p16在肝外胆管癌组织中的表达及临床意义
作者：胡乃东 张杰英 石运明 王文斌
单位：胡乃东,河北医科大学97级外科研究生；张杰英(河北医科大学第二医院病理科)；石运明 王文斌(河北医科大学第二医院肝胆外科 石家庄 050000)
关键词：基因,抑制,肿瘤；基因表达调控；胆管癌；病因学
河北医科大学学报000506
摘 要 目的 研究p16蛋白在肝外胆管恶性肿瘤中表达的意义。方法 用免疫组化ABC法，检测41例肝外胆管癌和12例胆管囊肿组织中p16蛋白的表达情况。结果 ①p16蛋白在胆管囊肿组织的阳性表达率明显高于肝外胆管癌的阳性表达率，两者具有显著性差异。②p16蛋白的阳性表达率与肝外胆管癌的分化程度、临床分期(Ⅰ～Ⅱ期与Ⅲ～Ⅳ期)及是否有淋巴转移密切相关(P<0.05)，而未发现p16蛋白表达与胆管癌病理类型有相关性(P>0.05)。③p16蛋白表达阳性组生存时间明显长于p16蛋白表达阴性组。结论 p16蛋白的表达与肝外胆管癌的发生、发展及恶性行为密切相关，可作为判断肝外胆管癌恶性度和预后的指标。
, 百拇医药
中图号 R735.8
EXPRESSION OF p16 IN BILE DUCT NEOPLASMS AND ITS CLINICAL SIGNFICANCE
Hu Naidong Shi Yunming Zhang Jieying Wang Wenbin
(Department of Hepato-biliary Surgery,the Second Hospital of Hebei Medical University Shijiazhuang 050000)
ABSTRACT Objective To investigate the significance of the expression of p16 protein in bile duct cacinoma.Methods ABC immunohistochemical method was used to detect the status of expression of p16 protein in 41 cases of bile duct cacinoma and in 12 cases of biliary cyst.Results ①p16 positive expression rate in biliary cyst was higher than that in bile duct cacinoma(P<0.05).②There was statistical correlation between p16 positive expression rate and differentiation、clinical stage、lymph node metastasis in bile duct cacinoma(P<0.05),No correlation was found between p16 positive expression rate and pathological types of bile duct cacinoma(P>0.05).③p16 negative expression was related to poorer prognosis in bile duct cacinoma.Conclusion p16 expression alteration has close ralationship with tumorogenesis、progression and malignant behavior in bile duct cacinoma,and it is an important index for the judgement of malignant degree and prognosis.
, 百拇医药
MeSH genes,suppressor,tumor;gene expression regulation;cholangiocarcinoma/etiology
p16基因是一个参与调控细胞周期的抑癌基因，当发生突变或缺失后可促使细胞无限制的生长，对肿瘤的发生、发展有着重要的作用。近年来有关抑癌基因p16的研究引起国内外学者的高度重视，研究结果表明约50 %的恶性肿瘤有p16的突变与缺失[1]。Sadao[2]利用SSCP-PCR技术对胆道肿瘤p16突变进行分析，胆管癌中有63 %突变，远高于其它癌基因，因而认为p16是胆管癌发生发展的一个重要因素。有关应用免疫组织化学法检测胆管癌组织p16蛋白的表达，目前国内尚未见报道，我们利用免疫组化ABC法检测了41例胆管癌组织中p16蛋白的表达情况，并用12例胆管囊肿组织对照研究，以期探讨该基因产物在胆管肿瘤生物学行为及预后评估方面的价值。
1 材 料 与 方 法
, http://www.100md.com
1.1 材料：收集本校第二医院病理科1989～1999年肝外胆管癌手术切除蜡块标本41例，其中男性25例，女性16例，年龄33～69岁，平均52.6岁。临床分期(按UICC分期标准)为：Ⅰ期4例，Ⅱ期7例，Ⅲ期13例，Ⅳ期17例。按其组织学类型分类腺癌31例，乳头状腺癌3例，粘液腺癌4例，未分化癌3例。41例中有淋巴转移者13例。所有病例术前均未作放疗及化疗。另取12例胆管囊肿组织蜡块作对照。
1.2 试剂:p16蛋白单克隆抗体是鼠抗人单克隆抗体(1∶50稀释)，由北京中山生物技术有限公司提供美国Santa Cruz公司的产品，SP试剂盒为美国Zymed公司产品。
1.3 方法:所有标本均为病理科固定、包埋好的蜡块，作5 μm厚连续切片，先作HE染色，核实诊断，再作ABC法免疫组化染色，用已知乳腺癌阳性切片作为阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。
1.4 结果判断:先在低倍镜下选癌巢，然后选5个高倍视野计数。阴性(-)，<10 %的细胞内有棕黄色颗粒。弱阳性(±)，10 %～30 %的细胞浆内有棕黄色颗粒。阳性(+)，30 %～50 %的细胞浆内有棕黄色阳性颗粒。强阳性(++)，>50 %的细胞内有颜色较深分布弥漫的棕黄色颗粒或胞核内有棕色颗粒。
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1.5 统计分析:检测结果采用χ2检验进行统计分析。
2 结 果
2.1 p16蛋白定位分布及胆管良、恶性病变阳性率：p16蛋白染色阳性绝大部分为胞浆呈棕色或棕黄色颗粒状弥漫分布，少见有胞核染色。本组病例中，肝外胆管癌阳性表达率为63.4 %，胆管囊肿阳性表达率为100 %，对照组明显高于恶性肿瘤组，统计学比较两组有显著差异(P<0.05)。见表1。
表1 p16蛋白在胆管良恶性病变中的表达
Table 1 The expression of p16 protein in bile duct lesions
Cases
n
, http://www.100md.com
Expression of p16
Positive rate
(%)
-
±
+
++
Biliary cyst
12
0
0
8
4
, 百拇医药
100.0*
Bile duct neoplasms
41
9
6
11
15
63.4**
*vs** P<0.052.2 p16蛋白的表达与胆管癌分化程度的关系：在高分化癌(Ⅰ级)中p16蛋白阳性表达率为85 %；中分化癌(Ⅱ级)中p16蛋白阳性表达率为44.4 %；低分化癌(Ⅲ级)中p16蛋白阳性表达率为33.3 %。p16蛋白阳性表达率随分化程度降低而降低，其中高分化癌与中分化癌之间，高分化癌与低分化癌之间有显著性差异(P<0.05)，中、低分化癌之间差异无显著性(P>0.05)。见表2。
, 百拇医药
2.3 p16蛋白阳性率与临床分期关系：Ⅰ～Ⅳ期的阳性表达率分别为100 %、85.7 %、61.5 %、47.1 %，其中Ⅰ、Ⅱ期之间，Ⅲ、Ⅳ期之间无显著差异(P>0.05)，但Ⅰ～Ⅱ期与Ⅲ～Ⅳ期之间的差异有统计学意义(P<0.05)。
2.4 p16蛋白的阳性率与淋巴转移的关系：13例发生淋巴转移的癌组织阳性表达率为30.8 %，28例无淋巴转移的癌组织p16阳性率为78.6 %，两者存在明显差异(P<0.01)。
2.5 p16蛋白的阳性率与肿瘤病理类型的关系：p16蛋白的阳性率与肿瘤病理类型无明显相关性(P>0.05)。
2.6 p16蛋白的表达与胆管癌预后的关系：41例胆管癌患者有效随访29例，失访12例(29.2 %)。随访满24个月，其中死亡27例，平均生存时间为14.16个月。按p16蛋白表达与否将29例分两组，结果发现p16蛋白阳性表达组平均生存时间为16.52个月，p16蛋白阴性表达组平均生存时间为9.87个月。
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表2 胆管癌中p16的表达分布
Table 2 The expression of p16 in bile duct carcinoma
Cases
n
Expression intensity
Positive rate
(%)
-
±
+
++
, 百拇医药
Pathological type
Papillary adenocarcinoma
3
0
1
1
1
66.7
Mucous adenocarcinoma
4
1
1
, 百拇医药
2
0
50.0
Adenocarcinoma
31
6
4
7
14
67.8
Poor differentiation carcinoma
3
2
, 百拇医药
0
1
0
33.3*
Differentiation Grade
Ⅰ
20
0
3
6
11
85.0
Ⅱ
, http://www.100md.com
18
7
3
4
4
44.4
Ⅲ
3
2
0
1
0
33.3**
, http://www.100md.com Lymph node metastasis
No metastasis
28
4
2
8
14
78.6
With metastasis
13
5
4
3
, http://www.100md.com
1
30.8△
TNM stages
Ⅰstage
4
0
0
2
2
100.0
Ⅱstage
7
0
, http://www.100md.com
1
2
4
85.7
Ⅲstage
13
3
2
4
4
61.5
Ⅳstage
17
6
, http://www.100md.com
3
3
5
47.1△△
* Comparison with all the other types P>0.05,** Ⅰcomparing with Ⅱ P<0.05,Ⅰcomparing with Ⅲ P<0.05,Ⅱ comparing with Ⅲ P>0.05
△comparison with no metastasis P<0.01,△△Ⅰstage comparing with Ⅱstage and Ⅲstage comparing with Ⅳstage P>0.05,Ⅰ～Ⅱstages comparing with Ⅲ～Ⅳstage P<0.053 讨 论
, http://www.100md.com
p16抑癌基因定位于人9号染色体短臂2区1节(9P21)，其染色体组有3个外显子，表达产物为p16蛋白，p16蛋白通过抑制细胞周期素依赖性激酶4(CDK4)活性参与并调节细胞从G0期进入G1期，若没有p16蛋白的抑制作用，细胞会异常增生，发生癌变[3]。p16基因在众多人类肿瘤细胞系有纯合性缺失，体外研究发现，来源于人肺、乳腺、食管、结肠、膀胱、卵巢等部位的癌细胞株内均有高频率的p16基因缺失，据统计达75 %[4]，这表明p16基因在肿瘤发生过程中扮演着重要角色。
本实验用免疫组化方法表明，在肝外胆管癌组织中的p16蛋白表达与在胆管囊肿组织中的表达，两者存在显著性差异(P<0.05)，表明在胆管癌组织中存在显著的p16蛋白的缺失，从蛋白质水平证明了p16基因失活与胆管癌发生是密切相关的。这同Sadao对胆道肿瘤p16突变进行分析，得出的结论是一致的。
本组资料显示，肝外胆管癌p16蛋白阳性表达率随分化程度的降低而降低，且中、低分化癌与高分化癌之间存在统计学差异(P<0.05)。提示在不同分化程度的胆管癌发生过程中p16基因缺失不同，在一定程度上反映了p16蛋白阳性率随胆管癌恶性程度增高有下降趋势，说明胆管癌的p16阳性率与组织学分级相关。
, 百拇医药
统计学分析同时显示p16蛋白在肝外胆管癌表达中临床Ⅰ～Ⅱ期与Ⅲ～Ⅳ期之间存在显著差异(P<0.05)，这表明，p16的表达与胆管癌的浸润特性密切相关，即阳性组织其肿瘤侵袭性相对较弱，而阴性者较强。p16蛋白作为一种细胞周期的负性调节因子，在癌变初期表达率较高，可能是对细胞所接受到的内外增殖信号的一种反应，以维持细胞周期的调控平衡，为细胞赢得受控DNA的修复时间，以减少基因突变积累，减少细胞过度分裂增生。在晚期由于致癌因子继续作用，使p16基因出现大量的缺失和突变，p16蛋白生物合成过程受阻，使p16蛋白丧失同CDK竞争的能力，细胞大量分裂增殖。本研究结果中p16的丢失和失活主要在胆管癌的中晚期，说明其在决定该肿瘤浸润和转移方面起重要作用。
本组资料中，淋巴结转移组p16蛋白阳性表达率明显低于无淋巴结转移组(P<0.05)，说明p16表达与淋巴转移呈显著负相关。陈汝福[5]应用免疫组化方法检测胆囊癌也得出相同结论。
p16表达与肝外胆管癌的病理类型无明显相关性，说明其在决定该肿瘤恶性表型方面意义不大，同时表明胆管癌各个类型在自然形成过程中经历相似阶段。
, 百拇医药
临床上一般以胆管癌的组织学类型、分化程度、有无转移及肿瘤分期等综合指标来评估患者的预后。据文献报告，p16蛋白与多种肿瘤预后有关，认为p16表达阳性率愈高则预后愈好。本研究结果支持上述观点，有p16阳性表达的肝外胆管癌患者，其生存时间明显长于阴性表达的患者，提示p16蛋白表达可作为判断患者预后的参考指标。
综上所述，p16蛋白的缺失广泛存在于肝外胆管肿瘤中，并与肿瘤的发生、发展及恶性行为密切相关，因而在临床上检测p16蛋白的表达对估计胆管癌的侵袭、淋巴转移的潜能，并依次判断预后有重要意义。
参考文献
1，Karab A,Gruis NA,Weaver-feldhaus J,et al.A cell cycle regulator potentially involved in genesis of many tumor types.Science,1994,264(12):436
, 百拇医药
2，Yoshida S,Todoroki T,Ichikawa Y,et al.Mutations of p16INK4/CDKN2 and P15INK4B/MTS2 genes in biliary tract cancers.Cancer Research,1995,55(13):2756
3，Serrano M,Hannon GJ,Beach D.A new regulatory motif in cell-cycle control causing specific inhibition of cyclin D/CDK4.Nature,1993,366(6456):704
4，Marx J.New tumor suppressor may rival p53.Science,1994,264(15):344
5，陈汝福，钱家勤.p16基因产物表达与胆囊癌生物学行为和预后的关系.临床肿瘤学杂志，1998,3(3):3
收稿日期：2000-03-17, http://www.100md.com
单位：胡乃东,河北医科大学97级外科研究生；张杰英(河北医科大学第二医院病理科)；石运明 王文斌(河北医科大学第二医院肝胆外科 石家庄 050000)
关键词：基因,抑制,肿瘤；基因表达调控；胆管癌；病因学
河北医科大学学报000506
摘 要 目的 研究p16蛋白在肝外胆管恶性肿瘤中表达的意义。方法 用免疫组化ABC法，检测41例肝外胆管癌和12例胆管囊肿组织中p16蛋白的表达情况。结果 ①p16蛋白在胆管囊肿组织的阳性表达率明显高于肝外胆管癌的阳性表达率，两者具有显著性差异。②p16蛋白的阳性表达率与肝外胆管癌的分化程度、临床分期(Ⅰ～Ⅱ期与Ⅲ～Ⅳ期)及是否有淋巴转移密切相关(P<0.05)，而未发现p16蛋白表达与胆管癌病理类型有相关性(P>0.05)。③p16蛋白表达阳性组生存时间明显长于p16蛋白表达阴性组。结论 p16蛋白的表达与肝外胆管癌的发生、发展及恶性行为密切相关，可作为判断肝外胆管癌恶性度和预后的指标。
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中图号 R735.8
EXPRESSION OF p16 IN BILE DUCT NEOPLASMS AND ITS CLINICAL SIGNFICANCE
Hu Naidong Shi Yunming Zhang Jieying Wang Wenbin
(Department of Hepato-biliary Surgery,the Second Hospital of Hebei Medical University Shijiazhuang 050000)
ABSTRACT Objective To investigate the significance of the expression of p16 protein in bile duct cacinoma.Methods ABC immunohistochemical method was used to detect the status of expression of p16 protein in 41 cases of bile duct cacinoma and in 12 cases of biliary cyst.Results ①p16 positive expression rate in biliary cyst was higher than that in bile duct cacinoma(P<0.05).②There was statistical correlation between p16 positive expression rate and differentiation、clinical stage、lymph node metastasis in bile duct cacinoma(P<0.05),No correlation was found between p16 positive expression rate and pathological types of bile duct cacinoma(P>0.05).③p16 negative expression was related to poorer prognosis in bile duct cacinoma.Conclusion p16 expression alteration has close ralationship with tumorogenesis、progression and malignant behavior in bile duct cacinoma,and it is an important index for the judgement of malignant degree and prognosis.
, 百拇医药
MeSH genes,suppressor,tumor;gene expression regulation;cholangiocarcinoma/etiology
p16基因是一个参与调控细胞周期的抑癌基因，当发生突变或缺失后可促使细胞无限制的生长，对肿瘤的发生、发展有着重要的作用。近年来有关抑癌基因p16的研究引起国内外学者的高度重视，研究结果表明约50 %的恶性肿瘤有p16的突变与缺失[1]。Sadao[2]利用SSCP-PCR技术对胆道肿瘤p16突变进行分析，胆管癌中有63 %突变，远高于其它癌基因，因而认为p16是胆管癌发生发展的一个重要因素。有关应用免疫组织化学法检测胆管癌组织p16蛋白的表达，目前国内尚未见报道，我们利用免疫组化ABC法检测了41例胆管癌组织中p16蛋白的表达情况，并用12例胆管囊肿组织对照研究，以期探讨该基因产物在胆管肿瘤生物学行为及预后评估方面的价值。
1 材 料 与 方 法
, http://www.100md.com
1.1 材料：收集本校第二医院病理科1989～1999年肝外胆管癌手术切除蜡块标本41例，其中男性25例，女性16例，年龄33～69岁，平均52.6岁。临床分期(按UICC分期标准)为：Ⅰ期4例，Ⅱ期7例，Ⅲ期13例，Ⅳ期17例。按其组织学类型分类腺癌31例，乳头状腺癌3例，粘液腺癌4例，未分化癌3例。41例中有淋巴转移者13例。所有病例术前均未作放疗及化疗。另取12例胆管囊肿组织蜡块作对照。
1.2 试剂:p16蛋白单克隆抗体是鼠抗人单克隆抗体(1∶50稀释)，由北京中山生物技术有限公司提供美国Santa Cruz公司的产品，SP试剂盒为美国Zymed公司产品。
1.3 方法:所有标本均为病理科固定、包埋好的蜡块，作5 μm厚连续切片，先作HE染色，核实诊断，再作ABC法免疫组化染色，用已知乳腺癌阳性切片作为阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。
1.4 结果判断:先在低倍镜下选癌巢，然后选5个高倍视野计数。阴性(-)，<10 %的细胞内有棕黄色颗粒。弱阳性(±)，10 %～30 %的细胞浆内有棕黄色颗粒。阳性(+)，30 %～50 %的细胞浆内有棕黄色阳性颗粒。强阳性(++)，>50 %的细胞内有颜色较深分布弥漫的棕黄色颗粒或胞核内有棕色颗粒。
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1.5 统计分析:检测结果采用χ2检验进行统计分析。
2 结 果
2.1 p16蛋白定位分布及胆管良、恶性病变阳性率：p16蛋白染色阳性绝大部分为胞浆呈棕色或棕黄色颗粒状弥漫分布，少见有胞核染色。本组病例中，肝外胆管癌阳性表达率为63.4 %，胆管囊肿阳性表达率为100 %，对照组明显高于恶性肿瘤组，统计学比较两组有显著差异(P<0.05)。见表1。
表1 p16蛋白在胆管良恶性病变中的表达
Table 1 The expression of p16 protein in bile duct lesions
Cases
n
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Expression of p16
Positive rate
(%)
-
±
+
++
Biliary cyst
12
0
0
8
4
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100.0*
Bile duct neoplasms
41
9
6
11
15
63.4**
*vs** P<0.052.2 p16蛋白的表达与胆管癌分化程度的关系：在高分化癌(Ⅰ级)中p16蛋白阳性表达率为85 %；中分化癌(Ⅱ级)中p16蛋白阳性表达率为44.4 %；低分化癌(Ⅲ级)中p16蛋白阳性表达率为33.3 %。p16蛋白阳性表达率随分化程度降低而降低，其中高分化癌与中分化癌之间，高分化癌与低分化癌之间有显著性差异(P<0.05)，中、低分化癌之间差异无显著性(P>0.05)。见表2。
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2.3 p16蛋白阳性率与临床分期关系：Ⅰ～Ⅳ期的阳性表达率分别为100 %、85.7 %、61.5 %、47.1 %，其中Ⅰ、Ⅱ期之间，Ⅲ、Ⅳ期之间无显著差异(P>0.05)，但Ⅰ～Ⅱ期与Ⅲ～Ⅳ期之间的差异有统计学意义(P<0.05)。
2.4 p16蛋白的阳性率与淋巴转移的关系：13例发生淋巴转移的癌组织阳性表达率为30.8 %，28例无淋巴转移的癌组织p16阳性率为78.6 %，两者存在明显差异(P<0.01)。
2.5 p16蛋白的阳性率与肿瘤病理类型的关系：p16蛋白的阳性率与肿瘤病理类型无明显相关性(P>0.05)。
2.6 p16蛋白的表达与胆管癌预后的关系：41例胆管癌患者有效随访29例，失访12例(29.2 %)。随访满24个月，其中死亡27例，平均生存时间为14.16个月。按p16蛋白表达与否将29例分两组，结果发现p16蛋白阳性表达组平均生存时间为16.52个月，p16蛋白阴性表达组平均生存时间为9.87个月。
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表2 胆管癌中p16的表达分布
Table 2 The expression of p16 in bile duct carcinoma
Cases
n
Expression intensity
Positive rate
(%)
-
±
+
++
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Pathological type
Papillary adenocarcinoma
3
0
1
1
1
66.7
Mucous adenocarcinoma
4
1
1
, 百拇医药
2
0
50.0
Adenocarcinoma
31
6
4
7
14
67.8
Poor differentiation carcinoma
3
2
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0
1
0
33.3*
Differentiation Grade
Ⅰ
20
0
3
6
11
85.0
Ⅱ
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18
7
3
4
4
44.4
Ⅲ
3
2
0
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33.3**
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No metastasis
28
4
2
8
14
78.6
With metastasis
13
5
4
3
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1
30.8△
TNM stages
Ⅰstage
4
0
0
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100.0
Ⅱstage
7
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1
2
4
85.7
Ⅲstage
13
3
2
4
4
61.5
Ⅳstage
17
6
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3
3
5
47.1△△
* Comparison with all the other types P>0.05,** Ⅰcomparing with Ⅱ P<0.05,Ⅰcomparing with Ⅲ P<0.05,Ⅱ comparing with Ⅲ P>0.05
△comparison with no metastasis P<0.01,△△Ⅰstage comparing with Ⅱstage and Ⅲstage comparing with Ⅳstage P>0.05,Ⅰ～Ⅱstages comparing with Ⅲ～Ⅳstage P<0.053 讨 论
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p16抑癌基因定位于人9号染色体短臂2区1节(9P21)，其染色体组有3个外显子，表达产物为p16蛋白，p16蛋白通过抑制细胞周期素依赖性激酶4(CDK4)活性参与并调节细胞从G0期进入G1期，若没有p16蛋白的抑制作用，细胞会异常增生，发生癌变[3]。p16基因在众多人类肿瘤细胞系有纯合性缺失，体外研究发现，来源于人肺、乳腺、食管、结肠、膀胱、卵巢等部位的癌细胞株内均有高频率的p16基因缺失，据统计达75 %[4]，这表明p16基因在肿瘤发生过程中扮演着重要角色。
本实验用免疫组化方法表明，在肝外胆管癌组织中的p16蛋白表达与在胆管囊肿组织中的表达，两者存在显著性差异(P<0.05)，表明在胆管癌组织中存在显著的p16蛋白的缺失，从蛋白质水平证明了p16基因失活与胆管癌发生是密切相关的。这同Sadao对胆道肿瘤p16突变进行分析，得出的结论是一致的。
本组资料显示，肝外胆管癌p16蛋白阳性表达率随分化程度的降低而降低，且中、低分化癌与高分化癌之间存在统计学差异(P<0.05)。提示在不同分化程度的胆管癌发生过程中p16基因缺失不同，在一定程度上反映了p16蛋白阳性率随胆管癌恶性程度增高有下降趋势，说明胆管癌的p16阳性率与组织学分级相关。
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统计学分析同时显示p16蛋白在肝外胆管癌表达中临床Ⅰ～Ⅱ期与Ⅲ～Ⅳ期之间存在显著差异(P<0.05)，这表明，p16的表达与胆管癌的浸润特性密切相关，即阳性组织其肿瘤侵袭性相对较弱，而阴性者较强。p16蛋白作为一种细胞周期的负性调节因子，在癌变初期表达率较高，可能是对细胞所接受到的内外增殖信号的一种反应，以维持细胞周期的调控平衡，为细胞赢得受控DNA的修复时间，以减少基因突变积累，减少细胞过度分裂增生。在晚期由于致癌因子继续作用，使p16基因出现大量的缺失和突变，p16蛋白生物合成过程受阻，使p16蛋白丧失同CDK竞争的能力，细胞大量分裂增殖。本研究结果中p16的丢失和失活主要在胆管癌的中晚期，说明其在决定该肿瘤浸润和转移方面起重要作用。
本组资料中，淋巴结转移组p16蛋白阳性表达率明显低于无淋巴结转移组(P<0.05)，说明p16表达与淋巴转移呈显著负相关。陈汝福[5]应用免疫组化方法检测胆囊癌也得出相同结论。
p16表达与肝外胆管癌的病理类型无明显相关性，说明其在决定该肿瘤恶性表型方面意义不大，同时表明胆管癌各个类型在自然形成过程中经历相似阶段。
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临床上一般以胆管癌的组织学类型、分化程度、有无转移及肿瘤分期等综合指标来评估患者的预后。据文献报告，p16蛋白与多种肿瘤预后有关，认为p16表达阳性率愈高则预后愈好。本研究结果支持上述观点，有p16阳性表达的肝外胆管癌患者，其生存时间明显长于阴性表达的患者，提示p16蛋白表达可作为判断患者预后的参考指标。
综上所述，p16蛋白的缺失广泛存在于肝外胆管肿瘤中，并与肿瘤的发生、发展及恶性行为密切相关，因而在临床上检测p16蛋白的表达对估计胆管癌的侵袭、淋巴转移的潜能，并依次判断预后有重要意义。
参考文献
1，Karab A,Gruis NA,Weaver-feldhaus J,et al.A cell cycle regulator potentially involved in genesis of many tumor types.Science,1994,264(12):436
, 百拇医药
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收稿日期：2000-03-17, http://www.100md.com