乙型肝炎患者血清白细胞介素6和血小板源生长因子水平与肝纤维化关系
作者：彭小斌 张国安 刘小朋 陈紫榕 施水兰
单位：解放军476医院传染科 福州 350002
关键词：乙型肝炎；白细胞介素6；血小板源生长因子；肝纤维化
中国现代医学杂志000619 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和细胞生物活性法检测了80例乙型肝炎患者白细胞介素6(IL-6)和血小板源生长因子(PDGF)水平，结果表明：急性肝炎、慢性肝炎和肝硬化患者的IL-6和PDGF的活性明显高于正常对照组，且与患者的血清Ⅲ型前胶原肽(PCⅢ)含量密切相关，揭示IL-6和PDGF活性的变化可能与肝纤维化的发病机制有关。
分类号 R512.6+2
肝纤维化是各种慢性肝病发展为肝硬化的必经病理过程，且进一步可发展为肝癌。探讨早期诊断肝纤维化，动态观察肝纤维化过程的临床指标并阻断慢性肝炎向肝硬化转化是一项重要的研究课题。肝硬化的前期病理学变化是肝纤维化，近年的研究表明，细胞因子对细胞外基质，尤其是胶原蛋白的代谢有重要的调节作用[1]。我们于1996年6月～1997年4月对80例乙型肝炎患者进行了白细胞介素6(IL-6)和血小板源生长因子(PDGF)水平的检测并与患者血清Ⅲ型前胶原肽(PCⅢ)含量进行比较，以探讨IL-6和PDGF与肝纤维化的关系。
, 百拇医药
1 对象与方法
1.1 研究对象
根据1995年(北京)全国传染病寄生虫病会议修订的标准，收集急性肝炎18例(男13例，女5例，年龄21～48岁，平均32.6岁)；慢性肝炎42例(男31例，女11例，年龄26～54岁，平均34.8岁)；肝硬变20例(男16例，女4例，年龄36～57岁，平均年龄45.2岁)。所有检测对象在1个月内未服用过糖皮质激素类药物。对照组为健康献血员20名(男10名，女10名，肝炎病毒标志物为阴性，肝功能正常)。
1.2 血清学检测
血清IL-6活性的检测：采用IL-6依赖的B9.9细胞增殖MTT染色法[2]。B9.9细胞株由荷兰Aarden博士惠赠，IL-6标准品由日本大板大学工学部提供。血浆PDGF活性的检测：采用细胞生物活性[3]，以1%FBS促进L929细胞增殖活性的表达值为PDGF的一个活性单位，测值以u/ml表示。血清PCⅢ含量的检测：RIA法(重庆肿瘤研究所提供试剂盒)，以μg/L为单位。血清HBV DNA的检测：PC法(军事医学科学院提供试剂盒。)
, 百拇医药
1.3 统计学处理
组间均数的比较采用t检验，各指标相关分析采用直线相关分析。
2 结果
2.1 各型肝炎患者IL-6、PDGF活性的变化与PCⅢ水平的关系
表1示，与正常对照组相比，各型肝炎患者的IL-6活性均有不同程度的升高，且与血清PCⅢ的含量密切相关(r=0.61,P<0.01)。各型肝炎患者的PDGF活性也有不同程度的升高，与血清中的PCⅢ含量呈正相关(r=0.75,P<0.01)。另外，急性肝炎、慢性肝炎和肝硬化组的IL-6水平各相互比较，无显著差异(P>0.05)。而慢性肝炎和肝硬化组的PDGF和PCⅢ水平与急性肝炎组比均有显著差异(P<0.01)。但慢性肝炎组和肝硬化组相比无显著差异(P>0.05)。
附表 各型肝炎患者IL-6、PDGF活性与PCⅢ水平的关系 组别
, 百拇医药
n
IL-6(u/ml)
PDGF(u/ml)
PCⅢ(μg/L)
正常对照组
20
<5
35±10
82.7±10.9
急性肝炎
18
8.26±1.722)
, 百拇医药
74±271)
121.2±30.11)
慢性肝炎
42
9.53±3.842)
127±412)
168±36.62)
肝硬化
20
8.49±1.662)
142±452)
, 百拇医药
185.2±43.82)
注：1)与对照组相比较P<0.05
2)与对照组相比较P<0.01
2.2 HBV DNA阴、阳性肝炎患者血清IL-6、PDGF活性的比较 在80例肝炎患者中有57例HBV DNA阳性，23例为阴性。HBV DNA阳性组患者血清IL-6、PDGF水平平均为(13.66±3.92)u/ml和(194±71)u/ml。阴性组分别为(7.12±2.01)u/ml和(41±12)u/ml。统计学比较HBV DNA阳性组IL-6和PDGF均明显高于HBV DNA阴性组(P<0.01)。
3 讨论
在慢性肝病的发展过程中，肝脏纤维化的形成是一个缓慢而复杂的过程，其中产生胶原蛋白的细胞被激活合成大量的细胞外基质(ECM)是病变形成的重要基础[4]。目前认为，在启动肝纤维化的过程中，炎症起着核心作用，而最早反应则是一些细胞因子的增加[5]。IL-6是一种具有多种免疫活性的细胞因子，它不仅与INF、IL-1一起形成重要的炎性介质，而且还刺激肝脏Ito细胞的增殖，促使Ito细胞产生ECM[6]。PDGF是sis原癌基因的表达产物，主要由上皮细胞、血小板、淋巴细胞和单核巨噬细胞产生。它可以促进纤维母细胞的迅速增殖和胶原蛋白的合成增多。在我们的研究中，各型肝炎患者的IL-6、PDGF活性均明显增高，其中以慢性肝炎和肝硬变患者的IL-6、PDGF活性升高最为显著，并且与患者的PCⅢ含量密切相关，提示机体内IL-6和PDGF的调节紊乱可能参与了肝纤维化的发病机制。
, 百拇医药
参考文献
1，Bachem MG,Meyer D,Schafer W,et al.The response of rat liverperisinasoidal lipocyte to polypeptide growth regulator changes withtheir transdifferetiation into myofiblast-like cells in culture.J Hepatol,1993;18:40
2，侯 健，孔宪涛.四甲基偶氮唑比色法检测人血清白细胞介素6.中华医学检验杂志，1993；16：208
3，Hedlin CH.Platelet-derived growth fator isolation by a large scaleprocedure and analysis of subunit composition.Biochemistry,1981;193:907
, 百拇医药
4，Martin GRM,Kleinman HK.The extracellular matrix in devel opment andin disease.Semi Liver Dis,1985;5:147
5，Thornton SC.Iteraction of Immune and connective tissue cell.Theeffect of Lymphokines and monokines on fibroblast growth.J Leuko Biol,1990;47:312～316
6，Andus T,Fauer J,Gerok W.Effect of cytokines on the liver.Hepatology,1991;13:364, 百拇医药
单位：解放军476医院传染科 福州 350002
关键词：乙型肝炎；白细胞介素6；血小板源生长因子；肝纤维化
中国现代医学杂志000619 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和细胞生物活性法检测了80例乙型肝炎患者白细胞介素6(IL-6)和血小板源生长因子(PDGF)水平，结果表明：急性肝炎、慢性肝炎和肝硬化患者的IL-6和PDGF的活性明显高于正常对照组，且与患者的血清Ⅲ型前胶原肽(PCⅢ)含量密切相关，揭示IL-6和PDGF活性的变化可能与肝纤维化的发病机制有关。
分类号 R512.6+2
肝纤维化是各种慢性肝病发展为肝硬化的必经病理过程，且进一步可发展为肝癌。探讨早期诊断肝纤维化，动态观察肝纤维化过程的临床指标并阻断慢性肝炎向肝硬化转化是一项重要的研究课题。肝硬化的前期病理学变化是肝纤维化，近年的研究表明，细胞因子对细胞外基质，尤其是胶原蛋白的代谢有重要的调节作用[1]。我们于1996年6月～1997年4月对80例乙型肝炎患者进行了白细胞介素6(IL-6)和血小板源生长因子(PDGF)水平的检测并与患者血清Ⅲ型前胶原肽(PCⅢ)含量进行比较，以探讨IL-6和PDGF与肝纤维化的关系。
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1 对象与方法
1.1 研究对象
根据1995年(北京)全国传染病寄生虫病会议修订的标准，收集急性肝炎18例(男13例，女5例，年龄21～48岁，平均32.6岁)；慢性肝炎42例(男31例，女11例，年龄26～54岁，平均34.8岁)；肝硬变20例(男16例，女4例，年龄36～57岁，平均年龄45.2岁)。所有检测对象在1个月内未服用过糖皮质激素类药物。对照组为健康献血员20名(男10名，女10名，肝炎病毒标志物为阴性，肝功能正常)。
1.2 血清学检测
血清IL-6活性的检测：采用IL-6依赖的B9.9细胞增殖MTT染色法[2]。B9.9细胞株由荷兰Aarden博士惠赠，IL-6标准品由日本大板大学工学部提供。血浆PDGF活性的检测：采用细胞生物活性[3]，以1%FBS促进L929细胞增殖活性的表达值为PDGF的一个活性单位，测值以u/ml表示。血清PCⅢ含量的检测：RIA法(重庆肿瘤研究所提供试剂盒)，以μg/L为单位。血清HBV DNA的检测：PC法(军事医学科学院提供试剂盒。)
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1.3 统计学处理
组间均数的比较采用t检验，各指标相关分析采用直线相关分析。
2 结果
2.1 各型肝炎患者IL-6、PDGF活性的变化与PCⅢ水平的关系
表1示，与正常对照组相比，各型肝炎患者的IL-6活性均有不同程度的升高，且与血清PCⅢ的含量密切相关(r=0.61,P<0.01)。各型肝炎患者的PDGF活性也有不同程度的升高，与血清中的PCⅢ含量呈正相关(r=0.75,P<0.01)。另外，急性肝炎、慢性肝炎和肝硬化组的IL-6水平各相互比较，无显著差异(P>0.05)。而慢性肝炎和肝硬化组的PDGF和PCⅢ水平与急性肝炎组比均有显著差异(P<0.01)。但慢性肝炎组和肝硬化组相比无显著差异(P>0.05)。
附表 各型肝炎患者IL-6、PDGF活性与PCⅢ水平的关系 组别
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n
IL-6(u/ml)
PDGF(u/ml)
PCⅢ(μg/L)
正常对照组
20
<5
35±10
82.7±10.9
急性肝炎
18
8.26±1.722)
, 百拇医药
74±271)
121.2±30.11)
慢性肝炎
42
9.53±3.842)
127±412)
168±36.62)
肝硬化
20
8.49±1.662)
142±452)
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185.2±43.82)
注：1)与对照组相比较P<0.05
2)与对照组相比较P<0.01
2.2 HBV DNA阴、阳性肝炎患者血清IL-6、PDGF活性的比较 在80例肝炎患者中有57例HBV DNA阳性，23例为阴性。HBV DNA阳性组患者血清IL-6、PDGF水平平均为(13.66±3.92)u/ml和(194±71)u/ml。阴性组分别为(7.12±2.01)u/ml和(41±12)u/ml。统计学比较HBV DNA阳性组IL-6和PDGF均明显高于HBV DNA阴性组(P<0.01)。
3 讨论
在慢性肝病的发展过程中，肝脏纤维化的形成是一个缓慢而复杂的过程，其中产生胶原蛋白的细胞被激活合成大量的细胞外基质(ECM)是病变形成的重要基础[4]。目前认为，在启动肝纤维化的过程中，炎症起着核心作用，而最早反应则是一些细胞因子的增加[5]。IL-6是一种具有多种免疫活性的细胞因子，它不仅与INF、IL-1一起形成重要的炎性介质，而且还刺激肝脏Ito细胞的增殖，促使Ito细胞产生ECM[6]。PDGF是sis原癌基因的表达产物，主要由上皮细胞、血小板、淋巴细胞和单核巨噬细胞产生。它可以促进纤维母细胞的迅速增殖和胶原蛋白的合成增多。在我们的研究中，各型肝炎患者的IL-6、PDGF活性均明显增高，其中以慢性肝炎和肝硬变患者的IL-6、PDGF活性升高最为显著，并且与患者的PCⅢ含量密切相关，提示机体内IL-6和PDGF的调节紊乱可能参与了肝纤维化的发病机制。
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参考文献
1，Bachem MG,Meyer D,Schafer W,et al.The response of rat liverperisinasoidal lipocyte to polypeptide growth regulator changes withtheir transdifferetiation into myofiblast-like cells in culture.J Hepatol,1993;18:40
2，侯 健，孔宪涛.四甲基偶氮唑比色法检测人血清白细胞介素6.中华医学检验杂志，1993；16：208
3，Hedlin CH.Platelet-derived growth fator isolation by a large scaleprocedure and analysis of subunit composition.Biochemistry,1981;193:907
, 百拇医药
4，Martin GRM,Kleinman HK.The extracellular matrix in devel opment andin disease.Semi Liver Dis,1985;5:147
5，Thornton SC.Iteraction of Immune and connective tissue cell.Theeffect of Lymphokines and monokines on fibroblast growth.J Leuko Biol,1990;47:312～316
6，Andus T,Fauer J,Gerok W.Effect of cytokines on the liver.Hepatology,1991;13:364, 百拇医药