅(广东省广州市第一人民医院 风湿内科)；毛平(血液内科)
关键词：红斑狼疮，系统性；T细胞亚群；NK细胞；流式细胞术
广东医学000515 【摘要】 目的 了解T淋巴细胞亚群、B细胞及自然杀伤细胞(NK细胞)在活动期SLE患者中的改变，探讨这些免疫细胞在SLE发病机理中的作用。方法 采用微量全血直接双标记免疫荧光染色和流式细胞仪，对38例活动期SLE患者及20例正常人的外周血淋巴细胞表型进行检测。结果 38例活动期SLE患者CD+4细胞和CD+4/CD+8比值降低(P<0.01)，CD+3细胞、CD+8细胞与正常对照组比较无统计学差异(P>0.05)，CD+19细胞(B细胞)升高(P<0.001)，而CD+16CD+56细胞(NK细胞)明显降低(P<0.001)。结论 SLE患者存在免疫功能紊乱。T淋巴细胞亚群的改变和NK细胞活性降低，导致B细胞功能亢进，产生多种自身抗体，在SLE的发病机理中起重要作用。
, 百拇医药
Phenotypic analysis of peripheral blood lymphocytes in patients with systemic lupus erythematosus
Cai Xiaoyan Xu Yanli Zhong Zhiming et al
(First Municipal People's Hospital of Guangzhou, Guangzhou 510180)
【Abstract】 Objective To investigate the significance of changes in T lymphocyte subsets, B cells and natural killer cells (NK cells) of peripheral blood in patients with systemic lupus erythematosus (SLE). Methods Phenotypic analysis of peripherial blood lymphocytes was conducted in 38 cases of active SLE and 20 healthy controls by using doublestaining immunofluoresence and flow cytometry. Results Decrease in CD+4 cells and CD+4/CD+8 was observed in SLE patients (P<0.01). No statistically significant differences were shown between two groups in CD+3 cells and CD+8 cells (P>0.05). CD+16CD+56 cells (NK cells) significantly decreased and CD+19 cells(B cells) significantly increased in SLE patients, as comparing with the control group (P<0.001). Conclusion Immunologic disorder is present in the peripheral blood of SLE patients. The changes of peripheral T lymphocyte subsets and decrease of NK cells, which lead to proliferation of B cells, may play an important role in the development of SLE.
, 百拇医药
【Key words】 Lupus erythematosus, systemic T lymphocyte subsets NK cells Flow cytometry
系统性红斑狼疮(SLE)是一种自身免疫性疾病，存在免疫功能的紊乱，但其发病机理及机体内免疫调节细胞的具体变化尚未完全明确。我们通过流式细胞仪对38例SLE患者和20例正常人的外周血淋巴细胞表型进行检测，了解T细胞亚群、B细胞及自然杀伤细胞(NK细胞)在活动期SLE的改变，从而探讨免疫细胞在SLE发病机理中的作用。
1 资料与方法
1.1 检测对象 SLE患者38例，均为我院住院及门诊患者，诊断符合美国ARA 1982年修订SLE分类标准[1]。女36例，男2例；年龄15～59岁，平均31岁。病程1个月至19 a，平均2.3 a。根据欧洲狼疮活动性指标积分评分[2]，都处于疾病的活动期。其中初发病21例，复发17例。合并狼疮性肾炎23例，合并神经精神性狼疮6例。选择20名性别、年龄相匹配之健康人作为正常对照组。
, 百拇医药
1.2 研究方法 采用微量全血直接双标记免疫荧光染色及流式细胞仪检测。所有受检者在清晨空腹抽取抗凝血1 ml，取标本100 μl分别加入CD3，CD4，CD8，CD19及CD16CD56荧光标记单抗(美国Coulter公司产品)20 μl，室温孵育20 min，加溶血素2 ml，摇匀后室温避光放置10 min，1 500 r/min离心5 min，弃上清液，用PBS洗涤2次，加体积分数为1%的甲醛0.5 ml，置流式细胞仪(美国BD公司Facs vantage型号)进行分析，每个样品收集104个细胞。
1.3 统计学处理 采用t检验。
2 结果
38例SLE患者CD+4细胞和CD+4/CD+8比值降低；CD+3和CD+8细胞与正常对照组比较无统计学差异；CD+19细胞(B细胞)升高；而CD+16CD+56细胞(NK细胞)明显减少。具体数值见表1。
, 百拇医药
表1 SLE患者外周血淋巴细胞免疫表型
±s
例数
CD+3(%)
CD+4(%)
CD+8(%)
CD+4/CD+8
CD+19(%)
CD+16CD+56(%)
, http://www.100md.com
SLE患者组
38
59.01±10.76
28.19±7.50
27.36±7.07
1.11±0.34
17.78±6.85
7.11±3.69
正常对照组
20
60.1±9.99
33.74±4.55
, 百拇医药
23.66±4.15
1.49±0.26
6.32±2.08
28.38±11.16
P值
>0.05
<0.01
>0.05
<0.01
<0.001
<0.001
3 讨论
, 百拇医药
正常免疫应答过程有赖于各种免疫细胞，特别是各T细胞亚群之间的相互协作和相互制约。若某一T细胞亚群的数量和功能发生异常，机体就出现免疫紊乱，并发生一系列病理变化。SLE是一种自身免疫性疾病，存在免疫调节功能紊乱。国内外对SLE患者T细胞亚群的研究有很多，但结果都不太一致。过去多数报道[3]在SLE活动期，辅助/诱导T细胞(CD+4细胞)升高，抑制/杀伤T细胞(CD+8细胞)下降，CD+4/CD+8比值升高，认为SLE的发病与上述T细胞亚群的改变有关，尤其是CD+8下降引起B细胞多克隆激活及体液免疫异常。但近年的研究[4，5]却发现SLE活动期CD+8细胞变化不大，或者反而升高。本组资料的结果也显示：活动期SLE患者的CD+8细胞与正常对照组比较无差异(P>0.05)，CD+4细胞减少(P<0.01)，CD+4/CD+8比值降低(P<0.01)，CD+19细胞(B细胞)明显升高(P<0.001)，与近年的报道一致。有进一步的研究发现，CD+8细胞亚群具有明显的异质性，活动性SLE患者的CD+8细胞几乎全部被反抑制性T细胞(CD+8VV+)取代，不能显示抑制功能，因而阻断了CD+8细胞对CD+4细胞的抑制作用[5]。另一方面，CD+4细胞减少，主要是CD+4亚群中的抑制诱导T细胞(CD+42H+4)降低，不能诱导CD+8细胞对B细胞产生抑制作用[6]。这就解释了活动期SLE患者中，CD+4细胞降低，CD+8细胞正常或升高时，仍然表现出免疫亢进，B细胞增殖并产生大量自身抗体的矛盾现象。
, 百拇医药
本组资料的结果还显示，活动期的SLE患者的NK细胞(CD+16CD+56细胞)活性较正常对照组明显降低(P<0.001)。NK细胞具有多种功能，它不仅是自然防御细胞，而且是体内多种细胞，尤其是T，B淋巴细胞的免疫调节细胞，在机体正常的免疫、防御机制中起重要作用。在生理情况下，NK细胞对抗体的产生具有双相调节作用。SLE活动期，NK细胞活性明显降低，对自身抗体产生的抑制作用减弱，多种自身抗体产生，导致多脏器受损。Erkeller-Yuksel等[7]和Stoh等[8]的研究也发现活动期SLE患者NK细胞活性降低，在SLE伴肾脏受累的患者中下降更为明显，治疗后NK细胞活性有所升高，提示NK细胞的变化可以直接地反映机体的免疫失衡状态。
可见，T细胞亚群、B细胞及NK细胞的改变在SLE的发病中起很大作用。检测SLE患者外周血淋巴细胞表型，对全面地了解机体的免疫状态，正确判断病情和指导临床治疗有重要意义。
, http://www.100md.com
参考文献
1，Tam EM, Cohen AS, Fries JF, et al. The 1982 revised criteria for the classification of systemic lupus erythematosus (SLE). Arthritis Rheum, 1982, 25:1271
2，Vitali C, Bencivelli W, Isenberg DA, et al. Disease activity in systemic lupus erythematosus: report of consensus study group of the European workshop for rheumatology research. Ⅱ. Identification of the variables indicative of disease activity and their use in the development of an activity score. Clin Exp Rheumatol, 1992, 10:541
, 百拇医药
3，Raziuddin S, Nur MA, Al-Wabel AA. Increased circulating HLA-DR+CD+4 T cells in systemic lupus erythematosus: alterations associated with prednisolone therapy. Scand J Immunol, 1990, 31(2): 139
4，Maeda N, Sekigawa I, Iida N, et al. Relationship between CD+4/CD+8 T cell ratio and T cell activation in systemic lupus erythematosus. Scand J Rheumatol, 1999, 28(3): 166
, 百拇医药
5，张冬春，王林军，马安伦，等. SLE中的反抑制细胞与rδTCR阳性T细胞. 风湿病学杂志，1997， 2(4)： 1
6，蒋，明，孙华瑜， 朱立平，等. 系统性红斑狼疮患者外周血中的T+42H+4细胞的研究.中华内科杂志，1991， 30(7)：426
7，Erkeller-Yuksel FM, Lydyard PM, Isenberg DA. Lack of NK cells in lupus patients with renal involvement. Lupus, 1997, 6(9): 708
8，Stoh W, Elliott JE, Hamilton AS, et al. Impaired recovery and cytolytic function of CD+56 T and non-T cells in systemic lupus erythematosus following in vitro polyclonal T cell stimulation. Studies in unselected patients and monozygotic disense-discordant twins. Arthritis Rheum, 1996, 39(11): 1840
收稿日期：1999-11-08, 百拇医药
单位：蔡小燕(广东省广州市第一人民医院 风湿内科)；许艳丽(血液内科)；钟志敏(检验科 10180)；郑学毅(广东省广州市第一人民医院 风湿内科)；毛平(血液内科)
关键词：红斑狼疮，系统性；T细胞亚群；NK细胞；流式细胞术
广东医学000515 【摘要】 目的 了解T淋巴细胞亚群、B细胞及自然杀伤细胞(NK细胞)在活动期SLE患者中的改变，探讨这些免疫细胞在SLE发病机理中的作用。方法 采用微量全血直接双标记免疫荧光染色和流式细胞仪，对38例活动期SLE患者及20例正常人的外周血淋巴细胞表型进行检测。结果 38例活动期SLE患者CD+4细胞和CD+4/CD+8比值降低(P<0.01)，CD+3细胞、CD+8细胞与正常对照组比较无统计学差异(P>0.05)，CD+19细胞(B细胞)升高(P<0.001)，而CD+16CD+56细胞(NK细胞)明显降低(P<0.001)。结论 SLE患者存在免疫功能紊乱。T淋巴细胞亚群的改变和NK细胞活性降低，导致B细胞功能亢进，产生多种自身抗体，在SLE的发病机理中起重要作用。
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Phenotypic analysis of peripheral blood lymphocytes in patients with systemic lupus erythematosus
Cai Xiaoyan Xu Yanli Zhong Zhiming et al
(First Municipal People's Hospital of Guangzhou, Guangzhou 510180)
【Abstract】 Objective To investigate the significance of changes in T lymphocyte subsets, B cells and natural killer cells (NK cells) of peripheral blood in patients with systemic lupus erythematosus (SLE). Methods Phenotypic analysis of peripherial blood lymphocytes was conducted in 38 cases of active SLE and 20 healthy controls by using doublestaining immunofluoresence and flow cytometry. Results Decrease in CD+4 cells and CD+4/CD+8 was observed in SLE patients (P<0.01). No statistically significant differences were shown between two groups in CD+3 cells and CD+8 cells (P>0.05). CD+16CD+56 cells (NK cells) significantly decreased and CD+19 cells(B cells) significantly increased in SLE patients, as comparing with the control group (P<0.001). Conclusion Immunologic disorder is present in the peripheral blood of SLE patients. The changes of peripheral T lymphocyte subsets and decrease of NK cells, which lead to proliferation of B cells, may play an important role in the development of SLE.
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【Key words】 Lupus erythematosus, systemic T lymphocyte subsets NK cells Flow cytometry
系统性红斑狼疮(SLE)是一种自身免疫性疾病，存在免疫功能的紊乱，但其发病机理及机体内免疫调节细胞的具体变化尚未完全明确。我们通过流式细胞仪对38例SLE患者和20例正常人的外周血淋巴细胞表型进行检测，了解T细胞亚群、B细胞及自然杀伤细胞(NK细胞)在活动期SLE的改变，从而探讨免疫细胞在SLE发病机理中的作用。
1 资料与方法
1.1 检测对象 SLE患者38例，均为我院住院及门诊患者，诊断符合美国ARA 1982年修订SLE分类标准[1]。女36例，男2例；年龄15～59岁，平均31岁。病程1个月至19 a，平均2.3 a。根据欧洲狼疮活动性指标积分评分[2]，都处于疾病的活动期。其中初发病21例，复发17例。合并狼疮性肾炎23例，合并神经精神性狼疮6例。选择20名性别、年龄相匹配之健康人作为正常对照组。
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1.2 研究方法 采用微量全血直接双标记免疫荧光染色及流式细胞仪检测。所有受检者在清晨空腹抽取抗凝血1 ml，取标本100 μl分别加入CD3，CD4，CD8，CD19及CD16CD56荧光标记单抗(美国Coulter公司产品)20 μl，室温孵育20 min，加溶血素2 ml，摇匀后室温避光放置10 min，1 500 r/min离心5 min，弃上清液，用PBS洗涤2次，加体积分数为1%的甲醛0.5 ml，置流式细胞仪(美国BD公司Facs vantage型号)进行分析，每个样品收集104个细胞。
1.3 统计学处理 采用t检验。
2 结果
38例SLE患者CD+4细胞和CD+4/CD+8比值降低；CD+3和CD+8细胞与正常对照组比较无统计学差异；CD+19细胞(B细胞)升高；而CD+16CD+56细胞(NK细胞)明显减少。具体数值见表1。
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表1 SLE患者外周血淋巴细胞免疫表型
±s例数
CD+3(%)
CD+4(%)
CD+8(%)
CD+4/CD+8
CD+19(%)
CD+16CD+56(%)
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SLE患者组
38
59.01±10.76
28.19±7.50
27.36±7.07
1.11±0.34
17.78±6.85
7.11±3.69
正常对照组
20
60.1±9.99
33.74±4.55
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23.66±4.15
1.49±0.26
6.32±2.08
28.38±11.16
P值
>0.05
<0.01
>0.05
<0.01
<0.001
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3 讨论
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正常免疫应答过程有赖于各种免疫细胞，特别是各T细胞亚群之间的相互协作和相互制约。若某一T细胞亚群的数量和功能发生异常，机体就出现免疫紊乱，并发生一系列病理变化。SLE是一种自身免疫性疾病，存在免疫调节功能紊乱。国内外对SLE患者T细胞亚群的研究有很多，但结果都不太一致。过去多数报道[3]在SLE活动期，辅助/诱导T细胞(CD+4细胞)升高，抑制/杀伤T细胞(CD+8细胞)下降，CD+4/CD+8比值升高，认为SLE的发病与上述T细胞亚群的改变有关，尤其是CD+8下降引起B细胞多克隆激活及体液免疫异常。但近年的研究[4，5]却发现SLE活动期CD+8细胞变化不大，或者反而升高。本组资料的结果也显示：活动期SLE患者的CD+8细胞与正常对照组比较无差异(P>0.05)，CD+4细胞减少(P<0.01)，CD+4/CD+8比值降低(P<0.01)，CD+19细胞(B细胞)明显升高(P<0.001)，与近年的报道一致。有进一步的研究发现，CD+8细胞亚群具有明显的异质性，活动性SLE患者的CD+8细胞几乎全部被反抑制性T细胞(CD+8VV+)取代，不能显示抑制功能，因而阻断了CD+8细胞对CD+4细胞的抑制作用[5]。另一方面，CD+4细胞减少，主要是CD+4亚群中的抑制诱导T细胞(CD+42H+4)降低，不能诱导CD+8细胞对B细胞产生抑制作用[6]。这就解释了活动期SLE患者中，CD+4细胞降低，CD+8细胞正常或升高时，仍然表现出免疫亢进，B细胞增殖并产生大量自身抗体的矛盾现象。
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本组资料的结果还显示，活动期的SLE患者的NK细胞(CD+16CD+56细胞)活性较正常对照组明显降低(P<0.001)。NK细胞具有多种功能，它不仅是自然防御细胞，而且是体内多种细胞，尤其是T，B淋巴细胞的免疫调节细胞，在机体正常的免疫、防御机制中起重要作用。在生理情况下，NK细胞对抗体的产生具有双相调节作用。SLE活动期，NK细胞活性明显降低，对自身抗体产生的抑制作用减弱，多种自身抗体产生，导致多脏器受损。Erkeller-Yuksel等[7]和Stoh等[8]的研究也发现活动期SLE患者NK细胞活性降低，在SLE伴肾脏受累的患者中下降更为明显，治疗后NK细胞活性有所升高，提示NK细胞的变化可以直接地反映机体的免疫失衡状态。
可见，T细胞亚群、B细胞及NK细胞的改变在SLE的发病中起很大作用。检测SLE患者外周血淋巴细胞表型，对全面地了解机体的免疫状态，正确判断病情和指导临床治疗有重要意义。
, http://www.100md.com
参考文献
1，Tam EM, Cohen AS, Fries JF, et al. The 1982 revised criteria for the classification of systemic lupus erythematosus (SLE). Arthritis Rheum, 1982, 25:1271
2，Vitali C, Bencivelli W, Isenberg DA, et al. Disease activity in systemic lupus erythematosus: report of consensus study group of the European workshop for rheumatology research. Ⅱ. Identification of the variables indicative of disease activity and their use in the development of an activity score. Clin Exp Rheumatol, 1992, 10:541
, 百拇医药
3，Raziuddin S, Nur MA, Al-Wabel AA. Increased circulating HLA-DR+CD+4 T cells in systemic lupus erythematosus: alterations associated with prednisolone therapy. Scand J Immunol, 1990, 31(2): 139
4，Maeda N, Sekigawa I, Iida N, et al. Relationship between CD+4/CD+8 T cell ratio and T cell activation in systemic lupus erythematosus. Scand J Rheumatol, 1999, 28(3): 166
, 百拇医药
5，张冬春，王林军，马安伦，等. SLE中的反抑制细胞与rδTCR阳性T细胞. 风湿病学杂志，1997， 2(4)： 1
6，蒋，明，孙华瑜， 朱立平，等. 系统性红斑狼疮患者外周血中的T+42H+4细胞的研究.中华内科杂志，1991， 30(7)：426
7，Erkeller-Yuksel FM, Lydyard PM, Isenberg DA. Lack of NK cells in lupus patients with renal involvement. Lupus, 1997, 6(9): 708
8，Stoh W, Elliott JE, Hamilton AS, et al. Impaired recovery and cytolytic function of CD+56 T and non-T cells in systemic lupus erythematosus following in vitro polyclonal T cell stimulation. Studies in unselected patients and monozygotic disense-discordant twins. Arthritis Rheum, 1996, 39(11): 1840
收稿日期：1999-11-08, 百拇医药