血清CagA IgG在根除幽门螺杆菌过程中的诊断价值
作者：杨致邦 辜明铭 王丕龙 陈立好 李华平 陈全
单位：重庆医科大学微生物学教研室400016
关键词：
重庆医学000615
多年来，众多学者的研究表明幽门螺杆菌(Helicobacter pylo ri,Hp)是慢性胃炎、消化性溃疡及胃癌等多种胃疾病的重要致病因素，根除Hp感染已具有重 要的临床意义[1]。但根除效果的观察较困难，常需经胃镜取胃粘膜组织。多次检 查，病人难以接受。国外资料报道，Hp被清除后，血清特异IgG明显下降，但所需时间长， 且难以降至正常水平[2]。近年的研究表明，临床分离的Hp可分为产细胞空泡毒素( Vacuolating cytotoxin,Vac)的Toxin+和不产Vac的Toxin-两种类型，所有的Toxin+ 株能表达一种蛋白质，称为细胞毒相关基因抗原(cytotoxin associated gene antigen,Cag A)。CagA在Hp中含量极微，却能引起强烈的免疫反应。消化性溃疡伴Hp感染者血清中多能检 出CagA抗体，检测血清CagA特异IgG是诊断Toxin+株感染的敏感方法[3]，但对 根除Hp过程中CagA IgG的变化尚不了解。本文对消化性溃疡伴Hp感染者，用药物根除Hp，以 细菌学诊断为金标准，用ELISA法检测血清CagA IgG和全细胞抗原(whole-cell antigen,WcA )IgG，并进行较长时间随访，以探讨血清CagA IgG在根除Hp过程中的临床意义。
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1 材料和方法
1.1 研究对象
自1998年6月至1999年2月，随机选取本校第一医院消化科门诊经内镜诊断为消化性溃疡，并 经细菌学诊断为伴有Hp感染患者73例，其中男性41例，女性32例，年龄范围为24～60岁，平 均年龄37岁。
1.2 药物治疗方案
采用小剂量三联疗法，即铋剂110mg，四环素250mg，甲硝唑200mg,Tid×14天。
1.3 标本采集
在用药前，用药后第9周、20周同时取胃粘膜和血清标本。胃粘膜标本在空腹时经内镜取胃 窦大弯侧距幽门约3cm处组织三块，分别用于直接涂片镜检、快速脲素酶试验和PCR检测。血 清标本取静脉血2ml，分离血清置-18℃冰箱保存。
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1.4 细菌学诊断
直接镜检采用革兰氏染色法，以镜下观察到典型形态HP判断为阳性。直接脲酶试验采用湿性 滤纸片法，以1hr内变色者判为阳性。PCR采用直接法，引物1：5′--TGGCGTGTCTATTGACAG CGAGC--3′，引物2：5′--CCTGCTGGGCATACTTCACCATG--3′(由北京富百盛生物公司 合成)，参照H.0.Sheng-sang的方法操作[4]。上述三项指标中任二项阳性判为Hp 感染。为确保诊断的可靠性，不收集单项阳性的病例。
1.5 血清抗体检测
CagA IgG ELISA试剂盒为售品(上海晶莹生物技术有限公司生产 批号：980322)，该试剂采 用基因工程表达CagA蛋白，经纯化后作为抗原而制备，诊断Toxin+株Hp感染有较高的特 异性和敏感性(胃溃疡阳性率为73.0%，十二指肠溃疡阳性率为94.4%)[5，6]。在 试验中，严格按说明书操作。WcA IgG ELISA试剂为本室参照Martin的方法自行制备[7 ]。采用间接法，将临床分离纯培养的20佘株Hp经反复冻融后超声波击碎，中速离心取上 清液作为抗原，以0.5μg/孔蛋白量包被，待测血清1：100稀释，酶标羊抗人IgG工作浓度 为1：800(美国BioRad公司售品)。结果用酶标仪(DG3022A 型，南京)于波长450nm处读取光 密度值(OD)。该试剂经检验诊断Hp感染具有较高的特异性和敏感性[8，9]。参照Bi oRad公司全细胞抗原IgG试剂盒的标准血清和本院Hp阳性、阴性患者血清各20份的检测结果 ，将CagAIgG和WcA IgG的阳性判断值分别定为OD≥0.41和OD≥0.60。
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2 结果
73例消化性溃疡伴Hp感染者，CagA IgG阳性55例，阳性率为75.3%。WcA IgG阳性71例，阳 性率为97.3%。药物治疗后，以细菌学诊断为标准，并按Hp根除效果将患者分为三组：1、 转阴组 即第9、20周均阴性者：2、阴性后阳转组，即第9周阴性、第20周阳性者；3、无效 组，即第9、20周均阳性者。三组患者WcA IgG和CagA IgG滴度均值变化见表1。
表1 三组患者WcA IgG和CagA IgG滴度均值变化 分组
病例数
(n)
治疗前
(OD)
治疗后第 9周
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(OD)
治疗后第20周
(OD)
CagA
WcA
CagA
WcA
CagA
WcA
CagA
W cA
阴转组
30
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38
0.6 66
1.010
0.493
0.819
0.382
0.759
阴性后阳转组
10
15
0.633
0.912
0.503
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0.804
0.818
1.060
无效组
15
18
0.646
0.960
0.710
0.995
0.700
1.060
WcA IgG随访结果：转阴组患者38例，抗体滴度呈明显下降变化，第9周时的下降率为18 .9%，第20周时的下降率为24.9%。第9周时无1例降至正常水平，第20周时有4例降至正常 水平。阴性后阳转组患者10例，抗体滴度呈先下降后升高变化，第9周时的下降率为11.8% ，第20周时的上升率为16.2%。无效组患者15例，抗体滴度呈上升趋势，第9周时的上升率 为3.6%，第20周时的上升率为10.4%。
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CagA IgG随访结果：三组患者抗体滴度变化规律与WcA IgG相似。在30例转阴者中，第9周时 的下降率为26.0%，第20周时的下降率为42.6%。第9周时有10例降至正常水平，第20周时 有18例降至正常水平。在10例阴性后阳转者中，第9周时的下降率为24.9%，第20周时的上 升率为29.2%。在15例无效者中，第9周时的上升率为9.9%，第20周时的上升率为8.3%。 三组患者WcA IgG和CagA IgG变化曲线见图1。
图1 三组患者WcA IgG和CagA IgG变化曲线
3 讨论
本试验中，抗生素治疗前检测结果，以细菌学诊断为金标准，WcA IgG的阳性率为97.3%， 与1997年Martin的报道相近[7]。CagA IgG的阳性率为75.3%，略低于1998年Qrsin e的报道(DU=86.1%、GU=96.4%)[10]，但高于1996年Graham的报道(59.0%) [11]。
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WcA IgG在治疗后第9、20周的变化与Kounen的报道相似[12]，与治疗前相比，转阴 组滴度的下降有显著性差异(t=4.83、6.51，P<0.01)；阴性后阳转组滴度的变化无 显著性差异(t=1.55，1.88，P>0.05)；而无效组滴度的变化亦无显著性差异(t=1.0 3、1.62，P>0.05)。
CagA IgG在治疗后的变化与WcA IgG的变化相似，转阴组滴度的下降有显著性差异(t=4.67 、8.99，P<0.01)。阴性后阳转组的变化、无效组滴度的升高均无显著性差异(t=2.1 2、2.09，1.96、1.16，P>0.05)。
将CagA IgG在治疗后第9周，20周的变化与WcA IgG比较，三组患者间的变化均无显著性差异 ；转阴组(t=0.07、0.78，P>0.05)，阴性后阳转组(t=0.222、0.10，P>0.05 )，无效组(t=0.43、0.69，P>0.05)。
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从降至正常值的例数比较，CagA IgG与WcA IgG间有显著性差异(X2＝12.3、16.6 ，P<0.01)。
以上结果表明，在根除Hp过程中，CagA IgG同WcA IgG一样，随Hp根除效果而变化。而CagA IgG以降至正常水平的病例出现早，数量多比WcA IgG的变化更为明显。因为CagA为纯抗原， 虽然Hp感染后细菌分泌的量少，刺激机体产生的抗体比全细胞抗原水平低，但特异性高，因 此Hp被根除后CagA IgG更容易降至正常水平。由于消化性溃疡Hp感染多为产细胞毒株，因而 检测血清CagA IgG是观察消化性溃疡患者Hp根除效果的更好指标。
参考文献
1，Parsonnet Friedmsn GD,Vandersteen DP.Helicobacter pylori infec tion and the risk of gastric carcinoma.N Engl J Med,1991,325:1127～1131
, 百拇医药
2，Arthur J,Ali Mr,Nicholson G I et al.Long-term follow-up of vol untary ingestion of Helicobacter pylori.Annals of internal Medicine,1991,114(8): 662～663
3，胡伏莲，重视幽门螺杆菌的研究.中华消化杂志，1998，18(2)：67～6 8
4，Ho SA,Hoyle JA,lewis FA,et al.Direct polymerase chain reaction test for detection of Helicobacter pylori in human and animals.J Clini Microbio l,1991,29(11):2543～2547
5，Cover TL,Glupczynskiy,Lage AP,et al.Serologic detection of inf ection with CagA+ Helicobacter pylori strains.J Clini Microbiol,1995,33(6):149 6～1500
, http://www.100md.com
6，张晓薇，杨小青，李志远，等.产细胞毒素幽门螺杆菌抗体检测的应用 价值.实用医技杂志，1997，4(11)：826～827
7，Martin DAC,Boixeda D,Canton R,et al.Usefulness of the combined IgG and IgA antibody determinations for serodiagnosis of Helicobacter pylori in fection.Eur J Gastroenterol Hepatol,1997,9(12):1191～1196
8，陈全，杨致邦，赵旭东，等.ELISA法检测血清幽门螺杆菌IgG抗体正常 效价及应用价值.中国临床医药学与卫生学，1999，564～566
9，王丕龙，杨致邦，余建平，等.清除门螺杆菌过程中血清特异性IgG.Ig A.IgM的变化.中国人兽共患病杂志，1998，14(5)：66～68
, 百拇医药
10，Orsine-B,Ciancio G, Surrenti E,et al.Serologic detection of C agA positive Helicobac ter pylori infection in a northern Italinan population its association with pept ic ulcer disease.Helicobacter,1998,3(1):15～20
11，Graham-DY, Genta Rm, Crabtree JE, et al. Serum CagA antidodie s in asymptomatic subjects and patients with peptic ulcer: lack of correlation of IgG antibody in patients with peptic ulcer of asymptomatic Helicobacter pylori gastritis.J Clin Pathol,1996,4 9(10:829～832
12，Kosunen TU, Seppala K, Srna-S,et al.Diagnostic value of decre asing IgG,IgA and IgM ant ibody titres eradication of Helicobacter pylori,The Lancet,1992,339(11):893～895
, 百拇医药
单位：重庆医科大学微生物学教研室400016
关键词：
重庆医学000615
多年来，众多学者的研究表明幽门螺杆菌(Helicobacter pylo ri,Hp)是慢性胃炎、消化性溃疡及胃癌等多种胃疾病的重要致病因素，根除Hp感染已具有重 要的临床意义[1]。但根除效果的观察较困难，常需经胃镜取胃粘膜组织。多次检 查，病人难以接受。国外资料报道，Hp被清除后，血清特异IgG明显下降，但所需时间长， 且难以降至正常水平[2]。近年的研究表明，临床分离的Hp可分为产细胞空泡毒素( Vacuolating cytotoxin,Vac)的Toxin+和不产Vac的Toxin-两种类型，所有的Toxin+ 株能表达一种蛋白质，称为细胞毒相关基因抗原(cytotoxin associated gene antigen,Cag A)。CagA在Hp中含量极微，却能引起强烈的免疫反应。消化性溃疡伴Hp感染者血清中多能检 出CagA抗体，检测血清CagA特异IgG是诊断Toxin+株感染的敏感方法[3]，但对 根除Hp过程中CagA IgG的变化尚不了解。本文对消化性溃疡伴Hp感染者，用药物根除Hp，以 细菌学诊断为金标准，用ELISA法检测血清CagA IgG和全细胞抗原(whole-cell antigen,WcA )IgG，并进行较长时间随访，以探讨血清CagA IgG在根除Hp过程中的临床意义。
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1 材料和方法
1.1 研究对象
自1998年6月至1999年2月，随机选取本校第一医院消化科门诊经内镜诊断为消化性溃疡，并 经细菌学诊断为伴有Hp感染患者73例，其中男性41例，女性32例，年龄范围为24～60岁，平 均年龄37岁。
1.2 药物治疗方案
采用小剂量三联疗法，即铋剂110mg，四环素250mg，甲硝唑200mg,Tid×14天。
1.3 标本采集
在用药前，用药后第9周、20周同时取胃粘膜和血清标本。胃粘膜标本在空腹时经内镜取胃 窦大弯侧距幽门约3cm处组织三块，分别用于直接涂片镜检、快速脲素酶试验和PCR检测。血 清标本取静脉血2ml，分离血清置-18℃冰箱保存。
, 百拇医药
1.4 细菌学诊断
直接镜检采用革兰氏染色法，以镜下观察到典型形态HP判断为阳性。直接脲酶试验采用湿性 滤纸片法，以1hr内变色者判为阳性。PCR采用直接法，引物1：5′--TGGCGTGTCTATTGACAG CGAGC--3′，引物2：5′--CCTGCTGGGCATACTTCACCATG--3′(由北京富百盛生物公司 合成)，参照H.0.Sheng-sang的方法操作[4]。上述三项指标中任二项阳性判为Hp 感染。为确保诊断的可靠性，不收集单项阳性的病例。
1.5 血清抗体检测
CagA IgG ELISA试剂盒为售品(上海晶莹生物技术有限公司生产 批号：980322)，该试剂采 用基因工程表达CagA蛋白，经纯化后作为抗原而制备，诊断Toxin+株Hp感染有较高的特 异性和敏感性(胃溃疡阳性率为73.0%，十二指肠溃疡阳性率为94.4%)[5，6]。在 试验中，严格按说明书操作。WcA IgG ELISA试剂为本室参照Martin的方法自行制备[7 ]。采用间接法，将临床分离纯培养的20佘株Hp经反复冻融后超声波击碎，中速离心取上 清液作为抗原，以0.5μg/孔蛋白量包被，待测血清1：100稀释，酶标羊抗人IgG工作浓度 为1：800(美国BioRad公司售品)。结果用酶标仪(DG3022A 型，南京)于波长450nm处读取光 密度值(OD)。该试剂经检验诊断Hp感染具有较高的特异性和敏感性[8，9]。参照Bi oRad公司全细胞抗原IgG试剂盒的标准血清和本院Hp阳性、阴性患者血清各20份的检测结果 ，将CagAIgG和WcA IgG的阳性判断值分别定为OD≥0.41和OD≥0.60。
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2 结果
73例消化性溃疡伴Hp感染者，CagA IgG阳性55例，阳性率为75.3%。WcA IgG阳性71例，阳 性率为97.3%。药物治疗后，以细菌学诊断为标准，并按Hp根除效果将患者分为三组：1、 转阴组 即第9、20周均阴性者：2、阴性后阳转组，即第9周阴性、第20周阳性者；3、无效 组，即第9、20周均阳性者。三组患者WcA IgG和CagA IgG滴度均值变化见表1。
表1 三组患者WcA IgG和CagA IgG滴度均值变化 分组
病例数
(n)
治疗前
(OD)
治疗后第 9周
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(OD)
治疗后第20周
(OD)
CagA
WcA
CagA
WcA
CagA
WcA
CagA
W cA
阴转组
30
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38
0.6 66
1.010
0.493
0.819
0.382
0.759
阴性后阳转组
10
15
0.633
0.912
0.503
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0.804
0.818
1.060
无效组
15
18
0.646
0.960
0.710
0.995
0.700
1.060
WcA IgG随访结果：转阴组患者38例，抗体滴度呈明显下降变化，第9周时的下降率为18 .9%，第20周时的下降率为24.9%。第9周时无1例降至正常水平，第20周时有4例降至正常 水平。阴性后阳转组患者10例，抗体滴度呈先下降后升高变化，第9周时的下降率为11.8% ，第20周时的上升率为16.2%。无效组患者15例，抗体滴度呈上升趋势，第9周时的上升率 为3.6%，第20周时的上升率为10.4%。
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CagA IgG随访结果：三组患者抗体滴度变化规律与WcA IgG相似。在30例转阴者中，第9周时 的下降率为26.0%，第20周时的下降率为42.6%。第9周时有10例降至正常水平，第20周时 有18例降至正常水平。在10例阴性后阳转者中，第9周时的下降率为24.9%，第20周时的上 升率为29.2%。在15例无效者中，第9周时的上升率为9.9%，第20周时的上升率为8.3%。 三组患者WcA IgG和CagA IgG变化曲线见图1。
图1 三组患者WcA IgG和CagA IgG变化曲线
3 讨论
本试验中，抗生素治疗前检测结果，以细菌学诊断为金标准，WcA IgG的阳性率为97.3%， 与1997年Martin的报道相近[7]。CagA IgG的阳性率为75.3%，略低于1998年Qrsin e的报道(DU=86.1%、GU=96.4%)[10]，但高于1996年Graham的报道(59.0%) [11]。
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WcA IgG在治疗后第9、20周的变化与Kounen的报道相似[12]，与治疗前相比，转阴 组滴度的下降有显著性差异(t=4.83、6.51，P<0.01)；阴性后阳转组滴度的变化无 显著性差异(t=1.55，1.88，P>0.05)；而无效组滴度的变化亦无显著性差异(t=1.0 3、1.62，P>0.05)。
CagA IgG在治疗后的变化与WcA IgG的变化相似，转阴组滴度的下降有显著性差异(t=4.67 、8.99，P<0.01)。阴性后阳转组的变化、无效组滴度的升高均无显著性差异(t=2.1 2、2.09，1.96、1.16，P>0.05)。
将CagA IgG在治疗后第9周，20周的变化与WcA IgG比较，三组患者间的变化均无显著性差异 ；转阴组(t=0.07、0.78，P>0.05)，阴性后阳转组(t=0.222、0.10，P>0.05 )，无效组(t=0.43、0.69，P>0.05)。
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从降至正常值的例数比较，CagA IgG与WcA IgG间有显著性差异(X2＝12.3、16.6 ，P<0.01)。
以上结果表明，在根除Hp过程中，CagA IgG同WcA IgG一样，随Hp根除效果而变化。而CagA IgG以降至正常水平的病例出现早，数量多比WcA IgG的变化更为明显。因为CagA为纯抗原， 虽然Hp感染后细菌分泌的量少，刺激机体产生的抗体比全细胞抗原水平低，但特异性高，因 此Hp被根除后CagA IgG更容易降至正常水平。由于消化性溃疡Hp感染多为产细胞毒株，因而 检测血清CagA IgG是观察消化性溃疡患者Hp根除效果的更好指标。
参考文献
1，Parsonnet Friedmsn GD,Vandersteen DP.Helicobacter pylori infec tion and the risk of gastric carcinoma.N Engl J Med,1991,325:1127～1131
, 百拇医药
2，Arthur J,Ali Mr,Nicholson G I et al.Long-term follow-up of vol untary ingestion of Helicobacter pylori.Annals of internal Medicine,1991,114(8): 662～663
3，胡伏莲，重视幽门螺杆菌的研究.中华消化杂志，1998，18(2)：67～6 8
4，Ho SA,Hoyle JA,lewis FA,et al.Direct polymerase chain reaction test for detection of Helicobacter pylori in human and animals.J Clini Microbio l,1991,29(11):2543～2547
5，Cover TL,Glupczynskiy,Lage AP,et al.Serologic detection of inf ection with CagA+ Helicobacter pylori strains.J Clini Microbiol,1995,33(6):149 6～1500
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6，张晓薇，杨小青，李志远，等.产细胞毒素幽门螺杆菌抗体检测的应用 价值.实用医技杂志，1997，4(11)：826～827
7，Martin DAC,Boixeda D,Canton R,et al.Usefulness of the combined IgG and IgA antibody determinations for serodiagnosis of Helicobacter pylori in fection.Eur J Gastroenterol Hepatol,1997,9(12):1191～1196
8，陈全，杨致邦，赵旭东，等.ELISA法检测血清幽门螺杆菌IgG抗体正常 效价及应用价值.中国临床医药学与卫生学，1999，564～566
9，王丕龙，杨致邦，余建平，等.清除门螺杆菌过程中血清特异性IgG.Ig A.IgM的变化.中国人兽共患病杂志，1998，14(5)：66～68
, 百拇医药
10，Orsine-B,Ciancio G, Surrenti E,et al.Serologic detection of C agA positive Helicobac ter pylori infection in a northern Italinan population its association with pept ic ulcer disease.Helicobacter,1998,3(1):15～20
11，Graham-DY, Genta Rm, Crabtree JE, et al. Serum CagA antidodie s in asymptomatic subjects and patients with peptic ulcer: lack of correlation of IgG antibody in patients with peptic ulcer of asymptomatic Helicobacter pylori gastritis.J Clin Pathol,1996,4 9(10:829～832
12，Kosunen TU, Seppala K, Srna-S,et al.Diagnostic value of decre asing IgG,IgA and IgM ant ibody titres eradication of Helicobacter pylori,The Lancet,1992,339(11):893～895
, 百拇医药