MTS1/p16基因表达与胆囊癌淋巴结转移相关性研究
王贵和 赵铁军 夏飞 孙学士
关键词：MTS1 p16 胆囊癌 免疫组化 预后
胆囊癌是胆道系统常见的恶性肿瘤，其早期诊断率、手术切除率及5年生存率均较低，预后极差。转移是影响胆囊癌预后的重要因素，大量临床资料证明，仅靠经典的临床分期，病理组织分级判断预后和转移已显不足，因而从肿瘤生物学角度认识并寻找更合理、更准确预测转移的检测方法和指标是一研究热点。p16是近年来发现的一种新型抑癌基因，其突变或缺失存在于多种人类恶性肿瘤中，与肿瘤的发生发展及转移潜能密切相关，因而有可能成为一项独立的预后指标。本文运用免疫组化方法对38例胆囊组织中p16基因的表达进行检测，为探索胆囊癌的转移及预后提供分子生物学基础。
1 材料与方法
1.1 材料
, http://www.100md.com
38例胆囊癌组织均取自于手术标本，经10%福尔马林固定石蜡切片包埋后存档，标本均行5μm连续切片。取2张，1张做HE染色复查诊断，另1张行免疫组化研究。
1.2 试剂及免疫组化染色(s-p法)
一抗为免抗人MTS1/p16多克隆抗体，由美国Maxim生物技术公司生产，稀释浓度为1∶50，SP试剂盒购自Dako公司。石蜡切片常规脱蜡至水，经过氧化酶阻断溶液浸泡15分钟，10%正常山羊血清封闭非特异性背景15分钟，依次加入一抗(37℃，90分钟)，二抗(生物素化羊抗免IgG，15分钟)，复合物(链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶溶液，15分钟)。上述各步间均以PBS(pH值7.4)缓冲液浸洗3次，每次5分钟，DAB显色，苏木精复染，常规脱水，透明、封片。用已知阳性切片作为阳性对照，PBS代替一抗作为阴性对照。
1.3 结果判断及统计分析
, 百拇医药
以细胞核及肥浆呈棕黄色或棕竭色着色的细胞数≥25%者为p16阳性表达病例。统计学处理采用卡方检验。
2 结果
本组淋巴结转移阳性的21例胆囊癌组织中p16呈阳性表达5例，阳性反应率为23.8%，淋巴结转移阴性的17例胆囊癌组织中p16呈阳性表达12例，阳性反应率为70.6%，二者统计学差异显著(P<0.05)。10例转移淋巴结组织中p16呈阳性表达2例，阳性反应率为20%，12例阴性淋巴结组织中p16呈阳性表达10例，阳性反应率为83.3%，差异显著(P<0.01)。
3 小结
p16基因又称多肿瘤抑制基因1(MTS1)，是1994年6月由美国盐湖城Kamb和Kolnick报道的一种新型抑癌基因，位于人类第9号染色体短臂(9P21)上，由3个外显子和2个内含子组成，其中307bp组成的外显子2编码一个16KD的蛋白，即p16蛋白。目前认为，细胞周期的正常演进需要细胞周期依赖激酶CDKs的活化，并通过周期蛋白和抑制蛋白完成正负平衡调节，MTS1/p16的基本生物学作用就是抑制CDK4和CDK6从而可以调节Rb的磷酸化，通过E2F的不断分裂，导致细胞的生长抑制。实验证明：MTS1/p16基因在人类多种肿瘤及细胞系中存在灭活现象，其灭活机理主要为缺失，突变和甲基化等。
, 百拇医药
TMS1/p16基因缺失可能使肿瘤细胞获得了生长优势，恶性程度增加，因此有人推测MTS1/p16基因改变有可能是肿瘤发展的晚期事件，与肿瘤的侵袭及淋巴结转移密切相关。我们通过SP免疫组织化学方法检测了38例胆囊癌组织中MTS1/p16基因表达，结果显示：淋巴结转移的病例MTS1/p16基因表达明显低于无淋巴转移者，而10例转移淋巴结组织中，MTS1/p16阳性表达率仅为20%。说明MTS1/p16基因表达与淋巴结转移呈显著负相关，检测MTS1/p16基因表达可能对临床预测胆囊癌淋巴结转移趋势和判断预后有重要价值。
作者单位：王贵和(铜陵市人民医院普外二科 安徽省铜陵市 244000)
赵铁军(铜陵市人民医院普外二科 安徽省铜陵市 244000)
夏飞(铜陵市人民医院普外二科 安徽省铜陵市 244000)
孙学士(铜陵市人民医院普外二科 安徽省铜陵市 244000), 百拇医药
关键词：MTS1 p16 胆囊癌 免疫组化 预后
胆囊癌是胆道系统常见的恶性肿瘤，其早期诊断率、手术切除率及5年生存率均较低，预后极差。转移是影响胆囊癌预后的重要因素，大量临床资料证明，仅靠经典的临床分期，病理组织分级判断预后和转移已显不足，因而从肿瘤生物学角度认识并寻找更合理、更准确预测转移的检测方法和指标是一研究热点。p16是近年来发现的一种新型抑癌基因，其突变或缺失存在于多种人类恶性肿瘤中，与肿瘤的发生发展及转移潜能密切相关，因而有可能成为一项独立的预后指标。本文运用免疫组化方法对38例胆囊组织中p16基因的表达进行检测，为探索胆囊癌的转移及预后提供分子生物学基础。
1 材料与方法
1.1 材料
, http://www.100md.com
38例胆囊癌组织均取自于手术标本，经10%福尔马林固定石蜡切片包埋后存档，标本均行5μm连续切片。取2张，1张做HE染色复查诊断，另1张行免疫组化研究。
1.2 试剂及免疫组化染色(s-p法)
一抗为免抗人MTS1/p16多克隆抗体，由美国Maxim生物技术公司生产，稀释浓度为1∶50，SP试剂盒购自Dako公司。石蜡切片常规脱蜡至水，经过氧化酶阻断溶液浸泡15分钟，10%正常山羊血清封闭非特异性背景15分钟，依次加入一抗(37℃，90分钟)，二抗(生物素化羊抗免IgG，15分钟)，复合物(链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶溶液，15分钟)。上述各步间均以PBS(pH值7.4)缓冲液浸洗3次，每次5分钟，DAB显色，苏木精复染，常规脱水，透明、封片。用已知阳性切片作为阳性对照，PBS代替一抗作为阴性对照。
1.3 结果判断及统计分析
, 百拇医药
以细胞核及肥浆呈棕黄色或棕竭色着色的细胞数≥25%者为p16阳性表达病例。统计学处理采用卡方检验。
2 结果
本组淋巴结转移阳性的21例胆囊癌组织中p16呈阳性表达5例，阳性反应率为23.8%，淋巴结转移阴性的17例胆囊癌组织中p16呈阳性表达12例，阳性反应率为70.6%，二者统计学差异显著(P<0.05)。10例转移淋巴结组织中p16呈阳性表达2例，阳性反应率为20%，12例阴性淋巴结组织中p16呈阳性表达10例，阳性反应率为83.3%，差异显著(P<0.01)。
3 小结
p16基因又称多肿瘤抑制基因1(MTS1)，是1994年6月由美国盐湖城Kamb和Kolnick报道的一种新型抑癌基因，位于人类第9号染色体短臂(9P21)上，由3个外显子和2个内含子组成，其中307bp组成的外显子2编码一个16KD的蛋白，即p16蛋白。目前认为，细胞周期的正常演进需要细胞周期依赖激酶CDKs的活化，并通过周期蛋白和抑制蛋白完成正负平衡调节，MTS1/p16的基本生物学作用就是抑制CDK4和CDK6从而可以调节Rb的磷酸化，通过E2F的不断分裂，导致细胞的生长抑制。实验证明：MTS1/p16基因在人类多种肿瘤及细胞系中存在灭活现象，其灭活机理主要为缺失，突变和甲基化等。
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TMS1/p16基因缺失可能使肿瘤细胞获得了生长优势，恶性程度增加，因此有人推测MTS1/p16基因改变有可能是肿瘤发展的晚期事件，与肿瘤的侵袭及淋巴结转移密切相关。我们通过SP免疫组织化学方法检测了38例胆囊癌组织中MTS1/p16基因表达，结果显示：淋巴结转移的病例MTS1/p16基因表达明显低于无淋巴转移者，而10例转移淋巴结组织中，MTS1/p16阳性表达率仅为20%。说明MTS1/p16基因表达与淋巴结转移呈显著负相关，检测MTS1/p16基因表达可能对临床预测胆囊癌淋巴结转移趋势和判断预后有重要价值。
作者单位：王贵和(铜陵市人民医院普外二科 安徽省铜陵市 244000)
赵铁军(铜陵市人民医院普外二科 安徽省铜陵市 244000)
夏飞(铜陵市人民医院普外二科 安徽省铜陵市 244000)
孙学士(铜陵市人民医院普外二科 安徽省铜陵市 244000), 百拇医药