+Gz重复暴露大鼠脑组织中IL-1β和TNF-α mRNA表达变化
作者：刘红巾 蔡庆 纪桂英 占志 姜建东 朱美财
单位：空军总医院,北京 100036
关键词：加速度实验；脑；白细胞介素1；肿瘤坏死因子；基因表达调节；大鼠
航天医学与医学工程000514摘要： 目的 了解反复高+Gz暴露后大鼠脑组织中IL-1β和TNF-α mRNA表达变化。 方法 20只SD大鼠随机分成对照组、+Gz重复暴露后30 min、6 h、24 h和48 h五组，每组4只。对照组大鼠G值为+1 Gz, 实验组大鼠在动物离心机上经历了3次+14 Gz/45 s(两次间间隔30 min)作用。分别于暴露后30 min、6 h、24 h和48 h处死大鼠取脑，提取总RNA，用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测方法检测大鼠脑组织中IL-1β和TNF-α mRNA表达水平。 结果 +Gz暴露后30 min、6 h和24 h大鼠脑组织IL-1β和TNF-α mRNA均有升高，但48 h时均恢复正常。 结论 反复高+Gz暴露可刺激大鼠脑组织内IL-1β和TNF-α mRNA表达，它们在+Gz所致脑损伤中起一定的作用，但这种变化是可逆的。
, http://www.100md.com
中图分类号：R852.21；文献标识码：A 文章编号：1002-0837(2000)05-0371-03
Changes of mRNA Expression of IL-1β and TNF-α in Rat Brains after Repeated Exposures to +Gz
LIU Hong-jin,CAI Qing, JI Gui-ying, ZHAN Zhi, JIANG Jian-dong, ZHU Mei-cai
(Space Medicine & Medical Engineering)
Abstract： Objective To study changes of mRNA expression of IL-1β and TNF-α in rat brains after repeated exposures to +Gz. Method Twenty concious SD rats served as the subjects. They were randomly divided into 5 groups. Using an animal centrifuge, control rats (n=4) were exposed to +1 Gz and experimental rats (n=16) were exposed to +14 Gz three times, each for 45 s with 30 min interval in between. The rat brains were taken 30 min, 6 h, 24 h and 48 h after the last centrifuge run and total RNA was isolated. mRNA expression levels of IL-1β and TNF-α in rat brain were measured by semi-quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). Result mRNA expression levels of IL-1β and TNF-α in rat brains taken 30 min, 6 h and 24 h after repeated +Gz exposures were significantly higher than those in control rats, but returned to normal after 48 h. Conclusion It suggested that mRNA expressions of IL-1β and TNF-α in rat brains can be stimulated by repeated +Gz exposures and the increased expression of IL-1β and TNF-α may play a role in the pathologic course of brain damage induced by+Gz exposures, but the damage is reversiable.
, 百拇医药
Key words:acceleration tests;brain;interleukin 1;tumor necrosis factor(TNF);gene expression regulation;rats
+Gz引起急性脑功能障碍是航空医学研究的重要课题之一。已经证实反复高+Gz暴露可对大鼠脑产生类似缺血和再灌注作用[1]，并引起脑损伤，脑神经元形态发生改变、能量代谢障碍和离子平衡紊乱等[2，3]，但其脑损伤的病理机制不清楚。本研究利用半定量反转录聚合酶链反应(Reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)技术，检测大鼠+Gz重复暴露后脑组织白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因表达的改变，探讨它们在+Gz所致脑损伤中的作用和意义。
方 法
, 百拇医药 实验动物 选用200 g左右的SD大鼠20只(本院实验动物中心提供)，随机分成对照组、+Gz重复暴露后30 min、6 h、24 h和48 h五组，每组4只。将大鼠固定于动物离心机的转臂上，头朝向离心机轴心。实验组所采用的+Gz暴露条件为：G值为+14 Gz，增长率1.5 G/s，峰值持续时间45 s，共作用3次，两次中间间歇30 min。对照组大鼠亦在动物离心机上经历类似实验步骤，所承受的G值为+1 Gz。
大鼠脑总RNA的制备 将大鼠断颈处死后取脑，用TRIzol总RNA提取试剂盒(美国GibcoBRL公司)提取组织总RNA。分别用紫外分光光度计(日本岛津UV2201型)测定总RNA浓度和纯度，重复测定3次，OD260和OD280之比值应在1.8～2.0之间，计算样品总RNA浓度。
反转录 取总RNA 2 μg,在65℃变性5 min后，依次加入5×反转录缓冲液4 μl,dNTP 0.5 mmol/L, Randon Primer 0.5 μg, M-MLV反转录酶(Promega公司)300 U，总反应体积20 μl。在37℃反应90 min后70℃加热10 min终止反应。
, 百拇医药
半定量PCR 参照文献[4,5]合成IL-1β和TNF-α寡核苷酸引物。选用看家基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因作为内参照，以校正计算IL-1β和TNF-α mRNA含量，GAPDH引物序列参照文献[6]。所用引物由北京赛百盛公司合成并纯化。PCR反应总体积为30 μl，其中含反转录反应液2 μl，10×PCR缓冲液3 μl，4种dNTP各 0.2 mmol/L, 上下游引物各0.5 μmol/L，Taq DNA聚合酶 (Promega公司)2 U。将反应管置于PCR仪(美国Perkin-Elmer 9600型)上进行PCR循环，94℃预变性2 min后进入 94℃变性1 min, 58℃退火1 min, 72℃延伸1 min, 循环32次，最后一轮循环在72℃延伸7 min。
反应完成后取12 μl PCR反应液，经2%琼脂糖凝胶电泳，用PCR Marker作分子量标准。电泳完毕后在紫外灯下观察照相，密度扫描分析PCR产物带。为消除系统及定量误差，IL-1β和TNF-α mRNA的表达水平以IL-1β和TNF-α的相对表达量即IL-1β/GAPDH和TNF-α/GAPDH的比率来计算。
, 百拇医药
统计学处理 数据用
±s表示，应用方差分析处理资料，P<0.05为差异有显著性。
结 果
IL-1β和TNF-α的RT-PCR 大鼠脑组织总RNA经反转录后用设定的引物进行PCR扩增，其产物长度IL-1β为528 bp、TNF-α为535 bp、 GAPDH为 515 bp，与引物设计相符(图1)。RNA产物不经反转录，直接进行PCR，电泳未见特异性扩增条带，表明RNA中无DNA污染。取模板量为2 μg总RNA，循环周期32，使这两个参数与PCR扩增产率之间呈正比关系。
+Gz重复暴露对大鼠脑组织IL-1β和TNF-α mRNA表达的影响 分别取对照组、+Gz重复暴露后30 min组、6 h组、24 h和48 h组大鼠脑组织总RNA 2μg，用RT-PCR分别扩增IL-1β、TNF-α和GAPDH基因，结果各组IL-1β和TNF-α的扩增条带不尽相同，GAPDH则均匀一致(图1)。+Gz重复暴露后30 min组、6 h组和24 h IL-1β和TNF-α mRNA水平均有升高，差异显著(P<0.01)，但48 h组与对照组相比无明显差异(P>0.05)(图1、表1)。
, 百拇医药
图1 +Gz重复暴露大鼠脑组织IL-1β和TNFα mRNA表达变化
Fig.1 Changes of IL-1β and TNFα mRNA levels in rat brain after repeated +Gz exposures
a:control;b: 30 min after +Gz exposure;c:6 h after +Gz exposure; d: 24 h after +Gz exposure；e: 48 h after +Gz exposure;M：PCR Marker
表1 +Gz重复暴露对大鼠脑组织IL-1β和TNFα mRNA表达的影响(n=4,±s)
Table 1 Changes of IL-1β and TNFα mRNA levels in rat brain after repeated +Gz exposures (n=4，±s) group
, 百拇医药
IL-1β/GAPDH
TNFα/GAPDH
control
0.12±0.03
0.18±0.04
30 min after +Gz exposure
0.22±0.05
0.28±0.06
6 h after +Gz exposure
0.56±0.09*
0.65±0.10*
, 百拇医药
24 h after +Gz exposure
0.52±0.09*
0.58±0.11*
48 h after +Gz exposure
0.11±0.04
0.20±0.03
Note:*P<0.01, as compared with the control group
讨 论
常用的 mRNA定量测定有Northern Blotting、RNA保护分析法和RT-PCR法等。Northern Blotting操作复杂，敏感性不高，需样品量多(需十几微克甚至几十微克)，对于只含极少量特异mRNA的组织和样品，测定较为困难。RNA保护分析法虽灵敏准确，但操作复杂，价格昂贵，不易普及应用。RT-PCR法则具有灵敏度高、使用样品量少、定量方便和不需DNA探针等优点，是一种相对定量mRNA的方法，已被广泛应用于mRNA表达研究。本文利用RT-PCR半定量测定方法测定IL-1β和TNF-α mRNA表达，在PCR循环周期为32，RNA用量为2 μg时，这两个参数与PCR扩增产率之间呈正比关系，因此可以从PCR产物量来反映mRNA水平。
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IL-1β和TNF-α是多功能细胞因子，参与机体的免疫反应和应激反应。近年来脑缺血再灌注动物模型研究表明脑缺血再灌注可引起IL-1β和TNF-α mRNA表达增加，并认为它们在脑缺血再灌注所致脑损伤中起重要作用[4,7，8]。+Gz重复暴露是否也可引起脑组织内IL-1β和TNF-α基因表达变化，国内未见报道。本研究测定了+Gz重复暴露对大鼠脑组织IL-1β和TNF-α mRNA表达的影响，结果IL-1β和TNF-α mRNA在暴露后30 min、6 h和24 h均有升高，表明+Gz重复暴露能引起脑组织IL-1β和TNF-α mRNA表达增加,推测IL-1β和TNF-α表达增加参与了+Gz所致脑损害的病理过程。IL-1β和TNF-α表达较早，它们是脑缺血损害后激活细胞因子网络的启动因子。尽管增加的IL-1β和TNFα也可以刺激神经细胞表达有助于改善脑损伤的神经生长因子，但它们还是可以通过以下途径在脑损伤中起作用[9～11]：介导白细胞粘附分子表达增多，引起局部炎反应；可使脑局部产生兴奋性氨基酸增多，并可作用于多种炎性细胞诱导一氧化氮合酶激活，NO合成增加，加重对神经系统的毒性作用；IL-1β可使血液中内皮素增多和血管舒张因子下降而导致血管收缩，加重脑缺血；TNF既能诱导内皮细胞产生凝血活性，引发PAF、TXA增加，又可抑制内皮细胞抗凝蛋白C旁路辅助因子的活性，使内皮细胞表面形成促凝状态，加重血栓形成；增加血脑屏障通透性。+Gz暴露48 h IL-1β和TNF-α表达基本恢复正常,表明这种损害可逆。
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有研究表明干扰和阻断IL-1β和TNF-α的作用可以减轻脑缺血再灌注引起的脑损伤[12,13]，本研究证实反复高+Gz暴露可诱发IL-1β和TNF-α表达增加，这为从基因水平认识和防护+Gz所致的脑损伤提供了依据。
基金项目：全军医药卫生科研基金和空军后勤部科研基金课题(98D033)
参考文献
[1] Shahed AR,Barber JA,Werchan PM.Multiple +Gz exposures cause brain edema in rats [J].Aviat Space Environ Med, 1994,65(6):522～526
[2] SUN Xiqing,ZHANG Lifan,WU Xingyu et al.Changes of ortical neurons after repeated +Gz exposures in rats[J].Space Medicine & Medical Engineering,1996,9(3):173～178
, 百拇医药
孙喜庆，张立藩，吴兴裕等.+Gz重复暴露后大鼠脑皮层神经元的形态学改变[J].航天医学与医学工程，1996,9(3):173～178
[3] SUN Xiqing.The potential effects and mechanism of repeated high+Gz exposures on the brain.Space Medicine & Medical Engineering,1998,11(1):75～78
孙喜庆.反复高G值暴露对脑的潜在影响及其机制[J].航天医学与医学工程,1998,11(1):75～78
[4] Szaflarski J,Burtrum D,Silverstein FS.Cerebral hypoxia-ischemia stimulates cytokine gene expression in perinatal rats [J].Stroke,1995,26(6):1093～1100
, 百拇医药
[5] CHEN Dechang,LI Hongjiang,JING Bingwen et al.The effect of rhubarb on cytokin expression in liver after theraml injury[J].Chinese Critical Care Med,1999,11(10):587～560
陈德昌，李红江，景炳文等.大黄对烫伤大鼠肝脏内细胞因子基因表达的影响[J].中国危重病急救医学,1999,11(10):587～560
[6] Kaneto H,Morrissey J,Klahr S.Increased expression of TGF-β1 mRNA in the obstructed kidney of rats with unilateral ureteral ligation [J].Kidney, 1993,44(2):313～321
, 百拇医药
[7] Liu T,McDonnell PC,Young PR et al.Interleukin-1β mRNA expression in ischemic rat cortex [J].Stroke,1993,24(11):1746～1751
[8] Liu T,Clark RK,McDonnell PC et al.Tumor necrosis factor-α expression in ischemic neurons [J].Stroke,1994,25(7):1481～1488
[9] Sharief MK,Noori MA,Ciardi M et al.Increased levels of circulation ICAM-1 in serum and serebrospinal fluid of patients with active multipe selerosis,correlation with TNF-α and blood-brain barrier damage [J].J Neuroimmunology,1993,43(1):15～22
, http://www.100md.com
[10] Barme FC, Arvin B,White RF et al.Tumor necrosis factor-α-mediator of focal ischemic brain injury [J].Stroke,1997,28(6):1233～1243
[11] Merrill JE,Benveniste EN.Cytokins in inflamatory brain lesion: helpful and harmful [J].Trends Neurosci,1996,19(18):331～339
[12] Wang X,Barone FC,Aiyar NV et al.Interleukin-1 receptor and receptor antagonist gene expression after focal stroke in rats [J].Stroke,1997,28(1):155～161
[13] Dawson DA,Martion D,Hallenbeck JM et al.Inhibition of tumor necrosis factor-α reduces focal cerebral ischemic injury in spontaneously hyerensive rat [J].Neurosci Letters,1996,218(1):41～44
收稿日期：1999-12-21, 百拇医药
单位：空军总医院,北京 100036
关键词：加速度实验；脑；白细胞介素1；肿瘤坏死因子；基因表达调节；大鼠
航天医学与医学工程000514摘要： 目的 了解反复高+Gz暴露后大鼠脑组织中IL-1β和TNF-α mRNA表达变化。 方法 20只SD大鼠随机分成对照组、+Gz重复暴露后30 min、6 h、24 h和48 h五组，每组4只。对照组大鼠G值为+1 Gz, 实验组大鼠在动物离心机上经历了3次+14 Gz/45 s(两次间间隔30 min)作用。分别于暴露后30 min、6 h、24 h和48 h处死大鼠取脑，提取总RNA，用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测方法检测大鼠脑组织中IL-1β和TNF-α mRNA表达水平。 结果 +Gz暴露后30 min、6 h和24 h大鼠脑组织IL-1β和TNF-α mRNA均有升高，但48 h时均恢复正常。 结论 反复高+Gz暴露可刺激大鼠脑组织内IL-1β和TNF-α mRNA表达，它们在+Gz所致脑损伤中起一定的作用，但这种变化是可逆的。
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中图分类号：R852.21；文献标识码：A 文章编号：1002-0837(2000)05-0371-03
Changes of mRNA Expression of IL-1β and TNF-α in Rat Brains after Repeated Exposures to +Gz
LIU Hong-jin,CAI Qing, JI Gui-ying, ZHAN Zhi, JIANG Jian-dong, ZHU Mei-cai
(Space Medicine & Medical Engineering)
Abstract： Objective To study changes of mRNA expression of IL-1β and TNF-α in rat brains after repeated exposures to +Gz. Method Twenty concious SD rats served as the subjects. They were randomly divided into 5 groups. Using an animal centrifuge, control rats (n=4) were exposed to +1 Gz and experimental rats (n=16) were exposed to +14 Gz three times, each for 45 s with 30 min interval in between. The rat brains were taken 30 min, 6 h, 24 h and 48 h after the last centrifuge run and total RNA was isolated. mRNA expression levels of IL-1β and TNF-α in rat brain were measured by semi-quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). Result mRNA expression levels of IL-1β and TNF-α in rat brains taken 30 min, 6 h and 24 h after repeated +Gz exposures were significantly higher than those in control rats, but returned to normal after 48 h. Conclusion It suggested that mRNA expressions of IL-1β and TNF-α in rat brains can be stimulated by repeated +Gz exposures and the increased expression of IL-1β and TNF-α may play a role in the pathologic course of brain damage induced by+Gz exposures, but the damage is reversiable.
, 百拇医药
Key words:acceleration tests;brain;interleukin 1;tumor necrosis factor(TNF);gene expression regulation;rats
+Gz引起急性脑功能障碍是航空医学研究的重要课题之一。已经证实反复高+Gz暴露可对大鼠脑产生类似缺血和再灌注作用[1]，并引起脑损伤，脑神经元形态发生改变、能量代谢障碍和离子平衡紊乱等[2，3]，但其脑损伤的病理机制不清楚。本研究利用半定量反转录聚合酶链反应(Reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)技术，检测大鼠+Gz重复暴露后脑组织白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因表达的改变，探讨它们在+Gz所致脑损伤中的作用和意义。
方 法
, 百拇医药 实验动物 选用200 g左右的SD大鼠20只(本院实验动物中心提供)，随机分成对照组、+Gz重复暴露后30 min、6 h、24 h和48 h五组，每组4只。将大鼠固定于动物离心机的转臂上，头朝向离心机轴心。实验组所采用的+Gz暴露条件为：G值为+14 Gz，增长率1.5 G/s，峰值持续时间45 s，共作用3次，两次中间间歇30 min。对照组大鼠亦在动物离心机上经历类似实验步骤，所承受的G值为+1 Gz。
大鼠脑总RNA的制备 将大鼠断颈处死后取脑，用TRIzol总RNA提取试剂盒(美国GibcoBRL公司)提取组织总RNA。分别用紫外分光光度计(日本岛津UV2201型)测定总RNA浓度和纯度，重复测定3次，OD260和OD280之比值应在1.8～2.0之间，计算样品总RNA浓度。
反转录 取总RNA 2 μg,在65℃变性5 min后，依次加入5×反转录缓冲液4 μl,dNTP 0.5 mmol/L, Randon Primer 0.5 μg, M-MLV反转录酶(Promega公司)300 U，总反应体积20 μl。在37℃反应90 min后70℃加热10 min终止反应。
, 百拇医药
半定量PCR 参照文献[4,5]合成IL-1β和TNF-α寡核苷酸引物。选用看家基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因作为内参照，以校正计算IL-1β和TNF-α mRNA含量，GAPDH引物序列参照文献[6]。所用引物由北京赛百盛公司合成并纯化。PCR反应总体积为30 μl，其中含反转录反应液2 μl，10×PCR缓冲液3 μl，4种dNTP各 0.2 mmol/L, 上下游引物各0.5 μmol/L，Taq DNA聚合酶 (Promega公司)2 U。将反应管置于PCR仪(美国Perkin-Elmer 9600型)上进行PCR循环，94℃预变性2 min后进入 94℃变性1 min, 58℃退火1 min, 72℃延伸1 min, 循环32次，最后一轮循环在72℃延伸7 min。
反应完成后取12 μl PCR反应液，经2%琼脂糖凝胶电泳，用PCR Marker作分子量标准。电泳完毕后在紫外灯下观察照相，密度扫描分析PCR产物带。为消除系统及定量误差，IL-1β和TNF-α mRNA的表达水平以IL-1β和TNF-α的相对表达量即IL-1β/GAPDH和TNF-α/GAPDH的比率来计算。
, 百拇医药
统计学处理 数据用
±s表示，应用方差分析处理资料，P<0.05为差异有显著性。结 果
IL-1β和TNF-α的RT-PCR 大鼠脑组织总RNA经反转录后用设定的引物进行PCR扩增，其产物长度IL-1β为528 bp、TNF-α为535 bp、 GAPDH为 515 bp，与引物设计相符(图1)。RNA产物不经反转录，直接进行PCR，电泳未见特异性扩增条带，表明RNA中无DNA污染。取模板量为2 μg总RNA，循环周期32，使这两个参数与PCR扩增产率之间呈正比关系。
+Gz重复暴露对大鼠脑组织IL-1β和TNF-α mRNA表达的影响 分别取对照组、+Gz重复暴露后30 min组、6 h组、24 h和48 h组大鼠脑组织总RNA 2μg，用RT-PCR分别扩增IL-1β、TNF-α和GAPDH基因，结果各组IL-1β和TNF-α的扩增条带不尽相同，GAPDH则均匀一致(图1)。+Gz重复暴露后30 min组、6 h组和24 h IL-1β和TNF-α mRNA水平均有升高，差异显著(P<0.01)，但48 h组与对照组相比无明显差异(P>0.05)(图1、表1)。
, 百拇医药
图1 +Gz重复暴露大鼠脑组织IL-1β和TNFα mRNA表达变化
Fig.1 Changes of IL-1β and TNFα mRNA levels in rat brain after repeated +Gz exposures
a:control;b: 30 min after +Gz exposure;c:6 h after +Gz exposure; d: 24 h after +Gz exposure；e: 48 h after +Gz exposure;M：PCR Marker
表1 +Gz重复暴露对大鼠脑组织IL-1β和TNFα mRNA表达的影响(n=4,
±s)Table 1 Changes of IL-1β and TNFα mRNA levels in rat brain after repeated +Gz exposures (n=4，
±s) group, 百拇医药
IL-1β/GAPDH
TNFα/GAPDH
control
0.12±0.03
0.18±0.04
30 min after +Gz exposure
0.22±0.05
0.28±0.06
6 h after +Gz exposure
0.56±0.09*
0.65±0.10*
, 百拇医药
24 h after +Gz exposure
0.52±0.09*
0.58±0.11*
48 h after +Gz exposure
0.11±0.04
0.20±0.03
Note:*P<0.01, as compared with the control group
讨 论
常用的 mRNA定量测定有Northern Blotting、RNA保护分析法和RT-PCR法等。Northern Blotting操作复杂，敏感性不高，需样品量多(需十几微克甚至几十微克)，对于只含极少量特异mRNA的组织和样品，测定较为困难。RNA保护分析法虽灵敏准确，但操作复杂，价格昂贵，不易普及应用。RT-PCR法则具有灵敏度高、使用样品量少、定量方便和不需DNA探针等优点，是一种相对定量mRNA的方法，已被广泛应用于mRNA表达研究。本文利用RT-PCR半定量测定方法测定IL-1β和TNF-α mRNA表达，在PCR循环周期为32，RNA用量为2 μg时，这两个参数与PCR扩增产率之间呈正比关系，因此可以从PCR产物量来反映mRNA水平。
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IL-1β和TNF-α是多功能细胞因子，参与机体的免疫反应和应激反应。近年来脑缺血再灌注动物模型研究表明脑缺血再灌注可引起IL-1β和TNF-α mRNA表达增加，并认为它们在脑缺血再灌注所致脑损伤中起重要作用[4,7，8]。+Gz重复暴露是否也可引起脑组织内IL-1β和TNF-α基因表达变化，国内未见报道。本研究测定了+Gz重复暴露对大鼠脑组织IL-1β和TNF-α mRNA表达的影响，结果IL-1β和TNF-α mRNA在暴露后30 min、6 h和24 h均有升高，表明+Gz重复暴露能引起脑组织IL-1β和TNF-α mRNA表达增加,推测IL-1β和TNF-α表达增加参与了+Gz所致脑损害的病理过程。IL-1β和TNF-α表达较早，它们是脑缺血损害后激活细胞因子网络的启动因子。尽管增加的IL-1β和TNFα也可以刺激神经细胞表达有助于改善脑损伤的神经生长因子，但它们还是可以通过以下途径在脑损伤中起作用[9～11]：介导白细胞粘附分子表达增多，引起局部炎反应；可使脑局部产生兴奋性氨基酸增多，并可作用于多种炎性细胞诱导一氧化氮合酶激活，NO合成增加，加重对神经系统的毒性作用；IL-1β可使血液中内皮素增多和血管舒张因子下降而导致血管收缩，加重脑缺血；TNF既能诱导内皮细胞产生凝血活性，引发PAF、TXA增加，又可抑制内皮细胞抗凝蛋白C旁路辅助因子的活性，使内皮细胞表面形成促凝状态，加重血栓形成；增加血脑屏障通透性。+Gz暴露48 h IL-1β和TNF-α表达基本恢复正常,表明这种损害可逆。
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有研究表明干扰和阻断IL-1β和TNF-α的作用可以减轻脑缺血再灌注引起的脑损伤[12,13]，本研究证实反复高+Gz暴露可诱发IL-1β和TNF-α表达增加，这为从基因水平认识和防护+Gz所致的脑损伤提供了依据。
基金项目：全军医药卫生科研基金和空军后勤部科研基金课题(98D033)
参考文献
[1] Shahed AR,Barber JA,Werchan PM.Multiple +Gz exposures cause brain edema in rats [J].Aviat Space Environ Med, 1994,65(6):522～526
[2] SUN Xiqing,ZHANG Lifan,WU Xingyu et al.Changes of ortical neurons after repeated +Gz exposures in rats[J].Space Medicine & Medical Engineering,1996,9(3):173～178
, 百拇医药
孙喜庆，张立藩，吴兴裕等.+Gz重复暴露后大鼠脑皮层神经元的形态学改变[J].航天医学与医学工程，1996,9(3):173～178
[3] SUN Xiqing.The potential effects and mechanism of repeated high+Gz exposures on the brain.Space Medicine & Medical Engineering,1998,11(1):75～78
孙喜庆.反复高G值暴露对脑的潜在影响及其机制[J].航天医学与医学工程,1998,11(1):75～78
[4] Szaflarski J,Burtrum D,Silverstein FS.Cerebral hypoxia-ischemia stimulates cytokine gene expression in perinatal rats [J].Stroke,1995,26(6):1093～1100
, 百拇医药
[5] CHEN Dechang,LI Hongjiang,JING Bingwen et al.The effect of rhubarb on cytokin expression in liver after theraml injury[J].Chinese Critical Care Med,1999,11(10):587～560
陈德昌，李红江，景炳文等.大黄对烫伤大鼠肝脏内细胞因子基因表达的影响[J].中国危重病急救医学,1999,11(10):587～560
[6] Kaneto H,Morrissey J,Klahr S.Increased expression of TGF-β1 mRNA in the obstructed kidney of rats with unilateral ureteral ligation [J].Kidney, 1993,44(2):313～321
, 百拇医药
[7] Liu T,McDonnell PC,Young PR et al.Interleukin-1β mRNA expression in ischemic rat cortex [J].Stroke,1993,24(11):1746～1751
[8] Liu T,Clark RK,McDonnell PC et al.Tumor necrosis factor-α expression in ischemic neurons [J].Stroke,1994,25(7):1481～1488
[9] Sharief MK,Noori MA,Ciardi M et al.Increased levels of circulation ICAM-1 in serum and serebrospinal fluid of patients with active multipe selerosis,correlation with TNF-α and blood-brain barrier damage [J].J Neuroimmunology,1993,43(1):15～22
, http://www.100md.com
[10] Barme FC, Arvin B,White RF et al.Tumor necrosis factor-α-mediator of focal ischemic brain injury [J].Stroke,1997,28(6):1233～1243
[11] Merrill JE,Benveniste EN.Cytokins in inflamatory brain lesion: helpful and harmful [J].Trends Neurosci,1996,19(18):331～339
[12] Wang X,Barone FC,Aiyar NV et al.Interleukin-1 receptor and receptor antagonist gene expression after focal stroke in rats [J].Stroke,1997,28(1):155～161
[13] Dawson DA,Martion D,Hallenbeck JM et al.Inhibition of tumor necrosis factor-α reduces focal cerebral ischemic injury in spontaneously hyerensive rat [J].Neurosci Letters,1996,218(1):41～44
收稿日期：1999-12-21, 百拇医药