大肠癌中CD44V6、p53、PCNA的表达及意义
作者：刘静贤 李吉友 张培荣 陈柯
单位：张培荣(牡丹江市第二人民医院病理科)；刘静贤 李吉友 陈柯(北京医科大学临床肿瘤医学院病理室 北京100036)
关键词：大肠肿瘤；免疫组织化学；肿瘤转移；CD44V6；基因产物，p53；PCNA
肿瘤000517 摘要：目的 探讨CD44V6、p53、PCNA在大肠癌中的表达与病理及生理学行为之间的关系。方法 采用免疫组化S-P法检测CD44V6、p53、PCNA在51例大肠癌中的表达。结果 51例大肠癌CD44V6阳性表达率41.18%(21/51)。CD44V6在低分化大肠癌的检出率为53.85%(7/13)明显高于高分化大肠癌36.84%(7/19)(P<0.05)，在浆膜外的阳性表达率53.38%(8/15)明显高于肌层33.33%(2/6)(P<0.05)，有淋巴结转移者阳性表达率为63.16%(12/19)明显高于无淋巴结转移者31.25%(10/32)(P<0.05)。p53在51例大肠癌中阳性检出率为50.59%(26/51)，其表达与大肠癌的组织类型、分化程度和淋巴结转移未见明显相关。而与浸润深度呈正相关，p53在浆膜外层的阳性表达率为53.33%(8/15)明显高于肌层33.33%(2/6)(P<0.05)。PCNA的表达与病理分级、浸润深度和淋巴结转移未见显著相关性(P>0.05)。结论 CD44V6的表达与大肠癌的临床病理生理学行为密切相关，而p53与大肠癌浸润深度关系密切。因此CD44V6和p53蛋白可为一个准确预测大肠癌预后的生物学指标。而PCNA作为大肠癌预后的标记物不够理想。
, 百拇医药
中图分类号：R735.34 文献标识码：A
文章编号：1000-7431(2000)05-0362-03
RELATIONSHIP BETWEEN EXPRESSION OF CD44V6,P53,PCNA AND THE PROGNOSIS OF COLORECTAL CARCINOMA
LIU Jing-xian, LI Ji-you,ZHANG Pei-rong, et al.
(Department of Pathology,School of Clinical Oncology, Beijing Medical University, Beijing, 100036,China)
Abstract：Objective To study the relation between the expression of CD44V6, p53 and PCNA and the prognosis of colorectal carcinoma. Methods Immnohistochemical method was used to detect the expression or CD44V6, p53 and PCNA in 51 patients with colorectal cacinoma.Results The positive rate of CD44V6 was 41.18%(21/51). It was 53.85%(7/13) in low differentiated colorectal carcinoma,markedly higher than that in highly differemtiated carcinoma (36.84%,7/19)(P<0.05).The expression rate outside of serosa was 53.34%(8/15), markedly higher than that in muscular layer (33.33%,2/6)(P<0.05)Also, it was much higher in carcinoma with lymph node metastasis (63.16%, 12/19) than that in carcinoma without lymph node metastasis (31.25 %,10/32)(P<0.05).The positive rate of p53 was (50.59% 26/51) and was only related with the depth of infiltration of carcinoma. The expression of p53 in the outer layer of serosa was (53.33%, 8/15),apparently higher than that in muscular layer (33.33%,2/6)(P<0.05),while the expression of PCNA was not related to pathological grade, depth of infiltration and lymph node metastasis (P<0.05).Conclusion The expression of CD44V6 and p53 is correlated with progression and metastasis of colorectal carcinoma, so CD44V6 and p53 may be used as a hopeful marker for predicting the metastastic potential of colorectal carcinoma and the prognosis of these patients.
, 百拇医药
Key words：Colorectal neoplasms; Immunohistochemistry; Neoplasm metastasis; Gene products,p53; PCNA； CD44V6
大肠癌是我国死亡率较高的恶性肿瘤之一，大肠癌患者主要死亡原因是术后转移。临床上尚无可靠的方法预测预后，因此探讨大肠癌转移的分子机制，寻找与大肠癌转移相关的生物标记是大肠癌基因研究和临床研究的重要课题之一。作者选择了CD44V6、p53、PCNA对大肠癌进行标记，并对其表达情况及其临床应用的价值进行探讨。
材料与方法
一、材料 全部病例选自北京大学临床肿瘤学院1997～1999年间大肠癌根治术切除标本共51例，其中男性26例，女性25例，年龄21～79岁，平均年龄54岁。
二、试剂 CD44V6、p53、PCNA单克隆抗体，S-P系列试剂盒等，购自美国ZYMED公司，抗体由北京中山公司分装。
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三、方法 用常规石蜡切片做CD44V6、p53、PCNA的免疫组化方法检测，工作浓度分别为1∶50，1∶200，检测系统为S-P试剂盒美国ZYMED公司检测程序按说明书进行，阴性对照用TBS代替一抗。按全国大肠癌协作组1986年标准进行组织学分类。高分化(管状腺癌Ⅰ级及乳头状腺癌)；中分化(管状腺癌Ⅱ级及粘液腺癌)；低分化(管状腺癌Ⅲ级及印戒细胞癌及未分化癌)。染色结果判断 肿瘤细胞膜或细胞核上出现棕黄或棕褐色颗粒，每张切片选择3个区在400倍视野下，连续记数200个瘤细胞。CD44V6，p53的表达阳性细胞≥30%为阳性病例，阳性细胞<30%为阴性病例。PCNA的表达分四级：(+)着色肿瘤细胞<25%，(++)25%～50%，(+++)50～75%，(++++)>75%。
四、统计学处理 采用卡方检验。
结 果
CD44V6、p53蛋白的阳性表达率分别为41.18%(21/51)、50.98%(26/51)，CD44V6、p53PCNA蛋白的阳性表达与组织学分级，浸润深度和淋巴结转移的关系分别见表1。
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表1 大肠癌CD44V6，p53，PCNA蛋白表达结果
例数
CD44V6
p53
PCNA
+
(%)
+
(%)
+(%)
++(%)
+++(%)
++++(%)
, http://www.100md.com
病理分级
高分化
19
7
(36.84)
12
(63.16)
0
4(21.05)
4(21.05)
11(57.89)
中分化
19
, http://www.100md.com
7
(36.84)
8
(42.11)
4(21.05)
10(52.63)
3(15.79)
2(10.53)
低分化
13
7
(53.85)
6
, http://www.100md.com
(46.15)
2(15.38)
2(15.38)
6(46.15)
3(23.08)
浸润深度
肌层
6
2
(33.33)
2
(33.33)
0
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1(16.67)
2(33.33)
3(50.00)
浆膜(外膜层)
30
11
(36.67)
17
(56.67)
3(10.00)
9(30.00)
9(30.00)
, 百拇医药
9(30.00)
浆膜外层
15
8
(53.34)
8
(53.33)
3(20.00)
6(40.00)
2(13.33)
4(26.66)
淋巴结状况
有转移
, http://www.100md.com
19
12
(63.16)
9
(47.37)
3(15.78)
8(42.17)
4(21.05)
4(21.05)
无转移
32
10
(31.25)
, http://www.100md.com
17
(53.13)
3(9.38)
7(21.88)
10(31.25)
12(37.55)
讨 论 一、CD44V6表达对判断大肠癌预后的意义 CD44V6分子是一种多功能的跨膜蛋白，存在于多种细胞的表面，主要在上皮源性细胞和肿瘤中表达[1]，多数学者认为CD44V6与肿瘤的转移存在相关性。Mulder等[2]发现CD44V6蛋白在50%左右的浸润性结肠癌中表达，并且CD44V6的表达可预示外科根治术后是否出现转移，认为CD44V6的表达与预后不良相关，他认为CD44V6蛋白表达可作为转移的标志。Wielenga等[3]的研究发现没有CD44V6序列表达的一些CD44蛋白出现在结肠癌中的早期阶段，含有V6序列的CD44表达大部分限于肿瘤发展的后期。V6在转移性结肠癌的表达较高。本组结果表明：CD44V6在低分化大肠癌的阳性表达率为53.85%(7/13)明显高于高分化大肠癌36.84%(7/19)(P<0.05)。在浆膜外层的阳性表达率53.34%(8/15)明显高于肌层33.33%(2/6)(P<0.05)，有淋巴结转移的阳性表达率63.16%(12/19)明显高于无淋巴结转移31.25%(10/23)(P<0.05)，这与文献报道结果相一致。表明CD44V6可作为判断大肠癌预后的可靠指标之一。
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二、PCNA表达对大肠癌预后的判断价值
国内外关于PCNA免疫组化在肿瘤的诊断和研究中的应用报道很多[4，5]，AL-shebeber等[8]认为PCNA对肿瘤的分级和预后有价值。本组大肠癌中PCNA阳性表达与病理分级、浸润深度和淋巴结转移状况均无明显差异(P>0.05)。
三、p53表达与大肠癌的关系
在与大肠癌预后有关多项指标的研究中，有人认为p53是判断大肠癌预后较好的指标[6]。而Remvikos等[7]对100例大肠癌进行p53表达研究认为阳性病例复发率高，生存率低。本组研究结果表明p53在51例大肠癌中阳性检出率为50.95%(26/51)。但是p53与大肠癌的组织类型、分化程度和淋巴结转移未见明显相关。而与浸润深度呈正相关，p53在浆膜外层的阳性表达率为53.33%(8/15)明显高于肌层33.33%(2/6)(P<0.05)。本结果显示p53表达情况能作为大肠癌预后的指标。
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小 结
病理分级、淋巴结转移及肿瘤浸润深度一直是临床判断大肠癌预后的可靠依据，作者发现CD44V6、p53是判断大肠癌预后的有效指标，而PCNA作为大肠癌预后的标记物不够理想。
作者简介：刘静贤，女，大学本科，副主任医师。
参考文献
[1]Stamenkovic I, Amiot M, Pesando J, et al. A lymphocyte molecule implicated in lymph node homing is a member of the cartilage link protein family〔J〕. Cell, 1989,56:1057
[2]Mulder JWR, Kruyt PM, Sewnath M, et al. Colorectal cancer prognosis and expression of exon-V6-containing CD44 proteins〔J〕. Cancer,1994,344:1470
, 百拇医药
[3]Wielenga VJ, Heider KH, Offerhaus GJ, et al. Expression of CD44 Variant proteins in human colorectal cancer is related to tumor progression〔J〕. Cancer Res,1993,53:6754
[4]Steven R, Tahan MD, Donna S, et al. Predication of early relapse and shortened survival in patients with breast cancer by proliferating cell nuclear antigen seore〔J〕. Cancer,1993,71:3552
[5]Aaltomaa S, Lipponen P, Syrjanen K, t al. Prognostic value of cell proliferation in breast cancer as determined by proliferous cell nuclear antigen (PCNA) immunostaning〔J〕. Antieancer Res, 1992,12:1281
, 百拇医药
[6]Masahiro W, Toshihiro Y, Kosaku K, et al. Allelie loss of chromosome 17P Mutation of the p53 gene, and mierosatellite instability in Right- and left-sided colorectal cancer〔J〕. Cancer,1996,77 suppl:1688
[7]Remvikos Y, Tominaga O, Hammel P, et al. Increased p53 protein eontent of coloreetal tumor correlates, with poor suvival〔J〕. Br J Cancer,1992,66:758
[8]AL-sheneber, Shibata HR,Sampalisetal. Prognostic significance of proliferating cell nuclear antigen expression in colorectal cancer〔J〕. Cancer, 1993,21(3):170
(收稿日期：2000-02-21), http://www.100md.com
单位：张培荣(牡丹江市第二人民医院病理科)；刘静贤 李吉友 陈柯(北京医科大学临床肿瘤医学院病理室 北京100036)
关键词：大肠肿瘤；免疫组织化学；肿瘤转移；CD44V6；基因产物，p53；PCNA
肿瘤000517 摘要：目的 探讨CD44V6、p53、PCNA在大肠癌中的表达与病理及生理学行为之间的关系。方法 采用免疫组化S-P法检测CD44V6、p53、PCNA在51例大肠癌中的表达。结果 51例大肠癌CD44V6阳性表达率41.18%(21/51)。CD44V6在低分化大肠癌的检出率为53.85%(7/13)明显高于高分化大肠癌36.84%(7/19)(P<0.05)，在浆膜外的阳性表达率53.38%(8/15)明显高于肌层33.33%(2/6)(P<0.05)，有淋巴结转移者阳性表达率为63.16%(12/19)明显高于无淋巴结转移者31.25%(10/32)(P<0.05)。p53在51例大肠癌中阳性检出率为50.59%(26/51)，其表达与大肠癌的组织类型、分化程度和淋巴结转移未见明显相关。而与浸润深度呈正相关，p53在浆膜外层的阳性表达率为53.33%(8/15)明显高于肌层33.33%(2/6)(P<0.05)。PCNA的表达与病理分级、浸润深度和淋巴结转移未见显著相关性(P>0.05)。结论 CD44V6的表达与大肠癌的临床病理生理学行为密切相关，而p53与大肠癌浸润深度关系密切。因此CD44V6和p53蛋白可为一个准确预测大肠癌预后的生物学指标。而PCNA作为大肠癌预后的标记物不够理想。
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中图分类号：R735.34 文献标识码：A
文章编号：1000-7431(2000)05-0362-03
RELATIONSHIP BETWEEN EXPRESSION OF CD44V6,P53,PCNA AND THE PROGNOSIS OF COLORECTAL CARCINOMA
LIU Jing-xian, LI Ji-you,ZHANG Pei-rong, et al.
(Department of Pathology,School of Clinical Oncology, Beijing Medical University, Beijing, 100036,China)
Abstract：Objective To study the relation between the expression of CD44V6, p53 and PCNA and the prognosis of colorectal carcinoma. Methods Immnohistochemical method was used to detect the expression or CD44V6, p53 and PCNA in 51 patients with colorectal cacinoma.Results The positive rate of CD44V6 was 41.18%(21/51). It was 53.85%(7/13) in low differentiated colorectal carcinoma,markedly higher than that in highly differemtiated carcinoma (36.84%,7/19)(P<0.05).The expression rate outside of serosa was 53.34%(8/15), markedly higher than that in muscular layer (33.33%,2/6)(P<0.05)Also, it was much higher in carcinoma with lymph node metastasis (63.16%, 12/19) than that in carcinoma without lymph node metastasis (31.25 %,10/32)(P<0.05).The positive rate of p53 was (50.59% 26/51) and was only related with the depth of infiltration of carcinoma. The expression of p53 in the outer layer of serosa was (53.33%, 8/15),apparently higher than that in muscular layer (33.33%,2/6)(P<0.05),while the expression of PCNA was not related to pathological grade, depth of infiltration and lymph node metastasis (P<0.05).Conclusion The expression of CD44V6 and p53 is correlated with progression and metastasis of colorectal carcinoma, so CD44V6 and p53 may be used as a hopeful marker for predicting the metastastic potential of colorectal carcinoma and the prognosis of these patients.
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Key words：Colorectal neoplasms; Immunohistochemistry; Neoplasm metastasis; Gene products,p53; PCNA； CD44V6
大肠癌是我国死亡率较高的恶性肿瘤之一，大肠癌患者主要死亡原因是术后转移。临床上尚无可靠的方法预测预后，因此探讨大肠癌转移的分子机制，寻找与大肠癌转移相关的生物标记是大肠癌基因研究和临床研究的重要课题之一。作者选择了CD44V6、p53、PCNA对大肠癌进行标记，并对其表达情况及其临床应用的价值进行探讨。
材料与方法
一、材料 全部病例选自北京大学临床肿瘤学院1997～1999年间大肠癌根治术切除标本共51例，其中男性26例，女性25例，年龄21～79岁，平均年龄54岁。
二、试剂 CD44V6、p53、PCNA单克隆抗体，S-P系列试剂盒等，购自美国ZYMED公司，抗体由北京中山公司分装。
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三、方法 用常规石蜡切片做CD44V6、p53、PCNA的免疫组化方法检测，工作浓度分别为1∶50，1∶200，检测系统为S-P试剂盒美国ZYMED公司检测程序按说明书进行，阴性对照用TBS代替一抗。按全国大肠癌协作组1986年标准进行组织学分类。高分化(管状腺癌Ⅰ级及乳头状腺癌)；中分化(管状腺癌Ⅱ级及粘液腺癌)；低分化(管状腺癌Ⅲ级及印戒细胞癌及未分化癌)。染色结果判断 肿瘤细胞膜或细胞核上出现棕黄或棕褐色颗粒，每张切片选择3个区在400倍视野下，连续记数200个瘤细胞。CD44V6，p53的表达阳性细胞≥30%为阳性病例，阳性细胞<30%为阴性病例。PCNA的表达分四级：(+)着色肿瘤细胞<25%，(++)25%～50%，(+++)50～75%，(++++)>75%。
四、统计学处理 采用卡方检验。
结 果
CD44V6、p53蛋白的阳性表达率分别为41.18%(21/51)、50.98%(26/51)，CD44V6、p53PCNA蛋白的阳性表达与组织学分级，浸润深度和淋巴结转移的关系分别见表1。
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表1 大肠癌CD44V6，p53，PCNA蛋白表达结果
例数
CD44V6
p53
PCNA
+
(%)
+
(%)
+(%)
++(%)
+++(%)
++++(%)
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病理分级
高分化
19
7
(36.84)
12
(63.16)
0
4(21.05)
4(21.05)
11(57.89)
中分化
19
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7
(36.84)
8
(42.11)
4(21.05)
10(52.63)
3(15.79)
2(10.53)
低分化
13
7
(53.85)
6
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(46.15)
2(15.38)
2(15.38)
6(46.15)
3(23.08)
浸润深度
肌层
6
2
(33.33)
2
(33.33)
0
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1(16.67)
2(33.33)
3(50.00)
浆膜(外膜层)
30
11
(36.67)
17
(56.67)
3(10.00)
9(30.00)
9(30.00)
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9(30.00)
浆膜外层
15
8
(53.34)
8
(53.33)
3(20.00)
6(40.00)
2(13.33)
4(26.66)
淋巴结状况
有转移
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19
12
(63.16)
9
(47.37)
3(15.78)
8(42.17)
4(21.05)
4(21.05)
无转移
32
10
(31.25)
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17
(53.13)
3(9.38)
7(21.88)
10(31.25)
12(37.55)
讨 论 一、CD44V6表达对判断大肠癌预后的意义 CD44V6分子是一种多功能的跨膜蛋白，存在于多种细胞的表面，主要在上皮源性细胞和肿瘤中表达[1]，多数学者认为CD44V6与肿瘤的转移存在相关性。Mulder等[2]发现CD44V6蛋白在50%左右的浸润性结肠癌中表达，并且CD44V6的表达可预示外科根治术后是否出现转移，认为CD44V6的表达与预后不良相关，他认为CD44V6蛋白表达可作为转移的标志。Wielenga等[3]的研究发现没有CD44V6序列表达的一些CD44蛋白出现在结肠癌中的早期阶段，含有V6序列的CD44表达大部分限于肿瘤发展的后期。V6在转移性结肠癌的表达较高。本组结果表明：CD44V6在低分化大肠癌的阳性表达率为53.85%(7/13)明显高于高分化大肠癌36.84%(7/19)(P<0.05)。在浆膜外层的阳性表达率53.34%(8/15)明显高于肌层33.33%(2/6)(P<0.05)，有淋巴结转移的阳性表达率63.16%(12/19)明显高于无淋巴结转移31.25%(10/23)(P<0.05)，这与文献报道结果相一致。表明CD44V6可作为判断大肠癌预后的可靠指标之一。
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二、PCNA表达对大肠癌预后的判断价值
国内外关于PCNA免疫组化在肿瘤的诊断和研究中的应用报道很多[4，5]，AL-shebeber等[8]认为PCNA对肿瘤的分级和预后有价值。本组大肠癌中PCNA阳性表达与病理分级、浸润深度和淋巴结转移状况均无明显差异(P>0.05)。
三、p53表达与大肠癌的关系
在与大肠癌预后有关多项指标的研究中，有人认为p53是判断大肠癌预后较好的指标[6]。而Remvikos等[7]对100例大肠癌进行p53表达研究认为阳性病例复发率高，生存率低。本组研究结果表明p53在51例大肠癌中阳性检出率为50.95%(26/51)。但是p53与大肠癌的组织类型、分化程度和淋巴结转移未见明显相关。而与浸润深度呈正相关，p53在浆膜外层的阳性表达率为53.33%(8/15)明显高于肌层33.33%(2/6)(P<0.05)。本结果显示p53表达情况能作为大肠癌预后的指标。
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小 结
病理分级、淋巴结转移及肿瘤浸润深度一直是临床判断大肠癌预后的可靠依据，作者发现CD44V6、p53是判断大肠癌预后的有效指标，而PCNA作为大肠癌预后的标记物不够理想。
作者简介：刘静贤，女，大学本科，副主任医师。
参考文献
[1]Stamenkovic I, Amiot M, Pesando J, et al. A lymphocyte molecule implicated in lymph node homing is a member of the cartilage link protein family〔J〕. Cell, 1989,56:1057
[2]Mulder JWR, Kruyt PM, Sewnath M, et al. Colorectal cancer prognosis and expression of exon-V6-containing CD44 proteins〔J〕. Cancer,1994,344:1470
, 百拇医药
[3]Wielenga VJ, Heider KH, Offerhaus GJ, et al. Expression of CD44 Variant proteins in human colorectal cancer is related to tumor progression〔J〕. Cancer Res,1993,53:6754
[4]Steven R, Tahan MD, Donna S, et al. Predication of early relapse and shortened survival in patients with breast cancer by proliferating cell nuclear antigen seore〔J〕. Cancer,1993,71:3552
[5]Aaltomaa S, Lipponen P, Syrjanen K, t al. Prognostic value of cell proliferation in breast cancer as determined by proliferous cell nuclear antigen (PCNA) immunostaning〔J〕. Antieancer Res, 1992,12:1281
, 百拇医药
[6]Masahiro W, Toshihiro Y, Kosaku K, et al. Allelie loss of chromosome 17P Mutation of the p53 gene, and mierosatellite instability in Right- and left-sided colorectal cancer〔J〕. Cancer,1996,77 suppl:1688
[7]Remvikos Y, Tominaga O, Hammel P, et al. Increased p53 protein eontent of coloreetal tumor correlates, with poor suvival〔J〕. Br J Cancer,1992,66:758
[8]AL-sheneber, Shibata HR,Sampalisetal. Prognostic significance of proliferating cell nuclear antigen expression in colorectal cancer〔J〕. Cancer, 1993,21(3):170
(收稿日期：2000-02-21), http://www.100md.com